Name: whole-kidney three-dimensional staining with cubic
Uploaded: 2022-07-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC at JoVE.com

En del af dette arbejde blev udført gennem samarbejde med Prof. Hiroki R. Ueda (University of Tokyo), Prof. Etsuo A. Susaki (Juntendo University), Prof. Tetsuhiro Tanaka (Tohoku University), Prof. Masafumi Fukagawa, Dr. Takehiko Wada og Dr. Hirotaka Komaba (Tokai University).

Alle eksperimenter blev godkendt af University of Tokyo Institutional Review Board. Alle dyreforsøg blev udført i henhold til National Institutes of Health retningslinjer. C57BL/6NJcl-hanmus, 8 uger gamle, blev anvendt til denne undersøgelse. Musene blev hentet fra kommercielle kilder (se Materialetabel).
1. Dyreforberedelse og nyrefiksering
<ol><li>Udfør perfusionsfiksering ved at følge nedenstående trin.<ol><li>Anæstetik musen ved indånding af isof...

<ol>
	<li>Velez-Fort, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stimulus+selectivity+and+connectivity+of+layer+six+principal+cells+reveals+cortical+microcircuits+underlying+visual+processing.">The stimulus selectivity and connectivity of layer six principal cells reveals cortical microcircuits underlying visual processing.</a> Neuron. 83 (6), 1431-1443 (2014).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-brain+imaging+with+single-cell+resolution+using+chemical+cocktails+and+computational+analysis.">Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis.</a> Cell. 157 (3), 726-739 (2014).</li><li>Erturk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO.">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nature Protocols. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li><li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+Landscape+for+Tissue+Clearing+Based+on+Hydrophilic+Reagents.">Chemical Landscape for Tissue Clearing Based on Hydrophilic Reagents.</a> Cell Reports. 24 (8), 2196-2210 (2018).</li><li>Susaki, E. A., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+and+whole-organ+clearing+and+imaging+techniques+with+single-cell+resolution:+toward+organism-level+systems+biology+in+mammals.">Whole-body and whole-organ clearing and imaging techniques with single-cell resolution: toward organism-level systems biology in mammals.</a> Cell Chemical Biology. 23 (1), 137-157 (2016).</li><li>Keller, P. J., Dodt, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+microscopy+of+living+or+cleared+specimens.">Light sheet microscopy of living or cleared specimens.</a> Current Opinion in Neurobiology. 22 (1), 138-143 (2012).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+CUBIC+protocols+for+whole-brain+and+whole-body+clearing+and+imaging.">Advanced CUBIC protocols for whole-brain and whole-body clearing and imaging.</a> Nature Protocols. 10 (11), 1709-1727 (2015).</li><li>Kubota, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+profiling+of+cancer+metastasis+with+single-cell+resolution.">Whole-body profiling of cancer metastasis with single-cell resolution.</a> Cell Reports. 20 (1), 236-250 (2017).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+three-dimensional+analysis+(CUBIC-kidney)+visualizes+abnormal+renal+sympathetic+nerves+after+ischemia/reperfusion+injury.">Comprehensive three-dimensional analysis (CUBIC-kidney) visualizes abnormal renal sympathetic nerves after ischemia/reperfusion injury.</a> Kidney International. 96 (1), 129-138 (2019).</li><li>Hasegawa, S., Inoue, T., Inagi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroimmune+interactions+and+kidney+disease.">Neuroimmune interactions and kidney disease.</a> Kidney Research and Clinical Practice. 38 (3), 282-294 (2019).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+oral+hypoxia-inducible+factor+prolyl+hydroxylase+inhibitor+enarodustat+counteracts+alterations+in+renal+energy+metabolism+in+the+early+stages+of+diabetic+kidney+disease.">The oral hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibitor enarodustat counteracts alterations in renal energy metabolism in the early stages of diabetic kidney disease.</a> Kidney International. 97 (5), 934-950 (2020).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+sympathetic+signaling+in+macrophages+blocks+systemic+inflammation+and+protects+against+renal+ischemia-reperfusion+injury.">Activation of sympathetic signaling in macrophages blocks systemic inflammation and protects against renal ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 32 (7), 1599-1615 (2021).</li><li>Renier, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iDISCO:+a+simple,+rapid+method+to+immunolabel+large+tissue+samples+for+volume+imaging.">iDISCO: a simple, rapid method to immunolabel large tissue samples for volume imaging.</a> Cell. 159 (4), 896-910 (2014).</li><li>Klingberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+evaluation+of+total+glomerular+number+and+capillary+tuft+size+in+nephritic+kidneys+using+lightsheet+microscopy.">Fully automated evaluation of total glomerular number and capillary tuft size in nephritic kidneys using lightsheet microscopy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (2), 452-459 (2017).</li><li>Zhao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+probing+of+intact+human+organs.">Cellular and molecular probing of intact human organs.</a> Cell. 180 (4), 796-812 (2020).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+whole-organ/body+staining+and+imaging+based+on+electrolyte-gel+properties+of+biological+tissues.">Versatile whole-organ/body staining and imaging based on electrolyte-gel properties of biological tissues.</a> Nature Communications. 11 (1), 1-22 (2020).</li></ol>

