Name: microfluidic tools for probing fungal-microbial interactions at the cellular level
Uploaded: 2022-06-23T13:20:00
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हम इंपीरियल कॉलेज लंदन और लीवरहुल्मे ट्रस्ट (रिसर्च ग्रांट रेफरेंस: आरपीजी -2020-352) में बायोइंजीनियरिंग विभाग से वित्तीय सहायता स्वीकार करते हैं।

नोट: इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित प्रक्रियाओं का सारांश नेत्रहीन चित्रा 2 में दर्शाया गया है।
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63917/63917fig02.jpg"> चित्रा 2: इस प्रोटोकॉल मे...

यह लेख चैनल माइक्रोफ्लुइडिक्स का उपयोग करके फंगल-माइक्रोबियल इंटरैक्शन के अध्ययन के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। लेखकों का उद्देश्य इन उपकरणों की बहुमुखी प्रतिभा का प्रदर्शन करना और शोधकर्ता...

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Difco Laboratories</td>
			<td>214010</td>
			<td>Used to solidify culture medium for bacterial and fungal cultivation within Petri dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum foil</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>11759408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoCAD 2021</td>
			<td>Autodesk, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave (VX-75)</td>
			<td>Systec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge (5810R)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorotrimethysilane</td>
			<td>Merck Life Sciences</td>
			<td>386529</td>
			<td>CAUTION: Chlorotrimethylsilane is a hazardous substance. Wear appropriate PPE and handle with care. Avoid contact with skin and eyes and prevent inhalation. Keep away from sources of ignition and use in a well-ventilated area.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cork borer</td>
			<td>SLS</td>
			<td>COR1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Developer solution (mr-Dev 600)</td>
			<td>Microresist Technologies</td>
			<td></td>
			<td>CAUTION: mr-Dev 600 developer solution is flammable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks</td>
			<td>VWR</td>
			<td>214-1108</td>
			<td>e.g. 200 mL; choose size to suit your exact needs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (70% v/v)&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>E/0650DF/15</td>
			<td>Diluted from 99.8% (Analytical Reagent Grade)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td></td>
			<td>Exemplar software package for imaging processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filtered, compressed air</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Available as standard in most labs. Altervatively, an oil-free compressor with air regulator can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat-headed wafer tweezers</td>
			<td>SLS</td>
			<td>INS5026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>10008051</td>
			<td>Bent, sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom petri dish</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>FD35-100</td>
			<td>35 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom petri dish</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>FD5040-100</td>
			<td>50 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass crystallisation dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>216-1865</td>
			<td>Used for washing of PDMS slabs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass crystallisation dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>216-1866</td>
			<td>Used in the development of master moulds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass media bottles</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>15456113</td>
			<td>e.g. 250 mL; choose size to suit your exact needs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass syringe (Hamilton)</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>10625251</td>
			<td>Used for dispensing chlorotrimethylsilane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate (HP 160 III BM)</td>
			<td>SAWATEC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inoculation loop</td>
			<td>VWR</td>
			<td>COPA175CS01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W292907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar flow hood</td>
			<td>Air Science (PCR)</td>
			<td></td>
			<td>Exemplar laminar flow hood used for device fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB medium</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>BP9723-500</td>
			<td>Exemplar nutrient broth for bacterial overnight culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light emitting diode light engine (LedHUB)</td>
			<td>Omicron-Laserage Laserprodukte GmbH</td>
			<td></td>
			<td>Exemplar light source that can be used for imaging fungal-microbial interactions (fluorescence)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MA6 Ultraviolet mask aligner</td>
			<td>Suss Microtec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malt extract</td>
			<td>VWR</td>
			<td>84618</td>
			<td>Used to make exemplar fungal culture medium (Malt extract agar)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mask Writer</td>
			<td>Applied Materials</td>
			<td>4700DP</td>
			<td>Example of a mask writer which can be used to print photo-mask for photolithography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Master mould plastic mount</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3D-printed bespoke holder manufactured in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microbiological safety cabinet&#160; (BioMat2)</td>
			<td>Contained Air Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Exemplar MSC used for microbial culture and device inoculation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q purified water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Available as standard in biology labs.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>BP359-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements Advanced Research imaging software</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Exemplar software package for image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements Free Viewer</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Exemplar software package for viewing acquired images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven (Binder BD115)</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>15602126</td>
			<td>Used for curing poly(dimethylsiloxane)(PDMS)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven (CLO-2AH-S)</td>
			<td>KOYO</td>
			<td></td>
			<td>Used for preparing silicon wafers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>HS234526B</td>
			<td>transparent film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, square sterile</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>11708573</td>
			<td>120.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>15370366</td>
			<td>90 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photolithography mask</td>
			<td>Micro Lithography Services Ltd. UK</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma cleaner (Zepto)</td>
			<td>Diener Electronic</td>
			<td>100012601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic cup</td>
			<td>Semadeni</td>
			<td>8323</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic spatula</td>
			<td>Semadeni</td>
			<td>3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable precision balance (OHAUS Scout)</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>15519631</td>
			<td>Used for weighing PDMS, media components etc.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision cutter</td>
			<td>Syneo</td>
			<td>HS1251135P1183</td>
			<td>Cutting edge diameter: 3.18 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision cutter&#160;</td>
			<td>Syneo</td>
			<td>HS1871730P1183S</td>
			<td>Cutting edge diameter: 4.75 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Profilometer&#160;</td>
			<td>Bruker</td>
			<td></td>
			<td>Dektak XT-stylus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>H&#228;berle Labortechnik</td>
			<td>9156110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refridgerator</td>
			<td>Haden</td>
			<td></td>
			<td>4-6 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retiga R1 CCD camera</td>
			<td>Qimaging</td>
			<td></td>
			<td>Exemplar camera that can be used for imaging fungal-microbial interactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotch magic tape</td>
			<td>Office Depot</td>
			<td>3969954</td>
			<td>19 mm invisible tape; clear tape</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking incubator (Cole-Parmer SI500)</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>10257954</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon wafer</td>
			<td>Inseto</td>
			<td></td>
			<td>100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soda lime glass plate</td>
			<td>Inseto</td>
			<td></td>
			<td>125 mm x 125 mm x 2 mm. Used to hold photolithography mask in mask aligner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spincoater&#160;</td>
			<td>SAWATEC</td>
			<td>SM-180-BM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU-8 2010 photoresist</td>
			<td>MicroChem</td>
			<td></td>
			<td>CAUTION: SU-8 photoresist is hazardous, take care when handling and prevent inhalation and contact with skin. Flammable, potentially carcinogenic and toxic to the environment.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 elastomer kit</td>
			<td>VWR</td>
			<td>634165S</td>
			<td>Used for the preparation of poly(dimethylsiloxane)(PDMS) devices</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature controlled incubator</td>
			<td>Okolab</td>
			<td></td>
			<td>Exemplar incubator that can be used for imaging fungal-microbial interactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti2-E inverted epifluorescence microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MEA54000</td>
			<td>Exemplar microscope that can be used for imaging fungal-microbial interactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic cleaner S-Line</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>FB15050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum desiccator</td>
			<td>Fisher Scientific Ltd</td>
			<td>10528861</td>
			<td>Silianisation and PDMS degassing should be conducted in separate desiccators</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x10/0.3 NA CFI Plan Fluor DL objective lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRH20105</td>
			<td>Exemplar objective lens that can be used for imaging fungal-microbial interactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>x20/0.45 NA CFI Plan Fluor DL objective lens</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRH48230</td>
			<td>Exemplar objective lens that can be used for imaging fungal-microbial interactions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microfluidic tools for probing fungal-microbial interactions at the cellular level

