Name: simultaneous imaging and flow-cytometry-based detection of multiple fluorescent senescence markers in therapy-induced senescent cancer cells
Uploaded: 2022-07-12T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Simultaneous Imaging and Flow-Cytometry-based Detection of Multiple Fluorescent Senescence Markers in Therapy-Induced Senescent Cancer Cells at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto da una sovvenzione a Yong Yu dell'Università Johannes Kepler di Linz (BERM16108001).

1. Linee cellulari DLBCL con trattamento con mafosfamide o daunorubicina per indurre la senescenza cellulare
NOTA: Il protocollo funziona anche per le cellule tumorali aderenti. A seconda delle dimensioni della cellula, il seme 1-2 × 105 cellule in un pozzetto di una piastra a 6 pozzetti e incubare la piastra in un incubatore al 5% di CO2, 37 °C durante la notte prima del trattamento. I passaggi del protocollo sono gli stessi delle celle di sospensione, m...

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	<li>Kuilman, T., Michaloglou, C., Mooi, W. J., Peeper, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+essence+of+senescence.">The essence of senescence.</a> Genes and Development. 24 (22), 2463-2479 (2010).</li><li>Di Micco, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncogene-induced+senescence+is+a+DNA+damage+response+triggered+by+DNA+hyper-replication.">Oncogene-induced senescence is a DNA damage response triggered by DNA hyper-replication.</a> Nature. 444 (7119), 638-642 (2006).</li><li>Milanovic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence-associated+reprogramming+promotes+cancer+stemness.">Senescence-associated reprogramming promotes cancer stemness.</a> Nature. 553 (7686), 96-100 (2018).</li><li>Passos, J. 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N., Schmitt, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+markers+of+therapy-induced+senescence+in+cancer+cells.">Detecting markers of therapy-induced senescence in cancer cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1534, 41-52 (2017).</li><li>Schmitt, C. A., Lowe, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+and+chemoresistance+in+transgenic+cancer+models.">Apoptosis and chemoresistance in transgenic cancer models.</a> Journal of Molecular Medicine. 80 (3), 137-146 (2002).</li><li>Dorr, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+lethal+metabolic+targeting+of+cellular+senescence+in+cancer+therapy.">Synthetic lethal metabolic targeting of cellular senescence in cancer therapy.</a> Nature. 501 (7467), 421-425 (2013).</li><li>Fan, D. N. Y., Schmitt, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxic+stress-induced+senescence.">Genotoxic stress-induced senescence.</a> Methods in Molecular Biology. 1896, 93-105 (2019).</li><li>Noppe, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+flow+cytometric+method+for+measuring+senescence+associated+beta-galactosidase+activity+in+human+fibroblasts.">Rapid flow cytometric method for measuring senescence associated beta-galactosidase activity in human fibroblasts.</a> Cytometry A. 75 (11), 910-916 (2009).</li><li>Biran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+identification+of+senescent+cells+in+aging+and+disease.">Quantitative identification of senescent cells in aging and disease.</a> Aging Cell. 16 (4), 661-671 (2017).</li><li>Rossi, M., Abdelmohsen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emergence+of+senescent+surface+biomarkers+as+senotherapeutic+targets.">The emergence of senescent surface biomarkers as senotherapeutic targets.</a> Cells. 10 (7), 1740 (2021).</li><li>Gonzalez-Gualda, E., Baker, A. G., Fruk, L., Munoz-Espin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+assessing+cellular+senescence+in+vitro+and+in+vivo.">A guide to assessing cellular senescence in vitro and in vivo.</a> The FEBS Journal. 288 (1), 56-80 (2021).</li></ol>

Questo metodo ha esaminato la capacità di ingresso in senescenza di quattro diverse linee cellulari DLBCL durante il trattamento chemioterapico, con imaging a campo luminoso e quantificazione basata sulla citometria a flusso. A livello di singola cellula, abbiamo rilevato con successo le principali popolazioni senescenti C12FDG + EdU-Ki67 + nelle cellule TRATTATE KARPAS422 e WSU-DLCL2 e, in misura minore, nelle cellule OCI-LY1, mentre la linea cellulare SU-DHL6 era resistente ...

