Name: investigating the pathogenesis of myh7 mutation gly823glu in familial hypertrophic cardiomyopathy using a mouse model
Uploaded: 2022-08-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Pathogenesis of MYH7 Mutation Gly823Glu in Familial Hypertrophic Cardiomyopathy using a Mouse Model at JoVE.com

Эта работа была поддержана проектом Фонда медицинских исследований провинции Гуандун (A2022363) и крупным проектом Гуандунского комитета по науке и технологиям, Китай (грант No 2022).
Мы хотели бы поблагодарить Цинцзяня Чэня из Университета Мэриленда, Колледж-Парк за помощь во время подготовки этой рукописи.

Истории семей были получены путем опроса членов семьи. Исследование было одобрено Комитетом по этике Провинциальной больницы китайской медицины провинции Гуандун (No 2019074). От всех членов семьи было получено информированное письменное согласие. Все животные лечатся в соответствии с эт?...

<ol>
	<li>Toepfer, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+sequestration+regulates+sarcomere+function,+cardiomyocyte+energetics,+and+metabolism,+informing+the+pathogenesis+of+hypertrophic+cardiomyopathy.">Myosin sequestration regulates sarcomere function, cardiomyocyte energetics, and metabolism, informing the pathogenesis of hypertrophic cardiomyopathy.</a> Circulation. 141 (10), 828-842 (2020).</li><li>Writing Committee Members et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2020+AHA/ACC+guideline+for+the+diagnosis+and+treatment+of+patients+with+hypertrophic+cardiomyopathy:+A+report+of+the+American+College+of+Cardiology/American+Heart+Association+Joint+Committee+on+Clinical+Practice+Guidelines.">2020 AHA/ACC guideline for the diagnosis and treatment of patients with hypertrophic cardiomyopathy: A report of the American College of Cardiology/American Heart Association Joint Committee on Clinical Practice Guidelines.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 162 (1), 23-106 (2021).</li><li>Elliott, P., McKenna, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertrophic+cardiomyopathy.">Hypertrophic cardiomyopathy.</a> Lancet. 363 (9424), 1881-1891 (2004).</li><li>Maron, B. J., Maron, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertrophic+cardiomyopathy.">Hypertrophic cardiomyopathy.</a> Lancet. 381 (9862), 242-255 (2013).</li><li>Inoue, T., Orgel, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nonenzymatic+RNA+polymerase+model.">A nonenzymatic RNA polymerase model.</a> Science. 219 (4586), 859-862 (1983).</li><li>Sanger, F., Nicklen, S., Coulson, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+sequencing+with+chain-terminating+inhibitors.">DNA sequencing with chain-terminating inhibitors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 74 (12), 5463-5467 (1977).</li><li>Sachidanandam, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+map+of+human+genome+sequence+variation+containing+1.42+million+single+nucleotide+polymorphisms.">A map of human genome sequence variation containing 1.42 million single nucleotide polymorphisms.</a> Nature. 409 (6822), 928-933 (2001).</li><li>Ng, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+capture+and+massively+parallel+sequencing+of+12+human+exomes.">Targeted capture and massively parallel sequencing of 12 human exomes.</a> Nature. 461 (7261), 272-276 (2009).</li><li>Wong, K. M., Hudson, T. J., McPherson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+the+genetics+of+cancer:+genome+sequencing+and+beyond.">Unraveling the genetics of cancer: genome sequencing and beyond.</a> Annual Review of Genomics and Human Genetics. 12, 407-430 (2011).