Name: intracerebroventricular delivery of gut-derived microbial metabolites in freely moving mice
Uploaded: 2022-06-02T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice at JoVE.com

אנו מודים לצוות מרכז חיות המעבדה באוניברסיטת נשיונל צ'נג קונג (NCKU) על הטיפול בבעלי החיים. עבודה זו נתמכה על ידי מלגה מקרן החינוך של פרופ' קון-ין הואנג מקרן צ'נג-סינג לרפואה ל- C.-W.L.; הכספים ממשרד המדע והטכנולוגיה (MOST) בטייוואן: (מחקר לתואר ראשון MOST 109-2813-C-006-095-B) ל- T.-H.Y.; (רוב 107-2320-B-006-072-MY3; 109-2314-B-006-046; 110-2314-B-006-114; 110-2320-B-006-018-MY3) ל W.-L.W.; ופרויקט נבטי ההשכלה הגבוהה, משרד החינוך למטה קידום האוניברסיטה ב- NCKU ל- W.-L.W.

כל פרוטוקולי הניסוי והטיפול בבעלי החיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת צ'נג קונג (NCKU) (IACUC).
1. הכנה לחיה הניסיונית
<ol><li>השג עכברים זכרים מסוג C57BL/6JNarl בני 6-8 שבועות מספקים פרטיים.</li>
	<li>אחסן את העכברים בכלוב עכברים סטנדרטי עם צ'או עכב...

מטבוליטים שמקורם במעיים נקשרו למחלות המתווכות על ידי המוח ללא מנגנון מדויק רב, בין היתר בשל אתרי הקשירה המרובים שלהם בגוף 6,12,24. דיווחים קודמים הצביעו על כך ש-SCFAs יכולים לשמש כליגנדים לקולטנים מצומדים לחלבון G, לווסתים אפיגנטיים ולמקורות ל?...