Una varietà di stimoli può innescare la senescenza cellulare, facendo sì che le cellule entrino in uno stato di arresto stabile del ciclo cellulare. Questi stimoli includono cambiamenti intrinseci di segnalazione o stress estrinseci. I segnali intrinseci includono l'accorciamento progressivo dei telomeri, i cambiamenti nella struttura dei telomeri, la modificazione epigenetica, i disturbi della proteostasi, la disfunzione mitocondriale e l'attivazione degli oncogeni. Gli stress estrinseci includono segnali infiammatori e / o di danno tissutale, radiazioni o trattamenti chimici e privazione nutrizionale 1,2,3,4. Tra i tipi distinti di senescenza, i più comunemente visti e ben studiati sono la senescenza replicativa, la senescenza indotta da oncogeni (OIS), la senescenza indotta da radiazioni e la senescenza indotta dalla terapia (TIS). L'OIS è una risposta cellulare acuta al danno genotossico causato dallo stress replicativo generato dall'attivazione aberrante dell'oncogene e può in una certa misura prevenire la progressione patologica da una lesione preneoplastica a un tumore in piena regola. La TIS si verifica quando le cellule tumorali sono stressate da farmaci chemioterapici o radiazioni ionizzanti 5,6.
La senescenza è considerata un'arma a doppio taglio in patologia a causa della sua natura altamente dinamica. Inizialmente è stato descritto come un meccanismo benefico soppressivo del tumore per rimuovere le cellule danneggiate dal pool circolante di cellule in divisione, salvaguardando la normale funzione degli organi e inibendo la crescita tumorale 7,8,9. Tuttavia, le prove emergenti hanno suggerito un lato oscuro della senescenza. Le cellule senescenti secernono citochine proinfiammatorie, note come fenotipo secretorio associato alla senescenza (SASP), che portano alla fibrosi e agli organi malfunzionanti e promuovono l'inizio e la progressione del tumore10. Inoltre, le cellule tumorali senescenti subiscono una riprogrammazione epigenetica e di espressione genica in parallelo con il rimodellamento della cromatina e l'attivazione di una risposta sostenuta al danno al DNA (DDR)11,12, acquisendo di recente nuove proprietà delle cellule staminali tumorali3. Sebbene i tumori capaci di senescenza rispondano meglio all'intervento terapeutico rispetto a quelli incapaci di senescenza13, la persistenza delle cellule senescenti può portare a una prognosi a lungo termine sfavorevole se non vengono efficacemente identificati ed eliminati dai farmaci senolitici5. In entrambi i casi, un metodo affidabile per valutare la senescenza è di notevole interesse clinico, non solo per la prognosi del trattamento terapeutico, ma anche per lo sviluppo di nuove strategie mirate alle cellule senescenti.
Indipendentemente dai diversi fattori scatenanti, le cellule senescenti presentano alcune caratteristiche comuni, tra cui morfologia allargata, appiattita, multinucleata con grandi vacuoli, nuclei significativamente espansi, formazione di eterocromatina associata alla senescenza ricca di H3K9me3 (SAHF) nel nucleo, accumulo persistente di focolai di marcatore di danno al DNA γH2AX, p53-p21attivato CIP1 e Rb-p16INK4a meccanismi di regolazione del ciclo cellulare, arresto stabile del ciclo cellulare G1, induzione massiccia di SASP e elevata attività della β-galattosidasi (SA-β-gal) associata alla senescenza14. Poiché nessun singolo marcatore è sufficiente per definire la senescenza, la colorazione enzimatica per l'attività SA-β-gal, che è considerata il gold standard per il rilevamento della senescenza, è solitamente combinata con la colorazione immunoistochimica per H3K9me3 e Ki67 per rilevare TIS15. Tuttavia, il SA-β-gal a base cromogenica chimica è difficile da quantificare. Qui, abbiamo combinato il rilevamento SA-β-gal (fSA-β-gal) a base di fluorescenza a base di fluorescenza 5-dodecanoylaminofluorescein-di-β-D-galattopiranoside (C12FDG) con la colorazione immunofluorescente per γH2AX e il DNA incorporato in EdU per identificare le cellule senescenti C12FDG + EdU-γH2AX + utilizzando l'avanzato sistema di citometro a flusso di imaging, che combina la velocità, la sensibilità e le immagini dettagliate a singola cellula con informazioni spaziali che non possono essere fornite dalla citometria a flusso e dalla microscopia. Questo metodo consente una rapida generazione di immagini ad alta risoluzione che consentono il posizionamento e la quantificazione dei segnali fluorescenti all'interno delle celle, consentendo al contempo l'analisi rapida di più campioni mediante la costruzione di pipeline standard.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 anti-H2A.X Phospho (Ser139) Antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>613407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ki-67 Mouse Monoclonal Antibody (Alexa Fluor 647)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>350509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C12FDG (5-Dodecanoylaminofluorescein Di-&#946;-D-Galactopyranoside)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11590276</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroquin -diphosphat</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>C6628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cleanser (Coulter Clenz)</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>8546929</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Click-iT EdU Pacific Blue Flow Cytometry Assay Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>C10418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Daunorubicin</td>
			<td>Medchemexpress</td>
			<td>HY-13062A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Debubbler (70% Isopropanol)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>1.3704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Analysis software (Amnis&#160;IDEAS&#160;6.3)</td>
			<td>Luminex</td>
			<td>CN-SW69-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instrument and imaging software (Amnis&#160;ImageStreamX&#160;Mk II Imaging Flow Cytometer System and INSPIRE software)</td>
			<td>Luminex</td>
			<td>100220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KARPAS</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>ACC 31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mafosfamide cyclohexylamine</td>
			<td>Niomech</td>
			<td>D-17272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCI-LY1</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>ACC 722</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11473704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PETG (2-Phenylethyl-&#946;-D-thiogalactosid)&#160;</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>P4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saponin</td>
			<td>Sigma aldrich</td>
			<td>47036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheath</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>BSS-1006-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpeedBead Kit for ImageStream</td>
			<td>Luminex</td>
			<td>400041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilizer (0.4-0.7% Hypochlorite)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>JT9416-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU-DHL6</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>ACC 572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WSU-DLCL2</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>ACC 575</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simultaneous imaging and flow-cytometry-based detection of multiple fluorescent senescence markers in therapy-induced senescent cancer cells

