Name: whole-kidney three-dimensional staining with cubic
Uploaded: 2022-07-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC at JoVE.com

En del av detta arbete genomfördes genom samarbete med prof. Hiroki R. Ueda (University of Tokyo), Prof. Etsuo A. Susaki (Juntendo University), Prof. Tetsuhiro Tanaka (Tohoku University), Prof. Masafumi Fukagawa, Dr. Takehiko Wada och Dr. Hirotaka Komaba (Tokai University).

Alla experiment godkändes av University of Tokyo Institutional Review Board. Alla djurförsök utfördes enligt National Institutes of Health riktlinjer. Manliga C57BL/6NJcl-möss, 8 veckor gamla, användes för den aktuella studien. Mössen erhölls från kommersiella källor (se Materialförteckning).
1. Djurberedning och njurfixering
<ol><li>Utför perfusionsfixering enligt stegen nedan.<ol><li>Bedöva musen genom inandning av isofluran (3 %, 2,0 l/min) ...

<ol>
	<li>Velez-Fort, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stimulus+selectivity+and+connectivity+of+layer+six+principal+cells+reveals+cortical+microcircuits+underlying+visual+processing.">The stimulus selectivity and connectivity of layer six principal cells reveals cortical microcircuits underlying visual processing.</a> Neuron. 83 (6), 1431-1443 (2014).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-brain+imaging+with+single-cell+resolution+using+chemical+cocktails+and+computational+analysis.">Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis.</a> Cell. 157 (3), 726-739 (2014).</li><li>Erturk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO.">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nature Protocols. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li><li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+Landscape+for+Tissue+Clearing+Based+on+Hydrophilic+Reagents.">Chemical Landscape for Tissue Clearing Based on Hydrophilic Reagents.</a> Cell Reports. 24 (8), 2196-2210 (2018).</li><li>Susaki, E. A., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+and+whole-organ+clearing+and+imaging+techniques+with+single-cell+resolution:+toward+organism-level+systems+biology+in+mammals.">Whole-body and whole-organ clearing and imaging techniques with single-cell resolution: toward organism-level systems biology in mammals.</a> Cell Chemical Biology. 23 (1), 137-157 (2016).</li><li>Keller, P. J., Dodt, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+microscopy+of+living+or+cleared+specimens.">Light sheet microscopy of living or cleared specimens.</a> Current Opinion in Neurobiology. 22 (1), 138-143 (2012).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+CUBIC+protocols+for+whole-brain+and+whole-body+clearing+and+imaging.">Advanced CUBIC protocols for whole-brain and whole-body clearing and imaging.</a> Nature Protocols. 10 (11), 1709-1727 (2015).</li><li>Kubota, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+profiling+of+cancer+metastasis+with+single-cell+resolution.">Whole-body profiling of cancer metastasis with single-cell resolution.</a> Cell Reports. 20 (1), 236-250 (2017).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+three-dimensional+analysis+(CUBIC-kidney)+visualizes+abnormal+renal+sympathetic+nerves+after+ischemia/reperfusion+injury.">Comprehensive three-dimensional analysis (CUBIC-kidney) visualizes abnormal renal sympathetic nerves after ischemia/reperfusion injury.</a> Kidney International. 96 (1), 129-138 (2019).</li><li>Hasegawa, S., Inoue, T., Inagi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroimmune+interactions+and+kidney+disease.">Neuroimmune interactions and kidney disease.</a> Kidney Research and Clinical Practice. 38 (3), 282-294 (2019).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+oral+hypoxia-inducible+factor+prolyl+hydroxylase+inhibitor+enarodustat+counteracts+alterations+in+renal+energy+metabolism+in+the+early+stages+of+diabetic+kidney+disease.">The oral hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibitor enarodustat counteracts alterations in renal energy metabolism in the early stages of diabetic kidney disease.</a> Kidney International. 97 (5), 934-950 (2020).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Hasegawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+sympathetic+signaling+in+macrophages+blocks+systemic+inflammation+and+protects+against+renal+ischemia-reperfusion+injury.">Activation of sympathetic signaling in macrophages blocks systemic inflammation and protects against renal ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 32 (7), 1599-1615 (2021).</li><li>Renier, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iDISCO:+a+simple,+rapid+method+to+immunolabel+large+tissue+samples+for+volume+imaging.">iDISCO: a simple, rapid method to immunolabel large tissue samples for volume imaging.</a> Cell. 159 (4), 896-910 (2014).</li><li>Klingberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+evaluation+of+total+glomerular+number+and+capillary+tuft+size+in+nephritic+kidneys+using+lightsheet+microscopy.">Fully automated evaluation of total glomerular number and capillary tuft size in nephritic kidneys using lightsheet microscopy.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (2), 452-459 (2017).</li><li>Zhao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+probing+of+intact+human+organs.">Cellular and molecular probing of intact human organs.</a> Cell. 180 (4), 796-812 (2020).</li><li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+whole-organ/body+staining+and+imaging+based+on+electrolyte-gel+properties+of+biological+tissues.">Versatile whole-organ/body staining and imaging based on electrolyte-gel properties of biological tissues.</a> Nature Communications. 11 (1), 1-22 (2020).</li></ol>