מערכת העיכול האנושית מכילה מיקרואורגניזמים מגוונים המשפיעים על המארח 1,2,3. חיידקי המעיים האלה יכולים להפריש מטבוליטים שמקורם במעיים במהלך השימוש שלהם ברכיבים תזונתיים הנצרכים על-ידי המארח 4,5. באופן מעניין, מטבוליטים של המעיים שאינם מטבוליסטים בפריפריה יכולים להיות מועברים לאיברים אחרים דרך מחזור6. שימו לב שהמטבוליטים המופרשים האלה יכולים לשמש כמתווכים לציר המעי-מוח, המוגדר כתקשורת דו-כיוונית בין מערכת העצבים המרכזית למעי7. מחקרים קודמים הראו כי מטבוליטים שמקורם במעיים יכולים לווסת התנהגות ורגש מורכבים אצל בעלי חיים 8,9,10,11.
חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFAs) הן המטבוליטים העיקריים המיוצרים על-ידי מיקרוביוטה של המעיים במהלך תסיסה של סיבים תזונתיים ופחמימות בלתי ניתנות לעיכול6. אצטט, פרופיונאט ובוטיראט הם ה-SCFAs הנפוצים ביותר במעיים12. SCFAs משמשים כמקור אנרגיה לתאים במערכת העיכול. SCFAs לא מטבוליים במעיים יכולים להיות מועברים למוח דרך וריד הפורטל, ובכך לווסת את המוח ואת ההתנהגות 6,12. מחקרים קודמים הציעו כי SCFAs עשויים למלא תפקיד קריטי בהפרעות נוירופסיכיאטריות 6,12. לדוגמה, הזרקה תוך-צפקית של בוטיראט בעכברי BTBR T+ Itpr3tf/J (BTBR), מודל חייתי של הפרעת ספקטרום האוטיזם (ASD), הצילה את הגירעונות החברתיים שלהם13. חולדות שטופלו באנטיביוטיקה וקיבלו מיקרוביוטה מנבדקים דיכאוניים הראו עלייה בהתנהגויות דמויות חרדה וב-SCFAs צואתיים14. מבחינה קלינית, שינויים ברמות SCFAs בצואה נצפו אצל אנשים עם ASD בהשוואה לקבוצת הביקורתהמתפתחת בדרך כלל 15,16. לאנשים עם דיכאון יש רמות נמוכות יותר של SCFAs בצואה מאשרלנבדקים בריאים 17,18. מחקרים אלה הציעו כי SCFAs יכולים לשנות התנהגות אצל בעלי חיים ובני אדם באמצעות מסלולים שונים.
מטבוליטים מיקרוביאליים מפעילים השפעות מגוונות על אתרים רבים בגוף, ומשפיעים על הפיזיולוגיה וההתנהגויות של המארח 4,19, כולל מערכת העיכול, עצב הוואגוס והעצב הסימפתטי. קשה להצביע על התפקיד המדויק של מטבוליטים שמקורם במעיים במוח בעת מתן המטבוליטים דרך נתיבים היקפיים. המאמר הזה מציג פרוטוקול מבוסס וידאו כדי לחקור את ההשפעות של מטבוליטים שמקורם במעיים במוחו של עכבר שנע בחופשיות (איור 1). הראינו כי ניתן לתת SCFAs באופן חריף דרך צינורית המדריך במהלך מבחנים התנהגותיים. ניתן לשנות את הסוג, הנפח וקצב העירוי של מטבוליטים בהתאם למטרה. ניתן לכוונן את אתר הקנוליזציה כדי לחקור את ההשפעה של מטבוליטים במעיים באזור מסוים במוח. אנו שואפים לספק למדענים שיטה לחקור את ההשפעה הפוטנציאלית של מטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים על המוח ועל ההתנהגות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advil Liqui-Gels Solubilized Ibuprofen A2:D41</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-rabbit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Fluorescent Gold (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB153-I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Vacuum Filter, 500 mL, 0.22 &#956;m, PES, Sterile</td>
			<td>NEST</td>
			<td>121921LA01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td>ACSF: 0.14 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine scrub 2%</td>
			<td>Phoenix</td>
			<td>NDC 57319-611-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine solution</td>
			<td>Phoenix</td>
			<td>NDC 57319-599-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial dummy</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62004</td>
			<td>Single_OD 0.20 mm/ M3.5/G = 0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial guide cannul</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62104</td>
			<td>Single_OD 0.41 mm-27G/ M3.5/C = 2.5 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial injector</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62204</td>
			<td>Single_OD 0.21 mm-33G/ Mates with M3.5/C = 3.5 mm/G = 0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td>ACSF: 0.61 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental acrylic</td>
			<td>HYGENIC</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixing screws</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield mounting medium with DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB104139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>16050130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>XG-LBB-9151133S-1BX</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>Panion &#38; BF biotech</td>
			<td>DG-4900-250D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td>ACSF: 0.19 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketoprofen&#160;</td>
			<td>Swiss Pharmaceutical</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine&#160;</td>
			<td>AstraZeneca</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melting point agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td>ACSF: 0.19 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover slips</td>
			<td>MARIENFELD</td>
			<td>101242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS-001E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil light, white NF</td>
			<td>Macron Fine Chemicals</td>
			<td>MA-6358-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>ACSF: 7.46 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td>ACSF: 0.18 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>ACSF: 1.76 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl cyanoacrylate adhesive (tissue adhesive glue)</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>3M Vetbond</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neural tracer&#160;</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-358883</td>
			<td>FluoroGold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene tube</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62329</td>
			<td>OD 1.50, I.D 0.50 mm and OD 1.09, I.D 0.38 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet (eye) Ointment</td>
			<td>Dechra&#160;</td>
			<td>12920060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td>SCFAs: 13.5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium butyrate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B5887</td>
			<td>SCFAs: 8 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium propionate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1880</td>
			<td>SCFAs: 5.18 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless guide cannula</td>
			<td>Chun Ta stainless steel enterprise CO., LTD.</td>
			<td>n/a</td>
			<td>OD 0.63 mm; Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless injector</td>
			<td>Chun Ta stainless steel enterprise CO., LTD.</td>
			<td>n/a</td>
			<td>OD 0.3 mm; dummy is made from injector; local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superglue</td>
			<td>Krazy Glue</td>
			<td>KG94548R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.08603.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula holder</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>B485-68217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ceiling camera</td>
			<td>FOSCAM</td>
			<td>R2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital stereotaxic instruments</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51730D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>INNOVIEW</td>
			<td>SEM-HT/TW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bead Sterilizer</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>RS1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53800M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Forceps</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td>Serrated, Slight Curve; Extra Delicate; 0.5mm Tip Width; 4&#34; Length&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5918</td>
			<td>4.5&#34; Angled Sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection controller</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>MICRO2T</td>
			<td>SMARTouch Controller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection syringe pump</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>UMP3T-1</td>
			<td>UltraMicroPump3&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80014</td>
			<td>10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Fiber Cold Light with double Fiber</td>
			<td>Step</td>
			<td>LGY-150</td>
			<td>Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet trimmer</td>
			<td>WAHL</td>
			<td>09962-2018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporiser for Isoflurane</td>
			<td>Step</td>
			<td>AS-01</td>
			<td>Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal behavior video tracking software</td>
			<td>Noldus</td>
			<td>EthoVision</td>
			<td>Version: 15.0.1416</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Application Suite X software</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LASX</td>
			<td>Version: 3.7.2.22383</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular delivery of gut-derived microbial metabolites in freely moving mice