Den nuværende protokol tillod 3D-billeddannelse af hele nyrerne af forskellige strukturer såsom sympatiske nerver, opsamlingskanaler, arterier, proksimale tubuli og glomeruli 9,10,11. Denne farvningsmetode tilbød makroskopisk observation og førte til nye biologiske opdagelser ved at visualisere ændringen i nyresympatiske nerver efter iskæmi-reperfusionsskade 9,10 og glomerulomegali i den ...

Nyren består af forskellige cellepopulationer. Selvom konventionel patologi giver os meget information om nyremikromiljøet, er tredimensionel (3D) billeddannelse nødvendig for præcist at forstå den intercellulære krydstale under nyresygdomsprogression. Tidligere skulle der udføres et stort antal seriel sektionering og billedrekonstruktion til hele orglet 3D-billeddannelse1. Denne metode krævede imidlertid for meget indsats og havde problemer med hensyn til reproducerbarhed.
Optisk clearing er en god strategi til at overvinde denne forhindring 2,3. Vævsopacitet skyldes hovedsageligt lysspredning og absorption, fordi hvert organ består af forskellige stoffer, herunder vand, protein og lipider. Således erstatter den grundlæggende strategi for vævsrensning vand og lipider i væv med brydningsindeks (RI) matchende reagenser, der har de samme optiske egenskaber som proteiner4. For at observere en gennemsigtig prøve er en lysark fluorescerende mikroskopi nyttig5. Lysark belyser den gennemsigtige prøve fra siden, og excitationssignaler erhverves gennem objektivlinsen placeret i lodret position6. Denne mikroskopi opnår tværsnitsinformation i en enkelt fejning, som adskiller sig fra den konfokale eller multifoton fluorescerende mikroskopi. Således kan den hurtigt erhverve z-stack-billeder med et lavt niveau af fotobleaching.
Clear, Unobstructed Brain / Body Imaging Cocktails and Computational Analysis (CUBIC) er en af de vævsrensningsmetoder, der muliggør helorganbilleddannelse ved lysark fluorescerende mikroskopi 2,7,8. CUBIC og helmonteret immunfluorescerende farvning er optimeret i denne undersøgelse til at visualisere musenyre 3D-strukturer 9,10,11. Ved hjælp af denne helmonterede farvningsmetode visualiseres ændringen i nyresympatiske nerver efter iskæmi-reperfusionsskade 9,10 og glomerulomegali i det tidlige stadium af diabetisk nyresygdom 11 samt blodkar, proksimale tubuli og opsamlingskanaler i en hel nyre9.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>14 mL Round Bottom High Clarity PP Test Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352059</td>
			<td>Tissue clearing, staining, wash</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-dimethyl-1-phenyl-5-pyrazolone/antipyrine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>D1876</td>
			<td>CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37%-Formaldehyde Solution</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>16223-55</td>
			<td>Post fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4%-Paraformaldehyde Phosphate Buffer Solution</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>09154-85</td>
			<td>Kidney fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Flour 555-conjugated donkey anti-sheep IgG antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21436</td>
			<td>Secondary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Flour 647-conjugated donkey anti-rabbit IgG antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31573</td>
			<td>Secondary antibody (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-aquaporin 2 (AQP2) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab199975</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-podocin antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0372</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-sodium glucose cotransporter 2 (SGLT2) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab85626</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-tyrosine hydroxylase (TH) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab113</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#945;-smooth muscle actin (&#945;-SMA) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5694</td>
			<td>Primary antibody (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocker Casein in PBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>37528</td>
			<td>Staining buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol Tartrate</td>
			<td>Meiji</td>
			<td>005526</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6NJcl</td>
			<td>Nippon Bio-Supp.Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Mouse strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Imaging analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macro-zoom microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>MVX10</td>
			<td>The observation unit of the custom-built microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine Hydrochloride</td>
			<td>Kyoritsu-Seiyaku</td>
			<td>008656</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>27803229</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8410</td>
			<td>Immersion oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-buthyldiethanolamine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>B0725</td>
			<td>CUBIC-L, CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>N0078</td>
			<td>CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene glycol mono-p-isooctylphenyl ether/Triton X-100</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>12967-45</td>
			<td>CUBIC-L, PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon oil HIVAC-F4</td>
			<td>Shin-Etsu Chemical</td>
			<td>50449832</td>
			<td>Immersion oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Wako</td>
			<td>195-11092</td>
			<td>Staining buffer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole-kidney three-dimensional staining with cubic