</li><li>Mattivi, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+utility+of+a+phenotype-enhanced+MYH7-specific+variant+classification+framework+in+hypertrophic+cardiomyopathy+genetic+testing.">Clinical utility of a phenotype-enhanced MYH7-specific variant classification framework in hypertrophic cardiomyopathy genetic testing.</a> Circulation. Genomic and Precision Medicine. 13 (5), 453-459 (2020).</li><li>Jiang, J., Wakimoto, H., Seidman, J. G., Seidman, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allele-specific+silencing+of+mutant+Myh6+transcripts+in+mice+suppresses+hypertrophic+cardiomyopathy.">Allele-specific silencing of mutant Myh6 transcripts in mice suppresses hypertrophic cardiomyopathy.</a> Science. 342 (6154), 111-114 (2013).</li><li>Hayashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+background+of+Japanese+patients+with+pediatric+hypertrophic+and+restrictive+cardiomyopathy.">Genetic background of Japanese patients with pediatric hypertrophic and restrictive cardiomyopathy.</a> Journal of Human Genetics. 63 (9), 989-996 (2018).</li><li>Gil, W. S., &#193;vila Vidal, L. A., V&#225;squez Salguero, M. A., Cajiao, M. B., Pe&#241;a, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+variant+affecting+the+myosin+light+chain+2+related+to+familial+hypertrophic+cardiomyopathy.">Genetic variant affecting the myosin light chain 2 related to familial hypertrophic cardiomyopathy.</a> Intractable &amp; Rare Diseases Research. 9 (4), 229-232 (2020).</li><li>Berge, K. E., Leren, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+hypertrophic+cardiomyopathy+in+Norway.">Genetics of hypertrophic cardiomyopathy in Norway.</a> Clinical Genetics. 86 (4), 355-360 (2014).</li><li>McNamara, J. W., Schuckman, M., Becker, R. C., Sadayappan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+homozygous+intronic+variant+in+TNNT2+associates+with+feline+cardiomyopathy.">A novel homozygous intronic variant in TNNT2 associates with feline cardiomyopathy.</a> Frontiers in Physiology. 11, 608473 (2020).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+transcriptome+analysis+of+atrial+septal+defect+identifies+dysregulated+genes+during+heart+septum+morphogenesis.">Comparative transcriptome analysis of atrial septal defect identifies dysregulated genes during heart septum morphogenesis.</a> Gene. 575, 303-312 (2016).</li><li>Andersen, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+yield,+interpretation,+and+clinical+utility+of+mutation+screening+of+sarcomere+encoding+genes+in+Danish+hypertrophic+cardiomyopathy+patients+and+relatives.">Diagnostic yield, interpretation, and clinical utility of mutation screening of sarcomere encoding genes in Danish hypertrophic cardiomyopathy patients and relatives.</a> Human Mutations. 30 (3), 363-370 (2009).</li><li>Nakashima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifelong+clinical+impact+of+the+presence+of+sarcomere+gene+mutation+in+Japanese+patients+with+hypertrophic+cardiomyopathy.">Lifelong clinical impact of the presence of sarcomere gene mutation in Japanese patients with hypertrophic cardiomyopathy.</a> Circulation Journal. 84 (10), 1846-1853 (2020).</li><li>Hu, L. R., Kontrogianni-Konstantopoulos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+myocardia+containing+the+Obscurin+R4344Q+mutation+linked+to+hypertrophic+cardiomyopathy.">Proteomic analysis of myocardia containing the Obscurin R4344Q mutation linked to hypertrophic cardiomyopathy.</a> Frontiers in Physiology. 11, 478 (2020).