Name: intracerebroventricular delivery of gut-derived microbial metabolites in freely moving mice
Uploaded: 2022-06-02T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice at JoVE.com

Ulusal Cheng Kung Üniversitesi'ndeki (NCKU) Laboratuvar Hayvanları Merkezi personeline hayvanlara baktıkları için teşekkür ederiz. Bu çalışma, CHENG-HSING Tıp Vakfı'nın Prof. Kun-Yen Huang Eğitim Fonu'ndan C.-W.L.'ye verilen bursla desteklenmiştir; Tayvan'daki Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan (MOST) gelen fonlar: (Lisans Araştırması MOST 109-2813-C-006-095-B) T.-H.Y.'ye; (ÇOĞU 107-2320-B-006-072-MY3; 109-2314-B-006-046; 110-2314-B-006-114; 110-2320-B-006-018-MY3) W.-L.W.'ye; ve Yüksek Öğrenim Filizi Projesi, Eğitim Bakanlığı'ndan NCKU'daki Üniversite İlerleme Merkezi'ne W.-L.W.'ye

Tüm deneysel protokoller ve hayvanların bakımı, Ulusal Cheng Kung Üniversitesi (NCKU) Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Deney hayvanına hazırlık
<ol><li>Bir satıcıdan 6-8 haftalık vahşi tip C57BL/6JNarl erkek fareleri edinin.</li>
	<li>Fareleri standart fare chow ve sterilize edilmiş su ad libitum ile standart bir fare kafesinde barındırın. NOT: NCKU Laboratuvar Hayvanları Merkezi için barın...

Bağırsak kaynaklı metabolitler, kısmen vücuttaki çoklu bağlanma bölgelerinden dolayı, çok kesin bir mekanizma olmadan, beyin aracılı hastalıklarla ilişkilendirilmiştir 6,12,24. Önceki raporlar, SCFA'ların G proteinine bağlı reseptörler, epigenetik düzenleyiciler ve vücudun birden fazla bölgesinde enerji üretimi için kaynaklar için ligandlar olarak hizmet edebileceğini gösterdi ...