फिलामेंटस कवक मिट्टी के सफल निवासी हैं और मिट्टी के पारिस्थितिक तंत्र में एक प्रमुख भूमिका निभाते हैं, जैसे कि कार्बनिक और अकार्बनिक पदार्थों के अपघटन के साथ-साथ पोषक तत्वों के स्तर का विनियमन। वहां उन्हें बैक्टीरिया या अन्य कवक जैसे विभिन्न अन्य रोगाणुओं के साथ बातचीत करने के कई अवसर भी मिलते हैं। सेलुलर स्तर पर फंगल इंटरैक्शन का अध्ययन करना, हालांकि, मिट्टी की ब्लैक बॉक्स जैसी प्रकृति के कारण चुनौतीपूर्ण हो सकता है। फंगल इंटरैक्शन के अध्ययन के लिए नए माइक्रोफ्लुइडिक टूल विकसित किए जा रहे हैं; बैक्टीरियल-फंगल और फंगल-फंगल इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए डिज़ाइन किए गए दो प्लेटफार्मों पर प्रकाश डाला गया है। इन माइक्रोचैनलों के भीतर, फंगल-माइक्रोबियल इंटरैक्शन को पहले से संभव की तुलना में उच्च अस्थायी और स्थानिक रिज़ॉल्यूशन पर नियंत्रित भौतिक-रासायनिक वातावरण में निगरानी की जा सकती है। इन उपकरणों के अनुप्रयोग ने कई उपन्यास जैविक अंतर्दृष्टि प्राप्त की हैं, जैसे कि हाइप के लिए बैक्टीरिया ध्रुवीय लगाव का अवलोकन या अनिर्दिष्ट कवक-कवक विरोध का खुलासा करना। इन पद्धतियों की एक प्रमुख विशेषता गैर-विशेषज्ञों द्वारा इस उपकरण के उपयोग में आसानी का संबंध है, जो सूक्ष्म जीव विज्ञान प्रयोगशालाओं में उपयोग के लिए अत्यधिक अनुवाद योग्य प्रौद्योगिकियों का उत्पादन करती है।

