Name: normothermic ex vivo pancreas perfusion for the preservation of pancreas allografts before transplantation
Uploaded: 2022-07-27T13:20:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation at JoVE.com

Bu çalışma için kullanılan tüm hayvanlar, Ulusal Tıbbi Araştırma Derneği tarafından formüle edilen "Laboratuvar Hayvanları Bakımı İlkeleri" ve Ontario, Kanada Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından yayınlanan "Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı İçin Kılavuz" uyarınca insancıl bakım almıştır. Tüm çalışmalar Toronto Genel Araştırma Enstitüsü Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmıştır.
NOT: Bu çalışma protokolü domuz modeline dayanmaktadır. Greft soğukta 2 saat bekletildikten sonra transplantasyondan önce 3 saat boyunca normotermik makine perfüzyonuna tabi tutulur (Şekil 1).
1. Hayvanlar
<ol><li>Erkek Yorkshire domuzları kullanın (40-50 kg).</li>
</ol>2. Organ temini
NOT: Preoperatif prosedür ve cerrahi işlemin bir kısmı, grubumuz15 tarafından yayınlanan önceki makalelerle aynıdır ve aşağıdaki gibidir:
<ol><li>Alışmaya izin vermek ve stres seviyelerini azaltmak için domuzları araştırma tesisinde en az 7 gün bekletin.</li>
	<li>Anestezinin indüksiyonundan önce domuzları en az 6 saat boyunca hızlılaştırın.</li>
	<li>Domuzu kas içi (IM) midazolam (0.15 mg / kg), ketamin (25 mg / kg) ve atropin (0.04 mg / kg) enjeksiyonu ile sakinleştirin. NOT: Bu, konut tesisinde yapılır.</li>
	<li>Hayvanı barınma tesisinden organın geri kazanılacağı ameliyathaneye (OR) aktarın.</li>
	<li>Domuzu ameliyathane masasına sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve çene gevşeyene kadar 2 L oksijen ve% 5 izofluran içeren bir yüz maskesi yerleştirin.</li>
	<li>Laringoskop kullanarak ses tellerini görselleştirin ve entübasyon sırasında spazmı önlemek için% 2 lidokain püskürtün. Entübasyona başlamadan önce maskeyi en az 30 saat boyunca oksijen ve izofluran ile değiştirin.</li>
	<li>7 mm'lik bir endotrakeal tüp takın ve manşeti 5 mL hava ile bloke edin. Tüpün doğru konumda olduğundan emin olmak için kapnometri kullanın.</li>
	<li>İzofluran gazını% 2.5'e düşürün. Vantilatörü açın ve 15-20 nefes / dak'ya ve gelgit hacmini 10-15 mL / kg vücut ağırlığına ayarlayın. Kalp atış hızını ve oksijen doygunluğunu sürekli izleyin.</li>
	<li>Seldinger tekniği16'yı kullanarak, juguler ven içine (sağ veya sol) 8.5 Fr. x 10 cm'lik bir kateter yerleştirin.</li>
	<li>250 mL / saat'te fentanil infüzyonunu başlatmak için juguler ven kateterini kullanın (500 mL Ringer'da 2.5 mL).</li>
	<li>Anestezinin derinliğini belirlemek için kas reflekslerini kontrol edin. Çene tonu en güvenilir kas refleksidir 17. NOT: Mandibuler kasların sertliği not edilirse, izofluran ve / veya fentanil infüzyonunu arttırın.</li>
</ol>3. Cerrahi prosedür
<ol><li>Cerrahi alanı dezenfekte edin ve örtün. Ksifoidden kasık simfizine orta hat insizyonu yapın. Daha iyi pozlama için cerrahi alanı sol lateral kesi ile genişletin.</li>
	<li>İnferior vena kavayı (IVC) abdominal aorttan diseke edin. Aortu çevreleyen dokudan daha da serbest bırakın ve küçük lomber aort dallarını bağlayın. Her iki renal arterin etrafındaki bağları tanımlayın ve yerleştirin. NOT: Bitişik harfler bu zaman noktasında bağlanmamalıdır.</li>
	<li>Aortun arkası serbest kaldıktan sonra, etrafına iki bağ geçirin. Alt ligatür sonunda iliak arter bifurkasyonunun hemen üstüne bağlanacak ve üst ligatür önceki bağın 5 cm yukarısına bağlanacaktır.</li>
	<li>Hepatik hilumu disseke edin. Tüm arterleri karaciğere mümkün olduğunca yakın bağlayın. Ortak safra kanalını tanımlayın, karaciğere yakın iki ligatür yerleştirin ve yapıyı bölün.</li>
	<li>Aort çevresini disseke edin, ancak bu zaman noktasında kesmeyin. Aortun suprahepatik kısmının etrafını tanımlayın ve diseke edin ve etrafına bir bağ yerleştirin. NOT: Bitişik harfler bu zaman noktasında bağlanmamalıdır.</li>
	<li>Buzun pankreası soğutmasına izin vermek için daha küçük kesesi açın. Yıkamadan önce pankreası mümkün olduğunca az harekete geçirin.</li>
	<li>Merkezi hat boyunca donör ağırlığının kg'ı başına 500 IU heparin uygulayın. 5 dakika bekleyin ve juguler kateter kullanarak sitrat, fosfat, dekstroz, salin, adenin, glikoz ve mannitol (CPD / SAG-M) torbalarında kan alımına başlayın.</li>
	<li>İnferior aort ligatürünü bağlayın, aortu iliak bifurkasyon bağının üzerinde düz bir çizgiyle kanüle edin ve kanülü bir üst bağ ile sabitleyin. Her iki renal arteri de bağla.</li>
	<li>Yeterli kan toplandıktan sonra (600 mL) suprahepatik aortu (çapraz kelepçe) bağlayın. Fedakarlık için 10 mL potasyum klorür uygulayın.</li>
	<li>Wisconsin Üniversitesi (UW) koruma çözümü ile bir yıkama başlatın. Portal damarda (mümkün olduğunca yüksek) bir açıklık ve havalandırma için kava kesin. Karın boşluğuna buz yerleştirin.</li>
	<li>1 L UW çözeltisini yıkadıktan sonra pankreas kuyruğunu ve duodenum C-döngüsünü değerlendirin. Yeterli yıkama varsa, diseksiyona başlayın, mezenterik damarları tanımlayın ve kelepçeleyin. İkinci litre UW için yıkamayı yavaşlatın.</li>
	<li>Portal venin uzantısı için pankreas greftini ve kava veya iliak venin bir segmentini alın. NOT: Pankreas grefti dalak ile birlikte çıkarılır.</li>
	<li>Organı, buzla dolu bir havzanın içine yerleştirilmiş bir organ torbasının içine yerleştirin.</li>
