Name: non-invasive pet/mr imaging in an orthotopic mouse model of hepatocellular carcinoma
Uploaded: 2022-08-31T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma at JoVE.com

Riconosciamo il sostegno dell'Hong Kong Anticancer Trust Fund, Hong Kong Research Grants Council Collaborative Research Fund (CRF C7018-14E) per gli esperimenti di imaging di piccoli animali. Ringraziamo anche il supporto del Molecular Imaging and Medical Cyclotron Center (MIMCC) presso l'Università di Hong Kong per la fornitura di [18 F]FMISO e [18F]FDG.

Tutti gli studi sugli animali sono stati condotti in conformità con il Comitato sull'uso di animali vivi nell'insegnamento e nella ricerca (CULATR) presso il Centre for Comparative Medicine Research (CCMR) dell'Università di Hong Kong, un programma accreditato dall'Associazione per la valutazione e l'accreditamento della cura degli animali da laboratorio internazionale (AAALAC). Gli animali utilizzati nello studio erano topi femmina BALB/cAnN-nu (Nude) all'età di 6-8 settimane, pesati a 20 g ± 2 g. Cibo e acqua erano...

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	<li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Chen, C., Lou, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+inducible+factors+in+hepatocellular+carcinoma.">Hypoxia inducible factors in hepatocellular carcinoma.</a> Oncotarget. 8 (28), 46691-46703 (2017).</li><li>Lu, R. -. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positron-emission+tomography+for+hepatocellular+carcinoma:+Current+status+and+future+prospects.">Positron-emission tomography for hepatocellular carcinoma: Current status and future prospects.</a> World Journal of Gastroenterology. 25 (32), 4682-4695 (2019).</li><li>Larsson, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adding+11C-acetate+to+18F-FDG+at+PET+examination+has+an+incremental+value+in+the+diagnosis+of+hepatocellular+carcinoma.">Adding 11C-acetate to 18F-FDG at PET examination has an incremental value in the diagnosis of hepatocellular carcinoma.</a> Molecular Imaging and Radionuclide Therapy. 21 (1), 6-12 (2012).</li><li>Huo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+analysis+of+dynamic+11C-acetate+PET/CT+imaging+as+a+potential+method+for+differentiation+of+hepatocellular+carcinoma+and+benign+liver+lesions.">Kinetic analysis of dynamic 11C-acetate PET/CT imaging as a potential method for differentiation of hepatocellular carcinoma and benign liver lesions.</a> Theranostics. 5 (4), 371-377 (2015).</li><li>Lopci, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PET+radiopharmaceuticals+for+imaging+of+tumor+hypoxia:+A+review+of+the+evidence.">PET radiopharmaceuticals for imaging of tumor hypoxia: A review of the evidence.</a> American Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 4 (4), 365-384 (2014).</li><li>Mao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+through+which+hypoxia-induced+caveolin-1+drives+tumorigenesis+and+metastasis+in+hepatocellular+carcinoma.">Mechanisms through which hypoxia-induced caveolin-1 drives tumorigenesis and metastasis in hepatocellular carcinoma.</a> Cancer Research. 76 (24), 7242-7253 (2016).</li><li>Kung-Chun Chiu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+regulates+the+mitochondrial+activity+of+hepatocellular+carcinoma+cells+through+HIF/HEY1/PINK1+pathway.">Hypoxia regulates the mitochondrial activity of hepatocellular carcinoma cells through HIF/HEY1/PINK1 pathway.</a> Cell Death &amp; Disease. 10 (12), 934 (2019).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+cell+clones+with+different+metastatic+potential+from+the+metastatic+hepatocellular+carcinoma+cell+line+MHCC97.">Establishment of cell clones with different metastatic potential from the metastatic hepatocellular carcinoma cell line MHCC97.</a> World Journal of Gastroenterology. 7 (5), 630-636 (2001).</li><li>Faustino-Rocha, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+rat+mammary+tumor+volume+using+caliper+and+ultrasonography+measurements.">Estimation of rat mammary tumor volume using caliper and ultrasonography measurements.</a> Lab Animal. 42 (6), 217-224 (2013).</li><li>Liu, Q., Tan, K. V., Chang, H. C., Khong, P. L., Hui, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+quantification+of+brown+and+beige+adipose+tissues+in+mice+using+[18F]+FDG+micro-PET/MR+imaging.">Visualization and quantification of brown and beige adipose tissues in mice using [18F] FDG micro-PET/MR imaging.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (173), e62460 (2021).</li><li>Lin, W. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-activated+cytotoxic+agent+tirapazamine+enhances+hepatic+artery+ligation-induced+killing+of+liver+tumor+in+HBx+transgenic+mice.">Hypoxia-activated cytotoxic agent tirapazamine enhances hepatic artery ligation-induced killing of liver tumor in HBx transgenic mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 113 (42), 11937-11942 (2016).</li><li>Wong, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRAF+methylation+by+PRMT6+regulates+aerobic+glycolysis-driven+hepatocarcinogenesis+via+ERK-dependent+PKM2+nuclear+relocalization+and+activation.">CRAF methylation by PRMT6 regulates aerobic glycolysis-driven hepatocarcinogenesis via ERK-dependent PKM2 nuclear relocalization and activation.</a> Hepatology. 71 (4), 1279-1296 (2020).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+cisplatin-loaded+hydrogels+for+trans-portal+vein+chemoembolization+in+an+orthotopic+liver+cancer+mouse+model.">Development of cisplatin-loaded hydrogels for trans-portal vein chemoembolization in an orthotopic liver cancer mouse model.</a> Drug Delivery. 28 (1), 520-529 (2021).</li><li>Shi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+evaluation+of+five+nasopharyngeal+carcinoma+animal+models+on+the+microPET/MR+platform.">Longitudinal evaluation of five nasopharyngeal carcinoma animal models on the microPET/MR platform.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (5), 1497-1507 (2021).</li><li>Kilian, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+hypoxia+in+small+animals+with+F+fluoromisonidasole.">Imaging of hypoxia in small animals with F fluoromisonidasole.</a> Nukleonika. 61 (2), 219-223 (2016).</li><li>Kawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+optimal+post-injection+timing+of+hypoxic+imaging+with+18F-Fluoromisonidazole-PET/CT.">Evaluation of optimal post-injection timing of hypoxic imaging with 18F-Fluoromisonidazole-PET/CT.</a> Molecular Imaging and Biology. 23 (4), 597-603 (2021).</li></ol>

