Name: intracerebroventricular delivery of gut-derived microbial metabolites in freely moving mice
Uploaded: 2022-06-02T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice at JoVE.com

हम जानवरों की देखभाल के लिए राष्ट्रीय चेंग कुंग विश्वविद्यालय (एनसीकेयू) में प्रयोगशाला पशु केंद्र के कर्मचारियों को स्वीकार करते हैं। इस काम को चेंग-एचएसिंग मेडिकल फाउंडेशन के प्रोफेसर कुन-येन हुआंग एजुकेशन फंड से सी-डब्ल्यूएल तक छात्रवृत्ति द्वारा समर्थित किया गया था; ताइवान में विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय (मोस्ट) से धन: (अंडरग्रेजुएट रिसर्च मोस्ट 109-2813-सी-006-095-बी) से टी-एचवाई; (सर्वाधिक 107-2320-बी-006-072-MY3; 109-2314-B-006-046; 110-2314-B-006-114; 110-2320-B-006-018-MY3) से W-L.W.; और उच्च शिक्षा स्प्राउट परियोजना, शिक्षा मंत्रालय से एनसीकेयू में विश्वविद्यालय उन्नति के मुख्यालय से डब्ल्यू-एलडब्ल्यू तक।

सभी प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल और जानवरों की देखभाल को राष्ट्रीय चेंग कुंग विश्वविद्यालय (एनसीकेयू) संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) द्वारा अनुमोदित किया गया था।
1. प्रयोगात्मक ...

आंत-व्युत्पन्न मेटाबोलाइट्स को बहुत सटीक तंत्र के बिना मस्तिष्क-मध्यस्थता रोगों से जोड़ा गया है, आंशिक रूप से शरीर में उनके कई बाध्यकारी साइटोंके कारण 6,12,24। पिछली रि...