Det nuvarande protokollet tillät helnjure 3D-avbildning av olika strukturer såsom sympatiska nerver, uppsamlingskanaler, artärer, proximala tubuler och glomeruli 9,10,11. Denna färgningsmetod erbjöd makroskopisk observation och ledde till nya biologiska upptäckter genom att visualisera förändringen i njursympatiska nerver efter ischemi-reperfusionsskada 9,10 och glomerulomegali i börja...

Njuren består av olika cellpopulationer. Även om konventionell patologi ger oss mycket information om njurmikromiljön, behövs tredimensionell (3D) avbildning för att exakt förstå den intercellulära överhörningen under njursjukdomsprogression. Tidigare behövde ett stort antal seriella sektionering och bildrekonstruktion utföras för helorganets 3D-avbildning1. Denna metod krävde dock för mycket ansträngning och hade problem när det gäller reproducerbarhet.
Optisk röjning är en bra strategi för att övervinna detta hinder 2,3. Vävnadsopacitet beror främst på ljusspridning och absorption eftersom varje organ består av olika ämnen, inklusive vatten, protein och lipider. Således är den grundläggande strategin för vävnadsrensning att ersätta vatten och lipider i vävnader med brytningsindex (RI) matchande reagens som har samma optiska egenskaper som proteiner4. För att observera ett transparent prov är en ljusplåtfluorescerande mikroskopi användbar5. Ljusark belyser det transparenta provet från sidan, och excitationssignaler förvärvas genom objektivlinsen i vertikalt läge6. Denna mikroskopi erhåller tvärsnittsinformation i ett enda svep, vilket skiljer sig från konfokal- eller multifotonfluorescerande mikroskopi. Således kan den snabbt förvärva z-stack-bilder med en låg nivå av fotoblekning.
Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational Analysis (CUBIC) är en av vävnadsrensningsmetoderna som möjliggör helorgansavbildning med ljusarksfluorescerande mikroskopi 2,7,8. CUBIC och helmonterad immunofluorescerande färgning optimeras i denna studie för att visualisera musnjure 3D-strukturer 9,10,11. Med hjälp av denna helmonterade färgningsmetod visualiseras förändringen i njursympatiska nerver efter ischemi-reperfusionsskada 9,10 och glomerulomegali i det tidiga skedet av diabetisk njursjukdom 11, liksom blodkärl, proximala tubuler och uppsamlingskanaler i en hel njure9.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>14 mL Round Bottom High Clarity PP Test Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352059</td>
			<td>Tissue clearing, staining, wash</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-dimethyl-1-phenyl-5-pyrazolone/antipyrine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>D1876</td>
			<td>CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37%-Formaldehyde Solution</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>16223-55</td>
			<td>Post fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4%-Paraformaldehyde Phosphate Buffer Solution</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>09154-85</td>
			<td>Kidney fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Flour 555-conjugated donkey anti-sheep IgG antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21436</td>
			<td>Secondary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Flour 647-conjugated donkey anti-rabbit IgG antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31573</td>
			<td>Secondary antibody (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-aquaporin 2 (AQP2) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab199975</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-podocin antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0372</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-sodium glucose cotransporter 2 (SGLT2) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab85626</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-tyrosine hydroxylase (TH) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab113</td>
			<td>Primary antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#945;-smooth muscle actin (&#945;-SMA) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5694</td>
			<td>Primary antibody (1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocker Casein in PBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>37528</td>
			<td>Staining buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol Tartrate</td>
			<td>Meiji</td>
			<td>005526</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6NJcl</td>
			<td>Nippon Bio-Supp.Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Mouse strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Imaging analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macro-zoom microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>MVX10</td>
			<td>The observation unit of the custom-built microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine Hydrochloride</td>
			<td>Kyoritsu-Seiyaku</td>
			<td>008656</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>27803229</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8410</td>
			<td>Immersion oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-buthyldiethanolamine</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>B0725</td>
			<td>CUBIC-L, CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>N0078</td>
			<td>CUBIC-R+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene glycol mono-p-isooctylphenyl ether/Triton X-100</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>12967-45</td>
			<td>CUBIC-L, PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon oil HIVAC-F4</td>
			<td>Shin-Etsu Chemical</td>
			<td>50449832</td>
			<td>Immersion oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Wako</td>
			<td>195-11092</td>
			<td>Staining buffer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole-kidney three-dimensional staining with cubic

