Name: facilitating cerebral organoid culture via lateral soft light illumination
Uploaded: 2022-06-06T14:00:00
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Cette étude a été soutenue par la Fondation des sciences naturelles de la province du Guangdong (subvention n ° 2020A0505100062), le projet de sujets clés de la science et de la technologie de la ville de Guangzhou (subvention n ° 201904020025), la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (subventions n ° 31872800, 32070582, 82101937) et le projet de subvention de recherche postdoctorale de la ville de Guangzhou (à Bangzhu Chen).

Le protocole a été élaboré à la suite de la Déclaration d’Helsinki. L’approbation a été accordée par le Comité d’éthique du troisième hôpital affilié de l’Université médicale de Guangzhou (examen médical et éthique [2021] n ° 022). Avant l’expérience, chaque milieu était préparé selon la formule12 de Juergen A. Knoblich (tableaux supplémentaires 1 à 4), ou un kit d’organoïdes cérébraux disponible dans le commerce était utilisé (voir <stron...

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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+production+of+uniform+human+cerebral+organoids+from+pluripotent+stem+cells.">Robust production of uniform human cerebral organoids from pluripotent stem cells.</a> Life Science Alliance. 3 (5), (2020).</li><li>Camp, J. G., Treutlein, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+development:+Advances+in+mini-brain+technology.">Human development: Advances in mini-brain technology.</a> Nature. 545 (7652), 39-40 (2017).</li><li>Giandomenico, S. L., Sutcliffe, M., Lancaster, M. 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Les organoïdes cérébraux ouvrent de nouvelles voies pour la recherche médicale. De nombreuses applications utiles de cette technologie commencent seulement à être explorées28. Cette recherche a révélé que les résultats du séquençage du transcriptome des organoïdes cérébraux génétiquement malades et des organoïdes cérébraux normaux peuvent refléter les différences entre la maladie et la santé. Par exemple, les résultats de l’analyse des données ARN-seq (<strong class="xf...