मानव जठरांत्र संबंधी मार्ग मेजबान 1,2,3 को प्रभावित करने वाले विविध सूक्ष्मजीवों को आश्रय देता है। ये आंत बैक्टीरिया मेजबान 4,5 द्वाराउपभोग किए गए आहार घटकों के उपयोग के दौरान आंत-व्युत्पन्न मेटाबोलाइट्स का स्राव कर सकते हैं। दिलचस्प बात यह है कि परिधि में चयापचय नहीं किए गए आंत मेटाबोलाइट्स को परिसंचरण 6 के माध्यम से अन्य अंगों में ले जाया जा सकताहै। ध्यान दें, ये स्रावित मेटाबोलाइट्स आंत-मस्तिष्क अक्ष के लिए मध्यस्थ के रूप में काम कर सकते हैं, जिसे केंद्रीय तंत्रिका तंत्र और आंत 7 के बीच द्विदिश संचार के रूप में परिभाषित कियागया है। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि आंत-व्युत्पन्न मेटाबोलाइट्स जानवरों में जटिल व्यवहार और भावनाओं कोसंशोधित कर सकते हैं 8,9,10,11।
शॉर्ट-चेन फैटी एसिड (एससीएफए) आहार फाइबर और अपचनीय कार्बोहाइड्रेटके किण्वन के दौरान आंत माइक्रोबायोटा द्वारा उत्पादित मुख्य मेटाबोलाइट्स हैं। आंत12 में एसीटेट, प्रोपियोनेट और ब्यूटिरेट सबसे प्रचुर मात्रा में एससीएफए हैं। एससीएफए जठरांत्र संबंधी मार्ग में कोशिकाओं के लिए ऊर्जा स्रोत के रूप में काम करते हैं। आंत में अनमेटाबोलाइज्ड एससीएफए को पोर्टल नस के माध्यम से मस्तिष्क में ले जाया जा सकता है, इस प्रकार मस्तिष्क और व्यवहार को संशोधित किया जा सकताहै 6,12. पिछले अध्ययनों ने सुझाव दिया है कि एससीएफए न्यूरोसाइकियाट्रिकविकारों 6,12 में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकते हैं। उदाहरण के लिए, बीटीबीआर टी + आईटीपीआर 3टीएफ / जे (बीटीबीआर) चूहों में ब्यूटिरेट के इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन, ऑटिज़्म स्पेक्ट्रम डिसऑर्डर (एएसडी) का एक पशु मॉडल, ने उनके सामाजिक घाटेको बचाया। अवसादग्रस्त विषयों से माइक्रोबायोटा प्राप्त करने वाले एंटीबायोटिक-उपचारित चूहों ने चिंता जैसे व्यवहार और फेकल एससीएफए14 में वृद्धि देखी। नैदानिक रूप से, आमतौर पर विकासशील नियंत्रण15,16 की तुलना में एएसडी वाले लोगों में फेकल एससीएफए के स्तर में परिवर्तन देखा गया था। अवसाद वाले लोगों में स्वस्थ लोगों की तुलना में कम फेकल एससीएफए का स्तर होता है 17,18। इन अध्ययनों ने सुझाव दिया कि एससीएफए विभिन्न मार्गों के माध्यम से जानवरों और मनुष्यों में व्यवहार को बदल सकते हैं।
माइक्रोबियल मेटाबोलाइट्स शरीर में कई साइटों पर विविध प्रभाव डालते हैं, मेजबान शरीर विज्ञान और व्यवहार 4,19 को प्रभावित करते हैं, जिसमें जठरांत्र संबंधी मार्ग, वेगस तंत्रिका और सहानुभूति तंत्रिका शामिल हैं। परिधीय मार्गों के माध्यम से मेटाबोलाइट्स को प्रशासित करते समय मस्तिष्क में आंत-व्युत्पन्न मेटाबोलाइट्स की सटीक भूमिका को इंगित करना मुश्किल है। यह पेपर एक स्वतंत्र रूप से चलने वाले माउस के मस्तिष्क में आंत-व्युत्पन्न मेटाबोलाइट्स के प्रभावों की जांच करने के लिए एक वीडियो-आधारित प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है (चित्रा 1)। हमने दिखाया कि व्यवहार परीक्षणों के दौरान गाइड कैनुला के माध्यम से एससीएफए को तीव्र रूप से दिया जा सकता है। मेटाबोलाइट्स के प्रकार, मात्रा और जलसेक दर को उद्देश्य के आधार पर संशोधित किया जा सकता है। एक विशिष्ट मस्तिष्क क्षेत्र में आंत मेटाबोलाइट्स के प्रभाव का पता लगाने के लिए कैनुलाइजेशन की साइट को समायोजित किया जा सकता है। हम वैज्ञानिकों को मस्तिष्क और व्यवहार पर आंत-व्युत्पन्न माइक्रोबियल मेटाबोलाइट्स के संभावित प्रभाव का पता लगाने के लिए एक विधि प्रदान करना चाहते हैं।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advil Liqui-Gels Solubilized Ibuprofen A2:D41</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-rabbit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Fluorescent Gold (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB153-I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Vacuum Filter, 500 mL, 0.22 &#956;m, PES, Sterile</td>
			<td>NEST</td>
			<td>121921LA01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td>ACSF: 0.14 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine scrub 2%</td>
			<td>Phoenix</td>
			<td>NDC 57319-611-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine solution</td>
			<td>Phoenix</td>
			<td>NDC 57319-599-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial dummy</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62004</td>
			<td>Single_OD 0.20 mm/ M3.5/G = 0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial guide cannul</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62104</td>
			<td>Single_OD 0.41 mm-27G/ M3.5/C = 2.5 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial injector</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62204</td>
			<td>Single_OD 0.21 mm-33G/ Mates with M3.5/C = 3.5 mm/G = 0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td>ACSF: 0.61 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental acrylic</td>
			<td>HYGENIC</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixing screws</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield mounting medium with DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB104139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>16050130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>XG-LBB-9151133S-1BX</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>Panion &#38; BF biotech</td>
			<td>DG-4900-250D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td>ACSF: 0.19 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketoprofen&#160;</td>
			<td>Swiss Pharmaceutical</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine&#160;</td>
			<td>AstraZeneca</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melting point agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td>ACSF: 0.19 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover slips</td>
			<td>MARIENFELD</td>
			<td>101242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS-001E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil light, white NF</td>
			<td>Macron Fine Chemicals</td>
			<td>MA-6358-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>ACSF: 7.46 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td>ACSF: 0.18 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>ACSF: 1.76 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl cyanoacrylate adhesive (tissue adhesive glue)</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>3M Vetbond</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neural tracer&#160;</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-358883</td>
			<td>FluoroGold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene tube</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62329</td>
			<td>OD 1.50, I.D 0.50 mm and OD 1.09, I.D 0.38 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet (eye) Ointment</td>
			<td>Dechra&#160;</td>
			<td>12920060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td>SCFAs: 13.5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium butyrate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B5887</td>
			<td>SCFAs: 8 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium propionate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1880</td>
			<td>SCFAs: 5.18 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless guide cannula</td>
			<td>Chun Ta stainless steel enterprise CO., LTD.</td>
			<td>n/a</td>
			<td>OD 0.63 mm; Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless injector</td>
			<td>Chun Ta stainless steel enterprise CO., LTD.</td>
			<td>n/a</td>
			<td>OD 0.3 mm; dummy is made from injector; local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superglue</td>
			<td>Krazy Glue</td>
			<td>KG94548R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.08603.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula holder</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>B485-68217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ceiling camera</td>
			<td>FOSCAM</td>
			<td>R2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital stereotaxic instruments</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51730D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>INNOVIEW</td>
			<td>SEM-HT/TW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bead Sterilizer</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>RS1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53800M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Forceps</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td>Serrated, Slight Curve; Extra Delicate; 0.5mm Tip Width; 4&#34; Length&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5918</td>
			<td>4.5&#34; Angled Sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection controller</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>MICRO2T</td>
			<td>SMARTouch Controller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection syringe pump</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>UMP3T-1</td>
			<td>UltraMicroPump3&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80014</td>
			<td>10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Fiber Cold Light with double Fiber</td>
			<td>Step</td>
			<td>LGY-150</td>
			<td>Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet trimmer</td>
			<td>WAHL</td>
			<td>09962-2018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporiser for Isoflurane</td>
			<td>Step</td>
			<td>AS-01</td>
			<td>Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal behavior video tracking software</td>
			<td>Noldus</td>
			<td>EthoVision</td>
			<td>Version: 15.0.1416</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Application Suite X software</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LASX</td>
			<td>Version: 3.7.2.22383</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular delivery of gut-derived microbial metabolites in freely moving mice