</li><li>Girolami, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+alpha-actinin+2+variant+associated+with+familial+hypertrophic+cardiomyopathy+and+juvenile+atrial+arrhythmias:+a+massively+parallel+sequencing+study.">Novel alpha-actinin 2 variant associated with familial hypertrophic cardiomyopathy and juvenile atrial arrhythmias: a massively parallel sequencing study.</a> Circulation. Cardiovascular Genetics. 7 (6), 741-750 (2014).</li><li>Salazar-Mendiguchia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p.(Cys150Tyr)+variant+in+CSRP3+is+associated+with+late-onset+hypertrophic+cardiomyopathy+in+heterozygous+individuals.">The p.(Cys150Tyr) variant in CSRP3 is associated with late-onset hypertrophic cardiomyopathy in heterozygous individuals.</a> European Journal of Medical Genetics. 63 (12), 104079 (2020).</li><li>Teekakirikul, P., Zhu, W., Huang, H. C., Fung, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertrophic+cardiomyopathy:+An+overview+of+genetics+and+management.">Hypertrophic cardiomyopathy: An overview of genetics and management.</a> Biomolecules. 9 (12), 878 (2019).</li><li>Crossley, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+Sanger+sequencing+and+molecular+assay+monitoring.">Guidelines for Sanger sequencing and molecular assay monitoring.</a> Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 32 (6), 767-775 (2020).</li><li>Song, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+profile+in+Chinese+patients+with+hypertrophic+cardiomyopathy.">Mutations profile in Chinese patients with hypertrophic cardiomyopathy.</a> Clinica Chimica Acta. 351 (1-2), 209-216 (2005).</li><li>Marian, A. J., Braunwald, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertrophic+cardiomyopathy:+Genetics,+pathogenesis,+clinical+manifestations,+diagnosis,+and+therapy.">Hypertrophic cardiomyopathy: Genetics, pathogenesis, clinical manifestations, diagnosis, and therapy.</a> Circulation Research. 121 (7), 749-770 (2017).</li><li>Cann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotype-driven+molecular+autopsy+for+sudden+cardiac+death.">Phenotype-driven molecular autopsy for sudden cardiac death.</a> Clinical Genetics. 91 (1), 22-29 (2017).</li><li>Lafreniere-Roula, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Family+screening+for+hypertrophic+cardiomyopathy:+Is+it+time+to+change+practice+guidelines.">Family screening for hypertrophic cardiomyopathy: Is it time to change practice guidelines.</a> European Heart Journal. 40 (45), 3672-3681 (2019).</li><li>Winkelmann, D. A., Forgacs, E., Miller, M. T., Stock, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+drug-induced+allosteric+changes+to+human+beta-cardiac+myosin+motor+activity.">Structural basis for drug-induced allosteric changes to human beta-cardiac myosin motor activity.</a> Nature Communications. 6, 7974 (2015).</li><li>Garc&#237;a-Giustiniani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotype+and+prognostic+correlations+of+the+converter+region+mutations+affecting+the+&#946;+myosin+heavy+chain.">Phenotype and prognostic correlations of the converter region mutations affecting the &#946; myosin heavy chain.</a> Heart (British Cardiac Society). 101 (13), 1047-1053 (2015).</li><li>Moore, J. R., Leinwand, L., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+cardiomyopathy+phenotypes+based+on+the+functional+impact+of+mutations+in+the+myosin+motor.">Understanding cardiomyopathy phenotypes based on the functional impact of mutations in the myosin motor.</a> Circulation Research. 111 (3), 375-385 (2012).</li><li>Majewski, J., Schwartzentruber, J., Lalonde, E., Montpetit, A., Jabado, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+can+exome+sequencing+do+for+you.">What can exome sequencing do for you.</a> Journal of Medical Genetics. 48 (9), 580-589 (2011).</li></ol>