Par rapport aux systèmes de culture bidimensionnelle (2D), les systèmes de culture tridimensionnelle (3D) présentent plusieurs avantages, notamment une véritable réplication et une reproduction efficace des structures complexes de certains organes1. Par conséquent, les organoïdes cérébraux sont l’une des méthodes auxiliaires importantes pour les domaines de recherche du développement du cerveau humain et de la maladie2, du dépistage des médicaments et de la thérapie cellulaire.
La culture d’organoïdes cérébraux par la méthode de suspension rotative est propice à leur développement et à leur maturation3. Bien que les systèmes de culture organoïdes cérébrales aient connu un grand succès, ils sont toujours confrontés à des défis critiques qui limitent leur application. Par exemple, la culture manuelle implique des étapes de manipulation compliquées et introduit des obstacles à la réalisation d’applications à grande échelle. De plus, à chaque stade de développement de la culture d’organoïdes cérébraux, des changements dans différents milieux et cytokines sont nécessaires4. Cependant, au stade précoce, les organoïdes ou EB ont des tailles minuscules (environ 200 μm à 300 μm) et sont presque visuellement inaccessibles sans appareil approprié. Inévitablement, une certaine quantité d’échantillons organoïdes précieux est évacuée lorsque le milieu est changé. De nombreuses techniques ont été explorées pour surmonter cela dans d’autres types de cultures organoïdes, et certains exemples incluent l’immersion de puces organoïdes entières dans un milieu de culture pendant 3 jours sans intervention5; ajouter un milieu frais à travers la couche de couverture après l’absorption de l’ancien milieu à l’aide de papier absorbant5; ou l’application de pipelines microfluidiques complexes pour l’échange de fluides 6,7,8. Un autre obstacle rencontré au début de la culture organoïde est la difficulté d’obtenir des observations directes à l’œil nu, ce qui peut provoquer de mauvaises opérations entraînant des dommages et des pertes organoïdes pendant les étapes de transfert organoïdes. Par conséquent, il est nécessaire d’établir un protocole plus réalisable qui facilite le changement de milieu et le transfert d’organoïdes pour générer des organoïdes.
Un fonctionnement optimisé correspondant basé sur des principes d’ingénierie est proposé pour surmonter ces problèmes, ce qui facilite considérablement et commodément de nombreuses procédures organoïdes. Dans la nature, lorsque le soleil brille dans une maison à travers un espace de fenêtre, l’œil nu peut voir la poussière danser dans le faisceau lumineux. En raison de la réflexion diffuse de la lumière du soleil sur la poussière, une partie de la lumière est réfractée dans le globe oculaire pour produire une image visuelle. Inspirée par le principe de ce phénomène 9,10, cette étude a réalisé une lampe à lumière douce et a éclairé les EB latéralement. Il a été constaté que les EB pouvaient être visuellement clairs sans affecter la portée de visualisation. Un écoulement secondaire pointant vers le centre est généré dans le liquide en faisant tourner la plaque de culture en raison des courants de Foucault11. Les EB dispersés à l’origine s’accumulent au centre de la plaque. Sur cette base, et le phénomène selon lequel la vitesse de sédimentation des organoïdes est plus rapide que celle des cellules, une méthode d’utilisation facile de changement de milieu et de transfert d’organoïdes sans centrifugation est proposée. Les organoïdes dans le milieu de culture peuvent être efficacement séparés des cellules libres et des fragments de cellules mortes grâce à cette opération de transfert.
Ici, un protocole facile à utiliser est proposé pour générer des organoïdes cérébraux à partir de cellules souches pluripotentes humaines. La technologie d’exploitation a été optimisée en appliquant le principe d’ingénierie, rendant les opérations en culture 3D aussi simples et réalisables que celles en culture 2D. La méthode d’échange de liquide améliorée et l’opération de transfert organoïde sont également utiles pour d’autres types de culture organoïde et la conception de machines de culture automatiques.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 &#956;m Filter</td>
			<td>NEST Biotechnology, China</td>
			<td>331001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#956;L wide-bore pipette tip</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>9405163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#956;L wide-bore pipette tip</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>9405020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>8057400005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Paraformaldehyde</td>
			<td>Servicebio, China</td>
			<td>G1101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well low adhesion plate</td>
			<td>NEST Biotechnology, China</td>
			<td>703011</td>
			<td>It is used for EBs suspension cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aaccute cell detachment solution</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>07920</td>
			<td>It is used to digest iPSC into single cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AggreWell800 24-well</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>34811</td>
			<td>Microporous culture plate for EBs preparation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Adherence Rinsing Solution</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>07010</td>
			<td>Rinsing solution for cultureware to prevent cell adhesion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27-vit. A supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>Peprotech, USA</td>
			<td>GMP100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Beyotime Biotechnology, China</td>
			<td>ST025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>5810 R</td>
			<td>It can be used for centrifugation of various types of centrifuge tubes, reagent bottles and working plates.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>Shitai Laboratory Equipment, China</td>
			<td>10212020C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Beyotime Biotechnology, China</td>
			<td>C1002</td>
			<td>Used for nuclear staining. After DAPI was combined with double stranded DNA, the maximum excitation wavelength was 364nm and the maximum emission wavelength was 454nm.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM-F12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>11330032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ES-quality FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Paque</td>
			<td>General Electric Company, USA</td>
			<td>17-5442-02</td>
			<td>Isolate the peripheral blood mononuclear cells according to Ficoll-Paque method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sangon Bioteach, China</td>
			<td>A609764</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Chicken IgY&#160; secondary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab150171</td>
			<td>Goat anti-Chicken IgG. Conjugation: Alexa Fluor 647. Ex: 652 nm, Em: 668 nm. Use at 1:500 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG secondary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab150120</td>
			<td>Goat anti-Mouse IgG. Conjugation: Alexa Fluor 594. Ex: 590 nm, Em: 617 nm. Use at 1:500 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG secondary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab150077</td>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG. Conjugation: Alexa Fluor 488. Ex: 495 nm, Em: 519 nm. Use at 1:500 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horizontal shaker</td>
			<td>Servicebio, China</td>
			<td>DS-H200</td>
			<td>Relative centrifugal force (RCF) of 0.11808 x g is more appropriate, according to the manufacturer INFORS HT (Switzerland).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>I9278-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOSR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning, USA</td>
			<td>354277</td>
			<td>Matrigel will solidify in the environment higher than 4 &#176;C, so it should be sub packed at low temperature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM-NEAA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR1</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>85850</td>
			<td>iPSC culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT4 primary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab19857</td>
			<td>Host: Rabbit. Dissolve with 500 &#956;L PBS. Use at 1:200 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathological frozen slicer</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>Leica CM1860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAX6 primary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab78545</td>
			<td>Host: Mouse. Use at 1:100 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>37350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSC dissociation solution</td>
			<td>Beijing Saibei Biotechnology, China</td>
			<td>CA3001500</td>
			<td>Enzyme free dissociation solution can be used for iPSC digestion and passage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sendai Reprogramming Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>A16518</td>
			<td>Establish iPSC according to the protocol of Sendai Reprogramming Kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Glass</td>
			<td>Shitai Laboratory Equipment, China</td>
			<td>188105W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft light lamp</td>
			<td>NUT</td>
			<td>NUT</td>
			<td>A simple self made device, refer to supplementary figure 2 for preparation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STEMdiff Cerebral Organoid Kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>8570</td>
			<td>Contain: 1. EB Formation Medium; 2. Induction Medium; 3. Expansion Medium; 4. Maturation Medium.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STEMdiff Cerebral Organoid Maturation Kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>8571</td>
			<td>Maturation Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sangon Bioteach, China</td>
			<td>A502792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TUJ1 primary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab41489</td>
			<td>Host: Chicken. Use at 1:1000 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline</td>
			<td>Sangon Bioteach, China</td>
			<td>A510146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>72302</td>
			<td>Prepare a 5 mM stock solution in PBS, resuspend 1 mg in 624 &#181;L of PBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weblink</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raw sequencing data</td>
			<td>Genome Sequence Archive (Genomics, Proteomics &#38; Bioinformatics 2021) in National Genomics Data Center (Nucleic Acids Res 2022), China National Center for Bioinformation / Beijing Institute of Genomics, Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>GSA-Human: HRA002430</td>
			<td>https://ngdc.cncb.ac.cn/gsa-human/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

