Name: intracerebroventricular delivery of gut-derived microbial metabolites in freely moving mice
Uploaded: 2022-06-02T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice at JoVE.com

نحن نقدر موظفي مركز المختبر في جامعة تشنغ كونغ الوطنية (NCKU) لرعاية الحيوانات. تم دعم هذا العمل من خلال المنحة الدراسية المقدمة من صندوق البروفيسور كون ين هوانغ للتعليم التابع لمؤسسة تشنغ - هسينغ الطبية إلى C.-W.L. ؛ الأموال من وزارة العلوم والتكنولوجيا (MOST) في تايوان: (البحوث الجامعية MOST 109-2813-C-006-095-B) إلى T.-H.Y. ؛ (معظم 107-2320-B-006-072-MY3; 109-2314-B-006-046; 110-2314-B-006-114; 110-2320-B-006-018-MY3) إلى W.-L.W.; ومشروع براعم التعليم العالي ، وزارة التربية والتعليم إلى مقر التقدم الجامعي في NCKU إلى W.-L.W.

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية ورعاية الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات بجامعة تشنغ كونغ الوطنية (NCKU).
1. التحضير لحيوان التجارب
<ol><li>احصل على الفئران الذكور C57BL / 6JNarl من النوع البري من 6 إلى 8 أسابيع من بائع.</li>
	<li>قم بإيواء الف...

ارتبطت المستقلبات المشتقة من الأمعاء بأمراض بوساطة الدماغ دون آلية دقيقة للغاية ، ويرجع ذلك جزئيا إلى مواقع ارتباطها المتعددة في الجسم6،12،24. أشارت التقارير السابقة إلى أن SCFAs يمكن أن تكون بمثابة روابط للمستقبلات المرتبطة بالبروتين G ، وا...