В этом исследовании мы описываем одну китайскую ханьскую семью с HCM. Генетический анализ показал, что гетерозиготная мутация MYH6 p.G823E сегрегируется с заболеванием у членов семьи с аутосомно-доминантным наследованием. Чтобы проверить патогенность мутации G823E и обсудить основные механиз?...

Гипертрофическая кардиомиопатия (HCM, OMIM: 613690) является наиболее распространенной кардиомиопатией в Китае, с оценочной заболеваемостью 0,2%, затрагивающей 150 000 человек 1,2.
Патологической анатомической особенностью, характеризующей ГКМП, является асимметричная желудочковая гипертрофия, которая часто включает желудочковый отток и/или межжелудочковую перегородку3. Клиническим проявлением является одышка при физической нагрузке, усталость и боль в груди. Индивидуальный фенотип ГКМП имеет вариабельность, варьирующуюся от клинически коварной до тяжелой сердечной недостаточности. Пациенты с ГКМП нуждаются в медицинском лечении, трансплантации сердца, оборудовании для жизнеобеспечения и междисциплинарном наблюдении4.
В прошлом веке технология ПЦР изменила способ изучения ДНК5. Метод секвенирования ДНК для клинической диагностики был открыт Сэнгером и его коллегами6. Метод Сэнгера был впоследствии применен к проекту «Геном человека», но этот подход был дорогостоящим и трудоемким7. Появление секвенирования всего генома (WGS) вывело понимание генетических заболеваний человека на новые высоты, но оно оставалось непомерно высоким с точки зрения стоимости. Технология секвенирования цельного экзома (WES) уже давно используется для обнаружения вариантов зародышевой линии8 и успешно идентифицирует мутации соматического драйвера в экзоме различных видов рака9. Обнаружение экзонов ДНК или кодирующих областей с помощью WES может быть использовано для выявления патогенных вариантов при большинстве менделевских заболеваний. Сегодня, с уменьшением стоимости секвенирования, WGS, как ожидается, станет важным инструментом в исследованиях геномики и может широко использоваться при обнаружении патогенных вариантов в геноме.
Технология WES также использовалась при наследственной кардиомиопатии для выявления патогенных вариантов для дальнейшего выяснения этиологии. Новые данные свидетельствуют о том, что гены, кодирующие структурные мутации генов саркомера белка, такие как MYH710, MYH611, MYBPC312, MYL213, MYL314, TNNT215, TNNI316, TNNC117 и TPM118 , ответственны за генетическую этиологию ГКМ. Осведомленность о патогенных вариантах в редких болезнетворных генах (например, мракурин, цитоскелетный кальмодулин и титин-взаимодействующий RhoGEF (OBSCN, OMIM: 608616)19, действующий альфа 2 (ACTN2, OMIM: 102573)20, а также цистеин и глицин богатый белок 3 (CSRP3, OMIM: 600824)21) также была связана с HCM. Современные генетические исследования выявили несколько различных патогенных вариантов в гене саркомерного белка примерно у 40%-60% пациентов с ГКМП, а генетическое тестирование у пациентов с ГКМП показало, что большинство патогенных вариантов встречаются в тяжелой цепи миозина (MYH7) и миозин-связывающем белке C (MYBPC3). Тем не менее, генетическая основа для HCM остается неуловимой. Изучение патогенности этих вариаций, лежащих в основе пациентов с ГКМП, остается серьезной проблемой22.
В этом исследовании мы сообщаем о патогенном варианте MYH7 в китайской ханьской семье с HCM от WES. Чтобы проверить патогенность этого варианта, мы установили нокаутирующих мышей C57BL/6N-Myh7em1(G823E) с использованием системы CRISPR/Cas9. Мы также обсуждаем правдоподобные механизмы этого варианта.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5&#215;TBE</td>
			<td>Shanghai Sangon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2&#215; Taq Master Mix (Dye Plus)</td>
			<td>Nanjing Novizan Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Regu</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine for small animals</td>
			<td>Reward Life Technology Co., Ltd.</td>
			<td>R500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BEDTools</td>
			<td></td>
			<td>2.16.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cas9 in vitro digestion method to detect gRNA target efficiency kit</td>
			<td>Viewsolid Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>VK007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Marker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA stabilizer</td>
			<td>Shanghai Seebio Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DNAstable LD</td>
			<td>prevent DNA degradation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric paraffin microtome</td>
			<td>Shenyang Hengsong Technology Co., Ltd.</td>
			<td>HS-S7220-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GATK</td>
			<td></td>
			<td>v3.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentra Puregene blood kit</td>
			<td>Santa Clara</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slide, coverslip</td>
			<td>Jiangsu Invotech Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin staining solution, Eosin staining solution</td>
			<td>Shanghai Biyuntian Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>C0107-500ml, C0109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiSeq X-ten platform</td>
			<td>Illumina</td>
			<td></td>
			<td>perform sequencing on the captured libraries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection of chorionic gonadotropin</td>
			<td>Livzon Pharmaceutical Group Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection of pregnant mare serum gonadotropin</td>
			<td>Livzon Pharmaceutical Group Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Local suppliers</td>
			<td></td>
			<td>inhalation anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE Ts2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding Machine</td>
			<td>Shenyang Hengsong Technology Co., Ltd.</td>
			<td>HS-B7126-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picard</td>
			<td></td>
			<td>(2.2.4) 20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Merck KGaA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>samtools</td>
			<td></td>
			<td>1.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencer</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>ABI 3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ745T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SureSelect Human All Exon V6</td>
			<td>Agilent Technology Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>exome probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 ARCA mRNA Kit</td>
			<td>New England BioLabs, Inc.</td>
			<td>NEB-E2065S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature box</td>
			<td>BINDER GmbH</td>
			<td>KBF-S Solid.Line</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma Hydrochloride Solution</td>
			<td>Sigma, Merck KGaA</td>
			<td>No. T2663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary ultrasound system</td>
			<td>Royal Philips</td>
			<td>CX50</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

investigating the pathogenesis of myh7 mutation gly823glu in familial hypertrophic cardiomyopathy using a mouse model