İnsan gastrointestinal sistemi, konakçıyı etkileyen çeşitli mikroorganizmaları barındırır 1,2,3. Bu bağırsak bakterileri, konakçıtarafından tüketilen diyet bileşenlerinin kullanımı sırasında bağırsak kaynaklı metabolitleri salgılayabilir 4,5. İlginçtir ki, çevrede metabolize edilmeyen bağırsak metabolitleri, dolaşım yoluyla diğer organlarataşınabilir6. Not olarak, bu salgılanan metabolitler, merkezi sinir sistemi ile bağırsak arasındaki çift yönlü iletişim olarak tanımlanan bağırsak-beyin ekseni için aracılar olarak hizmet edebilir7. Önceki çalışmalar, bağırsak kaynaklı metabolitlerin hayvanlarda karmaşık davranış ve duyguları modüle edebileceğini göstermiştir 8,9,10,11.
Kısa zincirli yağ asitleri (SCFA'lar), diyet lifi ve sindirilemeyen karbonhidratların fermantasyonu sırasında bağırsak mikrobiyotası tarafından üretilen ana metabolitlerdir6. Asetat, propiyonat ve bütirat, bağırsaktaki en bol SCFA'lardır12. SCFA'lar gastrointestinal sistemdeki hücreler için enerji kaynağı görevi görür. Bağırsaktaki metabolize edilmemiş SCFA'lar portal ven yoluyla beyne taşınabilir, böylece beyin ve davranışmodüle edilir 6,12. Önceki çalışmalar, SCFA'ların nöropsikiyatrik bozukluklarda kritik bir rol oynayabileceğini öne sürmüştür 6,12. Örneğin, otizm spektrum bozukluğunun (ASD) bir hayvan modeli olan BTBR T + Itpr3tf / J (BTBR) farelerinde intraperitoneal bütirat enjeksiyonu, sosyal eksikliklerini kurtardı13. Depresif deneklerden mikrobiyota alan antibiyotik tedavisi görmüş sıçanlar, anksiyete benzeri davranışlarda ve dışkı SCFA'larında bir artış göstermiştir14. Klinik olarak, OSB'li kişilerde fekal SCFA düzeylerindeki değişiklikler, tipik olarak gelişmekte olan kontrollere kıyaslagözlenmiştir 15,16. Depresyonu olan kişiler, sağlıklı deneklerden daha düşük dışkı SCFA seviyelerine sahiptir17,18. Bu çalışmalar, SCFA'ların hayvanlardaki ve insanlardaki davranışları çeşitli yollarla değiştirebileceğini öne sürdü.
Mikrobiyal metabolitler, gastrointestinal sistem, vagus siniri ve sempatik sinir dahil olmak üzere konakçı fizyolojisini ve davranışlarını 4,19 etkileyerek vücudun birçok bölgesi üzerinde çeşitli etkiler gösterir. Metabolitleri periferik yollarla uygularken bağırsaktan türetilmiş metabolitlerin beyindeki kesin rolünü belirlemek zordur. Bu makale, serbestçe hareket eden bir farenin beynindeki bağırsak kaynaklı metabolitlerin etkilerini araştırmak için video tabanlı bir protokol sunmaktadır (Şekil 1). SCFA'ların davranış testleri sırasında rehber kanül yoluyla akut olarak verilebileceğini gösterdik. Metabolitlerin tipi, hacmi ve infüzyon hızı amaca bağlı olarak değiştirilebilir. Kanülizasyon bölgesi, bağırsak metabolitlerinin belirli bir beyin bölgesindeki etkisini araştırmak için ayarlanabilir. Bilim insanlarına, bağırsaktan türetilmiş mikrobiyal metabolitlerin beyin ve davranış üzerindeki potansiyel etkisini araştırmak için bir yöntem sunmayı amaçlıyoruz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advil Liqui-Gels Solubilized Ibuprofen A2:D41</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-rabbit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Fluorescent Gold (rabbit polyclonal)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB153-I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Vacuum Filter, 500 mL, 0.22 &#956;m, PES, Sterile</td>
			<td>NEST</td>
			<td>121921LA01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td>ACSF: 0.14 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine scrub 2%</td>
			<td>Phoenix</td>
			<td>NDC 57319-611-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine solution</td>
			<td>Phoenix</td>
			<td>NDC 57319-599-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial dummy</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62004</td>
			<td>Single_OD 0.20 mm/ M3.5/G = 0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial guide cannul</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62104</td>
			<td>Single_OD 0.41 mm-27G/ M3.5/C = 2.5 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial injector</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62204</td>
			<td>Single_OD 0.21 mm-33G/ Mates with M3.5/C = 3.5 mm/G = 0.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td>ACSF: 0.61 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental acrylic</td>
			<td>HYGENIC</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixing screws</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield mounting medium with DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB104139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>16050130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>XG-LBB-9151133S-1BX</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>Panion &#38; BF biotech</td>
			<td>DG-4900-250D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td>ACSF: 0.19 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketoprofen&#160;</td>
			<td>Swiss Pharmaceutical</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine&#160;</td>
			<td>AstraZeneca</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melting point agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td>ACSF: 0.19 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover slips</td>
			<td>MARIENFELD</td>
			<td>101242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>4951PLUS-001E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil light, white NF</td>
			<td>Macron Fine Chemicals</td>
			<td>MA-6358-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>ACSF: 7.46 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td>ACSF: 0.18 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>ACSF: 1.76 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>n-butyl cyanoacrylate adhesive (tissue adhesive glue)</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>3M Vetbond</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neural tracer&#160;</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-358883</td>
			<td>FluoroGold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene tube</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>62329</td>
			<td>OD 1.50, I.D 0.50 mm and OD 1.09, I.D 0.38 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet (eye) Ointment</td>
			<td>Dechra&#160;</td>
			<td>12920060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td>SCFAs: 13.5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium butyrate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B5887</td>
			<td>SCFAs: 8 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium propionate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1880</td>
			<td>SCFAs: 5.18 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless guide cannula</td>
			<td>Chun Ta stainless steel enterprise CO., LTD.</td>
			<td>n/a</td>
			<td>OD 0.63 mm; Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless injector</td>
			<td>Chun Ta stainless steel enterprise CO., LTD.</td>
			<td>n/a</td>
			<td>OD 0.3 mm; dummy is made from injector; local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superglue</td>
			<td>Krazy Glue</td>
			<td>KG94548R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.08603.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula holder</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>B485-68217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ceiling camera</td>
			<td>FOSCAM</td>
			<td>R2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital stereotaxic instruments</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51730D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>INNOVIEW</td>
			<td>SEM-HT/TW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bead Sterilizer</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>RS1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53800M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Forceps</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td>Serrated, Slight Curve; Extra Delicate; 0.5mm Tip Width; 4&#34; Length&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5918</td>
			<td>4.5&#34; Angled Sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection controller</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>MICRO2T</td>
			<td>SMARTouch Controller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection syringe pump</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>UMP3T-1</td>
			<td>UltraMicroPump3&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80014</td>
			<td>10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Fiber Cold Light with double Fiber</td>
			<td>Step</td>
			<td>LGY-150</td>
			<td>Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet trimmer</td>
			<td>WAHL</td>
			<td>09962-2018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporiser for Isoflurane</td>
			<td>Step</td>
			<td>AS-01</td>
			<td>Local vendor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1000S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal behavior video tracking software</td>
			<td>Noldus</td>
			<td>EthoVision</td>
			<td>Version: 15.0.1416</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Application Suite X software</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LASX</td>
			<td>Version: 3.7.2.22383</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular delivery of gut-derived microbial metabolites in freely moving mice