प्रतिनिधि परिणाम अनुकरणीय बीएफआई40 और एफएफआई41 उपकरणों से प्रस्तुत किए जाते हैं। बुनियादी माइक्रोस्कोपी तकनीकों के साथ संयोजन में इन उपकरणों का उपयोग करके हाइफल विकास दर माप आसानी स?...

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Microfluidic Tools for Probing Fungal-Microbial Interactions at the Cellular Level

मिट्टी की अपारदर्शिता के कारण, इसके घटक रोगाणुओं के बीच बातचीत को सेलुलर रिज़ॉल्यूशन के साथ आसानी से कल्पना नहीं की जा सकती है। यहां, दो माइक्रोफ्लुइडिक उपकरण प्रस्तुत किए जाते हैं, जो फंगल-माइक्रोबियल इंटरैक्शन की जांच के लिए नए अवसर प्रदान करते हैं। उपकरण बहुमुखी और उपयोग करने में सरल हैं, जो सेलुलर स्तर पर उच्च स्थानिक नियंत्रण और उच्च-रिज़ॉल्यूशन इमेजिंग को सक्षम करते हैं।

सेलुलर स्तर पर फंगल-माइक्रोबियल इंटरैक्शन की जांच के लिए माइक्रोफ्लुइडिक उपकरण

Filamentous fungi are successful inhabitants of soil and play a major role in soil ecosystems, such as in the decomposition of organic and inorganic ...

