Name: whole-kidney three-dimensional staining with cubic
Uploaded: 2022-07-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC at JoVE.com

En del av dette arbeidet ble utført gjennom samarbeid med Prof. Hiroki R. Ueda (University of Tokyo), Prof. Etsuo A. Susaki (Juntendo University), Prof. Tetsuhiro Tanaka (Tohoku University), Prof. Masafumi Fukagawa, Dr. Takehiko Wada, og Dr. Hirotaka Komaba (Tokai University).

Alle eksperimenter ble godkjent av University of Tokyo Institutional Review Board. Alle dyreprosedyrer ble utført i henhold til National Institutes of Health retningslinjer. Mannlige C57BL/6NJcl-mus, 8 uker gamle, ble brukt i denne studien. Musene ble hentet fra kommersielle kilder (se materialtabell).
1. Dyrepreparat og nyrefiksering
<ol><li>Utfør perfusjonsfiksering ved å følge trinnene nedenfor.<ol><li>Bedøv musen ved inhalasjon av isofluran (3 %, 2,...

<ol>
	<li>Velez-Fort, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stimulus+selectivity+and+connectivity+of+layer+six+principal+cells+reveals+cortical+microcircuits+underlying+visual+processing.">The stimulus selectivity and connectivity of layer six principal cells reveals cortical microcircuits underlying visual processing.</a> Neuron. 83 (6), 1431-1443 (2014).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-brain+imaging+with+single-cell+resolution+using+chemical+cocktails+and+computational+analysis.">Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis.</a> Cell. 157 (3), 726-739 (2014).</li><li>Erturk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO.">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nature Protocols. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li><li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+Landscape+for+Tissue+Clearing+Based+on+Hydrophilic+Reagents.">Chemical Landscape for Tissue Clearing Based on Hydrophilic Reagents.</a> Cell Reports. 24 (8), 2196-2210 (2018).</li><li>Susaki, E. A., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+and+whole-organ+clearing+and+imaging+techniques+with+single-cell+resolution:+toward+organism-level+systems+biology+in+mammals.">Whole-body and whole-organ clearing and imaging techniques with single-cell resolution: toward organism-level systems biology in mammals.</a> Cell Chemical Biology. 23 (1), 137-157 (2016).</li><li>Keller, P. J., Dodt, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+microscopy+of+living+or+cleared+specimens.">Light sheet microscopy of living or cleared specimens.</a> Current Opinion in Neurobiology. 22 (1), 138-143 (2012).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+CUBIC+protocols+for+whole-brain+and+whole-body+clearing+and+imaging.">Advanced CUBIC protocols for whole-brain and whole-body clearing and imaging.</a> Nature Protocols. 10 (11), 1709-1727 (2015).</li><li>Kubota, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+profiling+of+cancer+metastasis+with+single-cell+resolution.">Whole-body profiling of cancer metastasis with single-cell resolution.</a> Cell Reports. 20 (1), 236-250 (2017).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+three-dimensional+analysis+(CUBIC-kidney)+visualizes+abnormal+renal+sympathetic+nerves+after+ischemia/reperfusion+injury.">Comprehensive three-dimensional analysis (CUBIC-kidney) visualizes abnormal renal sympathetic nerves after ischemia/reperfusion injury.</a> Kidney International. 96 (1), 129-138 (2019).</li><li>Hasegawa, S., Inoue, T., Inagi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroimmune+interactions+and+kidney+disease.">Neuroimmune interactions and kidney disease.</a> Kidney Research and Clinical Practice. 38 (3), 282-294 (2019).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+oral+hypoxia-inducible+factor+prolyl+hydroxylase+inhibitor+enarodustat+counteracts+alterations+in+renal+energy+metabolism+in+the+early+stages+of+diabetic+kidney+disease.">The oral hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibitor enarodustat counteracts alterations in renal energy metabolism in the early stages of diabetic kidney disease.</a> Kidney International. 97 (5), 934-950 (2020).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+sympathetic+signaling+in+macrophages+blocks+systemic+inflammation+and+protects+against+renal+ischemia-reperfusion+injury.">Activation of sympathetic signaling in macrophages blocks systemic inflammation and protects against renal ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 32 (7), 1599-1615 (2021).</li><li>Renier, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iDISCO:+a+simple,+rapid+method+to+immunolabel+large+tissue+samples+for+volume+imaging.">iDISCO: a simple, rapid method to immunolabel large tissue samples for volume imaging.</a> Cell. 159 (4), 896-910 (2014).</li><li>Klingberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+evaluation+of+total+glomerular+number+and+capillary+tuft+size+in+nephritic+kidneys+using+lightsheet+microscopy.">Fully automated evaluation of total glomerular number and capillary tuft size in nephritic kidneys using lightsheet microscopy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (2), 452-459 (2017).</li><li>Zhao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+probing+of+intact+human+organs.">Cellular and molecular probing of intact human organs.</a> Cell. 180 (4), 796-812 (2020).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+whole-organ/body+staining+and+imaging+based+on+electrolyte-gel+properties+of+biological+tissues.">Versatile whole-organ/body staining and imaging based on electrolyte-gel properties of biological tissues.</a> Nature Communications. 11 (1), 1-22 (2020).</li></ol>