Bağırsak mikrobiyotasının ve metabolitlerinin konakçı fizyolojisi ve davranışı üzerindeki etkisi bu on yılda kapsamlı bir şekilde araştırılmıştır. Çok sayıda çalışma, bağırsak mikrobiyotasından türetilmiş metabolitlerin, konakçıdaki karmaşık bağırsak-beyin yolları aracılığıyla beyin aracılı fizyolojik fonksiyonları modüle ettiğini ortaya koymuştur. Kısa zincirli yağ asitleri (SCFA'lar), bağırsak mikrobiyomu tarafından diyet lifi fermantasyonu sırasında üretilen başlıca bakteri kaynaklı metabolitlerdir. Bağırsaktan salgılanan SCFA'lar, SCFA reseptörlerinin geniş dağılımı nedeniyle bağışıklık, endokrin ve nöral yanıtları etkileyerek, periferdeki birden fazla bölgede hareket edebilir. Bu nedenle, SCFA'ların oral ve intraperitoneal uygulaması yoluyla SCFA'ların merkezi ve periferik etkilerini ayırt etmek zordur. Bu makale, SCFA'ların beyindeki işlevsel rolünü, serbestçe hareket eden farelerde bir rehber kanül aracılığıyla sorgulamak için video tabanlı bir yöntem sunmaktadır. Beyindeki SCFA'ların miktarı ve türü, infüzyon hacmi ve hızı kontrol edilerek ayarlanabilir. Bu yöntem, bilim insanlarına bağırsaktan türetilmiş metabolitlerin beyindeki rolünü takdir etmenin bir yolunu sağlayabilir.

Fare, yeni bir kafeste lokomotor aktiviteyi değerlendirmek için kılavuz kanül implantasyonundan kurtulduktan 1 hafta sonra SCFA'larla aşılandı. Fare yeni bir kafese yerleştirildi ve beynin lateral ventrikülüne implante edilen ticari kılavuz kanül aracılığıyla beyne ilk 5 dakikada (7 nL / s teslimat oranı) 2.100 nL SCFA veya ACSF ile aşılandı. Yeni bir kafesteki lokomotor aktivite, infüzyondan sonra 30 dakika daha kaydedildi. SCFA'ların infüzyonu ile ACSF arasındaki yeni kafesteki lokomotor aktivit...

Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice at JoVE.com

Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

Bağırsak kaynaklı mikrobiyal metabolitler, hayvanlarda karmaşık davranışlara yol açan çok yönlü etkilere sahiptir. Bağırsak kaynaklı mikrobiyal metabolitlerin beyindeki etkilerini bir rehber kanül aracılığıyla intraserebroventriküler yolla tanımlamak için adım adım bir yöntem sunmayı amaçlıyoruz.

Serbestçe Hareket Eden Farelerde Bağırsak Kaynaklı Mikrobiyal Metabolitlerin İntraserebroventriküler Verilmesi