I farmaci chemioterapici possono indurre danni irreparabili al DNA nelle cellule tumorali, portando ad apoptosi o senescenza prematura. A differenza della morte cellulare apoptotica, la senescenza è un meccanismo fondamentalmente diverso che limita la propagazione delle cellule tumorali. Decenni di studi scientifici hanno rivelato i complessi effetti patologici delle cellule tumorali senescenti nei tumori e nei microambienti che modulano le cellule tumorali e le cellule stromali. Nuove prove suggeriscono che la senescenza è un potente fattore prognostico durante il trattamento del cancro, e quindi è essenziale un rilevamento rapido e accurato delle cellule senescenti nei campioni di cancro. Questo documento presenta un metodo per visualizzare e rilevare la senescenza indotta dalla terapia (TIS) nelle cellule tumorali. Le linee cellulari diffuse di linfoma a grandi cellule B (DLBCL) sono state trattate con mafosfamide (MAF) o daunorubicina (DN) ed esaminate per il marcatore di senescenza, la β-galattosidasi associata alla senescenza (SA-β-gal), il marcatore di sintesi del DNA 5-etinil-2′-deossiuridina (EdU) e il marcatore di danno al DNA gamma-H2AX (γH2AX). L'imaging del citometro a flusso può aiutare a generare immagini a singola cellula ad alta risoluzione in un breve periodo di tempo per visualizzare e quantificare simultaneamente i tre marcatori nelle cellule tumorali.