प्रस्तुत माइक्रोफ्लुइडिक उपकरणों का उपयोग करके, हम कवक और अन्य रोगाणुओं के बीच सटीक स्पेसियल और पर्यावरण नियंत्रण के साथ-साथ एकल कोशिका स्तर पर उच्च-रिज़ॉल्यूशन इमेजिंग के बीच गतिशील बातचीत की जांच कर सकते हैं। महत्वपूर्ण रूप से, फंगल विकास को माइक्रोफ्लुइडिक चैनल के भीतर सीमित और निर्देशित किया जा सकता है। प्राप्त करने के लिए उच्च गुणवत्ता समय चूक छवियों को सक्षम करना।इसलिए, फंगल-फंगल और फंगल-बैक्टीरियल इंटरैक्शन की जटिलताओं का पता लगाया जा सकता है। कवक माइक्रोबियल इंटरैक्शन को समझना मिट्टी के माइक्रोबायोम को परिभाषित करने और संरक्षित करने में एक आवश्यक कदम है। इस ज्ञान का उपयोग टिकाऊ कृषि के साथ उपन्यास जैव नियंत्रण एजेंटों के विकास के लिए किया जा सकता है।शुरू करने के लिए, एक साफ प्लास्टिक कप में स्पैटुला का उपयोग करके 10 से 1 अनुपात में आधार और इलाज एजेंट को अच्छी तरह से मिलाकर लगभग 40 ग्राम पॉली (डाइमिथाइलसिलोक्सेन) या पीडीएम तैयार करें। सभी हवा के बुलबुले को हटाने के लिए, कप को एक घंटे के लिए वैक्यूम चैंबर में रखें। अगला, स्पष्ट टेप का उपयोग करके, मास्टर मोल्ड को प्लास्टिक माउंट में सुरक्षित करें और किसी भी धूल के कणों को हटाने के लिए संपीड़ित फ़िल्टर्ड हवा का उपयोग करें, फिर मास्टर मोल्ड के केंद्र पर पीडीएम डालें और इसे व्यवस्थित करने की अनुमति दें।पीडीएम की सतह पर धूल के कणों के निपटान को रोकने के लिए, प्लास्टिक के ढक्कन के साथ मास्टर मोल्ड को शिथिल रूप से कवर करें, फिर मास्टर मोल्ड को ओवन में स्थानांतरित करें और 70 डिग्री सेल्सियस पर रात भर इलाज करें। ओवन से मास्टर मोल्ड को हटाने और इसे ठंडा करने की अनुमति देने के बाद, पीडीएम में मास्टर मोल्ड को नुकसान पहुंचाए बिना मास्टर मोल्ड और प्लास्टिक फ्रेम से ठीक किए गए पीडीएम को छील लें। फिर धूल मुक्त सतह को बनाए रखने के लिए, पीडीएम में उभरा माइक्रोचैनलों पर स्पष्ट टेप रखें।इसके बाद, डिजाइन द्वारा निर्दिष्ट स्लैब में पीडीएम को काटने के लिए एक घुड़सवार गिलोटिन या रेजर ब्लेड का उपयोग करें। बैक्टीरियल-फंगल इंटरैक्शन डिवाइस, या बीएफआई डिवाइस के लिए उपयोग किए जाने वाले पीडीएम स्लैब के पार्श्व उद्घाटन को काटते समय, सुनिश्चित करें कि माइक्रोचैनल पूरी तरह से खुले हैं। हालांकि, फंगल-फंगल इंटरैक्शन डिवाइस, या एफएफआई की असेंबली में उपयोग किए जाने वाले पीडीएम स्लैब के लिए, प्रत्येक कोने को छंटनी की जानी चाहिए ताकि यह ग्लास बॉटम पेट्री डिश में फिट हो जाए।अगला, डिवाइस डिज़ाइन के अनुसार इनलेट या आउटलेट छेद पंच करने के लिए एक सटीक कटर का उपयोग करें। इसके बाद, पीडीएम स्लैब को 0.5 दाढ़ सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान में डुबोएं। उन्हें 70% इथेनॉल समाधान में स्थानांतरित करने से पहले बाँझ डबल आसुत जल में स्लैब कुल्ला।इथेनॉल को हटाने और फिर से डबल आसुत बाँझ पानी के साथ स्लैब को कुल्ला करने के बाद, स्लैब को बाँझ डबल आसुत जल में विसर्जित करें और पांच मिनट के लिए सोनीकेट करें, फिर पीडीएम स्लैब को पानी से हटा दें, उन्हें संपीड़ित फ़िल्टर्ड हवा से सुखाएं, और उन्हें बाँझ वर्ग पेट्री डिश में रखें। इसके बाद, एक घंटे के लिए 70 डिग्री सेल्सियस पर ओवन में पीडीएम स्लैब के साथ पेट्री डिश सेते हैं। एक बार जब स्लैब धूल मुक्त वातावरण में ठंडा हो जाते हैं, तो टेप और संपीड़ित फ़िल्टर्ड हवा का उपयोग करके उनकी सतह से किसी भी धूल को साफ करें।पीडीएम स्लैब और ग्लास बॉटम पेट्री डिश की सतहों को सक्रिय करने के लिए, जो बाद में एक साथ बंधे होंगे, उन्हें ऊपर की ओर सक्रिय होने वाली सतहों के साथ प्लाज्मा क्लीनर में रखें। प्लाज्मा क्लीनर से पेट्री डिश में पीडीएम स्लैब को हटाने के बाद, सक्रिय सतहों को एक दूसरे के अनुरूप संपर्क में रखकर उन्हें धीरे-धीरे बांधें। बॉन्ड बीएफआई और एफएफआई पीडीएम क्रमशः 35 मिलीमीटर और 55 मिलीमीटर व्यास के पेट्री व्यंजनों के साथ स्लैब, सफल बंधन की जांच के लिए, चिमटी के साथ अपने पेट्री डिश से पीडीएम प्रयोगशाला को खींचने की कोशिश करते हैं।