In questo studio, abbiamo descritto le procedure per eseguire HAL su xenotrapianti ortotopici HCC epatici utilizzando tumori sottocutanei, insieme a metodi per il monitoraggio non invasivo dell'ipossia tumorale negli xenotrapianti ortotopici utilizzando [18 F] FMISO e [18F] FDG PET / MR. Il nostro interesse risiede nell'imaging metabolico di vari modelli di cancro e malattia per la diagnosi precoce e la valutazione della risposta al trattamento11,13,14,15<sup class...

Il carcinoma epatocellulare (HCC) è il sesto tumore più diagnosticato e la terza causa più comune di morte per cancro in tutto il mondo, con oltre 900.000 nuovi casi e 800.000 decessi nel 20201. Il principale fattore di rischio è la cirrosi, che si verifica a seguito di infezioni virali (virus dell'epatite B e C), abuso di alcol, diabete e steatoepatite non alcolica2. La gestione dell'HCC è piuttosto complessa e sono disponibili diverse opzioni di trattamento, tra cui resezione chirurgica, ablazione termica o chimica, trapianto, chemioembolizzazione transarteriosa, radiazioni e chemioterapia, a seconda della stadiazione della malattia 2,3. L'HCC è un tumore refrattario alla chemioterapia con recidiva della malattia fino al 70% dei pazienti che seguono una terapia curativa2.
Nonostante l'elevato grado di eterogeneità tumorale, l'HCC è associato a due esiti comuni: (i) l'HCC è molto ipossico e (ii) l'ipossia tumorale è legata a una maggiore aggressività del tumore e al fallimento del trattamento. La proliferazione incontrollata delle cellule HCC si traduce in un alto tasso di consumo di ossigeno che precede la vascolarizzazione, creando così un microambiente ipossico. Bassi livelli di ossigeno intratumorale innescano quindi una serie di risposte biologiche che influenzano l'aggressività del tumore e la risposta al trattamento. I fattori inducibili dall'ipossia (HIF) sono spesso riconosciuti come i regolatori trascrizionali essenziali nella risposta all'ipossia 2,3. Quindi, la capacità di rilevare l'ipossia è fondamentale per visualizzare i tessuti neoplastici e identificare i siti inaccessibili, che richiedono procedure invasive. Aiuta anche a comprendere meglio i cambiamenti molecolari che portano all'aggressività del tumore e migliorare i risultati del trattamento del paziente.
L'imaging molecolare mediante tomografia ad emissione di positroni (PET) è comunemente usato nella diagnosi e nella stadiazione di molti tumori, incluso l'HCC. In particolare, l'uso combinato dell'imaging PET a doppio tracciante che coinvolge [18 F]fluorodesossiglucosio ([18F]FDG) e [11C]acetato può aumentare significativamente la sensibilità complessiva nella diagnosi di HCC 4,5. L'imaging dell'ipossia, d'altra parte, può essere ottenuto utilizzando il marcatore ipossico comunemente usato [18 F] Fluoromisonidazolo ([18F] FMISO). Nella pratica clinica, la valutazione non invasiva dell'ipossia è importante per differenziare tra vari tipi di tumori e regioni per la pianificazione della radioterapia6.
L'imaging preclinico è diventato uno strumento indispensabile per la valutazione non invasiva e longitudinale di modelli murini per diverse malattie. Un modello di HCC robusto e altamente riproducibile rappresenta un'importante piattaforma per la ricerca preclinica e traslazionale sulla fisiopatologia dell'HCC umano e la valutazione di nuove terapie. Insieme all'imaging PET, i comportamenti in vivo possono essere chiariti per fornire importanti informazioni a livello molecolare per un dato punto temporale. Qui, descriviamo un protocollo per la generazione di xenotrapianti HCC ortotopici di legatura dell'arteria epatica (HAL) e l'analisi del loro metabolismo tumorale in vivo utilizzando [18 F]FMISO e [18F]FDG PET/MR. L'incorporazione di HAL rende un modello adatto di xenotrapianti di topi HCC transgenici o indotti chimicamente per studiare l'ipossia tumorale in vivo, poiché HAL può bloccare efficacemente l'afflusso di sangue arterioso per indurre ipossia intratumorale 7,8. Inoltre, a differenza della colorazione immunoistochimica ex vivo con pimonidazolo, i cambiamenti nel metabolismo tumorale a seguito di ipossia possono essere facilmente visualizzati e quantificati con precisione in modo non invasivo utilizzando l'imaging PET, consentendo la valutazione longitudinale della risposta al trattamento o la misurazione dell'emergenza di resistenza 3,7,8 . Il nostro metodo mostrato qui consente la creazione di un robusto modello di HCC ipossico insieme al monitoraggio non invasivo dell'ipossia tumorale utilizzando l'imaging PET / MR per studiare la biologia dell'HCC in vivo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% sterile saline</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>N/A</td>
			<td>0.9% sodium chloride intravenous infusion, 500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10# Scalpel blade</td>
			<td>RWD Life Science Co.,ltd</td>
			<td>S31010-01</td>
			<td>Animal surgery tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% povidone-iodine solution</td>
			<td>Banitore</td>
			<td>6.425.678</td>
			<td>For disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G needle with a 1 mL syringe</td>