يأوي الجهاز الهضمي البشري كائنات دقيقة متنوعة تؤثر على المضيف1،2،3. يمكن لبكتيريا الأمعاء هذه إفراز مستقلبات مشتقة من الأمعاء أثناء استخدامها للمكونات الغذائية التي يستهلكها المضيف 4,5. ومن المثير للاهتمام ، يمكن نقل مستقلبات الأمعاء غير المستقلب في المحيط إلى أعضاء أخرى عبر الدورة الدموية6. تجدر الإشارة إلى أن هذه المستقلبات المفرزة يمكن أن تكون بمثابة وسطاء لمحور الأمعاء والدماغ ، والذي يعرف بأنه الاتصال ثنائي الاتجاه بين الجهاز العصبي المركزي والأمعاء7. وقد أظهرت الدراسات السابقة أن المستقلبات المشتقة من الأمعاء يمكن أن تعدل السلوك المعقد والعاطفة في الحيوانات8،9،10،11.
الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFAs) هي المستقلبات الرئيسية التي تنتجها ميكروبات الأمعاء أثناء تخمير الألياف الغذائية والكربوهيدرات غير القابلة للهضم6. الأسيتات والبروبيونات والزبدات هي SCFAs الأكثر وفرة في الأمعاء12. SCFAs بمثابة مصدر الطاقة للخلايا في الجهاز الهضمي. يمكن نقل SCFAs غير المستقلب في الأمعاء إلى الدماغ من خلال الوريد البابي ، وبالتالي تعديل الدماغ والسلوك 6,12. وقد أشارت الدراسات السابقة إلى أن SCFAs قد تلعب دورا حاسما في الاضطرابات العصبية والنفسية 6,12. على سبيل المثال ، الحقن داخل الصفاق من الزباديات في الفئران BTBR T + Itpr3tf / J (BTBR) ، وهو نموذج حيواني لاضطراب طيف التوحد (ASD) ، أنقذ عجزهم الاجتماعي13. أظهرت الفئران المعالجة بالمضادات الحيوية التي تتلقى الميكروبات من الأشخاص المصابين بالاكتئاب زيادة في السلوكيات الشبيهة بالقلق و SCFAs البرازية14. سريريا ، لوحظت تغيرات في مستويات SCFAs البرازية في الأشخاص الذين يعانون من ASD مقارنة بالضوابط النامية عادة15,16. الأشخاص الذين يعانون من الاكتئاب لديهم مستويات SCFAs أقل في البراز من الأشخاص الأصحاء17,18. اقترحت هذه الدراسات أن SCFAs يمكن أن تغير السلوك في الحيوانات والبشر من خلال طرق مختلفة.
تمارس المستقلبات الميكروبية تأثيرات متنوعة على مواقع متعددة في الجسم ، مما يؤثر على فسيولوجيا المضيف والسلوكيات 4,19 ، بما في ذلك الجهاز الهضمي والعصب المبهم والعصب الودي. من الصعب تحديد الدور الدقيق للمستقلبات المشتقة من الأمعاء في الدماغ عند إدارة المستقلبات عبر الطرق الطرفية. تقدم هذه الورقة بروتوكولا قائما على الفيديو للتحقيق في آثار المستقلبات المشتقة من الأمعاء في دماغ فأر يتحرك بحرية (الشكل 1). أظهرنا أنه يمكن إعطاء SCFAs بشكل حاد من خلال قنية الدليل أثناء الاختبارات السلوكية. يمكن تعديل نوع وحجم ومعدل ضخ المستقلبات اعتمادا على الغرض. يمكن تعديل موقع القنية لاستكشاف تأثير مستقلبات الأمعاء في منطقة معينة من الدماغ. نحن نهدف إلى تزويد العلماء بطريقة لاستكشاف التأثير المحتمل للمستقلبات الميكروبية المشتقة من الأمعاء على الدماغ والسلوك.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advil Liqui-Gels Solubilized Ibuprofen A2:D41</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-rabbit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Fluorescent Gold (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB153-I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Vacuum Filter, 500 mL, 0.22 &#956;m, PES, Sterile</td>
			<td>NEST</td>
			<td>121921LA01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td>ACSF: 0.14 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine scrub 2%</td>
			<td>Phoenix</td>
			<td>NDC 57319-611-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine solution</td>
			<td>Phoenix</td>
			<td>NDC 57319-599-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial dummy</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62004</td>
			<td>Single_OD 0.20 mm/ M3.5/G = 0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial guide cannul</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62104</td>
			<td>Single_OD 0.41 mm-27G/ M3.5/C = 2.5 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial injector</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62204</td>
			<td>Single_OD 0.21 mm-33G/ Mates with M3.5/C = 3.5 mm/G = 0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td>ACSF: 0.61 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental acrylic</td>
			<td>HYGENIC</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixing screws</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield mounting medium with DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB104139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>16050130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>XG-LBB-9151133S-1BX</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>Panion &#38; BF biotech</td>
			<td>DG-4900-250D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td>ACSF: 0.19 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketoprofen&#160;</td>
			<td>Swiss Pharmaceutical</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine&#160;</td>
			<td>AstraZeneca</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melting point agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td>ACSF: 0.19 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover slips</td>
			<td>MARIENFELD</td>
			<td>101242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS-001E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil light, white NF</td>
			<td>Macron Fine Chemicals</td>
			<td>MA-6358-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>ACSF: 7.46 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td>ACSF: 0.18 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>ACSF: 1.76 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl cyanoacrylate adhesive (tissue adhesive glue)</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>3M Vetbond</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neural tracer&#160;</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-358883</td>
			<td>FluoroGold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene tube</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62329</td>
			<td>OD 1.50, I.D 0.50 mm and OD 1.09, I.D 0.38 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet (eye) Ointment</td>
			<td>Dechra&#160;</td>
			<td>12920060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td>SCFAs: 13.5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium butyrate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B5887</td>
			<td>SCFAs: 8 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium propionate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1880</td>
			<td>SCFAs: 5.18 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless guide cannula</td>
			<td>Chun Ta stainless steel enterprise CO., LTD.</td>
			<td>n/a</td>
			<td>OD 0.63 mm; Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless injector</td>
			<td>Chun Ta stainless steel enterprise CO., LTD.</td>
			<td>n/a</td>
			<td>OD 0.3 mm; dummy is made from injector; local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superglue</td>
			<td>Krazy Glue</td>
			<td>KG94548R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.08603.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula holder</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>B485-68217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ceiling camera</td>
			<td>FOSCAM</td>
			<td>R2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital stereotaxic instruments</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51730D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>INNOVIEW</td>
			<td>SEM-HT/TW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bead Sterilizer</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>RS1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53800M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Forceps</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td>Serrated, Slight Curve; Extra Delicate; 0.5mm Tip Width; 4&#34; Length&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5918</td>
			<td>4.5&#34; Angled Sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection controller</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>MICRO2T</td>
			<td>SMARTouch Controller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection syringe pump</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>UMP3T-1</td>
			<td>UltraMicroPump3&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80014</td>
			<td>10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Fiber Cold Light with double Fiber</td>
			<td>Step</td>
			<td>LGY-150</td>
			<td>Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet trimmer</td>
			<td>WAHL</td>
			<td>09962-2018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporiser for Isoflurane</td>
			<td>Step</td>
			<td>AS-01</td>
			<td>Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal behavior video tracking software</td>
			<td>Noldus</td>
			<td>EthoVision</td>
			<td>Version: 15.0.1416</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Application Suite X software</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LASX</td>
			<td>Version: 3.7.2.22383</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular delivery of gut-derived microbial metabolites in freely moving mice