इनोक्यूलेशन इनलेट्स या माइक्रोचैनलों का कोई पतन सुनिश्चित करने के लिए डिवाइस को आंखों के साथ या जेनेरिक माइक्रोस्कोपी द्वारा सावधानीपूर्वक विज़ुअलाइज़ करें। पानी संतृप्त या पोषक तत्वों से भरपूर स्थितियों के लिए, बंधन के तुरंत बाद बीएफआई उपकरणों को भरने के लिए वांछित समाधान के पिपेट 100 माइक्रोलीटर। एफएफआई उपकरणों के लिए, प्रत्येक इनलेट में मीडिया के 30 माइक्रोलीटर जोड़ें।अंत में, आर्द्रता बनाए रखने के लिए पेट्री डिश में बाँझ डबल आसुत जल के 100 से 200 माइक्रोलीटर जोड़ें। हालांकि, पानी की असंतृप्त स्थितियों के लिए, आर्द्रता बनाए रखने के लिए पेट्री डिश में बाँझ डबल आसुत जल के 100 से 200 माइक्रोलीटर जोड़ें। कवक टीकाकरण के लिए, एक लामिना प्रवाह हुड के अंदर, एक निष्फल कॉर्क बोरर का उपयोग करके, तीन दिन पुरानी संस्कृति की परिधि पर एक कॉलोनी से एक अगर प्लग निकालें, जिससे बढ़ते हाइफल फ्रंट को बरकरार रखा जा सके।या एफएफआई डिवाइस के फंगल इनलेट में अगर प्लग को पेश करें, जिसमें चैनलों के हाइफल घुसपैठ को प्रोत्साहित करने के लिए माइक्रोचैनल उद्घाटन की ओर उन्मुख हाइफल फ्रंट में माइसेलियम पक्ष नीचे है। एफएफआई डिवाइस के लिए, विपरीत इनलेट में दूसरी कवक प्रजातियों के साथ एक और अगर प्लग पेश करें। अगला, एक पारदर्शी फिल्म के साथ पेट्री डिश को सील करें और इमेजिंग तक अंधेरे में 25 से 28 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं।बैक्टीरिया के टीकाकरण के लिए, इनक्यूबेटर से बीएफआई डिवाइस को हटाने के बाद, एक बाँझ वातावरण में जीवाणु इनलेट में एक जीवाणु निलंबन के पिपेट 10 माइक्रोलीटर। एक बार पेट्री डिश को पारदर्शी फिल्म के साथ सील कर दिया जाता है, तो इमेजिंग शुरू होने तक डिवाइस को अंधेरे में 25 डिग्री सेल्सियस पर सीधे संग्रहीत किया जाता है। इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए, कवक कोप्रिनोप्सिस सिनेरिया और जीवाणु बेसिलस सबटिलिस के बीच बातचीत को सफलतापूर्वक कल्पना की जा सकती है।यह देखा गया कि जीवाणु की उपस्थिति में, लगभग पांच घंटे के सिक्के के बाद कवक की वृद्धि दर में भारी गिरावट शुरू हो गई। इसके अलावा, बैक्टीरिया से जुड़े फंगल हाइप में पतली और पारदर्शी उपस्थिति थी। टाइम लैप्स फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी ने बेसिलस सबटिलिस के साथ पांच घंटे के सिक्के के बाद फंगल हाइपहे पतन का भी खुलासा किया।हालांकि, छह घंटे के बाद से, जीवाणु आबादी में भी गिरावट शुरू हो गई। फंगल-फंगल इंटरैक्शन के विज़ुअलाइज़ेशन से पता चला है कि फ्यूजेरियम ग्रामिनियरम ने ट्राइकोडर्मा रॉसिकम के विकास को दृढ़ता से रोक दिया, जो प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके स्पष्ट था। इस प्रोटोकॉल ने आगे बैक्टीरिया स्यूडोमोनास सिंक्सांथा और स्यूडोमोनास फ्लोरेसेंस की उपस्थिति में कवक वर्टिसिलियम लॉन्गिस्पोरम में महत्वपूर्ण रूपात्मक परिवर्तनों का खुलासा किया।अध्ययन में इस्तेमाल की गई उच्च रिज़ॉल्यूशन गतिशील इमेजिंग तकनीक ने कवक क्लोनोस्टैचिस रोसिया की उपस्थिति में फुसेरियम ग्रामिनियरम में सेप्टा गठन का भी खुलासा किया। प्रतिदीप्ति लेबलिंग ने एफएफआई डिवाइस में क्लोनोस्टैचिस रोजिया हाइफल प्रसार के गतिशील परिमाणीकरण को वहन किया। इन उपकरणों को उपयोगकर्ता द्वारा ब्याज की विभिन्न प्रजातियों को शामिल करने और फंगल माइक्रोबियल इंटरैक्शन से संबंधित उनके विशिष्ट प्रयोगात्मक प्रश्नों को संबोधित करने के लिए अनुकूलित और संशोधित किया जा सकता है।बीएफआई और एफएफआई दोनों उपकरणों ने वैज्ञानिक सीमाओं को धक्का दिया है, यह खुलासा करते हुए कि कवक कवक, वायरस, नेमाटोड द्वारा हमले पर रक्षा संकेतों और पोषक तत्वों का प्रचार कैसे करता है और जीवाणु फैलाव पर जांच को सक्षम करता है।

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