</ol>4. Pankreas greftinin arka tabla hazırlanması (Şekil 2A)
<ol><li>Gömme çizgisini aortun distal kısmından çıkarın ve bir bağ ile kapatın. Organ torbasını kalan UW çözeltisi ile doldurun. Pankreası dalak da dahil olmak üzere yapışkan dokudan serbest bırakın.</li>
	<li>Daha önce kurtarılmış kava veya iliak ven kullanarak 6-0 Prolene ile portal ven uzatma yapın. Portal ven ve proksimal aortu redüktörde 1/4 x 3/8 ile kanüle edin.</li>
	<li>Duodenumun distal kısmını Malecot kateteri ve bağı ile kanüle edin. Duodenal içeriğin dökülmesini önlemek için kateterin ucunu kelepçeleyin. Mezenterik damarları 4-0 Prolene ile denetledi.</li>
	<li>Greftin ağırlığını kaydedin. Grefti NEVPP başlayana kadar statik soğuk depoda (SCS) saklayın.</li>
</ol>5. Normothermic ex vivo pankreas perfüzyonu (NEVPP)
NOT: Perfüzyon devresi yenidoğan kardiyopulmoner bypass ekipmanından yapılmıştır (Şekil 3).
<ol><li>İlgili tüpü oksijenatöre ve venöz rezervuara, ayrıca arteriyel çizgiyi oksijenatörün çıkışına takın ve kabarcık filtresini tutucusuna yerleştirin. Kabarcık filtresinden venöz rezervuara giden temizleme hattını bağlayın. Tüm havanın dışarı çıkmasına izin vermek için kabarcık filtresi kapağını açın.</li>
	<li>Venöz hattı venöz rezervuarın girişine bağlayın. Diyalizat infüze edileceği diyaliz filtresini ve tüpünü bağlayın. Debimetre sensörünü, basınç hatlarını ve sıcaklık probunu bağlayın. Arteriyel ve venöz numune hatlarını numune portlarına bağlayın.</li>
	<li>Pankreas odasını (Şekil 3) bir Mayo masasına yerleştirin ve arteriyel ve venöz boruyu bu amaç için amaçlanan deliklerden geçirin. Harici ısıtıcı ünitesini bağlayın ve açın.</li>
	<li>Emme borusunu silindir pompasının içine yerleştirin ve sıvıları toplamak için bir ucunu odadan çıkan boruya, diğer ucunu da perfüzyonun tüm organ kayıplarını toplamak için venöz rezervuara bağlayın.</li>
	<li>Oksijen tüpünü (yeşil) karbojen karışımını (% 95 O% 2/5 CO2) ve oksijenatörü içeren gaz tankına bağlayın. Isıtıcı pompa ünitesi borusunu oksijenatöre bağlayın.</li>
	<li>Kelepçe arteriyel ve venöz çıkış hatlarının yanı sıra venöz rezervuarın çıkışı.</li>
</ol>6. Perfüzyonun hazırlanması ve devrenin astarlanması
<ol><li>Venöz rezervuarı perfüzyonat ile doldurun (Tablo 1).</li>
	<li>Vazodilatatörün (epoprostenol) arteriyel hatta 8 mL/s'de sürekli uygulanması için bir şırınga pompası kullanın. Enzim inhibitörünün doğrudan venöz rezervuara (15 mg, 10 mL / s) sürekli uygulanması için ikinci bir şırınga pompası kullanın.</li>
	<li>Kalp akciğer makinesini (HLM) açın ve basınç, sıcaklık ve zamanlayıcı panellerini çalıştırın. Perfüzyon çözeltisini 38 ° C'ye ısıtmak için ısıtıcı pompasını açın. O 2/CO2 kaynağını açın.</li>
	<li>Venöz rezervuarın çıkışına yerleştirilen boru kelepçesini çıkarın, santrifüj pompayı çalıştırın ve 1.500 rpm'ye kadar alın. Arteriyel filtreyi atlayarak boruyu sıkıştırın ve arteriyel filtreden havayı serbest bırakın. Arteriyel ve venöz basınç hatlarını sıfırlayın.</li>
</ol>7. Pankreas greft perfüzyonu (Şekil 2B)
<ol><li>Pankreasın depolandığı organ torbasını açın. Arteriyel kanülden 200 mL albümin ile yıkayın. Pankreası buzdan çıkarın ve organ odasının içindeki pozisyonu alın. Arteriyel ve venöz tüpün havasız olduğunu doğrulayın.</li>
	<li>Kelepçeyi arteriyel taraftan serbest bırakın ve arteriyel ve venöz tüp arasındaki kısayolu sıkıştırın. Arteriyel tüpten kan çıkmaya başladığında, hattı arteriyel kanüle bağlayın. Santrifüj pompanın hızını düzenleyerek arteriyel basıncı 20-25 mmHg'ye ayarlayın. Venöz kanülden kan çıkmaya başladığında venöz tüpü bağlayın.</li>
	<li>Pankreas tamamen bağlandığında ve majör kanama gözlenmediğinde, bir şişe verapamil (2.5 mg / mL) doğrudan arteriyel tarafa uygulayın.</li>
	<li>Basınçları, arteriyel akışı, sıcaklığı ve duodenum sekresyonunu sürekli olarak kaydedin. Kan toplayın, her saat başı duodenal çıkışı kaydedin ve ödem için saatlik makroskopik olarak değerlendirin. Perfüzyon parametrelerini kaydedin ve analiz için örnekler alın (venöz ve arteriyel kan gazı örneklerinin yanı sıra amilaz, lipaz ve LDH örnekleri).</li>
	<li>Perfüzyon bittiğinde arteriyel ve venöz tüplerin bağlantısını kesin, grefti organ odasından çıkarın ve soğuk UW ile yıkayın ve tartın. Grefti nakil anına kadar steril bir organ torbasında buz üzerinde saklayın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>. National Diabetes Statistics Report | Diabetes | CDC Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/diabetes/data/statistics-report/index.html">https://www.cdc.gov/diabetes/data/statistics-report/index.html</a> (2022)</li><li>Shyr, Y. M., Wang, S. E., Chen, S. C., Shyr, B. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reappraisal+of+pancreas+transplantation.">Reappraisal of pancreas transplantation.</a> Journal of the Chinese Medical Association JCMA. 82 (7), 531-534 (2019).</li><li>Dholakia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreas+transplantation:+past,+present,+future.">Pancreas transplantation: past, present, future.</a> American Journal of Medicine. 129 (7), 667-673 (2016).</li><li>Johnson, P., Sharples, E., Sinha, S., Friend, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreas+and+islet+transplantation:+pancreas+and+islet+transplantation+in+diabetes+mellitus.">Pancreas and islet transplantation: pancreas and islet transplantation in diabetes mellitus.