Name: whole-kidney three-dimensional staining with cubic
Uploaded: 2022-07-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC at JoVE.com

Een deel van dit werk werd uitgevoerd door samenwerking met Prof. Hiroki R. Ueda (Universiteit van Tokio), Prof. Etsuo A. Susaki (Juntendo University), Prof. Tetsuhiro Tanaka (Tohoku University), Prof. Masafumi Fukagawa, Dr. Takehiko Wada en Dr. Hirotaka Komaba (Tokai University).

Alle experimenten werden goedgekeurd door de Institutional Review Board van de Universiteit van Tokio. Alle dierprocedures werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van de National Institutes of Health. Mannelijke C57BL/6NJcl muizen, 8 weken oud, werden gebruikt voor deze studie. De muizen werden verkregen uit commerciële bronnen (zie Tabel van Materialen).
1. Bereiding van dieren en nierfixatie
<ol><li>Voer perfusiefixatie uit volgens de onderstaande stappe...

<ol>
	<li>Velez-Fort, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stimulus+selectivity+and+connectivity+of+layer+six+principal+cells+reveals+cortical+microcircuits+underlying+visual+processing.">The stimulus selectivity and connectivity of layer six principal cells reveals cortical microcircuits underlying visual processing.</a> Neuron. 83 (6), 1431-1443 (2014).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-brain+imaging+with+single-cell+resolution+using+chemical+cocktails+and+computational+analysis.">Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis.</a> Cell. 157 (3), 726-739 (2014).</li><li>Erturk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO.">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nature Protocols. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li><li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+Landscape+for+Tissue+Clearing+Based+on+Hydrophilic+Reagents.">Chemical Landscape for Tissue Clearing Based on Hydrophilic Reagents.</a> Cell Reports. 24 (8), 2196-2210 (2018).</li><li>Susaki, E. A., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+and+whole-organ+clearing+and+imaging+techniques+with+single-cell+resolution:+toward+organism-level+systems+biology+in+mammals.">Whole-body and whole-organ clearing and imaging techniques with single-cell resolution: toward organism-level systems biology in mammals.</a> Cell Chemical Biology. 23 (1), 137-157 (2016).</li><li>Keller, P. J., Dodt, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+microscopy+of+living+or+cleared+specimens.">Light sheet microscopy of living or cleared specimens.</a> Current Opinion in Neurobiology. 22 (1), 138-143 (2012).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+CUBIC+protocols+for+whole-brain+and+whole-body+clearing+and+imaging.">Advanced CUBIC protocols for whole-brain and whole-body clearing and imaging.</a> Nature Protocols. 10 (11), 1709-1727 (2015).</li><li>Kubota, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+profiling+of+cancer+metastasis+with+single-cell+resolution.">Whole-body profiling of cancer metastasis with single-cell resolution.</a> Cell Reports. 20 (1), 236-250 (2017).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+three-dimensional+analysis+(CUBIC-kidney)+visualizes+abnormal+renal+sympathetic+nerves+after+ischemia/reperfusion+injury.">Comprehensive three-dimensional analysis (CUBIC-kidney) visualizes abnormal renal sympathetic nerves after ischemia/reperfusion injury.</a> Kidney International. 96 (1), 129-138 (2019).</li><li>Hasegawa, S., Inoue, T., Inagi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroimmune+interactions+and+kidney+disease.">Neuroimmune interactions and kidney disease.</a> Kidney Research and Clinical Practice. 38 (3), 282-294 (2019).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+oral+hypoxia-inducible+factor+prolyl+hydroxylase+inhibitor+enarodustat+counteracts+alterations+in+renal+energy+metabolism+in+the+early+stages+of+diabetic+kidney+disease.">The oral hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibitor enarodustat counteracts alterations in renal energy metabolism in the early stages of diabetic kidney disease.</a> Kidney International. 97 (5), 934-950 (2020).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+sympathetic+signaling+in+macrophages+blocks+systemic+inflammation+and+protects+against+renal+ischemia-reperfusion+injury.">Activation of sympathetic signaling in macrophages blocks systemic inflammation and protects against renal ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 32 (7), 1599-1615 (2021).</li><li>Renier, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iDISCO:+a+simple,+rapid+method+to+immunolabel+large+tissue+samples+for+volume+imaging.">iDISCO: a simple, rapid method to immunolabel large tissue samples for volume imaging.</a> Cell. 159 (4), 896-910 (2014).</li><li>Klingberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+evaluation+of+total+glomerular+number+and+capillary+tuft+size+in+nephritic+kidneys+using+lightsheet+microscopy.">Fully automated evaluation of total glomerular number and capillary tuft size in nephritic kidneys using lightsheet microscopy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (2), 452-459 (2017).</li><li>Zhao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+probing+of+intact+human+organs.">Cellular and molecular probing of intact human organs.</a> Cell. 180 (4), 796-812 (2020).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+whole-organ/body+staining+and+imaging+based+on+electrolyte-gel+properties+of+biological+tissues.">Versatile whole-organ/body staining and imaging based on electrolyte-gel properties of biological tissues.</a> Nature Communications. 11 (1), 1-22 (2020).</li></ol>