Una matrice di compensazione è stata generata utilizzando un software di analisi delle immagini caricando i dati registrati dei campioni di controllo a colore singolo. Come mostrato nella Figura supplementare S1, è stata rilevata una ricaduta della luce non trascurabile (valore del coefficiente ≥ 0,1) da EdU a C12FDG con valore del coefficiente di diafonia 0,248, mentre la diafonia tra gli altri canali non era significativa. Quattro diverse linee cellulari DLBCL sono state trattate con 5 ?...

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Simultaneous Imaging and Flow-Cytometry-based Detection of Multiple Fluorescent Senescence Markers in Therapy-Induced Senescent Cancer Cells

Qui presentiamo un metodo basato sulla citometria a flusso per la visualizzazione e la quantificazione di più marcatori associati alla senescenza in singole cellule.

Imaging simultaneo e rilevamento basato sulla citometria a flusso di marcatori di senescenza fluorescenti multipli in cellule tumorali senescenti indotte dalla terapia

Chemotherapeutic drugs can induce irreparable DNA damage in cancer cells, leading to apoptosis or premature senescence. Unlike apoptotic cell death, ...

Questo metodo può generare rapidamente immagini ad alta risoluzione che consentono un'analisi della distribuzione spaziale e la quantificazione dei segnali fluorescenti all'interno delle cellule, consentendo al contempo una rapida analisi di più campioni. Le cellule vengono misurate utilizzando l'avanzato sistema di citometria a flusso di imaging, che combina velocità, sensibilità e immagini dettagliate di singole cellule con informazioni spaziali che producono dati unici che non possono essere forniti dall'optometria o dalla microscopia a flusso. Un consiglio importante è quello di fornire abbastanza celle per stabilire le impostazioni dello strumento e sospendiamo le celle ad alta densità per le misurazioni.A parte questo, l'acquisizione dei dati è semplice e simile alla citometria a flusso convenzionale. Per prima cosa generare le linee cellulari DLBCL come descritto nel manoscritto. Quindi aggiungere una soluzione di EdU da 10 millimolari in un rapporto di uno a 1000 nella coltura cellulare DLBCL e incubare la piastra in un incubatore di anidride carbonica al 5% a 37 gradi Celsius per tre ore dopo aver miscelato la piastra con un leggero dondolio.Estrarre la piastra dopo l'incubazione e aggiungere una soluzione di clorochina da 100 millimolari ad una concentrazione finale di 75 micromolari. Mescolare dondolando delicatamente e incubare per 30 minuti. Quindi aggiungere 20 millimolari di soluzioni di C12 FDG ad una concentrazione finale di 20 micromolari.Dopo una delicata miscelazione, incubare la piastra per un'ora come dimostrato in precedenza. Quindi, aggiungere 100 millimolari di soluzione di 2-feniletil-beta-d-tiogalattoside da uno a 50 per interrompere la colorazione FSA beta-gal. E ruotare delicatamente il piatto per mescolare.Trasferire le cellule in provette sterili da centrifuga da 15 millilitri e centrifugare a 100 volte G per cinque minuti a quattro gradi Celsius. Una volta scartato il surnatante lavare le cellule con quattro millilitri di PBS e centrifugare a 100 volte G per cinque minuti a quattro gradi Celsius. Quindi risospendere i pellet cellulari in 500 microlitri al 4% di soluzione di fissazione della paraformaldeide.Dopo 10 minuti di incubazione a temperatura ambiente, centrifugare a 250 volte G per cinque minuti a temperatura ambiente. Scartare il surnatante e lavare le cellule con quattro millilitri di PBS due volte e centrifugare a 100 volte G per cinque minuti a temperatura ambiente. Dopo il lavaggio, scartare il surnatante e risospendere il pellet cellulare in 200 microlitri di tampone di permeabilizzazione della saponina.Ora trasferire la sospensione in un nuovo tubo da 1,5 millilitri e incubare per 10 minuti a temperatura ambiente. Pellettare le celle a 250 volte G per cinque minuti a temperatura ambiente. Quindi risospendere le cellule in 200 microlitri di soluzione anticorpale primaria e incubare a quattro gradi Celsius durante la notte, al buio.Centrifugare i tubi a 250 volte G per cinque minuti a quattro gradi Celsius. Scartare il surnatante e lavare con 100 microlitri di soluzione di lavaggio con saponina. Dopo aver lavato le cellule due volte, scartare il surnatante e risospendere i pellet cellulari in 500 microlitri di cocktail di rilevamento EdU.Incubare a temperatura ambiente per 30 minuti al buio e centrifugare a 250 