</a> Transplantation Surgery. , 205-217 (2021).</li><li>Kopp, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreas+transplantation+with+grafts+from+donors+deceased+after+circulatory+death:+5+years+single-center+experience.">Pancreas transplantation with grafts from donors deceased after circulatory death: 5 years single-center experience.</a> Transplantation. 102 (2), 333-339 (2018).</li><li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+lung+perfusion+in+clinical+lung+transplantation.">Normothermic ex vivo lung perfusion in clinical lung transplantation.</a> The New England Journal of Medicine. 364 (15), 1431-1440 (2011).</li><li>Nasralla, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized+trial+of+normothermic+preservation+in+liver+transplantation.">A randomized trial of normothermic preservation in liver transplantation.</a> Nature. 557 (7703), 50-56 (2018).</li><li>Selzner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+liver+perfusion+using+steen+solution+as+perfusate+for+human+liver+transplantation:+First+North+American+results.">Normothermic ex vivo liver perfusion using steen solution as perfusate for human liver transplantation: First North American results.</a> Liver Transplantation: Official Publication of the American Association for the Study of Liver Diseases and the International Liver Transplantation Society. 22 (11), 1501-1508 (2016).</li><li>Hosgood, S. A., Thompson, E., Moore, T., Wilson, C. H., Nicholson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+machine+perfusion+for+the+assessment+and+transplantation+of+declined+human+kidneys+from+donation+after+circulatory+death+donors.">Normothermic machine perfusion for the assessment and transplantation of declined human kidneys from donation after circulatory death donors.</a> The British Journal of Surgery. 105 (4), 388-394 (2018).</li><li>Urbanellis, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+kidney+perfusion+improves+early+dcd+graft+function+compared+with+hypothermic+machine+perfusion+and+static+cold+storage.">Normothermic ex vivo kidney perfusion improves early dcd graft function compared with hypothermic machine perfusion and static cold storage.</a> Transplantation. 104 (5), 947-955 (2020).</li><li>Barlow, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+ex+vivo+normothermic+perfusion+for+quality+assessment+of+discarded+human+donor+pancreases.">Use of ex vivo normothermic perfusion for quality assessment of discarded human donor pancreases.</a> American Journal of Transplantation: Official Journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 15 (9), 2475-2482 (2015).</li><li>Kumar, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+porcine+pancreas:+A+physiological+model+for+preservation+and+transplant+study.">Ex vivo normothermic porcine pancreas: A physiological model for preservation and transplant study.</a> International journal of surgery. 54, 206-215 (2018).</li><li>Hamaoui, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+pancreatic+machine+perfusion:+translational+steps+from+porcine+to+human+models.">Development of pancreatic machine perfusion: translational steps from porcine to human models.</a> The Journal of Surgical Research. 223, 263-274 (2018).</li><li>Prudhomme, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+pancreas+allotransplantations+after+hypothermic+machine+perfusion+in+a+novel+diabetic+porcine+model:+a+controlled+study.">Successful pancreas allotransplantations after hypothermic machine perfusion in a novel diabetic porcine model: a controlled study.</a> Transplant International: Official Journal of the European Society for Organ Transplantation. 34 (2), 353-364 (2021).</li><li>Kaths, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+kidney+perfusion+for+the+preservation+of+kidney+grafts+prior+to+transplantation.">Normothermic ex vivo kidney perfusion for the preservation of kidney grafts prior to transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (101), e353 (2015).</li><li>Graham, A. S., Ozment, C., Tegtmeyer, K., Lai, S., Braner, D. A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+venous+catheterization.">Central venous catheterization.</a> The New England Journal of Medicine. 356 (21), 21 (2009).</li><li>Swindle, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Swine in the Laboratory Surgery, Anesthesia, Imaging, and Experimental Techniques. , (2015).</li><li>Mazilescu, L. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+situ+pancreas+perfusion+for+the+preservation+of+porcine+pancreas+grafts.">Normothermic ex situ pancreas perfusion for the preservation of porcine pancreas grafts.</a> American Journal of Transplantation. , (2022).</li><li>Fridell, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+the+pancreas+allograft+for+transplantation.">Preparation of the pancreas allograft for transplantation.</a> Clinical transplantation. 25 (2), (2011).</li><li>Nassar, A., Liu, Q., Walsh, M., Quintini, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+perfusion+of+discarded+human+pancreas.">Normothermic ex vivo perfusion of discarded human pancreas.</a> Artificial Organs. 42 (3), 334-335 (2018).</li></ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyleri yoktur.