Het huidige protocol maakte 3D-beeldvorming van de hele nier mogelijk van verschillende structuren zoals sympathische zenuwen, verzamelkanalen, slagaders, proximale tubuli en glomeruli 9,10,11. Deze kleuringsmethode bood macroscopische observatie en leidde tot nieuwe biologische ontdekkingen, door de verandering in renale sympathische zenuwen na ischemie-reperfusieletsel 9,10<...

De nier bestaat uit verschillende celpopulaties. Hoewel conventionele pathologie ons veel informatie geeft over de micro-omgeving van de nieren, is driedimensionale (3D) beeldvorming nodig om de intercellulaire overspraak tijdens de progressie van de nierziekte nauwkeurig te begrijpen. In het verleden moest een groot aantal seriële secties en beeldreconstructies worden uitgevoerd voor de 3D-beeldvorming van het hele orgaan1. Deze methode vergde echter te veel inspanning en had problemen op het gebied van reproduceerbaarheid.
Optische clearing is een goede strategie om deze horde te nemen 2,3. Weefselopaciteit is voornamelijk te wijten aan lichtverstrooiing en absorptie omdat elk orgaan bestaat uit verschillende stoffen, waaronder water, eiwitten en lipiden. De basisstrategie van weefselzuivering is dus het vervangen van water en lipiden in weefsels door refractieve index (RI) overeenkomende reagentia die dezelfde optische eigenschappen hebben als eiwitten4. Om een transparant monster te observeren, is een lichtblad fluorescerende microscopie nuttig5. Lichtplaten verlichten het transparante monster vanaf de zijkant en excitatiesignalen worden verkregen door de objectieflens in een verticale positie6. Deze microscopie verkrijgt in één beweging dwarsdoorsnede-informatie, die verschilt van de confocale of multifoton fluorescerende microscopie. Zo kan het snel z-stack-afbeeldingen verkrijgen met een laag niveau van fotobleaching.
Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational Analysis (CUBIC) is een van de weefselzuiveringsmethoden die beeldvorming van hele organen mogelijk maakt door fluorescentiemicroscopie 2,7,8. CUBIC en whole-mount immunofluorescente kleuring zijn in deze studie geoptimaliseerd om 3D-structuren van muizennieren te visualiseren 9,10,11. Met behulp van deze whole-mount kleuringsmethode wordt de verandering in renale sympathische zenuwen gevisualiseerd na ischemie-reperfusieletsel 9,10 en glomerulomegallie in het vroege stadium van diabetische nierziekte11, evenals bloedvaten, proximale tubuli en verzamelkanalen in een hele nier9.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>14 mL Round Bottom High Clarity PP Test Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352059</td>
			<td>Tissue clearing, staining, wash</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-dimethyl-1-phenyl-5-pyrazolone/antipyrine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>D1876</td>
			<td>CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37%-Formaldehyde Solution</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>16223-55</td>
			<td>Post fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4%-Paraformaldehyde Phosphate Buffer Solution</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>09154-85</td>
			<td>Kidney fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Flour 555-conjugated donkey anti-sheep IgG antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21436</td>
			<td>Secondary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Flour 647-conjugated donkey anti-rabbit IgG antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31573</td>
			<td>Secondary antibody (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-aquaporin 2 (AQP2) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab199975</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-podocin antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0372</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-sodium glucose cotransporter 2 (SGLT2) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab85626</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-tyrosine hydroxylase (TH) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab113</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#945;-smooth muscle actin (&#945;-SMA) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5694</td>
			<td>Primary antibody (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocker Casein in PBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>37528</td>
			<td>Staining buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol Tartrate</td>
			<td>Meiji</td>
			<td>005526</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6NJcl</td>
			<td>Nippon Bio-Supp.Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Mouse strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Imaging analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macro-zoom microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>MVX10</td>
			<td>The observation unit of the custom-built microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine Hydrochloride</td>
			<td>Kyoritsu-Seiyaku</td>
			<td>008656</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>27803229</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8410</td>
			<td>Immersion oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-buthyldiethanolamine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>B0725</td>
			<td>CUBIC-L, CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>N0078</td>
			<td>CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene glycol mono-p-isooctylphenyl ether/Triton X-100</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>12967-45</td>
			<td>CUBIC-L, PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon oil HIVAC-F4</td>
			<td>Shin-Etsu Chemical</td>
			<td>50449832</td>
			<td>Immersion oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Wako</td>
			<td>195-11092</td>
			<td>Staining buffer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole-kidney three-dimensional staining with cubic