मेजबान शरीर विज्ञान और व्यवहार पर आंत माइक्रोबायोटा और उनके मेटाबोलाइट्स के प्रभाव की इस दशक में बड़े पैमाने पर जांच की गई है। कई अध्ययनों से पता चला है कि आंत माइक्रोबायोटा-व्युत्पन्न मेटाबोलाइट्स मेजबान में जटिल आंत-मस्तिष्क मार्गों के माध्यम से मस्तिष्क-मध्यस्थता शारीरिक कार्यों को संशोधित करते हैं। शॉर्ट-चेन फैटी एसिड (एससीएफए) आंत माइक्रोबायोम द्वारा आहार फाइबर किण्वन के दौरान उत्पादित प्रमुख बैक्टीरिया-व्युत्पन्न मेटाबोलाइट्स हैं। आंत से स्रावित एससीएफए परिधि में कई साइटों पर कार्य कर सकता है, एससीएफए रिसेप्टर्स के विशाल वितरण के कारण प्रतिरक्षा, अंतःस्रावी और तंत्रिका प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करता है। इसलिए, एससीएफए के मौखिक और इंट्रापरिटोनियल प्रशासन के माध्यम से एससीएफए के केंद्रीय और परिधीय प्रभावों को अलग करना चुनौतीपूर्ण है। यह पेपर स्वतंत्र रूप से चलने वाले चूहों में एक गाइड कैनुला के माध्यम से मस्तिष्क में एससीएफए की कार्यात्मक भूमिका से पूछताछ करने के लिए एक वीडियो-आधारित विधि प्रस्तुत करता है। मस्तिष्क में एससीएफए की मात्रा और प्रकार को जलसेक मात्रा और दर को नियंत्रित करके समायोजित किया जा सकता है। यह विधि वैज्ञानिकों को मस्तिष्क में आंत-व्युत्पन्न मेटाबोलाइट्स की भूमिका की सराहना करने का एक तरीका प्रदान कर सकती है।

एक नए पिंजरे में लोकोमोटर गतिविधि का मूल्यांकन करने के लिए गाइड कैनुला प्रत्यारोपण से वसूली के 1 सप्ताह बाद माउस को एससीएफए के साथ जोड़ा गया था। माउस को एक नए पिंजरे में रखा गया था और मस्तिष्क के पार्श्?...