Bu çalışma, daha önce sunulan kurulum ile perfüzyondan 3 saat sonra minimal histolojik hasarı olan pankreas allogreftlerinde stabil NEVPP'nin elde edilebileceğini göstermektedir. Arteriyel akım, basınç, pH, HCO3 ve Na gibi perfüzyon parametreleri perfüzyon sırasında stabil kalır ve K ve laktatta azalma ve stabilizasyon gözlemledik.
Greftin tedarik, arka masa hazırlığı ve perfüzyon sırasında mümkün olduğunca az manipüle edilmesi kritik öneme sahiptir. Arteriyel basıncın sıkı kontrolünü sağlamak da çok önemlidir. Pankreas düşük basınçlı bir organ olduğundan, basınçtaki bir artış organda geri dönüşü olmayan hasara neden olabilir.
Bu çalışma için arka masa hazırlığı insan greftlerinin hazırlanmasından farklıdır (Şekil 2A). Pankreas domuzlardan temin edilen tek organ olduğu için aortun çölyak gövdesi ve superior mezenterik arteri içeren kısmını alabildik. Portal ven ise iliak ven kullanılarak uzatma yapıldı. İnsan greftleri söz konusu olduğunda, arka masa hazırlığının, transplantasyon için yapıldığı gibi, arteriyel rekonstrüksiyon ve portal uzatma için iliak greftler kullanılarak yapılması gerekecektir19.
Bu yöntem, kurulumun karmaşıklığı ile sınırlı olabilir. Greftsiz yapıldığında greftin şiddetli ödemini fark ettikten sonra diyaliz kaseti eklemeye karar verdik. Bu deneyler için, greftlerin optimal perfüzyonu için etkili olduğu kanıtlanan harici bir ısıtma kaynağı içeren ısmarlama bir organ odası da inşa edildi.
Normotermik ex vivo pankreas perfüzyonunu tanımlayan az sayıda çalışma vardır. Bu çalışmaların çoğunda, ödem ana sınırlayıcı faktör gibi görünmektedir. Bildiğimiz kadarıyla, bu yöntem ödemi kontrol etmek için diyaliz kaseti kullanmanın tek raporudur.
Pankreas için normothermic ex vivo perfüzyon, diğer organlara kıyasla henüz emekleme aşamasındadır. Mevcut protokoller, perfüzyon sırasında greft hasarını değerlendirmek için genişletilmiş kriter donörlerine (DCD), perfüzyon iyileşmesine, daha uzun perfüzyon sürelerine ve biyobelirteçlere odaklanmaktadır. Amilaz ve lipaz seviyeleri güvenilir belirteçler gibi görünmemektedir, çünkü kapalı bir sistem kullanıyoruz ve histopatoloji20 ile ilişkili görünmüyor. Şimdiye kadar grubumuz perfüzyon sonrası pankreas allogreftlerini de nakletmeyi başarmış ve iyi sonuçlar almıştır18.
Bu teknolojideki sürekli gelişmelerle birlikte, bu teknolojinin klinik transplantasyona uygulanabilir olacağını ve pankreas allogreftlerinin değerlendirilmesine ve onarımına izin vereceğini umuyoruz. Bu, umarım sonuçta daha fazla greft kullanımına, hastalar için bekleme süresinin azalmasına ve daha iyi hasta sonuçlarına neden olur