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

Bağırsak mikrobiyotası tarafından salınan metabolitler, konakçı üzerinde karmaşık etkiler yaratır. Bu protokol, bağırsak metabolitlerinin fare beynindeki ve davranışındaki rolünü sorgulamak için bir yöntem sunar. Bu teknik, bağırsak metabolitlerini serbestçe hareket eden farelerde bir beyne iletmek için hassas, titiz ve doğrulanmış bir yöntem sağlar.Bağırsak beyin ekseni araştırmasına ilişkin içgörü için kapsamlı ve fizyolojik olarak en iyi metodolojiyi sunuyoruz. Fareyi stereotaksik çerçeveye yerleştirin ve fare kesici dişlerini stereotaksik kesici tutucudaki kesici çubukta sabitleyin. Burun, burun koni maskesi ile örtün.Ardından, farenin nosiseptyonunu üst kıstırma refleksi ile değerlendirin ve cerrahi bölgeyi kesmeden önce sabit bir solunum hızı sağlayın. Baştaki kesilmiş kürk yapışkan bant tarafından çıkarıldıktan sonra, ağrıyı hafifletmek ve göz merhemi uygulamak için deri altından analjezik ketoprofen enjekte edin. Ardından, sivri uçlu kulak çubuğunu kulak kanalına yerleştirerek kafayı sabitleyin.Kesici tutucudaki burun kelepçesini sıkın ve başın sabitlendiğinden emin olmak için kafaya hafifçe bastırın. Kafa derisini dezenfekte etmek için 3 alternatif klorheksidin çubuk fırçası kullanın. Şimdi, kafa derisinde bir santimetreden daha az bir kesi yapmak için diseksiyon neşter kullanın.Kesini açtıktan sonra, kafatasını mikro diseksiyon forsepsleri tarafından tutulan pamuklu bir çubukla silin. Stereotaksik koordinatlara dayanarak, makalede açıklandığı gibi sağ lateral ventrikülün konumunu tanımlayın ve etiketleyin. Daha sonra, stereotaksik bir matkap kullanarak etiketli bölgedeki kafatasından bir delik açın ve daha sonra kafatasında iki ila dört delik daha açın.Kafatasını lidokain pamuklu çubukla silin ve deliklere 2 ila 4 paslanmaz vida takın. Ticari kılavuz kanülü stereotaksik kanül tutucuya yerleştirin ve cam hız sterilizatörü ile 150 santigrat derecede dezenfekte edin. Ardından, stereotaksik kanül tutucuyu lateral ventrikül için açılan deliğe taşıyın ve istenen derinliğe ulaşana kadar ticari kılavuz kanülü yavaşça deliğe yerleştirin.Şimdi ticari kılavuz kanülünü delinmiş deliğe sabitlemek için 10 mikrolitre n-Butil siyanoakrilat yapıştırıcı uygulayın ve 3 ila 4 dakika bekleyin. Ticari kılavuz kanülü stereotaksik kanül tutucudan yavaşça serbest bırakın ve ticari kılavuz kanülünü sabitlemek için kesilmiş kafa derisine diş akrilik uygulayın ve en az 5 dakika bekleyin. Ticari mankeni ticari rehber kanülüne yerleştirin.Ardından, anesteziden kurtulmak için fareyi altında bir ısıtma yastığı bulunan yeni bir kafese yerleştirin ve fare tamamen uyanana kadar sürekli gözlemleyin. 10 mikrolitre damıtılmış su içeren mikrolitre şırıngayı mikroenjeksiyon pompasına monte edin. Bir insülin şırıngası kullanarak, polietilen tüpü damıtılmış suyla doldurun ve mikrolitre şırıngayı asılı polietilen tüpe bağlayın.Mikroenjeksiyon denetleyicisini açın ve komut ekranına erişmek için tüm kanalları görüntüle düğmesine basın. Ardından, yapılandırmaya basın ve saniyede 100 nanolitre teslimat oranıyla hacim hedefini 9.800 nanolitre olarak ayarlayın. Ardından, demleme moduna geçmek için yöne basın ve mikrolitre şırıngaya bağlı polietilen tüpten 9.800 nanolitre damıtılmış su demlemek için çalıştır'a basın.Şimdi, enjektörü mineral yağı içeren bir şişeye yerleştirin, konfigürasyona basın ve hacim hedefini saniyede 100 nanolitre teslimat oranıyla 3.000 nanolitreye ayarlayın. 3.000 nanolitre mineral yağ çekmek için, çekme moduna geçmek için yöne basın ve ardından çalıştır'a basın. Polietilen tüpü mikrolitre şırınga iğnesinden sökün.Mikrolitre şırınga iğnesinden 3.000 nanolitre damıtılmış su tükürmek için, demleme moduna geçmek için yöne basın ve çalıştır'a basın. Daha sonra mikrolitre şırıngayı tekrar polietilen tüpe yerleştirin. Enjektörü SCFA'lar içeren bir şişeye yerleştirin.Konfigürasyona basın ve hacim hedefini saniyede 100 nanolitre teslimat oranıyla 9.500 nanolitreye ayarlayın. Para çekme moduna geçmek için yöne basarak 9.500 nanolitre SCFA'yı geri çekin ve çalıştır'a basın. SCFA'ların başarıyla aşılanıp aşılanmadığını doğrulamak için yağ SCFA'ları aşamasını etiketleyin.Konfigürasyona basın ve teslimat hızı saniyede 7 nanolitre olan istenen hacim hedefini ayarlayın. Demleme moduna geçmek için yöne basın. SCFA'ların enjeksiyonu için enjektörü kanüle sokmadan önce mikrolitre şırıngayı ticari enjektörün ön ucunda sıvı çıkana kadar ileri doğru inflendirmek için run tuşuna basın.Fareyi uyuşturduktan sonra, ticari enjektörü ticari kılavuz kanülüne yerleştirin. Fare anesteziden kurtulduktan sonra, yeni bir kafese yerleştirin ve 35 dakika boyunca serbestçe keşfetmesine izin verin. SCFA'ları, ilk 5 dakikada 2.100 nanolitrelik bir hedef hacim için saniyede 7 nanolitrelik bir dağıtım hızı kullanarak infüze edin.Ardından demleme moduna yön tuşuna basın ve çalıştır'a basın. Davranışsal testlerden sonra, ticari enjektörü ticari kılavuz kanülünden çıkarın. İnfüzyon bölgesini doğrulamak için nötr izleyicinin 2.100 nanolitresini saniyede 7 nanolitre verme oranıyla infüze edin.İnfüzyon bölgesindeki floresan sinyalini bir floresan mikroskobu kullanarak görüntüleyin. Hem ACSF hem de SCFA'larla aşılanmış fareler, toplam 35 dakika boyunca yeni bir kafeste seyahat ettiler. Yeni kafesteki lokomotor aktivitede SCFA'ların infüzyonu ile ACSF arasında fark gözlenmedi.Floresan boya, ticari bir kılavuz kanül ile aşılandığında lateral ventrikülde ve fare beyninin çevresindeki bölgelerde tespit edildi. Benzer şekilde, paslanmaz çelik kılavuz kanülünden infüzyon, lateral ventriküldeki ve fare beyninin çevresindeki bölgelerdeki sinyallerin algılanmasına yol açar. Bu prosedürü devre tabanlı sinir teknolojileri ile birleştirmek, bilim adamlarının beynin devre tabanlı kontrolü ve bağırsak metabolitlerinin katkıda bulunduğu davranış hakkında fikir edinmelerini sağlayacaktır.Bu teknik, araştırmacıların mikrobiyota ve metabolitlerin karmaşık bağırsak beyin eksenindeki rolünü keşfetmelerinin yolunu açmaktadır.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