Selvom konventionel patologi gav mange oplysninger om nyremikrostruktur, var det svært at kende den præcise struktur af blodkar, proksimale tubuli, opsamlingskanaler, glomeruli og sympatiske nerver i nyrerne på grund af manglen på tredimensionel (3D) information. Optisk clearing er en god strategi til at overvinde denne store forhindring. Flere celler i et helt organ kan analyseres ved enkeltcelleopløsning ved at kombinere vævsrensning og 3D-billeddannelsesteknik. Imidlertid forbliver cellemærkningsmetoder til helorganbilleddannelse underudviklede. Især er helmonteret organfarvning udfordrende på grund af vanskeligheden ved antistofindtrængning. Den nuværende protokol udviklede en helmonteret musenyrefarvning til 3D-billeddannelse med CUBIC (Clear, Unobstructed Brain / Body Imaging Cocktails and Computational analysis) vævsrensningsmetode. Protokollen har muliggjort visualisering af nyresympatisk denervation efter iskæmi-reperfusionsskade og glomerulomegali i det tidlige stadium af diabetisk nyresygdom fra et omfattende synspunkt. Således kan denne teknik føre til nye opdagelser inden for nyreforskning ved at give et makroskopisk perspektiv.

Ved hjælp af denne farvningsmetode blev sympatiske nerver [anti-tyrosinhydroxylase (TH) antistof] og arterier [anti-α-glat muskelactin (αSMA) antistof] i en hel nyre (figur 4A, B og video 1) visualiseret9. Unormale nyresympatiske nerver blev også visualiseret efter iskæmi/reperfusionsskade (IRI)9,10 (figur 4C). Desuden blev visualisering af s...

Watch this Scientific Journal Video about Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC at JoVE.com

Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC

Den nuværende protokol beskriver en vævsrensningsmetode og helmonteret immunfluorescerende farvning til tredimensionel (3D) nyrebilleddannelse. Denne teknik kan tilbyde makroskopiske perspektiver i nyrepatologi, hvilket fører til nye biologiske opdagelser.

Tredimensionel farvning med hele nyrer med CUBIC

Although conventional pathology provided numerous information about kidney microstructure, it was difficult to know the precise structure of blood ...