volte G per cinque minuti a temperatura ambiente. Scartare il surnatante e lavare con un millilitro di soluzione di lavaggio alla saponina. Ripetere il lavaggio due volte, scartare il surnatante e risospendere i pellet cellulari in 20-50 microlitri di PBS.Prima di accendere lo strumento, svuotare la bottiglia del liquido di scarto e controllare i livelli di SpeedBeads, sterilizzatore, detergente, debubbler e guaina liquidi sufficienti. Dopo aver acceso lo strumento e il software di imaging, fare clic sul pulsante di avvio per inizializzare la fluidica e la calibrazione del sistema. Impostare l'ingrandimento su 40 volte e impostare la velocità fluidica su bassa.Dopo aver acceso i laser, accendere un laser a 405 nanometri per misurare EdU Pacific Blue, 488 nanometri per misurare C12-FDG e 642 nanometri per misurare Alexa-Fluor-647-gamma-H2AX. Impostate il canale sei per il canale di dispersione, il canale uno e il canale nove per il campo luminoso. Quindi iniziare con il campione che dovrebbe avere la massima fluorescenza per impostare l'intensità dei laser e capovolgere delicatamente la provetta per miscelare.Dopo aver aperto il coperchio del tubo, inserire la provetta sul dock. Fare clic su Carica per avviare e aprire un grafico a dispersione. Quindi, selezionate l'area Caratteristiche, sottolineate MO1 e proporzioni sottolineate MO1 rispettivamente per gli assi X e Y.Impostare un gate sopra le proporzioni di 0,5 per escludere doppietti e aggregati di celle sotto e sul lato destro e la popolazione SpeedBead sul lato sinistro. Ora aprite Grafico istogramma (Histogram Plot) e selezionate il quadrato medio della radice sfumata della maschera uno e del canale uno per l'asse X. Scegli la popolazione di singoletto e imposta il gate per selezionare le celle focalizzate.Aprite un grafico a istogramma e selezionate le intensità massime dei pixel non elaborate per i canali due, sette e 11 dell'asse X. Quindi regolare le potenze laser di laser a 488 nanometri, 405 nanometri e laser a 642 nanometri per il canale due, sette e 11 rispettivamente in modo che ogni fluorocromo abbia un valore massimo di pixel grezzo tra 100 e 4.000 per evitare la sovrasaturazione. Scegli la popolazione focalizzata da registrare e fai clic su Acquisisci per misurare i campioni DLBCL con impostazioni coerenti.Quando si cambiano i campioni per la misurazione, fare clic su Invio per recuperare la provetta del campione. Premere Carica per eliminare il campione. Dopo aver misurato tutti i campioni, spegnere il laser a campo chiaro e a dispersione.Misurare campioni di controllo di un singolo colore per generare una matrice di compensazione. Fare clic su Shutdown (Arresta) per chiudere il sistema di imaging. Analizza i dati nel software di analisi delle immagini.Utilizzare lo strumento Spot Wizard del software di analisi delle immagini per contare e quantificare automaticamente i focolai di H2AX gamma nucleare e le immagini di cellule vive. Selezionare due popolazioni di cellule, una con alto e una con basso numero di spot per addestrare la Procedura guidata Spot per un'ulteriore analisi automatica del conteggio degli spot. Il metodo di citometria a flusso nelle immagini a singola cellula ha mostrato un aumento della popolazione C12-FDG positiva, EdU negativa, gamma H2AX positiva, senesced e KARPAS422.Cellule WSU-DLCL2 e OCI-LY1, ma non nelle cellule SU-DHL6. L'analisi basata sull'imaging ha presentato un numero significativamente più elevato di focolai gamma H2AX e KARPAS422, WSU-DLCL2 e OCI-LY1, ma non nelle cellule SU-DHL6. Risultati simili sono stati rappresentati da dati di frequenza e quantificazione.L'aggiunta di saponina alla sospensione cellulare è fondamentale, altrimenti gli anticorpi non possono raggiungere gli antigeni interni della cellula e detergenti aggressivi portano alla perdita del segnale C12-FTG La citometria di imaging è ottimale per analizzare i cambiamenti nella localizzazione dei marcatori come la traslocazione di un fattore di trascrizione al nucleo in risposta a determinati stimoli. Tale analisi può essere ottenuta anche con il nostro protocollo. Questo metodo consente la visualizzazione di più marcatori fluorescenti a livello di singola cella che aiuta a rilevare la presenza, l'intensità e la localizzazione dei singoli segnali.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Flow Cytometry-based Drug Screening System for the Identification of Small Molecules That Promote Cellular Differentiation of Glioblastoma Stem Cells