Hoewel conventionele pathologie veel informatie over de niermicrostructuur opleverde, was het moeilijk om de precieze structuur van bloedvaten, proximale tubuli, verzamelkanalen, glomeruli en sympathische zenuwen in de nier te kennen vanwege het gebrek aan driedimensionale (3D) informatie. Optische clearing is een goede strategie om deze grote hindernis te overwinnen. Meerdere cellen in een heel orgaan kunnen worden geanalyseerd met eencellige resolutie door weefselzuivering en 3D-beeldvormingstechniek te combineren. Celetiketteringsmethoden voor beeldvorming van hele organen blijven echter onderontwikkeld. In het bijzonder is het kleuren van organen in de hele montage een uitdaging vanwege de moeilijkheid bij de penetratie van antilichamen. Het huidige protocol ontwikkelde een nierkleuring van de hele muis voor 3D-beeldvorming met de CUBIC (Clear, Unobstructed Brain/ Body Imaging Cocktails and Computational analysis) weefselzuiveringsmethode. Het protocol heeft het mogelijk gemaakt om renale sympathische denervatie na ischemie-reperfusieletsel en glomerulomegalie in het vroege stadium van diabetische nierziekte vanuit een uitgebreid oogpunt te visualiseren. Deze techniek kan dus leiden tot nieuwe ontdekkingen in nieronderzoek door een macroscopisch perspectief te bieden.

Met behulp van deze kleuringsmethode werden sympathische zenuwen [anti-tyrosinehydroxylase (TH) antilichaam] en slagaders [anti-α-gladde spieractine (αSMA) antilichaam] in een hele nier (figuur 4A, B en video 1) gevisualiseerd9. Abnormale renale sympathische zenuwen werden ook gevisualiseerd na ischemie/reperfusieletsel (IRI)9,10 (figuur 4C). Bo...

Watch this Scientific Journal Video about Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC at JoVE.com

Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC

Het huidige protocol beschrijft een weefselzuiveringsmethode en immunofluorescente kleuring met volledige mount voor driedimensionale (3D) nierbeeldvorming. Deze techniek kan macroscopische perspectieven bieden in de nierpathologie, wat leidt tot nieuwe biologische ontdekkingen.

Whole-Kidney Driedimensionale Kleuring met CUBIC

Although conventional pathology provided numerous information about kidney microstructure, it was difficult to know the precise structure of blood ...