Ulusal Diyabet İstatistikleri Raporu'na göre, 2019 yılında Amerika Birleşik Devletleri'nde toplam 28,7 milyon kişi diyabet tanısı ile yaşıyordu. Bunların yaklaşık 1,8 milyonunda tip 1 diyabet1 tanısı vardı. PTx şu anda komplike tip 1 diabetes mellitus2 için en etkili ve tek küratif tedavidir ve bu hastaların hem yaşam beklentisini hem de yaşam kalitesini artıran bir prosedürdür3.
Pankreas, ölen donörlerden alındıktan sonra en sık atılan organdır4. Devam eden organ kıtlığı ve artan bekleme listesi süreleri ile nakil merkezleri, dolaşım ölümünden sonra bağış (DCD) de dahil olmak üzere ECD'lerden daha fazla pankreas grefti kullanmaktadır5. Genişletilmiş kriterli donörlerden gelen allogreftleri güvenli bir şekilde korumak, perfüzyon yapmak, değerlendirmek ve onarmak için stratejilere ihtiyaç vardır.
NEVP'in akciğer6, karaciğer 7,8 ve böbrek greftlerinin 9,10 korunmasında başarılı olduğu kanıtlanmıştır. Bununla birlikte, hem hipotermik hem de normotermik pankreas için makine perfüzyonu üzerinde çalışan grup sayısı ve yayın sayısı, greft ödemi ve yaralanması nedeniyle az ve sınırlıdır11,12,13,14.
Bu çalışmanın amacı, transplantasyon öncesi uzun süreli koruma, organ değerlendirmesi ve onarımı için bir platform sağlamak amacıyla bir domuz modeli kullanarak normotermik ex vivo pankreas perfüzyonu (NEVPP) için bir protokol sunmaktır. Bu, diğer araştırma gruplarının pankreas allogreftlerinin incelenmesi için bir perfüzyon modeli oluşturmasına izin verecektir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alburex 5</td>
			<td>CSL Behring AG</td>
			<td>187337</td>
			<td>25 g of Albumin (human) in 500 mL of buffered diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aprotinin from bovine lung</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A1153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Belzer UW Cold storage solution</td>
			<td>Bridge to life Ltd</td>
			<td>4055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium gluconate (10%)</td>
			<td>Fresenius Kabi Canada Ltd (Toronto, ON)</td>
			<td>C360019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Composelect (blood collection bags)</td>
			<td>Fresenius Kabi Canada Ltd</td>
			<td>PQ31555</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epoprostenol</td>
			<td>GlaxoSmithKline Inc.</td>
			<td>218761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heart lung machine, St&#246;ckert S3</td>
			<td>Sorin Group Canada Inc.</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>Centrifugal pump, roller pump, control panel (sensors for pressure, flow, temperature, bubbles, and level), oxygen blender, heater unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemoflow, Fresenius Polysulfone</td>
			<td>Fresenius Medical Care North America</td>
			<td>0520165A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin (10000 IU/10 mL)</td>
			<td>Fresenius Kabi Canada Ltd</td>
			<td>C504710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactated Ringer&#39;s solution</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>JB2324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonatal cardiopulmonary bypass techonolgy</td>
			<td>Sorin Group Canada Inc</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>Dideco perfusion tubing systems, centrifugal blood pump (Revolution), arterial blood filter, microporous hollow fibre memebrane oxygenator), cannulas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pancreas chamber</td>
			<td></td>
			<td>Custom made</td>
			<td>With external heater</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percutaneous Sheath Introducer Set with Integral Hemostasis Valve/side Port for use with 7-7.5 Fr Catheters&#160;</td>
			<td>Arrow International LLC</td>
			<td>SI-09880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (8.4%)</td>
			<td>Fresenius Kabi Canada Ltd</td>
			<td>C908950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solu-Medrol</td>
			<td>Pfizer Canada Inc.</td>
			<td>52246-14-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steen</td>
			<td>XVIVO</td>
			<td>19004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urethral catheter</td>
			<td>Bard Inc</td>
			<td>86020</td>
			<td>20 Fr, malecot model drain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Verapamil</td>
			<td>Sandoz Canada Inc.</td>
			<td>8960</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