			<td>BD PrecisionGlide</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 mL syringe with 25G needle for cell suspensions injections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS05L</td>
			<td>5 mL syringe Luer Lock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.07017</td>
			<td>For disinfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counter</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMQAF2000</td>
			<td>For automated cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>HealthDirect</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Subcutaneous injection (0.05-0.2 mg/kg/12 hours) for analgesic after surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Dish (60 mm diameter)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>150462</td>
			<td>For tumor tissue processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>3-16KL, fixed-angle rotor 12311</td>
			<td>For cell suspensions collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Conical Tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>EP0030122151</td>
			<td>For cell suspensions collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture media (Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10566024</td>
			<td>high glucose, GlutaMAX&#8482; Supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Caliper</td>
			<td>RS PRO</td>
			<td>841-2518</td>
			<td>For subcutaneous tumor size measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct heat CO2 incubator</td>
			<td>Techcomp Limited</td>
			<td>NU5841</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dose calibrator</td>
			<td>Biodex</td>
			<td>&#160;N/A</td>
			<td>Atomlab 500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS (Dulbecco&#8217;s phosphate-buffered saline)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14287072</td>
			<td>For cell wash and injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye lubricant</td>
			<td>Alcon Duratears</td>
			<td>&#160;N/A</td>
			<td>Sterile ocular lubricant ointment, 3.5 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A4766801</td>
			<td>Used for a broad range of cell types, especially sensitive cell lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (curved fine and straight blunt)</td>
			<td>RWD Life Science Co.,ltd</td>
			<td>F12012-10 &#38; F12011-13</td>
			<td>Animal surgery tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>ALA Scientific Instruments</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Heat pad for mice during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>10ME2913</td>
			<td>1 mL insulin syringe with needle for radiotracer injections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>InterView fusion software</td>
			<td>Mediso</td>
			<td>Version 3.03</td>
			<td>Post-processing and image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Yu Lung Scientific Co., Ltd</td>
			<td>BM-209G</td>
			<td>For cells morphology visualization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Chanelle Pharma</td>
			<td>&#160;N/A</td>
			<td>Iso-Vet, inhalation anesthetic, 250 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Alfasan International B.V.</td>
			<td>HK-37715</td>
			<td>Ketamine 10% injection solution, 10 mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical oxygen</td>
			<td>Linde HKO</td>
			<td>101-HR</td>
			<td>compressed gas, 99.5% purity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nanoScan PET/MR Scanner</td>
			<td>Mediso</td>
			<td>&#160;N/A</td>
			<td>3 Tesla MR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>RWD Life Science Co.,ltd</td>
			<td>F31026-12</td>
			<td>Animal surgery tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucline nanoScan software</td>
			<td>Mediso</td>
			<td>Version 3.0</td>
			<td>Scanner operating software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon Suture (6/0 and 5/0)</td>
			<td>Healthy Medical Company Ltd</td>
			<td>000524 &#38; 000526</td>
			<td>Animal surgery tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin- Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Culture media for a final concentration of 50 to 100 I.U./mL penicillin and 50 to 100 &#181;g/mL streptomycin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentabarbital</td>
			<td>AlfaMedic</td>
			<td>13003</td>
			<td>Intraperitoneal injection (330 mg/kg) to induce cessation of breathing of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp scissors</td>
			<td>RWD Life Science Co.,ltd</td>
			<td>S14014-10</td>
			<td>Animal surgery tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring Scissors</td>
			<td>RWD Life Science Co.,ltd</td>
			<td>S11005-09</td>
			<td>Animal surgery tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution, 0,4%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250061</td>
			<td>For cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA, 0.25%), phenol red.</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200072</td>
			<td>For cell digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Alfasan International B.V.</td>
			<td>HK-56179</td>
			<td>Xylazine 2% injection solution, 30 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive pet/mr imaging in an orthotopic mouse model of hepatocellular carcinoma