ההשפעה של מיקרוביוטה של המעיים והמטבוליטים שלהם על הפיזיולוגיה וההתנהגות של המארחים נחקרה בהרחבה בעשור זה. מחקרים רבים גילו כי מטבוליטים שמקורם במיקרוביוטה של המעיים מווסתים תפקודים פיזיולוגיים בתיווך המוח באמצעות מסלולים מורכבים בין המעי למוח אצל הפונדקאי. חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFAs) הן המטבוליטים העיקריים שמקורם בחיידקים המיוצרים במהלך תסיסת סיבים תזונתיים על-ידי המיקרוביום של המעי. SCFAs מופרשים מהמעיים יכולים לפעול באתרים רבים בפריפריה, ולהשפיע על התגובה החיסונית, האנדוקרינית והעצבית עקב התפוצה העצומה של קולטני SCFAs. לכן, מאתגר להבדיל בין ההשפעות המרכזיות וההיקפיות של SCFAs באמצעות מתן פומי ותוך-צפקי של SCFAs. מאמר זה מציג שיטה מבוססת וידאו לחקור את התפקיד התפקודי של SCFAs במוח באמצעות צינורית מנחה בעכברים הנעים בחופשיות. ניתן להתאים את כמות וסוג ה-SCFAs במוח על ידי שליטה בנפח ובקצב העירוי. שיטה זו יכולה לספק למדענים דרך להעריך את תפקידם של מטבוליטים שמקורם במעיים במוח.

העכבר הוחדר ל-SCFAs שבוע לאחר ההחלמה מהשתלת צינורית המדריך כדי להעריך את פעילות התנועה בכלוב חדש. העכבר הוכנס לכלוב חדשני והוחדר עם 2,100 nL של SCFAs או ACSF ב-5 הדקות הראשונות (קצב אספקה של 7 nL/s) לתוך המוח דרך צינורית המדריך המסחרית שהושתלה בחדר הצדדי של המוח. פעילות התנועה בכלוב חדש נרשמה במשך 30 דקות נ...

Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice at JoVE.com

Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

למטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים יש השפעות רבות פנים המובילות להתנהגות מורכבת אצל בעלי חיים. אנו שואפים לספק שיטה שלב אחר שלב כדי להגדיר את ההשפעות של מטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים במוח באמצעות העברה תוך-חדרית באמצעות צינורית מנחה.

העברה תוך-מוחית של מטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים בעכברים הנעים בחופשיות