Även om konventionell patologi gav många uppgifter om njurmikrostruktur, var det svårt att känna till den exakta strukturen hos blodkärl, proximala tubuler, uppsamlingskanaler, glomeruli och sympatiska nerver i njurarna på grund av bristen på tredimensionell (3D) information. Optisk clearing är en bra strategi för att övervinna detta stora hinder. Flera celler i ett helt organ kan analyseras med encellsupplösning genom att kombinera vävnadsrensning och 3D-avbildningsteknik. Cellmärkningsmetoder för helorganavbildning är dock fortfarande underutvecklade. I synnerhet är helmonterad organfärgning utmanande på grund av svårigheten med antikroppspenetration. Detta protokoll utvecklade en helmonterad musnjurfärgning för 3D-avbildning med CUBIC -vävnadsrensningsmetoden (Clear, Unobstructed Brain / Body Imaging Cocktails and Computational analysis). Protokollet har gjort det möjligt att visualisera njursympatitisk denervation efter ischemi-reperfusionsskada och glomerulomegali i det tidiga skedet av diabetisk njursjukdom ur en omfattande synvinkel. Således kan denna teknik leda till nya upptäckter inom njurforskning genom att ge ett makroskopiskt perspektiv.

Med hjälp av denna färgningsmetodvisualiserades sympatiska nerver [anti-tyrosinhydroxylas (TH) antikropp] och artärer [anti-α-glattmuskelaktin (αSMA) antikropp] i en hel njure (figur 4A, B och video 1) 9. Onormala njursympatiska nerver visualiserades också efter ischemi/reperfusionsskada (IRI)9,10 (figur 4C). Dessutom uppnåddes visualiserin...

Watch this Scientific Journal Video about Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC at JoVE.com

Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC

Detta protokoll beskriver en vävnadsrensningsmetod och helmonterad immunofluorescerande färgning för tredimensionell (3D) njuravbildning. Denna teknik kan erbjuda makroskopiska perspektiv inom njurpatologi, vilket leder till nya biologiska upptäckter.

Helnjure tredimensionell färgning med CUBIC

Although conventional pathology provided numerous information about kidney microstructure, it was difficult to know the precise structure of blood ...