تم التحقيق على نطاق واسع في تأثير ميكروبات الأمعاء ومستقلباتها على فسيولوجيا المضيف وسلوكه على نطاق واسع في هذا العقد. كشفت العديد من الدراسات أن المستقلبات المشتقة من ميكروبات الأمعاء تعدل الوظائف الفسيولوجية بوساطة الدماغ من خلال مسارات معقدة بين الأمعاء والدماغ في المضيف. الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFAs) هي المستقلبات الرئيسية المشتقة من البكتيريا التي يتم إنتاجها أثناء تخمير الألياف الغذائية بواسطة ميكروبيوم الأمعاء. يمكن أن تعمل SCFAs المفرزة من الأمعاء في مواقع متعددة في المحيط ، مما يؤثر على الاستجابات المناعية والغدد الصماء والعصبية بسبب التوزيع الواسع لمستقبلات SCFAs. لذلك ، من الصعب التمييز بين الآثار المركزية والطرفية ل SCFAs من خلال الإدارة الفموية وداخل الصفاق ل SCFAs. تقدم هذه الورقة طريقة قائمة على الفيديو لاستجواب الدور الوظيفي ل SCFAs في الدماغ عبر قنية إرشادية في الفئران التي تتحرك بحرية. يمكن تعديل كمية ونوع SCFAs في الدماغ عن طريق التحكم في حجم التسريب ومعدله. يمكن أن توفر هذه الطريقة للعلماء طريقة لتقدير دور المستقلبات المشتقة من الأمعاء في الدماغ.

تم غرس الفأر مع SCFAs 1 بعد أسبوع من الشفاء من زرع قنية الدليل لتقييم النشاط الحركي في قفص جديد. تم وضع الفأر في قفص جديد وغرسه مع 2100 نانولتر من SCFAs أو ACSF في أول 5 دقائق (معدل تسليم 7 nL / s) في الدماغ من خلال قنية الدليل التجاري المزروعة في البطين الجانبي للدماغ. تم تسجيل النشاط الحركي في قفص جديد لمد...

Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice at JoVE.com

Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

المستقلبات الميكروبية المشتقة من الأمعاء لها تأثيرات متعددة الأوجه تؤدي إلى سلوك معقد في الحيوانات. نحن نهدف إلى توفير طريقة خطوة بخطوة لتحديد آثار المستقلبات الميكروبية المشتقة من الأمعاء في الدماغ عن طريق التسليم داخل البطين عبر قنية دليلية.

التسليم داخل البطين للمستقلبات الميكروبية المشتقة من الأمعاء في الفئران التي تتحرك بحرية