Den nåværende protokollen tillot hel-nyre 3D-avbildning av ulike strukturer som sympatiske nerver, samlekanaler, arterier, proksimale tubuli og glomeruli 9,10,11. Denne fargemetoden tilbød makroskopisk observasjon og førte til nye biologiske funn, ved å visualisere endringen i nyresympatiske nerver etter iskemi-reperfusjonsskade 9,10 og glomerulomegali i begynnelsen av diabetisk nyresykdom...

Nyren består av ulike cellepopulasjoner. Selv om konvensjonell patologi gir oss mye informasjon om nyremikromiljøet, er det nødvendig med tredimensjonal (3D) avbildning for å forstå den intercellulære krysstalen under nyresykdomsprogresjon. Tidligere måtte et stort antall serielle seksjonerings- og bilderekonstruksjoner utføres for 3D-avbildningen av hele orgelet1. Denne metoden krevde imidlertid for mye innsats og hadde problemer med hensyn til reproduserbarhet.
Optisk clearing er en god strategi for å overvinne denne hindringen 2,3. Vevsopasitet skyldes hovedsakelig lysspredning og absorpsjon fordi hvert organ består av forskjellige stoffer, inkludert vann, protein og lipider. Dermed er den grunnleggende strategien for vevsrydding å erstatte vann og lipider i vev med brytningsindeks (RI) matchende reagenser som har samme optiske egenskaper som proteiner4. For å observere en gjennomsiktig prøve, er et lysark fluorescerende mikroskopi nyttig5. Lysark lyser opp den gjennomsiktige prøven fra siden, og eksitasjonssignaler oppnås gjennom objektivlinsen plassert i vertikal stilling6. Denne mikroskopien får tverrsnittsinformasjon i en enkelt feie, som er forskjellig fra konfokal eller multifoton fluorescerende mikroskopi. Dermed kan den raskt skaffe z-stack-bilder med lavt nivå av fotobleking.
Clear, Unobstructed Brain / Body Imaging Cocktails and Computational Analysis (CUBIC) er en av vevsryddingsmetodene som muliggjør helorganavbildning ved lysarkfluorescerende mikroskopi 2,7,8. CUBIC og helmontert immunfluorescerende farging er optimalisert i denne studien for å visualisere mus nyre 3D strukturer 9,10,11. Ved hjelp av denne helmonterte fargemetoden visualiseres endringen i nyresympatiske nerver etter iskemi-reperfusjonsskade 9,10 og glomerulomegali i tidlig stadium av diabetisk nyresykdom 11, samt blodkar, proksimale tubuli og samlekanaler i en hel nyre9.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>14 mL Round Bottom High Clarity PP Test Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352059</td>
			<td>Tissue clearing, staining, wash</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-dimethyl-1-phenyl-5-pyrazolone/antipyrine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>D1876</td>
			<td>CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37%-Formaldehyde Solution</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>16223-55</td>
			<td>Post fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4%-Paraformaldehyde Phosphate Buffer Solution</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>09154-85</td>
			<td>Kidney fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Flour 555-conjugated donkey anti-sheep IgG antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21436</td>
			<td>Secondary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Flour 647-conjugated donkey anti-rabbit IgG antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31573</td>
			<td>Secondary antibody (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-aquaporin 2 (AQP2) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab199975</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-podocin antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0372</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-sodium glucose cotransporter 2 (SGLT2) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab85626</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-tyrosine hydroxylase (TH) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab113</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#945;-smooth muscle actin (&#945;-SMA) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5694</td>
			<td>Primary antibody (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocker Casein in PBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>37528</td>
			<td>Staining buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol Tartrate</td>
			<td>Meiji</td>
			<td>005526</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6NJcl</td>
			<td>Nippon Bio-Supp.Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Mouse strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Imaging analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macro-zoom microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>MVX10</td>
			<td>The observation unit of the custom-built microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine Hydrochloride</td>
			<td>Kyoritsu-Seiyaku</td>
			<td>008656</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>27803229</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8410</td>
			<td>Immersion oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-buthyldiethanolamine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>B0725</td>
			<td>CUBIC-L, CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>N0078</td>
			<td>CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene glycol mono-p-isooctylphenyl ether/Triton X-100</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>12967-45</td>
			<td>CUBIC-L, PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon oil HIVAC-F4</td>
			<td>Shin-Etsu Chemical</td>
			<td>50449832</td>
			<td>Immersion oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Wako</td>
			<td>195-11092</td>
			<td>Staining buffer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole-kidney three-dimensional staining with cubic