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Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

आंत-व्युत्पन्न माइक्रोबियल मेटाबोलाइट्स में बहुआयामी प्रभाव होते हैं जो जानवरों में जटिल व्यवहार के लिए अग्रणी होते हैं। हमारा उद्देश्य एक गाइड कैनुला के माध्यम से इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर डिलीवरी के माध्यम से मस्तिष्क में आंत-व्युत्पन्न माइक्रोबियल मेटाबोलाइट्स के प्रभावों को चित्रित करने के लिए एक चरण-दर-चरण विधि प्रदान करना है।

स्वतंत्र रूप से चलने वाले चूहों में आंत-व्युत्पन्न माइक्रोबियल मेटाबोलाइट्स का इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर डिलीवरी

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

आंत माइक्रोबायोटा द्वारा जारी मेटाबोलाइट्स मेजबान पर जटिल प्रभाव पैदा करते हैं। यह प्रोटोकॉल माउस मस्तिष्क और व्यवहार में आंत मेटाबोलाइट्स की भूमिका से पूछताछ करने के लिए एक विधि प्रस्तुत करता है। यह तकनीक स्वतंत्र रूप से चलने वाले चूहों में मस्तिष्क में आंत मेटाबोलाइट्स को वितरित करने के लिए एक सटीक, सावधानीपूर्वक और मान्य विधि प्रदान करती है।हम आंत मस्तिष्क अक्ष अनुसंधान में अंतर्दृष्टि के लिए एक व्यापक और शारीरिक सर्वोत्तम पद्धति प्रदान करते हैं। माउस को स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम पर रखें और स्टीरियोटैक्सिक छेदक धारक में छेदक पट्टी पर माउस छेदक को ठीक करें। नाक कोन मास्क से नाक को कवर करें।फिर शीर्ष पिंच रिफ्लेक्स के माध्यम से माउस के नोसिसेप्शन का मूल्यांकन करें, और सर्जिकल साइट को संक्रमित करने से पहले एक निरंतर श्वास दर सुनिश्चित करें। एक बार जब सिर पर छंटनी किए गए फर को चिपकने वाला टेप द्वारा हटा दिया जाता है, तो दर्द से राहत पाने और आंखों का मलहम लगाने के लिए एनाल्जेसिक केटोप्रोफेन को चमड़े के नीचे इंजेक्ट करें। इसके बाद, कान नहर में नुकीले कान की पट्टी डालकर सिर को ठीक करें।छेदक धारक पर नाक क्लैंप को कसें और यह सुनिश्चित करने के लिए सिर को धीरे से दबाएं कि सिर ठीक हो गया है। खोपड़ी को कीटाणुरहित करने के लिए क्लोरहेक्सिडीन स्वैब के 3 वैकल्पिक स्क्रब का उपयोग करें। अब, खोपड़ी में एक सेंटीमीटर से कम का चीरा लगाने के लिए विच्छेदन स्केलपेल का उपयोग करें।चीरा खोलने के बाद, खोपड़ी को सूती फाहे से पोंछ लें, जिसे सूक्ष्म विच्छेदन बल द्वारा रखा गया है। स्टीरियोटैक्सिक निर्देशांक के आधार पर, पांडुलिपि में वर्णित दाएं पार्श्व वेंट्रिकल की स्थिति की पहचान करें और लेबल करें। इसके बाद, स्टीरियोटैक्सिक ड्रिल का उपयोग करके लेबल साइट पर खोपड़ी के माध्यम से एक छेद ड्रिल करें, और बाद में, खोपड़ी में दो से चार और छेद करें।खोपड़ी को लिडोकेन कपास के फाहे से पोंछें और छेद पर 2 से 4 स्टेनलेस स्क्रू माउंट करें। स्टीरियोटैक्सिक कैनुला धारक पर वाणिज्यिक गाइड कैनुला रखें और 150 डिग्री सेल्सियस पर ग्लास स्पीड स्टेरिलाइज़र के साथ कीटाणुरहित करें। फिर, स्टीरियोटैक्सिक कैनुला धारक को पार्श्व वेंट्रिकल के लिए ड्रिल किए गए छेद में ले जाएं और धीरे-धीरे वाणिज्यिक गाइड कैनुला को छेद में डालें जब तक कि वांछित गहराई प्राप्त न हो जाए।अब ड्रिल किए गए छेद में वाणिज्यिक गाइड कैनुला को ठीक करने के लिए एन-ब्यूटाइल साइनोएक्रिलेट चिपकने वाले के 10 माइक्रोलीटर लागू करें और 3 से 4 मिनट तक प्रतीक्षा करें। स्टीरियोटैक्सिक कैनुला धारक से धीरे-धीरे वाणिज्यिक गाइड कैनुला जारी करें और वाणिज्यिक गाइड कैनुला को ठीक करने के लिए इंजेक्शन वाली खोपड़ी पर दंत ऐक्रेलिक लागू करें और कम से कम 5 मिनट तक प्रतीक्षा करें। वाणिज्यिक डमी को वाणिज्यिक गाइड कैनुला में प्रत्यारोपित करें।