Dit protocol maakt een visualisatie van driedimensionale structuren in volledige nier mogelijk, wat kan leiden tot innovatieve ontdekkingen in nieronderzoek door een macroscopisch perspectief te bieden. Orgaankleuring met hele montage is een uitdaging vanwege de moeilijkheid bij de penetratie van antilichamen. Dit protocol heeft de hoogwaardige, hele kleuring van de nieren door de antilichamen aangetoond.Voer om te beginnen de onderdompelingsfixatie uit onmiddellijk na de perfusiefixatie en nierbemonstering, door de nier gedurende 16 uur onder te dompelen in 4% paraformaldehyde bij vier graden Celsius. Geef drie wasbeurten met PBS gedurende elk twee uur. Voer het ontkleurings- en delipidatieproces uit door de vaste nier onder te dompelen in zeven millimeter van 50% CUBIC-L in een buis met ronde bodem van 14 milliliter, met zacht schudden bij kamertemperatuur.Dompel na zes uur de nier onder in zeven milliliter CUBIC-L in een buis met ronde bodem van 14 millimeter, met zacht schudden bij 37 graden Celsius gedurende vijf dagen. Ververs CUBIC-L elke dag. Zodra de ontkleuring en delipidatie zijn voltooid, gebruikt u een doseerlepel voor monsterbehandeling en wast u de nier driemaal met PBS op kamertemperatuur gedurende twee uur.Immunostain de gedelipideerde nier in primaire antilichamen verdund in kleuring buffer oplossing, met zacht schudden in een incubator shaker bij 37 graden Celsius gedurende zeven dagen. Was vervolgens de nier met 0,5% Triton X-100 in PBS, ook bekend als PBST, bij kamertemperatuur gedurende één dag. Voor secundaire antilichamenkleuring, behandel de nier met secundaire antilichamen in de kleuringsbuffer, in het donker, met zacht schudden bij 37 graden Celsius gedurende zeven dagen.Bevestig de vlek met een PBST-wasbeurt op kamertemperatuur gedurende één dag. Dompel de nier na fixatie drie uur onder in 1% formaldehyde in PB en was deze zes uur lang met PBS op kamertemperatuur. Voer de refractieve indexmatching uit door de nier gedurende één dag onder te dompelen in zeven milliliter van 50% CUBIC-R + in een 14 milliliter buis met ronde bodem met schudden, gevolgd door behandeling met zeven milliliter CUBIC-R + met schudden bij kamertemperatuur gedurende twee dagen.Met behulp van de immuunkleuringsmethode werden sympathische zenuwen en slagaders in een hele nier gevisualiseerd in 3D-nierbeeldvorming. Bovendien werden abnormale renale sympathische zenuwen gevisualiseerd na ischemie-reperfusieletsel. Dit protocol vergemakkelijkte ook het visualiseren van sympathische zenuwen in de hele milt.Het gegevenskwantificeringsproces voor de driedimensionale immunofluorescente kleuring wordt hier weergegeven. Bovendien werden verzamelkanalen, het S1-segment van proximale tubuli en de glomeruli met succes gevisualiseerd in een hele nier. De onderdrukte glomerulomegalie, als gevolg van toediening van geneesmiddelen in de vroege stadia van diabetische nierziekte, werd ook gevisualiseerd in 3D-beeldvorming.Dit protocol kan het specifieke molecuul in een hele nier labelen. Zo kunnen onderzoekers structuurverandering in de vasculatuur analyseren of zeldzame gebeurtenissen in nierweefsels vinden.

Research

JoVE Journal

Medicine

Three-dimensional Imaging of Nociceptive Intraepidermal Nerve Fibers in Human Skin Biopsies

Driedimensionale beeldvorming van Nociceptieve Intraepidermal zenuwvezels in Menselijke huid Biopsieën

A punch biopsy of the skin is commonly used to quantify intraepidermal nerve fiber densities (IENFD) for the diagnosis of peripheral polyneuropathy 1,2. ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

Kwantificering van de Breast Cancer Cell Invasiviteit met een drie-dimensionale (3D) Model

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Driedimensionale Co-cultuur Model voor Tumor-stromale Interactie

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Driedimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

Driedimensionale alginaat-bead cultuur van de mens hypofyseadenoom Cells

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

Three-Dimensional Printing of a Complex Aortic Anomaly

Drie-dimensionale afdrukken van een complexe aorta anomalie

Complex congenital aortic anomalies include diverse types of malformations that may be clinically asymptomatic or present with respiratory or esophageal ...

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Schatting van het Nephron aantal in hele nieren met behulp van de zure methode

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Three-Dimensional Printing Guide Template Assisted Percutaneous Vertebroplasty (PVP)

Three-Dimensional Printing Guide Template Assisted Percutaneous Vertebroplasty PVP

Driedimensionale print gids sjabloon bijgestaan percutane VERTEBROPLASTY (PVP)

Percutaneous vertebroplasty (PVP) is considered an effective treatment for the back pain caused by osteoporotic vertebral compression fracture. The ...

Three-Dimensional Collagen Matrix Scaffold Implantation as a Liver Regeneration Strategy

Driedimensionale collageenmatrixsteigerimplantatie als leverregeneratiestrategie

Liver diseases are the leading cause of death worldwide. Excessive alcohol consumption, a high-fat diet, and hepatitis C virus infection promote fibrosis, ...

Guided Endodontics: Three-Dimensional Planning and Template-Aided Preparation of Endodontic Access Cavities

Begeleide endodontie: driedimensionale planning en sjabloonondersteunde voorbereiding van endodontische toegangsholtes

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, ...