I modelli sperimentali preclinici di carcinoma epatocellulare (HCC) che ricapitolano la malattia umana rappresentano uno strumento importante per studiare la tumorigenesi e valutare nuovi approcci terapeutici. L'imaging non invasivo di tutto il corpo utilizzando la tomografia ad emissione di positroni (PET) fornisce informazioni critiche sulle caratteristiche in vivo dei tessuti a livello molecolare in tempo reale. Presentiamo qui un protocollo per la creazione di xenotrapianto ortotopico HCC con e senza legatura dell'arteria epatica (HAL) per indurre ipossia tumorale e la valutazione del loro metabolismo tumorale in vivo utilizzando [18 F]Fluoromisonidazolo ([18 F]FMISO) e [18 F]Fluorodesossiglucosio ([18F]FDG) PET / risonanza magnetica (MR). L'ipossia tumorale poteva essere facilmente visualizzata usando il marcatore di ipossia [18 F] FMISO, e si è scoperto che l'assorbimento di [18 F] FMISO era più alto nei topi HCC sottoposti a HAL rispetto al gruppo non-HAL, mentre [18F] FDG non poteva distinguere l'ipossia tumorale tra i due gruppi. I tumori HAL hanno anche mostrato un livello più elevato di espressione del fattore inducibile dall'ipossia (HIF)-1α in risposta all'ipossia. La quantificazione dei tumori HAL ha mostrato un aumento di 2,3 volte nell'assorbimento di [18F] FMISO basato sull'approccio standardizzato di assorbimento del valore (SUV).

Per ottenere un blocco tumorale adatto per il successivo impianto ortotopico, cloni stabili sono stati prima generati mediante iniezione sottocutanea di 200 μL di sospensione cellulare in DPBS (contenente cellule MHCC97L) nel fianco inferiore di topi nudi (Figura 1A). La crescita del tumore è stata monitorata e, quando le dimensioni del tumore hanno raggiunto 800-1000 mm 3 (circa 4 settimane dopo l'iniezione), i topi sono stati eutanasizzati e il blocco tumorale risultante è st...