फिर, एनेस्थीसिया से वसूली के लिए माउस को एक हीटिंग पैड के साथ एक नए पिंजरे में रखें और लगातार तब तक निरीक्षण करें जब तक कि माउस पूरी तरह से जाग न जाए। माइक्रोइंजेक्शन पंप पर माइक्रोलीटर सिरिंज माउंट करें, जिसमें आसुत जल के 10 माइक्रोलीटर होते हैं। इंसुलिन सिरिंज का उपयोग करके, पॉलीथीन ट्यूब को आसुत पानी से भरें और माइक्रोलीटर सिरिंज को हैंगिंग पॉलीथीन ट्यूब से कनेक्ट करें।माइक्रोइंजेक्शन नियंत्रक चालू करें और कमांड स्क्रीन तक पहुंचने के लिए सभी चैनलों को प्रदर्शित करें। इसके बाद, कॉन्फ़िगरेशन दबाएं और 100 नैनोलीटर प्रति सेकंड की डिलीवरी दर के साथ 9,800 नैनोलीटर पर वॉल्यूम लक्ष्य निर्धारित करें। फिर इन्फ्यूज मोड पर स्विच करने के लिए दिशा दबाएं और माइक्रोलिटर सिरिंज से जुड़े पॉलीथीन ट्यूब से आसुत पानी के 9,800 नैनोलीटर डालने के लिए चलाएं।अब, इंजेक्टर को खनिज तेल, प्रेस कॉन्फ़िगरेशन युक्त शीशी में रखें और वॉल्यूम लक्ष्य को 3,000 नैनोलीटर पर सेट करें, जिसमें डिलीवरी दर 100 नैनोलीटर प्रति सेकंड है। खनिज तेल के 3,000 नैनोलीटर निकालने के लिए, निकासी मोड पर स्विच करने के लिए दिशा दबाएं और फिर रन दबाएं। माइक्रोलिटर सिरिंज सुई से पॉलीथीन ट्यूब को अलग करें।माइक्रोलीटर सिरिंज सुई से आसुत पानी के 3,000 नैनोलीटर थूकने के लिए, इन्फ्यूज मोड पर स्विच करने के लिए दिशा दबाएं और रन दबाएं। फिर माइक्रोलीटर सिरिंज को पॉलीथीन ट्यूब में वापस डालें। इंजेक्टर को एससीएफए युक्त शीशी में रखें।कॉन्फ़िगरेशन दबाएं और 100 नैनोलीटर प्रति सेकंड की डिलीवरी दर के साथ 9,500 नैनोलीटर पर वॉल्यूम लक्ष्य निर्धारित करें। निकासी मोड पर स्विच करने और चलाने के लिए दिशा दबाकर एससीएफए के 9,500 नैनोलीटर निकालें। एससीएफए सफलतापूर्वक संक्रमित हैं या नहीं, यह सत्यापित करने के लिए तेल एससीएफए चरण को लेबल करें।कॉन्फ़िगरेशन दबाएं और डिलीवरी दर के साथ वांछित मात्रा लक्ष्य को 7 नैनोलीटर प्रति सेकंड पर सेट करें। इन्फ्यूज़ मोड पर स्विच करने के लिए दिशा दबाएँ। एससीएफए इंजेक्शन के लिए कैनुला में इंजेक्टर डालने से पहले माइक्रोलीटर सिरिंज को आगे बढ़ाने के लिए तब तक दबाएं जब तक कि तरल वाणिज्यिक इंजेक्टर के सामने के छोर पर न निकल जाए।माउस को एनेस्थेटाइज करने के बाद, वाणिज्यिक इंजेक्टर को वाणिज्यिक गाइड कैनुला में डालें। एक बार जब माउस संज्ञाहरण से बरामद हो जाता है, तो इसे एक नए पिंजरे में रखें और इसे 35 मिनट के लिए स्वतंत्र रूप से पता लगाने की अनुमति दें। पहले 5 मिनट में 2,100 नैनोलीटर की लक्षित मात्रा के लिए प्रति सेकंड 7 नैनोलीटर की डिलीवरी दर का उपयोग करके एससीएफए को शामिल करें।फिर इन्फ्यूज़ मोड पर दिशा दबाएं और चलाएँ दबाएँ। व्यवहार परीक्षण के बाद, वाणिज्यिक गाइड कैनुला से वाणिज्यिक इंजेक्टर को हटा दें। जलसेक साइट को सत्यापित करने के लिए प्रति सेकंड 7 नैनोलीटर की वितरण दर के साथ तटस्थ ट्रेसर के 2,100 नैनोलीटर डालें।प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग करके जलसेक साइट में फ्लोरोसेंट सिग्नल की छवि बनाएं। एसीएसएफ और एससीएफए-संक्रमित चूहों दोनों ने कुल 35 मिनट के लिए एक नए पिंजरे में यात्रा की। एससीएफए और एसीएसएफ के बीच नए पिंजरे में लोकोमोटर गतिविधि में कोई अंतर नहीं देखा गया।फ्लोरोसेंट डाई को पार्श्व वेंट्रिकल और माउस मस्तिष्क के आसपास के क्षेत्रों में पाया गया था जब एक वाणिज्यिक गाइड कैनुला के साथ जोड़ा गया था। इसी तरह, स्टेनलेस स्टील गाइड कैनुला के माध्यम से जलसेक पार्श्व वेंट्रिकल और माउस मस्तिष्क के आसपास के क्षेत्रों में संकेतों का पता लगाने की ओर जाता है। सर्किट आधारित तंत्रिका प्रौद्योगिकियों के साथ इस प्रक्रिया को संयोजित करने से वैज्ञानिकों को मस्तिष्क के सर्किट आधारित नियंत्रण और आंत मेटाबोलाइट्स द्वारा योगदान किए गए व्यवहार में अंतर्दृष्टि प्राप्त करने की अनुमति मिलेगी।यह तकनीक शोधकर्ताओं के लिए जटिल आंत मस्तिष्क अक्ष में माइक्रोबायोटा और मेटाबोलाइट्स की भूमिका का पता लगाने का मार्ग प्रशस्त करती है।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