Семейная гипертрофическая кардиомиопатия (HCM, OMIM: 613690) является наиболее распространенной кардиомиопатией в Китае. Тем не менее, основная генетическая этиология HCM остается неуловимой.
Ранее мы идентифицировали гетерозиготный вариант гена миозина тяжелой цепи 7 (MYH7), NM_000257,4: c.G2468A (p.G823E), в большой китайской семье Хань с HCM. В этом семействе вариант G823E косерегируется с аутосомно-доминантным расстройством. Этот вариант расположен в рычажной области шеи белка MYH7 и высоко сохраняется среди гомологичных миозинов и видов. Чтобы проверить патогенность варианта G823E, мы создали модель мыши C57BL/6N с точечной мутацией (G823E) в локусе MYH7 мыши с помощью CRISPR/Cas9-опосредованной геномной инженерии. Мы разработали векторы гРНК, нацеленные на донорские олигонуклеотиды (с последовательностями нацеливания, окруженными 134 bp гомологии). Сайт p.G823E (от GGG до GAG) в донорском олигонуклеотиде был введен в экзон 23 MYH7 путем гомологического репарации. Также был вставлен глушенный p.R819 (от AGG до CGA), чтобы предотвратить связывание гРНК и повторное расщепление последовательности после гомологического репарации. Эхокардиография выявила гипертрофию задней стенки левого желудочка (LVPW) с систолой у мышей MYH7 G823E/- в возрасте 2 месяцев. Эти результаты были также подтверждены гистологическим анализом (рисунок 3).
Эти результаты демонстрируют, что вариант G823E играет важную роль в патогенезе ГКМП. Наши результаты обогащают спектр вариантов MYH7, связанных с семейным HCM, и могут служить руководством для генетического консультирования и пренатальной диагностики в этой китайской семье.

Клинический профиль семей Семейные родословные ГКМП были получены и показаны на рисунке 2. Все зарегистрированные члены семьи были диагностированы с HCM при зачислении.
В семье (Рисунок 2А) пробаном был пациент III-7, у которого в 46 лет была д?...

Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Pathogenesis of MYH7 Mutation Gly823Glu in Familial Hypertrophic Cardiomyopathy using a Mouse Model at JoVE.com

Investigating the Pathogenesis of MYH7 Mutation Gly823Glu in Familial Hypertrophic Cardiomyopathy using a Mouse Model

Основываясь на семействе семейных наследственных кардиомиопатий, найденных в нашей клинической работе, мы создали модель мыши C57BL / 6N с точечной мутацией (G823E) в локусе MYH7 мыши с помощью CRISPR / Cas9-опосредованной геномной инженерии для проверки этой мутации.

Исследование патогенеза мутации MYH7 Gly823Glu при семейной гипертрофической кардиомиопатии с использованием мышиной модели

Familial hypertrophic cardiomyopathy (HCM, OMIM: 613690) is the most common cardiomyopathy in China. However, the underlying genetic etiology of HCM ...