Farmaco a base di citometria a flusso sistema di Screening per l'identificazione di piccole molecole che promuovono la differenziazione cellulare delle cellule staminali di Glioblastoma

Glioblastoma (GBM) is the most common and most lethal primary brain tumor in adults, causing roughly 14,000 deaths each year in the U.S. alone. Median ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Formazione immagine di tomografia multimodale bioluminescenti ed emissione positronica tomografia/computazionale di mieloma multiplo del midollo osseo xenotrapianti in topi NOG

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

Detection of Protease Activity by Fluorescent Peptide Zymography

Rilevazione di attività di proteasi dallo Zymography Peptide fluorescente

The purpose of this method is to measure the proteolytic activity of complex biological samples. The samples are separated by molecular weight using ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Rilevamento della progressione del tumore del polmone nei topi mediante Ultrasound Imaging

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

In Vivo Targeting of Xenografted Human Cancer Cells with Functionalized Fluorescent Silica Nanoparticles in Zebrafish

In Vivo Targeting di cellule tumorali umane Xenografted con nanoparticelle di silice fluorescenti funzionalizzate nel pesce zebra

Developing nanoparticles capable of detecting, targeting, and destroying cancer cells is of great interest in the field of nanomedicine. In vivo animal ...

Immunofluorescence Imaging of DNA Damage and Repair Foci in Human Colon Cancer Cells

Immunofluorescenza Immagini di danno al DNA e riparazione Foci nelle cellule tumorali del colon umano

The purpose of the manuscript is to provide a step-by-step protocol for performing immunofluorescence microscopy to study the radiation-induced DNA damage ...

Far-Red Fluorescent Senescence-Associated &#946;-Galactosidase Probe for Identification and Enrichment of Senescent Tumor Cells by Flow Cytometry

Far-Red Fluorescent Senescence-Associated ÃƒÅ½Ã‚Â²-Galactosidase Probe for Identification and Enrichment of Senescent Tumor Cells by Flow Cytometry

Sonda β-galattosidasi associata alla senescenza fluorescente Far-Red per l'identificazione e l'arricchimento delle cellule tumorali senescenti mediante citometria a flusso

Cellular senescence is a state of proliferative arrest induced by biological damage that normally accrues over years in aging cells but may also emerge ...

Modeling Brain Metastasis by Internal Carotid Artery Injection of Cancer Cells

Modellazione delle metastasi cerebrali mediante iniezione interna di cellule tumorali nell'arteria carotide

Brain metastasis is a cause of severe morbidity and mortality in cancer patients. Critical aspects of metastatic diseases, such as the complex neural ...

A Flow Cytometry-Based Cell Surface Protein Binding Assay for Assessing Selectivity and Specificity of an Anticancer Aptamer

Un saggio di legame proteico della superficie cellulare basato sulla citometria a flusso per valutare la selettività e la specificità di un aptamero antitumorale

A key challenge in developing an anticancer aptamer is to efficiently determine the selectivity and specificity of the developed aptamer to the target ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

L'impianto ortotopico di cellule tumorali derivate dal paziente nei topi ricapitola il cancro colorettale avanzato

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...