normothermic ex vivo pancreas perfusion for the preservation of pancreas allografts before transplantation

Pankreas transplantasyonu (PTx), diabetes mellitus (DM) tanısı yükü ile yaşayan insanlar için iyileştirici bir tedavidir. Bununla birlikte, organ kıtlığı ve PTx için listelenen hasta sayısının artması nedeniyle, transplantasyon için mevcut greft sayısını artırmak için yeni stratejilere ihtiyaç vardır. 
Statik soğuk hava deposu (SCS), standart kriter organlar için altın standart olarak kabul edilir. Bununla birlikte, standart kriterli donörler (SCD) giderek azalmaktadır ve genişletilmiş kriterli donörlerden (ECD) organ kabul oranını artırabilecek yeni stratejilere acilen ihtiyaç duyulmaktadır. 
Normothermic ex vivo perfüzyon (NEVP), son birkaç on yılda giderek daha popüler hale gelen stratejilerden biridir. Bu koruma yöntemi diğer organlarda (karaciğer, böbrekler ve akciğerler) başarıyla kullanılmıştır, ancak pankreas transplantasyonunda minimal olarak araştırılmıştır. Pankreas yöntemini tanımlayan birkaç makale çok az başarı göstermektedir, ödem en önemli sorunlardan biridir. Aşağıdaki yazıda grubumuzun domuz pankreasını perfüze etmek için geliştirdiği başarılı NEVP yöntemi ve kurulumu anlatılmaktadır.