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Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma

Qui, presentiamo un protocollo per creare xenotrapianti di carcinoma epatocellulare ortotopico con e senza legatura dell'arteria epatica ed eseguire la tomografia ad emissione di positroni (PET) non invasiva dell'ipossia tumorale utilizzando [18 F]Fluoromisonidazolo ([18 F]FMISO) e [18 F]Fluorodesossiglucosio ([18F]FDG).

Imaging PET/RM non invasivo in un modello murino ortotopico di carcinoma epatocellulare

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and ...

I nostri metodi creano un modello affidabile di carcinoma epatocellulare ipossico per l'imaging non invasivo dell'ipossia tumorale per studiare la biologia dell'HCC in vivo, che può ricapitolare meglio lo sviluppo del cancro negli esseri umani. Il nostro modello HCC affidabile, insieme a un metodo di immagine altamente producibile, funge da importante piattaforma per la ricerca traslazionale sulla fisiopatologia dell'HCC umano. Il monitoraggio in tempo reale dell'ipossia tumorale fornisce informazioni sui cambiamenti molecolari che portano all'aggressività del tumore, consentendo di determinare le aree di ipossia e prevedere la risposta al trattamento.Sebbene la chirurgia intraaddominale possa essere tecnicamente impegnativa, un'adeguata pianificazione e cura degli animali migliorerà il tasso complessivo di successo chirurgico e il benessere dei piccoli animali. Per iniziare, sterilizzare la regione dorsale di un topo anestetizzato di 6-8 settimane sul lato sinistro o destro del fianco inferiore con etanolo al 70%. Quindi, utilizzare una pinza per sollevare la pelle e inserire delicatamente l'ago per iniezione sotto.Per evitare perdite accidentali della sospensione cellulare iniettata durante il prelievo dell'ago, far avanzare l'ago da 4 a 5 millimetri dal sito di puntura lungo il piano sottocutaneo. Dopo aver rilasciato la pinza, scaricare con attenzione il contenuto della siringa senza penetrare nel lato opposto. Dopo l'eutanasia del topo portatore di tumore sottocutaneo, praticare un'incisione sulla pelle del sito tumorale con una lama di bisturi.Quindi, asportare il blocco tumorale e trasferirlo immediatamente ai terreni di coltura. Successivamente, usando forbici chirurgiche affilate, tagliare il blocco tumorale in piccoli cubi da 1 millimetro cubo, evitando la regione centrale del blocco tumorale. Conservare tutti i cubi nei terreni colturali.Per l'impianto ortotopico del fegato, estendere gli arti di un topo anestetizzato e fissarli con del nastro adesivo per esporre al massimo l'addome ventrale e il torace. Quindi, sterilizzare l'intera pelle addominale con una soluzione di iodio povidone al 10% seguita da etanolo al 70%. Successivamente, eseguire una laparotomia facendo prima un'incisione della linea mediana di 10 millimetri usando forbici affilate per accedere al peritoneo.Quindi, bloccare e tirare il processo xifoideo verso la testa con una pinza e aprire il campo chirurgico usando divaricatori subcostali. Utilizzando un tampone di garza bagnato, ritrarre i lobi del fegato mediano e sinistro verso l'alto. Quindi, spostare l'intestino fuori dall'addome sul lato sinistro del mouse e coprirli con un tampone di garza bagnato.Successivamente, sotto una lampada d'ingrandimento per una visualizzazione ottimale, eseguire la legatura dell'arteria epatica sull'arteria epatica comune, che ha origine dalla testa pancreatica alla sua radice nel peduncolo epatico. Esporre il lobo sinistro ritraendo la parte posteriore del lobo mediano e sinistro con un tampone di garza bagnato. Quindi, utilizzando una lama sterile di bisturi, praticare un'incisione di circa 2 millimetri di lunghezza e profondità nel lobo sinistro e inserire immediatamente un frammento tumorale nell'incisione epatica con una pinza sterile.Seppellire il tumore in modo sicuro nel fegato prima di applicare una sutura a otto, con una sutura di nylon 6-0 sul sito di incisione per garantire un corretto impianto del tumore e l'emostasi. Quindi, chiudere l'incisione addominale con punti di sutura 5-0 interrotti. Erogare un'aliquota di 18-FMISO in un tubo e diluirla con soluzione salina sterile per garantire una concentrazione totale di attività da 18 a 20 megabecquerel in 100 microlitri.Quindi, aspirare la soluzione con una siringa da 1 millilitro e registrare la radioattività e il tempo indicati sul calibratore di dose. Dopo aver registrato il peso corporeo del topo soggetto, iniettare con cura il radiotracciante preparato attraverso la vena della coda. Per tenere conto della correzione del decadimento, registrare il tempo di iniezione e l'attività residua nella siringa.Per iniziare l'acquisizione PET, individuare la posizione del mouse nello scanner eseguendo una vista di esplorazione. Regolare la posizione del letto del mouse per assicurarsi che l'intero corpo del mouse con la regione del tronco sia al centro del campo visivo del MR. Quindi, selezionare Acquisizione PET nella finestra dell'elenco degli studi. Per utilizzare le posizioni predeterminate del letto del mouse dalla vista scout, scegliere Intervallo di scansione su acquisizione precedente.Quindi, fai clic su Prepara per spostare automaticamente il letto del mouse da MR a PET, seguito da Vai per avviare l'acquisizione. Selezionare il radionucleotide appropriato sotto l'Editor radiofarmaceutico e inserire i dettagli della dose e del tempo di iniezione. Inoltre, nel menu Informazioni oggetto, immettere il peso del mouse.Una volta completata la scansione PET, selezionare Prepara a spostare il mouse da PET a MR e fare clic su Vai per eseguire l'acquisizione MR. Al termine di tutte le scansioni, riportare il piano di imaging nella posizione predefinita selezionando Tabella fuori. L'imaging PET utilizzato in questo studio ha rivelato un aumento dell'assorbimento tumorale di 18-FMISO nei topi con legatura dell'arteria epatica ma non nei topi di controllo.Tuttavia, l'assorbimento tumorale del marcatore glicolitico 18F-FDG era simile nei topi con e senza legatura dell'arteria epatica. La quantificazione utilizzando questo approccio standardizzato basato sul valore di assorbimento ha rivelato un assorbimento 18-FMISO 2,3 volte superiore da parte dei tumori nei topi con legatura dell'arteria epatica rispetto a quello nei topi di controllo. Allo stesso modo, l'assorbimento di 18-FMISO era più alto nel fegato dei topi con legatura dell'arteria epatica rispetto ai fegati dei topi di controllo.La legatura dell'arteria epatica ha anche determinato un aumento dell'ipossia tumorale, come evidenziato da un livello più elevato di espressione del fattore 1-alfa inducibile dall'ipossia nelle secrezioni tumorali dei topi con legatura dell'arteria epatica rispetto a quelli dei topi di controllo. Dopo l'imaging PET 18-FMISO, il nostro sequenziamento può essere eseguito per identificare i ruoli dei geni metabolici indotti sotto ipossia, portando a nuove strategie di trattamento. Questa tecnica può essere utilizzata per monitorare accuratamente l'ipossia tumorale, consentendo così una rapida valutazione dell'efficacia del trattamento e anche la creazione di una nuova strategia terapeutica mirata alla via dell'ipossia nell'HCC.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescente ortotopico modello murino di cancro al pancreas