Selv om konvensjonell patologi ga mange opplysninger om nyremikrostruktur, var det vanskelig å vite den nøyaktige strukturen til blodkar, proksimale tubuli, samlekanaler, glomeruli og sympatiske nerver i nyrene på grunn av mangel på tredimensjonal (3D) informasjon. Optisk clearing er en god strategi for å overvinne denne store hindringen. Flere celler i et helt organ kan analyseres ved enkeltcelleoppløsning ved å kombinere vevsrydding og 3D-avbildningsteknikk. Imidlertid forblir cellemerkingsmetoder for helorganavbildning underutviklet. Spesielt er helmontert organfarging utfordrende på grunn av vanskeligheten med antistoffpenetrasjon. Den nåværende protokollen utviklet en helmontert mus nyrefarging for 3D-avbildning med CUBIC (Clear, Unobstructed Brain / Body Imaging Cocktails and Computational analysis) vevsryddingsmetode. Protokollen har gjort det mulig å visualisere renal sympatisk denervering etter iskemi-reperfusjonsskade og glomerulomegali i tidlig stadium av diabetisk nyresykdom fra et omfattende synspunkt. Dermed kan denne teknikken føre til nye funn i nyreforskning ved å gi et makroskopisk perspektiv.

Ved hjelp av denne fargemetoden ble sympatiske nerver [anti-tyrosinhydroksylase (TH) antistoff] og arterier [anti-α-glatt muskelaktin (αSMA) antistoff] i en hel nyre (figur 4A, B og video 1) visualisert9. Unormale nyresympatiske nerver ble også visualisert etter iskemi/reperfusjonsskade (IRI)9,10 (figur 4C). Videre ble visualisering av sympatis...

Watch this Scientific Journal Video about Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC at JoVE.com

Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC

Denne protokollen beskriver en vevsryddingsmetode og helmontert immunfluorescerende farging for tredimensjonal (3D) nyreavbildning. Denne teknikken kan tilby makroskopiske perspektiver i nyrepatologi, noe som fører til nye biologiske funn.

Hel-nyre tredimensjonal farging med CUBIC

Although conventional pathology provided numerous information about kidney microstructure, it was difficult to know the precise structure of blood ...