Detta protokoll möjliggör en visualisering av tredimensionella strukturer i full njure, vilket kan leda till innovativa upptäckter inom njurforskning genom att ge ett makroskopiskt perspektiv. Helmonterad organfärgning är utmanande på grund av svårigheten med antikroppspenetration. Detta protokoll har visat antikropparnas högkvalitativa, helmonterade färgning av njurarna.För att börja, utför nedsänkningsfixeringen omedelbart efter perfusionsfixeringen och njurprovtagningen genom att nedsänka njuren i 4% paraformaldehyd vid fyra grader Celsius i 16 timmar. Ge tre tvättar med PBS i två timmar vardera. Utför avfärgnings- och delipideringsprocessen genom att nedsänka den fasta njuren i sju millimeter 50% KUBIK-L i ett 14 ml rundbottenrör, med mild skakning vid rumstemperatur.Efter sex timmar, sänk ner njuren i sju milliliter CUBIC-L i ett 14 millimeter rundbottnat rör, med försiktig skakning vid 37 grader Celsius i fem dagar. Uppdatera CUBIC-L varje dag. När avfärgningen och avlipideringen är klar, använd en doseringssked för provhantering och tvätta njuren tre gånger med PBS vid rumstemperatur i två timmar.Immunostain den delipiderade njuren i primära antikroppar utspädda i färgningsbuffertlösning, med mild skakning i en inkubatorskakare vid 37 grader Celsius i sju dagar. Tvätta sedan njuren med 0.5% Triton X-100 i PBS, även känd som PBST, vid rumstemperatur under en dag. För sekundär antikroppsfärgning, behandla njuren med sekundära antikroppar i färgningsbufferten, i mörkret, med mild skakning vid 37 grader Celsius i sju dagar.Fixa färgningen med en PBST-tvätt vid rumstemperatur i en dag. Efter fixering, sänk ner njuren i 1% formaldehyd i PB i tre timmar och tvätta den med PBS vid rumstemperatur i sex timmar. Utför brytningsindexmatchningen genom att nedsänka njuren i sju milliliter 50% KUBIK-R+i ett 14 ml rundbottenrör med skakning i en dag, följt av behandling med sju milliliter CUBIC-R+med skakning vid rumstemperatur i två dagar.Med hjälp av immunfärgningsmetoden visualiserades sympatiska nerver och artärer i en hel njure i 3D-njuravbildning. Dessutom visualiserades onormala njursympatiska nerver efter ischemi-reperfusionsskada. Detta protokoll underlättade också visualisering av sympatiska nerver i hela mjälten.Datakvantifieringsprocessen för den tredimensionella immunofluorescerande färgningen visas här. Dessutom visualiserades uppsamlingskanaler, S1-segmentet av proximala tubuler och glomeruli framgångsrikt i en hel njure. Den undertryckta glomerulomegali, som härrör från läkemedelsadministration i de tidiga stadierna av diabetisk njursjukdom, visualiserades också vid 3D-avbildning.Detta protokoll kan märka den specifika molekylen i en hel njure. Således kan forskare analysera strukturförändring i kärlen eller hitta sällsynta händelser i njurvävnader.

Research

JoVE Journal

Medicine

Three-dimensional Imaging of Nociceptive Intraepidermal Nerve Fibers in Human Skin Biopsies

Tredimensionell avbildning av Nociceptiva Intraepidermal nervfibrer i human hud Biopsier

A punch biopsy of the skin is commonly used to quantify intraepidermal nerve fiber densities (IENFD) for the diagnosis of peripheral polyneuropathy 1,2. ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

Kvantifiering av bröstcancer Cell Invasivt hjälp av en tredimensionell (3D) Modell

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Tredimensionell Samodling modell för Tumör-stromal Interaktion

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Tredimensionell (3D) Tumör Spheroid invasionsanalys

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

Tredimensionell alginat-pärla Culture of Human hypofysadenom Cells

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

Three-Dimensional Printing of a Complex Aortic Anomaly

Tredimensionella utskrift av en komplex aorta anomali

Complex congenital aortic anomalies include diverse types of malformations that may be clinically asymptomatic or present with respiratory or esophageal ...

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Uppskattning av Nephron antal i hela njuren med hjälp av Acid maceration metod

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Three-Dimensional Printing Guide Template Assisted Percutaneous Vertebroplasty (PVP)

Three-Dimensional Printing Guide Template Assisted Percutaneous Vertebroplasty PVP

Tredimensionell utskrift guide mall assisterad perkutan vertebroplasty (PVP)

Percutaneous vertebroplasty (PVP) is considered an effective treatment for the back pain caused by osteoporotic vertebral compression fracture. The ...

Three-Dimensional Collagen Matrix Scaffold Implantation as a Liver Regeneration Strategy

Tredimensionell kollagenmatris byggnadsställning implantation som en leverregenereringsstrategi

Liver diseases are the leading cause of death worldwide. Excessive alcohol consumption, a high-fat diet, and hepatitis C virus infection promote fibrosis, ...

Guided Endodontics: Three-Dimensional Planning and Template-Aided Preparation of Endodontic Access Cavities

Guidad endodonti: Tredimensionell planering och mallstödd beredning av endodontiska åtkomsthåligheter

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, ...