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

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Modello murino sperimentale di sviluppo del tumore originale e peritoneale Metastasi<em&gt; via</em&gt; Ortotopico inoculazione con cellule dell&#39;ovaio Carcinoma

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Study of Viral Vectors in a Three-dimensional Liver Model Repopulated with the Human Hepatocellular Carcinoma Cell Line HepG2

Studio di vettori virali in un tridimensionale fegato Modello ripopolata con l&#39;Umano carcinoma epatocellulare Linea cellulare HepG2

This protocol describes the generation of a three-dimensional (3D) ex vivo liver model and its application to the study and development of viral vector ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolamento delle cellule tumorali circolanti in un modello di topo ortotopico del tumore del colon-retto

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

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Un modello di topo ortotopico oncogenico indotto dall'epatocito del cancro epatocellulare in aumento nell'impostazione dell'infiammazione epatica e della fibrosi

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Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Impianto ortotopico a ultrasuoni dell'adenocarcinoma dugalese Murine

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Transarterial chemoembolization (TACE) is the most common modality for treatment of hepatocellular carcinoma (HCC) at the intermediate stage. TACE is ...

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Analisi del microambiente epatico durante la progressione precoce del carcinoma epatocellulare associato alla steatosi epatica non alcolica nel pesce zebra

Liver cancer is currently the third&#160;leading cause of cancer related death worldwide, and Hepatocellular Carcinoma (HCC) accounts for 75-90% of all ...

A Three-Dimensional Spheroid Model to Investigate the Tumor-Stromal Interaction in Hepatocellular Carcinoma

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