Yaklaşan veriler, kalp atışı donör pankreas alımı modelini kullanan yedi deneyin temsili sonuçlarını göstermektedir. Aortun kanülasyonu, UW çözeltisi ile yıkanması ve pankreasın geri alınmasından sonra, kırmızı kan hücreleri hazırlanırken greftler 2 saat boyunca SCS'de tutuldu. NEVPP bu modelde 3 saat boyunca uygulandı, gelecekte greft değerlendirmesi ve onarımı amaçlanıyorsa perfüzyon için gerekli olan en az süreyi düşündük. Numuneler ve ölçümler saatlik zaman noktalarında kaydedildi. (0 = taban çizgisi, organ devreye bağlandıktan hemen sonra, 1 = 1 h, 2 = 2 h, 3 = 3 h).
Pankreas greftleri, bu amaç için özel olarak tasarlanmış ve bir ısıtıcı (Ek Dosya) içeren bir organ odasına yerleştirildi. NEVPP'nin amacı, organ için yakın fizyolojik bir ortam sağlamaktır. Bu amaçla tüm perfüzyonlarda arteriyel basınç 20-25 mmHg arasında kalacak şekilde ayarlandı. Basınç ve akış tüm perfüzyon boyunca ölçüldü ve sabit kaldı (Şekil 4). Aşağıdaki formül kullanılarak greftin oksijen tüketimi hesaplanarak metabolik aktivite tahmin edildi: [(pO 2 art-pO2ven) * akış /ağırlık] (Şekil 5). Tüm perfüzyon sırasında pH, sodyum, kalsiyum ve HCO3 ölçümleri fizyolojik değerler dahilindeydi (Şekil 6). Perfüzyon sırasında laktat ve potasyum seviyeleri azaldı ve 3 saatte normale yakın değerlere ulaştı (Şekil 7). Devre kapalı bir sistem olduğu için perfüzyon sırasında amilaz ve lipaz düzeylerinin artması beklenmektedir (Şekil 8). Bununla birlikte, seviyelerdeki artışın greftteki hasarla ilişkili görünmemektedir (Şekil 9). Adacık hücre bütünlüğünün yanı sıra yağ ve parankim nekrozunu skorlamak için yarı kantitatif bir ölçek kullanıldı. (0 - değişiklik yok, 1 - hafif değişiklikler, 2 - orta dereceli değişiklikler, 3 - ciddi değişiklikler). Bu, deney gruplarına kör olmuş bir patolog tarafından yapıldı ve pankreatit belirtileri gözlenmedi.
Pankreas allogreftleri perfüzyon öncesi ve sonrası tartımlanarak ödem değerlendirildi (Tablo 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63905/63905fig01.jpg"> Şekil 1. Çalışma protokolü. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63905/63905fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63905/63905fig02.jpg"> Şekil 2. Perfüzyondan önce ve sonra pankreas. (A) Perfüzyondan önce. (B) Perfüzyondan sonra. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63905/63905fig02large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63905/63905fig03.jpg"> Şekil 3. Perfüzyon devresinin şematik çizimi. Yenidoğan kardiyopulmoner bypass teknolojisinin kullanımı ile; Perfüzyonat venöz rezervuara dökülür ve daha sonra oksijenatöre santrifüjlü bir pompa yardımıyla itilir. Oksijenatörden ayrıldıktan sonra, devre diyaliz kasetine perfüzyon gönderen ve arteriyel filtreye giden rezervuara ve boruya geri dönen boruya bölünür. Arteriyel kabarcık filtresini geçtikten sonra, perfüzyonat aorttan pankreasa 20-25 mmHg'lik bir basınçla sürülür. Venöz çıkış, perfüzyonu venöz rezervuara geri götürür. ( 18'den uyarlanmıştır). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63905/63905fig03large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63905/63905fig04.jpg"> Şekil 4. Standart sapma ile ortalama arteriyel akım (mL/dak). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63905/63905fig04large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63905/63905fig05.jpg"> Şekil 5. Standart sapma ile ortalama oksijen tüketimi (mL/dak/g). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63905/63905fig05large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63905/63905fig06.jpg"> Şekil 6. (A) Standart sapmalarla ortalama pH, (B)HCO 3, (C) sodyum ve (D) kalsiyum ölçümleri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63905/63905fig06large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63905/63905fig07.jpg"> Şekil 7. (A) Ortalama laktat ve (B) standart sapmalarla potasyum ölçümleri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63905/63905fig07large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63905/63905fig08.jpg"> Şekil 8. (A) Ortalama amilaz ve (B) standart sapmalarla lipaz ölçümleri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63905/63905fig08large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63905/63905fig09.jpg"> Şekil 9. Perfüzyon öncesi ve sonrası çekirdek biyopsileri. (A) Makine perfüzyonundan önce normal pankreas parankimleri18. (B) Pankreas asini ve adacık hücrelerinin iyi korunması ile perfüzyon sonrası biyopsi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63905/63905fig09large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Malzeme</td>
			<td>Miktar</td>
		</tr><tr><td>Ringer laktatı</td>
			<td>260 mL</td>
		</tr><tr><td>Steen Çözümü</td>
			<td>195 milyon L</td>
		</tr><tr><td>Yıkanmış eritrositler</td>
			<td>162,5 milyon litre</td>
		</tr><tr><td>Çift Ters Ozmoz Suyu (DRO)</td>
			<td>35 mL</td>
		</tr><tr><td>Heparin (10000 IU / 10 mL)</td>
			<td>1,3 milyon L</td>
		</tr><tr><td>Sodyum bikarbonat (%8.4)</td>
			<td>10,4 milyon L</td>
		</tr><tr><td>Kalsiyum glukonat (%10)</td>
			<td>1,3 milyon L</td>
		</tr><tr><td>Metilprednizolon (Solu-Medrol)</td>
			<td>325 mg</td>
		</tr><tr><td>Aprotinin</td>
			<td>15 mg</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 1. Perfüzyon kompozisyonu.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td>
			<td>Ağırlık öncesi</td>
			<td>Ağırlık sonrası</td>
			<td>Kazanç</td>
			<td>% fark</td>
		</tr><tr><td>Vaka 1</td>
			<td>244 gr</td>
			<td>240 gr</td>
			<td>-4 gr</td>
			<td>-1.63</td>
		</tr><tr><td>Vaka 2</td>
			<td>154 gr</td>
			<td>164 gr</td>
			<td>10 gr</td>
			<td>6.49</td>
		</tr><tr><td>Vaka 3</td>
			<td>184 gr</td>
			<td>245 gr</td>
			<td>61 gr</td>
			<td>33.15</td>
		</tr><tr><td>Vaka 4</td>
			<td>190 gr</td>
			<td>226 gr</td>
			<td>36 gr</td>
			<td>18.94</td>
		</tr><tr><td>Vaka 5</td>
			<td>198 gr</td>
			<td>307 gr</td>
			<td>109 gr</td>
			<td>55.05</td>
		</tr><tr><td>Vaka 6</td>
			<td>205 gr</td>
			<td>315 gr</td>
			<td>107 gr</td>
			<td>51.44</td>
		</tr><tr><td>Vaka 7</td>
			<td>193 gr</td>
			<td>256 gr</td>
			<td>63 gr</td>
			<td>32.64</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 2. Perfüzyon öncesi ve sonrası ağırlık. 
Ek Dosya: Perfüzyon için özel yapım pankreas odası. Prenses Margaret Kanser Merkezi'ndeki Tıbbi Fizik - Radyasyon Tıbbı Programı Makine Atölyesi ile işbirliği içinde tasarlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63905/RightsLink%20Printable%20License.zip" target="_blank">Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation at JoVE.com