Denne protokol tillader en visualisering af tredimensionelle strukturer i fuld nyre, hvilket kan føre til innovative opdagelser inden for nyreforskning ved at give et makroskopisk perspektiv. Helmonteret organfarvning er udfordrende på grund af vanskeligheden ved antistofindtrængning. Denne protokol har vist den høje kvalitet, helmonteret farvning af nyrerne ved antistofferne.Til at begynde med skal du udføre nedsænkningsfikseringen umiddelbart efter perfusionsfiksering og nyreprøvetagning ved at nedsænke nyrerne i 4% paraformaldehyd ved fire grader Celsius i 16 timer. Giv tre vaske med PBS i to timer hver. Udfør affarvnings- og delipideringsprocessen ved at nedsænke den faste nyre i syv millimeter 50% CUBIC-L i et 14 milliliter rundbundet rør med blid omrystning ved stuetemperatur.Efter seks timer nedsænkes nyren i syv milliliter CUBIC-L i et 14 millimeter rundtliggende rør med blid omrystning ved 37 grader Celsius i fem dage. Opdater CUBIC-L hver dag. Når affarvningen og delipidationen er afsluttet, skal du bruge en dispenseringsske til prøvehåndtering og vaske nyrerne tre gange med PBS ved stuetemperatur i to timer.Immunostain den delipiderede nyre i primære antistoffer fortyndet i farvningsbufferopløsning, med blid omrystning i en inkubatorryster ved 37 grader Celsius i syv dage. Vask derefter nyren med 0,5% Triton X-100 i PBS, også kendt som PBST, ved stuetemperatur i en dag. Ved farvning af sekundære antistoffer skal nyren behandles med sekundære antistoffer i farvningsbufferen, i mørke, med blid omrystning ved 37 grader Celsius i syv dage.Fastgør farvningen med en PBST-vask ved stuetemperatur i en dag. Efter fiksering nedsænkes nyren i 1% formaldehyd i PB i tre timer, og vask den med PBS ved stuetemperatur i seks timer. Udfør brydningsindeksmatchningen ved at nedsænke nyrerne i syv milliliter 50% CUBIC-R + i et 14 ml rundtliggende rør med omrystning i en dag efterfulgt af behandling med syv milliliter CUBIC-R + med omrystning ved stuetemperatur i to dage.Ved hjælp af immunfarvningsmetoden blev sympatiske nerver og arterier i en hel nyre visualiseret i 3D nyrebilleddannelse. Desuden blev unormale nyresympatiske nerver visualiseret efter iskæmi-reperfusionsskade. Denne protokol lettede også visualisering af sympatiske nerver i hele milten.Datakvantificeringsprocessen for den tredimensionelle immunfluorescerende farvning vises her. Derudover blev opsamlingskanaler, S1-segmentet af proksimale tubuli og glomeruli med succes visualiseret i en hel nyre. Den undertrykte glomerulomegali, der skyldes lægemiddeladministration i de tidlige stadier af diabetisk nyresygdom, blev også visualiseret i 3D-billeddannelse.Denne protokol kan mærke det specifikke molekyle i en hel nyre. Således kan forskere analysere strukturændring i vaskulaturen eller finde sjældne hændelser i nyrevæv.

Research

JoVE Journal

Medicine

Three-dimensional Imaging of Nociceptive Intraepidermal Nerve Fibers in Human Skin Biopsies

Tre-dimensionel Imaging af Nociceptive Intraepidermal nervefibre i Human hudbiopsier

A punch biopsy of the skin is commonly used to quantify intraepidermal nerve fiber densities (IENFD) for the diagnosis of peripheral polyneuropathy 1,2. ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

Kvantificering af Breast Cancer Cell invasiv Ved hjælp af en tre-dimensionel (3D) Model

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Tre-dimensionel Co-kultur Model for Tumor-stromale Interaktion

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Tre-Dimensional (3D) Tumor Sfæroide Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

Tre-dimensionel Alginat-perle dyrkning af humane hypofyseadenom Cells

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

Three-Dimensional Printing of a Complex Aortic Anomaly

Tre-dimensionelle udskrivning af en kompleks aorta anomali

Complex congenital aortic anomalies include diverse types of malformations that may be clinically asymptomatic or present with respiratory or esophageal ...

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Estimering af Neron nummer i hele nyrerne ved hjælp af Acid maceration metode

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Three-Dimensional Printing Guide Template Assisted Percutaneous Vertebroplasty (PVP)

Three-Dimensional Printing Guide Template Assisted Percutaneous Vertebroplasty PVP

Tredimensionel udskrivnings guide skabelon assisteret perkutan Vertebroplasty (PVP)

Percutaneous vertebroplasty (PVP) is considered an effective treatment for the back pain caused by osteoporotic vertebral compression fracture. The ...

Three-Dimensional Collagen Matrix Scaffold Implantation as a Liver Regeneration Strategy

Tre-dimensionelle kollagen Matrix Stillads implantation som en lever regenerering strategi

Liver diseases are the leading cause of death worldwide. Excessive alcohol consumption, a high-fat diet, and hepatitis C virus infection promote fibrosis, ...

Guided Endodontics: Three-Dimensional Planning and Template-Aided Preparation of Endodontic Access Cavities

Guidet endodonti: Tredimensionel planlægning og skabelonstøttet forberedelse af endodontiske adgangshulrum

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, ...