आज़ादी चलती Polyimide आधारित microelectrode का उपयोग चूहे के उच्च घनत्व ईईजी रिकॉर्डिंग

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

Recording Single Neurons' Action Potentials from Freely Moving Pigeons Across Three Stages of Learning

आज़ादी लर्निंग के तीन चरणों में कबूतर बढ़ने से एकल न्यूरॉन्स &#39;कार्रवाई क्षमता रिकॉर्डिंग

While the subject of learning has attracted immense interest from both behavioral and neural scientists, only relatively few investigators have observed ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

एक उपन्यास पद्धति का उपयोग करते हुए मुक्त नवजात चूहों को उड़ाने में ईईजी रिकॉर्डिंग

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

चूहों में रेसिनिफेरॉक्सिन और दर्द परीक्षण के साथ इंट्रासेरेरेब्रोवेंट्रिकुलर उपचार

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

स्वतंत्र रूप से चलती Piglets से इनवेसिव ईईजी रिकॉर्डिंग

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

आज़ादी से चलती चूहों में ईईजी रिकॉर्डिंग के दौरान उत्तेजक अमीनो अम्ल की Microdialysis

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

Long-term Sensory Conflict in Freely Behaving Mice

स्वतंत्र रूप से चूहों का बर्ताव करने में दीर्घकालिक संवेदी संघर्ष

Long-term sensory conflict protocols are a valuable means of studying motor learning. The presented protocol produces a persistent sensory conflict for ...

Hybrid Microdrive System with Recoverable Opto-Silicon Probe and Tetrode for Dual-Site High Density Recording in Freely Moving Mice

रिकवरेबल ऑप्टो-सिलिकॉन जांच और स्वतंत्र रूप से चल चूहे में दोहरी साइट उच्च घनत्व रिकॉर्डिंग के लिए Tetrode के साथ हाइब्रिड Microdrive प्रणाली

Multi-regional neural recordings can provide crucial information to understanding fine-timescale interactions between multiple brain regions. However, ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

मल्टी-फाइबर फोटोमेट्री फ्रीली-मोविंग जानवरों में तंत्रिका गतिविधि रिकॉर्ड करने के लिए

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Extracellular Electrophysiological Recording in the Motor Cortex of Mice

Multichannel Extracellular Recording in Freely Moving Mice

Advancements in Multichannel Extracellular Recording for Studying Neuronal Activity in Freely Moving Mice (Video) | JoVE

स्वतंत्र रूप से चलने वाले चूहों में मल्टीचैनल एक्स्ट्रासेल्युलर रिकॉर्डिंग

The protocol aims to uncover the properties of neuronal firing and network local field potentials (LFPs) in behaving mice carrying out specific tasks by ...