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Normothermic ex vivo makine perfüzyonu (NEVP), pankreas allogreftlerinin korunması için henüz araştırılmamıştır. Bu yazıda pankreas allogreftleri için transplantasyon öncesi yenilikçi bir koruma tekniği sunulmaktadır.

Transplantasyon Öncesi Pankreas Allogreftlerinin Korunması için Normothermic Ex Vivo Pankreas Perfüzyonu

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ ...

Pankreas nakli, diyabetli insanlar için iyileştirici bir tedavidir. Bununla birlikte, organlar azdır ve donör havuzunu iyileştirmek için stratejiler gereklidir. Normothermic Ex Vivo Perfüzyon, pankreas allogreftlerinin değerlendirilmesine ve onarımına potansiyel olarak izin verebilecek diğer organlar için zaten başarılı olmuştur.Pankreas, nakil için en sık atılan organdır. Bu teknik, karmaşık diyabetle yaşayan insanlar için organ havuzunu artırma potansiyeline sahiptir. Bu yöntem aynı zamanda iskemi-reperfüzyon hasarını daha iyi anlamamızı ve pankreas hasarının biyobelirteçlerini tanımlamamızı sağlayacaktır.Kurulum biraz karmaşık olabilir ve pankreasın çok hassas bir organ olduğu göz önüne alındığında, geri alınması için pratik yapılması gerekir. Başlamak için cerrahi alanı dezenfekte edin ve örtün. Ksifoidden kasık simfizine orta hat insizyonu yapın ve daha iyi pozlama için cerrahi alanı sol lateral insizyonla genişletin.İnferior vena kavayı abdominal aorttan diseke edin. Aortu çevreleyen dokudan daha da serbest bırakın ve küçük lomber aort dallarını bağlayın. Her iki renal arterin etrafındaki bağları tanımlayın ve yerleştirin.Aortun arkası serbest kaldıktan sonra, alt ligatürün sonunda iliak arter bifurkasyonunun hemen üstüne bağlanacağı ve üst ligatür önceki bağın beş santimetre yukarısına bağlanacağı iki bağ geçirin. Hepatik hilumu diseksiyon ettikten sonra, tüm arterleri karaciğere mümkün olduğunca yakın bağlayın. Sonra ortak safra kanalını tanımlayın.Karaciğere yakın iki bağ yerleştirin ve yapıyı bölün. Daha sonra, aortun supra hepatik kısmının etrafını tanımlayın ve parçalara ayırın ve etrafına bir bağ yerleştirin. Daha sonra, buzun pankreası soğutmasına izin vermek için daha küçük çuvalı açın ve pankreası yıkamadan önce mümkün olduğunca az harekete geçirin.Daha sonra merkezi hat boyunca donör ağırlığının kilogramı başına 500 uluslararası heparin birimi uygulayın ve juguler kateter kullanarak sitrat, fosfat, dekstroz, salin, adenin, glikoz ve mannitol torbalarında kan toplamaya başlayın. İnferior aort ligatürünü bağladıktan sonra, aortu iliak bifurkasyon bağının üzerinde düz bir çizgi ile kanüle edin. Kanülü üst bağ ile sabitleyin ve her iki renal arteri de bağlayın.Yeterli kan toplandıktan sonra, supraçölyak aortunu bağlayın ve bağın üzerine bir kelepçe yerleştirin. Ardından, Wisconsin Üniversitesi Koruma Çözümü ile bir yıkama başlatın. Daha sonra havalandırma için portal ven ve kavada bir açıklık kesin.Bir litre Wisconsin Üniversitesi Çözeltisi yıkandıktan sonra pankreas kuyruğunu ve duodenum C-döngüsünü değerlendirin. Ve yeterince yıkandıktan sonra, mezenterik damarları tanımlayarak ve sıkıştırarak diseksiyona başlayın. Portal venin uzaması için pankreas greftini ve kava veya iliak venin bir segmentini alın.Ve organı buzla dolu bir havzanın içine yerleştirilmiş bir organ torbasının içine yerleştirin. Yıkama çizgisini aortun distal kısmından çıkardıktan sonra, bir bağ ile kapatın ve organ torbasını kalan UW Solüsyonu ile doldurun. Daha sonra, daha önce kurtarılmış kava veya iliak ven kullanarak 6-0 Prolene ile portal ven uzantısı yapın ve portal ven ve proksimal aortu dörtte bir kez 3/8 Redüktör ile kanüle edin.Daha sonra duodenumun distal kısmını bir Malecot kateteri ve bağı ile kanüle edin. Daha sonra duodenal içeriğin dökülmesini önlemek için kateterin ucunu kelepçeleyin ve mezenterik damarları 4-0 Prolene ile denetleyin. Greftin ağırlığını kaydettikten sonra, Ex Vivo Pankreas Perfüzyonu başlayana kadar grefti statik soğuk depoda tutun.Pankreas odasını bir Mayo masasına yerleştirin ve arteriyel ve venöz boruyu bu amaç için amaçlanan deliklerden geçirin. Harici ısıtıcı ünitesini bağlayın ve açın. Emme borusunu silindir pompasının içine yerleştirdikten sonra, sıvıları toplamak için bir ucunu odadan çıkan boruya, diğer ucunu da perfüzyonun tüm organ kaybını toplamak için venöz rezervuara bağlayın.Daha sonra oksijen tüpünü karbon karışımını ve oksijenatörü içeren gaz tankına bağlayın. Ardından ısıtıcı pompa ünitesi borusunu oksijenatöre bağlayın. Kelepçe arterius ve venöz çıkış hatlarının yanı sıra venöz rezervuarın çıkışı.Venöz rezervuarı perfüzyon ile doldurduktan sonra, bir şırınga pompası kullanarak, vazodilatöre saatte sekiz mililitrede arteriyel hatta sürekli olarak uygulayın. Daha sonra ikinci bir şırınga pompası kullanarak, enzim inhibitörünü doğrudan venöz rezervuara sürekli olarak uygulayın. Kalp-akciğer makinesini açtıktan sonra, basınç, sıcaklık ve zamanlayıcı panellerini çalıştırın.Ardından, perfüzyon çözeltisini 38 santigrat dereceye ısıtmak için ısıtıcı pompasını açın ve oksijen karbondioksit kaynağını açın. Ardından, venöz rezervuarın çıkışına yerleştirilen boru kelepçesini çıkarın ve santrifüj pompayı 1.500 RPM'ye kadar alarak çalıştırın. Ardından, arteriyel filtreyi atlayarak boruyu sıkıştırın.Ve havayı arteriyel filtreden serbest bırakın. Daha sonra, arteriyel ve venöz basınç çizgilerini sıfırlayın. Pankreasın depolandığı organ torbasını açtıktan sonra, arteriyel kanülden 200 mililitre albümin ile yıkayın.Daha sonra pankreası buzdan çıkarın ve organ odasının içine yerleştirerek arteriyel ve venöz tüpün havasız olmasını sağlayın. Daha sonra, kelepçeyi arteriyel taraftan serbest bıraktıktan sonra, arteriyel ve venöz tüp arasındaki kısayolu kelepçeleyin. Kan arteriyel tüpten çıkmaya başladığında, hattı arteriyel kanüle bağlayın.Daha sonra santrifüj pompanın hızını düzenleyerek arteriyel basıncı 20 ila 25 milimetre cıvaya ayarlayın ve venöz kanülden kan çıkmaya başladığında venöz tüpü bağlayın. Daha sonra, pankreas tamamen bağlandığında ve herhangi bir önlem kanaması gözlenmediğinde bir şişe verapamil'i doğrudan arteriyel tarafa uygulayın. Makalede açıklandığı gibi çeşitli parametreleri kaydettikten sonra.Analiz için örnekleri alın. Perfüzyon bittiğinde arteriyel ve venöz tüplerin bağlantısını kesin. Grefti organ odasından çıkardıktan sonra, soğuk Wisconsin Üniversitesi Solüsyonu ile yıkayın ve tartın.Daha sonra grefti nakil anına kadar steril bir organ torbasında buz üzerinde saklayın. Basınç ve akış tüm perfüzyon boyunca ölçüldü ve sonuçlar stabil kaldığını gösterdi. Greftin ortalama oksijen tüketimi hesaplanarak metabolik aktivite tahmin edildi.Sonuçlar, pH, sodyum, kalsiyum ve bikarbonat ölçümlerinin tüm perfüzyon boyunca fizyolojik değerler içinde olduğunu göstermektedir. Perfüzyon sırasında laktat ve potasyum düzeylerinin azaldığı ve üç saatte normale yakın değerlere ulaştığı gözlendi. Devre kapalı bir sistem olduğu için perfüzyon sırasında amilaz ve lipaz düzeylerinin artması bekleniyordu.Bununla birlikte, seviyelerdeki artışın greftteki hasarla ilişkili görünmemektedir. Pankreasın yıkamadan önce ve ekstraksiyon sırasında mümkün olduğunca az manipüle edilmesi gerektiğini hatırlamak çok önemlidir. Gelecekte, bu modelin nakil için uygun olmayan organları onarmak için terapötik müdahalelere izin vereceğini umuyoruz.Bu teknik, araştırmacıların pankreas iskemi-reperfüzyon hasarını, korunmasını, değerlendirilmesini ve sonunda onarımını daha fazla incelemelerini sağlayacaktır.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Collection Protocol for Human Pancreas

İnsan Pankreas için Toplama Protokolü

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

İzole Yöntemi<em&gt; Ex vivo</emBir Rat Modelinde&gt; Akciğer Perfüzyon: Sıçan EVLP Programı Geliştirme Öğrenilmiş Dersler

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Donör karaciğerleri Ex Situ Normotermik Makinesi Perfüzyonu

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Subnormothermic Makine Perfüzyon Yoluyla Fonksiyonel İnsan Karaciğer Koruma ve Kurtarma

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normotermik<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Böbrek Koruma Böbrek Nakli Perfüzyon önce greftler

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Fare modeli değiştirilmiş manşet tekniği kullanarak pankreas nakli için

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Fare pankreas diseksiyon histolojik analiz ve metabolik profil oluşturma

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon küçük bir hayvan Model

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

Normothermic Ex Situ kalp perfüzyon çalışma modu: değerlendirme kardiyak fonksiyon ve metabolizma

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

Robotic Lateral Pancreaticojejunostomy for Chronic Pancreatitis

Kronik Pankreatit için Robotik Lateral Pankreaticojejunostomi

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The ...