Poliimid-temelli Mikroelektrod kullanarak Serbestçe Hareketli Fare Yüksek yoğunluklu EEG Kayıtlar

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

Recording Single Neurons' Action Potentials from Freely Moving Pigeons Across Three Stages of Learning

Serbestçe Öğrenmenin üç aşamalı karşısında Güvercinler Hareketli gelen tek nöronların &#39;Aksiyon Potansiyelleri kayıt

While the subject of learning has attracted immense interest from both behavioral and neural scientists, only relatively few investigators have observed ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

Yeni Bir Yöntemi Kullanarak Serbest Dolaşan Yenidoğan Sıçanlarında EEG Kaydı

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

Farelerde Resiniferatoksin ve Ağrı Testleri ile İntracerebroventriküler Tedavi

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

Noninvasive EEG Recordings from Freely Moving Piglets

Domuz yavruları serbestçe hareket noninvaziv EEG kayıtları

The method allows the recording of high-quality electroencephalograms (EEGs) from freely moving piglets directly in the pigpen. We use a one-channel ...

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

Microdialysis fareler serbestçe hareket EEG kayıtları sırasında eksitatör Amino asit

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

Long-term Sensory Conflict in Freely Behaving Mice

Fareler serbestçe davranıyor uzun vadeli duyusal çatışma

Long-term sensory conflict protocols are a valuable means of studying motor learning. The presented protocol produces a persistent sensory conflict for ...

Hybrid Microdrive System with Recoverable Opto-Silicon Probe and Tetrode for Dual-Site High Density Recording in Freely Moving Mice

SerbestÇe Hareket Eden Farelerde Çift Alan Yüksek Yoğunluklu Kayıt için Kurtarılabilir Opto-Silikon Prob ve Tetrode ile Hibrid Microdrive Sistemi

Multi-regional neural recordings can provide crucial information to understanding fine-timescale interactions between multiple brain regions. However, ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

SerbestÇe Hareket Eden Hayvanlarda Nöral AktiviteYi Kaydetmek Için Çoklu Fiber Fotometri

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Extracellular Electrophysiological Recording in the Motor Cortex of Mice

Multichannel Extracellular Recording in Freely Moving Mice

Advancements in Multichannel Extracellular Recording for Studying Neuronal Activity in Freely Moving Mice (Video) | JoVE

Serbestçe hareket eden farelerde çok kanallı hücre dışı kayıt

The protocol aims to uncover the properties of neuronal firing and network local field potentials (LFPs) in behaving mice carrying out specific tasks by ...