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

تنتج المستقلبات التي تطلقها ميكروبات الأمعاء تأثيرات معقدة على المضيف. يقدم هذا البروتوكول طريقة لاستجواب دور مستقلبات الأمعاء في دماغ الفأر وسلوكه. توفر هذه التقنية طريقة دقيقة ودقيقة ومعتمدة لتوصيل مستقلبات الأمعاء إلى الدماغ في الفئران التي تتحرك بحرية.نحن نقدم أفضل منهجية شاملة وفسيولوجية للحصول على نظرة ثاقبة في أبحاث محور الدماغ المعوي. ضع الماوس على الإطار المجسم، وقم بتثبيت قواطع الماوس على شريط القواطع في حامل القواطع المجسمة. قم بتغطية الأنف بقناع مخروط الأنف.ثم قم بتقييم الإحساس بألم الماوس عبر منعكس القرصة العلوي ، وتأكد من معدل تنفس ثابت قبل شق الموقع الجراحي. بمجرد إزالة الفراء المشذب على الرأس بواسطة الشريط اللاصق ، قم بحقن الكيتوبروفين المسكن تحت الجلد لتخفيف الألم وتطبيق مرهم العين. بعد ذلك ، قم بإصلاح الرأس عن طريق إدخال شريط الأذن المدبب في قناة الأذن.شد مشبك الأنف على حامل القواطع واضغط على الرأس بلطف لضمان تثبيت الرأس. استخدم 3 مقشرات بالتناوب من مسحة الكلورهيكسيدين لتطهير فروة الرأس. الآن ، استخدم مشرط تشريح لإجراء شق أقل من سنتيمتر واحد في فروة الرأس بطريقة خلفية أمامية.بعد فتح الشق ، امسح الجمجمة بقطعة قطن تمسك بها ملقط تشريح صغير. استنادا إلى الإحداثيات المجسمة، حدد وسم موضع البطين الجانبي الأيمن كما هو موضح في المخطوطة. بعد ذلك ، قم بحفر ثقب عبر الجمجمة في الموقع المسمى باستخدام مثقاب مجسمة ، وبعد ذلك ، حفر ثقبين إلى أربعة ثقوب أخرى في الجمجمة.امسح الجمجمة بقطعة قطن ليدوكائين وقم بتركيب 2 إلى 4 مسامير غير قابلة للصدأ على الثقوب. ضع قنية الدليل التجاري على حامل القنية المجسمة وقم بتطهيرها باستخدام معقم السرعة الزجاجية عند 150 درجة مئوية. ثم حرك حامل القنية المجسمة إلى الحفرة المحفورة للبطين الجانبي وأدخل ببطء قنية التوجيه التجاري في الحفرة حتى يتم تحقيق العمق المطلوب.الآن قم بتطبيق 10 ميكرولتر من لاصق n-Butyl cyanoacrylate لإصلاح قنية الدليل التجاري في الحفرة المحفورة وانتظر لمدة 3 إلى 4 دقائق. حرر قنية الدليل التجاري بلطف من حامل القنية المجسمة وقم بتطبيق أكريليك الأسنان على فروة الرأس المحفورة لإصلاح قنية الدليل التجاري وانتظر لمدة 5 دقائق على الأقل. زرع الدمية التجارية في قنية الدليل التجاري.ثم ضع الماوس في قفص جديد مع وسادة تدفئة تحته للتعافي من التخدير وراقب باستمرار حتى يستيقظ الماوس تماما. قم بتركيب حقنة الميكرولتر ، التي تحتوي على 10 ميكرولترات من الماء المقطر ، على مضخة الحقن المجهري. باستخدام حقنة الأنسولين ، املأ أنبوب البولي إيثيلين بالماء المقطر وقم بتوصيل حقنة الميكرولتر بأنبوب البولي إيثيلين المعلق.قم بتشغيل وحدة التحكم في الحقن المجهري واضغط على عرض جميع القنوات للوصول إلى شاشة الأوامر. بعد ذلك ، اضغط على التكوين وحدد هدف الحجم إلى 9،800 نانولتر بمعدل تسليم 100 نانولتر في الثانية. ثم اضغط على الاتجاه للتبديل إلى وضع النفخ واضغط على Run لبث 9،800 نانولتر من الماء المقطر من أنبوب البولي إيثيلين المتصل بحقنة الميكرولتر.الآن ، ضع الحاقن في قارورة تحتوي على الزيت المعدني ، واضغط على التكوين واضبط هدف الحجم على 3000 نانولتر مع معدل توصيل إلى 100 نانولتر في الثانية. لسحب 3000 نانولتر من الزيوت المعدنية ، اضغط على الاتجاه للتبديل إلى وضع السحب ثم اضغط على تشغيل. قم بتفكيك أنبوب البولي إيثيلين من إبرة حقنة الميكرولتر.لبصق 3000 نانولتر من الماء المقطر من إبرة حقنة الميكرولتر، اضغط على الاتجاه للتبديل إلى وضع النفخ واضغط على تشغيل. ثم أدخل حقنة الميكرولتر مرة أخرى في أنبوب البولي إيثيلين. ضع الحاقن في قارورة تحتوي على SCFAs.اضغط على التكوين وحدد هدف الحجم إلى 9،500 نانولتر مع معدل التسليم إلى 100 نانولتر في الثانية. اسحب 9،500 نانولتر من SCFAs عن طريق الضغط على الاتجاه للتبديل إلى وضع السحب والضغط على تشغيل. قم بتسمية مرحلة SCFAs النفطية للتحقق مما إذا كان قد تم غرس SCFAs بنجاح.اضغط على التكوين واضبط هدف الحجم المطلوب بمعدل تسليم إلى 7 نانولتر في الثانية. اضغط على الاتجاه للتبديل إلى وضع infuse. اضغط على زر التشغيل لبث حقنة الميكرولتر إلى الأمام حتى يخرج السائل في الطرف الأمامي من الحاقن التجاري قبل إدخال الحاقن في القنية لحقن SCFAs.بعد تخدير الفأر ، أدخل الحاقن التجاري في قنية الدليل التجاري. بمجرد تعافي الفأر من التخدير ، ضعه في قفص جديد واسمح له بالاستكشاف لمدة 35 دقيقة بحرية. غرس SCFAs باستخدام معدل توصيل 7 نانولتر في الثانية لحجم مستهدف من 2،100 نانولتر في أول 5 دقائق.ثم اضغط على الاتجاه إلى وضع infuse واضغط على تشغيل. بعد الاختبار السلوكي ، قم بإزالة الحاقن التجاري من قنية الدليل التجاري. غرس 2،100 نانولتر من المقتفي المحايد بمعدل تسليم 7 نانولتر في الثانية للتحقق من موقع التسريب.قم بتصوير إشارة الفلورسنت في موقع التسريب باستخدام مجهر التألق. سافرت كل من الفئران المشبعة ب ACSF و SCFAs في قفص جديد لمدة 35 دقيقة. لم يلاحظ أي فرق في النشاط الحركي في القفص الجديد بين ضخ SCFAs و ACSF.تم اكتشاف صبغة الفلورسنت في البطين الجانبي والمناطق المحيطة به من دماغ الفأر عند غرسها مع قنية دليل تجاري. وبالمثل ، يؤدي التسريب من خلال قنية دليل الفولاذ المقاوم للصدأ إلى اكتشاف الإشارات في البطين الجانبي والمناطق المحيطة به من دماغ الفأر. إن الجمع بين هذا الإجراء والتقنيات العصبية القائمة على الدائرة سيسمح للعلماء باكتساب نظرة ثاقبة على التحكم القائم على الدائرة في الدماغ والسلوك الذي تساهم به مستقلبات الأمعاء.تمهد هذه التقنية الطريق للباحثين لاستكشاف دور الميكروبات والمستقلبات في محور الدماغ المعقد للأمعاء.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