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

המטבוליטים שמשתחררים על-ידי המיקרוביוטה של המעיים מייצרים השפעות מורכבות על הפונדקאי. פרוטוקול זה מציג שיטה לחקור את תפקידם של מטבוליטים במעיים במוח העכבר ובהתנהגותו. טכניקה זו מספקת שיטה מדויקת, מוקפדת ומאומתת להעברת מטבוליטים של המעיים למוח בעכברים הנעים בחופשיות.אנו מספקים את המתודולוגיה המקיפה והפיזיולוגית הטובה ביותר לתובנות על חקר ציר המוח במעיים. הנח את העכבר על המסגרת הסטריאוטקסית ותקן את החותכות של העכבר על פס החותך במחזיק החותך הסטריאוטקסי. מכסים את האף במסכת חרוט האף.לאחר מכן להעריך את nociception של העכבר באמצעות רפלקס צביטה העליון, ולהבטיח קצב נשימה קבוע לפני חתירה באתר הניתוח. לאחר גזום פרווה על הראש מוסר על ידי סרט דבק, תת עורית להזריק את ketoprofen משכך כאבים כדי להקל על הכאב ולהחיל משחה העין. לאחר מכן, תקן את הראש על ידי הכנסת מוט האוזן המחודד לתעלת האוזן.הדקו את מהדק האף על מחזיק החותך ולחצו על הראש בעדינות כדי לוודא שהראש קבוע. השתמש ב-3 קרצוף לסירוגין של ספוגית כלורהקסידין כדי לחטא את הקרקפת. כעת, השתמש באזמל כריתה כדי לבצע חתך של פחות מסנטימטר אחד בקרקפת באופן אחורי קדמי.לאחר פתיחת החתך, נגבו את הגולגולת בעזרת צמר גפן המוחזק על ידי מלקחיים מיקרו-ניתוחיים. בהתבסס על הקואורדינטות הסטריאוטקסיות, יש לזהות ולתייג את מיקום החדר הצדדי הימני כמתואר בכתב היד. לאחר מכן, קדח חור דרך הגולגולת באתר המסומן באמצעות מקדחה סטריאוטקסית, ומאוחר יותר, קדח שניים עד ארבעה חורים נוספים בגולגולת.נגבו את הגולגולת עם צמר גפן לידוקאין והרכיבו 2 עד 4 ברגים מנירוסטה על החורים. הניחו את צינורית המדריך המסחרי על מחזיק הצינורית הסטריאוטקסית וחטאו עם מעקר מהירות הזכוכית ב-150 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, העבירו את מחזיק הצינורית הסטריאוטקסית לחור שנקדח עבור החדר הצדדי והכניסו באיטיות את צינורית ההנחיה המסחרית לתוך החור עד להשגת העומק הרצוי.עכשיו להחיל 10 microliters של דבק n-Butyl cyanoacrylate כדי לתקן את צינורית המדריך המסחרי בחור קדח ולחכות 3 עד 4 דקות. יש לשחרר בעדינות את צינורית המדריך המסחרי ממחזיק הצינורית הסטריאוטקסית ולמרוח אקריליק דנטלי על הקרקפת המשופעת כדי לתקן את צינורית המדריך המסחרי ולהמתין לפחות 5 דקות. להשתיל את הדמה המסחרית לתוך צינורית המדריך המסחרי.לאחר מכן, הכניסו את העכבר לכלוב חדש עם כרית חימום מתחתיו להתאוששות מהרדמה והתבוננו ברציפות עד שהעכבר מתעורר במלואו. הרכב את מזרק המיקרוליטר, המכיל 10 מיקרוליטרים של מים מזוקקים, על משאבת המיקרו-הזרקה. באמצעות מזרק אינסולין, למלא את צינור פוליאתילן עם מים מזוקקים ולחבר את מזרק microliter לצינור פוליאתילן תלוי.הפעל את בקר המיקרו-הזרקה ולחץ על הצג את כל הערוצים כדי לגשת למסך הפקודה. לאחר מכן, לחץ על תצורה וקבע יעד נפח ל -9, 800 ננוליטר עם קצב אספקה של 100 ננוליטר לשנייה. לאחר מכן לחץ על כיוון כדי לעבור למצב ההחדרה ולחץ על Run כדי להחדיר 9, 800 ננוליטר של מים מזוקקים מצינור הפוליאתילן המחובר למזרק המיקרוליטר.כעת, הכניסו את המזרק לבקבוקון המכיל את השמן המינרלי, לחצו על תצורת הנפח והגדירו את יעד הנפח ל -3, 000 ננוליטר עם קצב אספקה ל -100 ננוליטר לשנייה. למשיכת 3, 000 ננוליטר של שמן מינרלי, לחץ על כיוון כדי לעבור למצב נסיגה ולאחר מכן לחץ על הפעלה. לפרק את צינור פוליאתילן מן מחט מזרק microliter.כדי לירוק החוצה 3, 000 ננוליטר של מים מזוקקים ממחט מזרק microliter, לחץ על כיוון לעבור למצב החדרה ולחץ על הפעלה. ואז להכניס את מזרק microliter בחזרה לתוך צינור פוליאתילן. הכניסו את המזרק לבקבוקון המכיל SCFAs.לחץ על תצורת ההדפסה והגדר את יעד הנפח ל-9, 500 ננוליטר עם קצב אספקה של 100 ננוליטר לשנייה. משוך 9, 500 ננוליטרים של SCFAs על ידי לחיצה על כיוון כדי לעבור למצב משיכה ולחץ על הפעלה. תייג את שלב ה-SCFAs של השמן כדי לוודא אם ה-SCFAs מוחדרים בהצלחה.לחץ על תצורת ההדפסה והגדר את יעד הנפח הרצוי עם קצב אספקה של 7 ננוליטר לשנייה. לחצו על הכיוון כדי לעבור למצב ההחדרה. לחץ לרוץ כדי להחדיר את מזרק microliter קדימה עד הנוזל יוצא בקצה הקדמי של המזרק המסחרי לפני החדרת המזרק לתוך הצינורית להזרקת SCFAs.לאחר הרדמת העכבר, הכנס את המזרק המסחרי לתוך צינורית המדריך המסחרי. לאחר שהעכבר מתאושש מההרדמה, הניחו אותו בכלוב חדש ואפשרו לו לחקור במשך 35 דקות בחופשיות. החדירו SCFAs באמצעות קצב אספקה של 7 ננוליטר לשנייה לנפח יעד של 2, 100 ננוליטר ב-5 הדקות הראשונות.לאחר מכן לחץ על כיוון למצב ההחדרה ולחץ על הפעלה. לאחר בדיקה התנהגותית, הסר את המזרק המסחרי מהצינורית המסחרית. החדירו 2, 100 ננוליטרים של העקיבה הנייטרלית עם קצב אספקה של 7 ננוליטר לשנייה כדי לאמת את אתר העירוי.דמיינו את האות הפלואורסצנטי באתר העירוי באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. גם עכברים שהוחדרו ל-ACSF וגם עכברים בעלי SCFAs נסעו בכלוב חדש במשך 35 דקות בסך הכל. לא נצפה הבדל בפעילות הלוקומוטורית בכלוב החדש בין עירוי של SCFAs ו- ACSF.הצבע הפלואורסצנטי זוהה בחדר הצדדי ובאזורים הסובבים את מוח העכבר כאשר הוחדר לו צינורית מנחה מסחרית. באופן דומה, עירוי דרך צינורית מדריך הנירוסטה מוביל לזיהוי אותות בחדר הלטרלי ובאזורים הסובבים את מוח העכבר. שילוב הליך זה עם טכנולוגיות עצביות מבוססות מעגלים יאפשר למדענים לקבל תובנה לגבי השליטה מבוססת המעגלים במוח וההתנהגות שתורמים מטבוליטים במעיים.טכניקה זו סוללת את הדרך לחוקרים לחקור את תפקידם של מיקרוביוטה ומטבוליטים בציר המוח המורכב של המעי.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