Denne protokollen tillater en visualisering av tredimensjonale strukturer i full nyre, noe som kan føre til innovative funn i nyreforskning ved å gi et makroskopisk perspektiv. Helmontert organfarging er utfordrende på grunn av vanskeligheten med antistoffpenetrasjon. Denne protokollen har vist høy kvalitet, helmontert farging av nyrene av antistoffene.For å begynne med, utfør nedsenkningsfiksering umiddelbart etter perfusjonsfiksering og nyreprøvetaking, ved å nedsenke nyrene i 4% paraformaldehyd ved fire grader Celsius i 16 timer. Gi tre vasker med PBS i to timer hver. Utfør avfargings- og delipideringsprosessen ved å senke den faste nyren i syv millimeter 50% KUBIKK-L i et 14 milliliter rundbunnsrør, med mild risting ved romtemperatur.Etter seks timer, senk nyrene i syv milliliter CUBIC-L i et 14 millimeter rundbunnsrør, med mild risting ved 37 grader Celsius i fem dager. Oppdater CUBIC-L hver dag. Når avfargingen og delipidiseringen er fullført, bruk en dispenseringsskje for prøvehåndtering og vask nyrene tre ganger med PBS ved romtemperatur i to timer.Immunostain den delipiderte nyren i primære antistoffer fortynnet i fargebufferløsning, med mild risting i en inkubatorshaker ved 37 grader Celsius i syv dager. Vask deretter nyrene med 0,5% Triton X-100 i PBS, også kjent som PBST, ved romtemperatur i en dag. For sekundære antistofffarging, behandle nyrene med sekundære antistoffer i fargebufferen, i mørket, med mild risting ved 37 grader Celsius i syv dager.Fest fargingen med en PBST-vask ved romtemperatur i en dag. Etter fiksering, senk nyrene i 1% formaldehyd i PB i tre timer, og vask det med PBS ved romtemperatur i seks timer. Utfør brytningsindeksmatchingen ved å senke nyrene i syv milliliter 50% KUBIKK-R + i et 14 milliliter rundbunnsrør med risting i en dag, etterfulgt av behandling med syv milliliter KUBIKK-R + med risting ved romtemperatur i to dager.Ved hjelp av immunfargingsmetoden ble sympatiske nerver og arterier i en hel nyre visualisert i 3D nyreavbildning. Videre ble unormale nyresympatiske nerver visualisert etter iskemi-reperfusjonsskade. Denne protokollen gjorde det også lettere å visualisere sympatiske nerver i hele milten.Datakvantifiseringsprosessen for den tredimensjonale immunfluorescerende fargingen vises her. I tillegg ble samlekanaler, S1-segmentet av proksimale tubuli og glomeruli vellykket visualisert i en hel nyre. Den undertrykte glomerulomegali, som følge av legemiddeladministrasjon i de tidlige stadier av diabetisk nyresykdom, ble også visualisert i 3D-bildebehandling.Denne protokollen kan merke det spesifikke molekylet i en hel nyre. Dermed kan forskere analysere strukturendring i vaskulaturen eller finne sjeldne hendelser i nyrevev.

Research

JoVE Journal

Medicine

Three-dimensional Imaging of Nociceptive Intraepidermal Nerve Fibers in Human Skin Biopsies

Tredimensjonal Imaging av nociseptive Intraepidermal nervefibrene i menneskelig hud Biopsi

A punch biopsy of the skin is commonly used to quantify intraepidermal nerve fiber densities (IENFD) for the diagnosis of peripheral polyneuropathy 1,2. ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

Kvantifisering av Breast Cancer Cell Invasivitet Ved hjelp av en tredimensjonal (3D) modell

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Tredimensjonal Co-kultur Modell for Tumor-stromal Interaksjon

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Tredimensjonale (3D) Tumor Spheroid invasjonen analysen

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

Tredimensjonal Alginat-perle Culture of Human hypofyseadenom Cells

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

Three-Dimensional Printing of a Complex Aortic Anomaly

Tredimensjonale utskrift av en kompleks aorta anomali

Complex congenital aortic anomalies include diverse types of malformations that may be clinically asymptomatic or present with respiratory or esophageal ...

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Estimering av Nephron nummer i hele nyrene ved hjelp av acid maserasjon Method

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Three-Dimensional Printing Guide Template Assisted Percutaneous Vertebroplasty (PVP)

Three-Dimensional Printing Guide Template Assisted Percutaneous Vertebroplasty PVP

Tredimensjonal utskrift guide mal assistert perkutan Vertebroplasty (PVP)

Percutaneous vertebroplasty (PVP) is considered an effective treatment for the back pain caused by osteoporotic vertebral compression fracture. The ...

Three-Dimensional Collagen Matrix Scaffold Implantation as a Liver Regeneration Strategy

Tredimensjonal kollagen matrise stillas implantasjon som en lever regenerering strategi

Liver diseases are the leading cause of death worldwide. Excessive alcohol consumption, a high-fat diet, and hepatitis C virus infection promote fibrosis, ...

Guided Endodontics: Three-Dimensional Planning and Template-Aided Preparation of Endodontic Access Cavities

Veiledet endodonti: Tredimensjonal planlegging og malstøttet forberedelse av endodontiske tilgangshulrom

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, ...