عالية الكثافة تسجيلات EEG من الفئران تتحرك بحرية باستخدام بوليميد المستندة Microelectrode

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

Recording Single Neurons' Action Potentials from Freely Moving Pigeons Across Three Stages of Learning

تسجيل إمكانات العمل احدة الخلايا العصبية &#39;من التنقل بحرية في جميع أنحاء الحمام ثلاث مراحل التعلم

While the subject of learning has attracted immense interest from both behavioral and neural scientists, only relatively few investigators have observed ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

تسجيل إيغ في التحرك بحرية الفئران حديثي الولادة باستخدام طريقة رواية

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

العلاج البطيني داخل المنظار مع Resiniferatoxin واختبارات الألم في الفئران

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

تسجيلات التخطيط الدماغي موسع من الانتقال بحرية الخنازير

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

ميكرودياليسيس أحماض الأمينية ضادات خلال تسجيلات التخطيط الدماغي في الانتقال بحرية الفئران

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

Long-term Sensory Conflict in Freely Behaving Mice

الصراع الحسي طويلة الأجل في التصرف بحرية الفئران

Long-term sensory conflict protocols are a valuable means of studying motor learning. The presented protocol produces a persistent sensory conflict for ...

Hybrid Microdrive System with Recoverable Opto-Silicon Probe and Tetrode for Dual-Site High Density Recording in Freely Moving Mice

نظام Microdrive الهجين مع مسبار أوبتو السيليكون القابل ة للاسترداد وTetrode لتسجيل الكثافة العالية في الموقع المزدوج في الفئران المتحركة بحرية

Multi-regional neural recordings can provide crucial information to understanding fine-timescale interactions between multiple brain regions. However, ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

القياس الضوئي متعدد ألياف لتسجيل النشاط العصبي في الكائنات المتحركة بحريه

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Extracellular Electrophysiological Recording in the Motor Cortex of Mice

Multichannel Extracellular Recording in Freely Moving Mice

Advancements in Multichannel Extracellular Recording for Studying Neuronal Activity in Freely Moving Mice (Video) | JoVE

تسجيل متعدد القنوات خارج الخلية في الفئران المتحركة بحرية

The protocol aims to uncover the properties of neuronal firing and network local field potentials (LFPs) in behaving mice carrying out specific tasks by ...