בצפיפות גבוהה הקלטות EEG של העכברים לנוע בחופשיות באמצעות polyimide מבוססי microelectrode

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

Recording Single Neurons' Action Potentials from Freely Moving Pigeons Across Three Stages of Learning

הקלטת הפוטנציאלים הפעולה &#39;יחיד נוירונים מחופשיות העברת יונים על פני שלושה שלבים של למידה

While the subject of learning has attracted immense interest from both behavioral and neural scientists, only relatively few investigators have observed ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

הקלטה EEG בחופשיות העברת חולדות neonatal בשיטת רומן

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

טיפול תוך-ברובני עם בדיקות Resiniferatoxin וכאב בעכברים

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

EEG לא פולשנית הקלטות לנוע בחופשיות חזירונים

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

Microdialysis של חומצות אמינו מעוררות במהלך ההקלטות EEG בחופשיות העברת חולדות

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

Long-term Sensory Conflict in Freely Behaving Mice

הקונפליקט חושי לטווח ארוך באופן חופשי להתנהג עכברים

Long-term sensory conflict protocols are a valuable means of studying motor learning. The presented protocol produces a persistent sensory conflict for ...

Hybrid Microdrive System with Recoverable Opto-Silicon Probe and Tetrode for Dual-Site High Density Recording in Freely Moving Mice

מערכת Microdrive היברידית עם בדיקה ההשבה Opto-סיליקון ו Tetrode עבור הקלטה כפול בצפיפות גבוהה בחופשיות העברת עכברים

Multi-regional neural recordings can provide crucial information to understanding fine-timescale interactions between multiple brain regions. However, ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

מולטי-סיב פונסה להקליט פעילות עצבית בבעלי חיים הנעים באופן חופשי

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Extracellular Electrophysiological Recording in the Motor Cortex of Mice

Multichannel Extracellular Recording in Freely Moving Mice

Advancements in Multichannel Extracellular Recording for Studying Neuronal Activity in Freely Moving Mice (Video) | JoVE

הקלטה חוץ-תאית רב-ערוצית בעכברים הנעים בחופשיות

The protocol aims to uncover the properties of neuronal firing and network local field potentials (LFPs) in behaving mice carrying out specific tasks by ...