Этот протокол важен, так как он может обеспечить демонстрацию ультразвука у мелких животных. Этот метод может дать представление об открытии патогенных генов при наследственной кардиомиопатии. Зафиксируйте мышей-ноукинов горизонтально на платформе, затем наклоните платформу на 30 градусов к нокину мыши.Удалите волосы на передней грудной стенке мышей с помощью крема для депиляции расположите зонд вертикально с шишкой, обращенной к голове животного. Затем поверните зонд против часовой стрелки примерно на 45 градусов в полустернальной длинной оси. Поверните зонд на 90 градусов по часовой стрелке, чтобы получить вид на короткую ось para sternal.После вращения зонда отрегулируйте смещение оси Y, чтобы получить правильный срез. Наблюдайте за изображением сердца с длинной осью, а затем выберите данные измерения в режиме M. Получение ультразвуковых данных с полустернальных длинноосевых видов мышей и измерение частоты сердечных сокращений, фракции выброса левого желудочка, сердечного выброса, левого желудочка и диастолического измерения, левого желудочка и систолического измерения.Задняя стенка левого желудочка и желудочковая перегородка. Были получены семейные родословные гипертрофической кардиомиопатии, и всем задокументированным членам семьи был поставлен диагноз гипертрофической кардиомиопатии. Секвенирование Сэнгера подтвердило один и тот же вариант M Y H 7 P G 8 23 E у всех пациентов, но не у здоровых людей в семьях.И 174 контрольных элемента, гетерозиготные M Y H 7 P G 8 23 E полностью сегрегированы в этом семействе. Остаток глицина в Codon 8 23 в области домена шеи M Y H 7 был высоко сохранен во всех доступных последовательностях миоцинов позвоночных. В соответствии со стандартами и руководящими принципами A C M G вариант M Y H 7 P G 8 23 E был предсказан как патогенный вариант.У мышей-нокинов развилась возрастная гипертрофия сердца после рождения. Эхокардиография показала, что межжелудочковая перегородка и задняя стенка левого желудочка развивались с увеличением частоты сердечных сокращений у мышей-нокинов. Также подтверждено гистологическим анализом.Данные ультразвукового исследования вируса могут быть получены путем вращения зонда под разными углами на разных участках мышиного термина.

Research

JoVE Journal

Genetics

Detection of Copy Number Alterations Using Single Cell Sequencing

Обнаружение Copy Number Изменений Использование Single Cell Секвенирование

Detection of genomic changes at single cell resolution is important for characterizing genetic heterogeneity and evolution in normal tissues, cancers, and ...

A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells

Стандартная методология для изучения на месте мутагенность как функция Точечная мутация ремонта, катализируемые ТРИФОСФАТЫ/Cas9 и SsODN в клетках человека

Combinatorial gene editing using CRISPR/Cas9 and single-stranded oligonucleotides is an effective strategy for the correction of single-base point ...

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Эффективное производство и генерируемые идентификации ТРИФОСФАТЫ/Cas9 гена нокауты в модели системы данио рерио

Characterization of the clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system of Streptococcus pyogenes has enabled the development ...

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

Profiling DNA Replication Timing Using Zebrafish as an In Vivo Model System

Профилирования времени репликации ДНК, используя данио рерио как в естественных условиях модель системы

DNA replication timing is an important cellular characteristic, exhibiting significant relationships with chromatin structure, transcription, and DNA ...

Using Mouse Oocytes to Assess Human Gene Function During Meiosis I

С помощью мыши яйцеклеток для оценки человеческого гена функции во время мейоза я

Embryonic aneuploidy is the major genetic cause of infertility in humans. Most of these events originate during female meiosis, and albeit positively ...

Visualization of Microbiota in Tick Guts by Whole-mount In Situ Hybridization

Visualization of Microbiota in Tick Guts by Whole-mount In Situ Hybridization

Визуализация микробиоты в кишки клеща в целом гора в Situ гибридизация

Infectious diseases transmitted by arthropod vectors continue to pose a significant threat to human health worldwide. The pathogens causing these ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

Использование в пробирке и в клеток форму расследовать малые молекулы индуцированной пре мРНК структурные изменения

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...

Characterizing Histone Post-translational Modification Alterations in Yeast Neurodegenerative Proteinopathy Models

Характеризуя гистона столб-поступательные изменения изменения в моделях Neurodegenerative Proteinopathy дрожжей

Neurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson&#39;s disease (PD), cause the loss of hundreds of thousands of lives ...

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

Определения скорости оплодотворение яйца Bemisia tabaci с помощью цитогенетического техника

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant ...

A Non-random Mouse Model for Pharmacological Reactivation of Mecp2 on the Inactive X Chromosome

Модель неслучайной мыши для фармакологической активации Mecp2 на неактивной х-хромосоме

X chromosome inactivation (XCI) is the random silencing of one X chromosome in females to achieve gene dosage balance between the sexes. As a result, all ...