facilitating cerebral organoid culture via lateral soft light illumination

À l’heure actuelle, la technologie de culture organoïde cérébrale est encore compliquée à utiliser et difficile à appliquer à grande échelle. Il est nécessaire de trouver une solution simple et pratique. Par conséquent, un protocole organoïde cérébral plus réalisable est proposé dans la présente étude. Pour résoudre les inconvénients inévitables du changement moyen et du transfert organoïde à un stade précoce, la recherche actuelle optimise la technologie d’exploitation en appliquant le principe d’ingénierie. Une lampe à lumière douce a été adoptée pour éclairer latéralement les échantillons de corps embryoïde (EB), permettant aux EB d’être vus à l’œil nu grâce à l’effet de réflexion diffuse amélioré. En utilisant le principe de l’écoulement secondaire généré par la rotation, les organoïdes se rassemblent vers le centre du puits, ce qui facilite le fonctionnement du changement de milieu ou du transfert organoïde. Par rapport à la cellule dispersée, le corps embryoïde s’installe plus rapidement dans la pipette. En utilisant ce phénomène, la plupart des cellules libres et des fragments de cellules mortes peuvent être éliminés efficacement de manière simple, empêchant les EB d’être endommagés par la centrifugation. Cette étude facilite le fonctionnement de la culture organoïde cérébrale et aide à promouvoir l’application d’organoïdes cérébraux.

La présente étude a induit des CSPi (figure 2B) dans des organoïdes cérébraux (figure 2C). Les EB cultivés au stade précoce ont exprimé le marqueur OCT4 (Figure 2A), ce qui indiquait une bonne pluripotence. Dans la dernière étape, les EB se sont développés en organoïdes cérébraux matures (Figure 2D). La recherche a cultivé des CSPi d’individus normaux en bonne santé et de patients att...

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Facilitating Cerebral Organoid Culture via Lateral Soft Light Illumination

Les organoïdes cérébraux offrent des possibilités sans précédent d’étudier le développement des organes et la pathologie des maladies humaines. Bien qu’un grand succès ait été obtenu avec les systèmes de culture organoïdes cérébrales, il existe encore des difficultés opérationnelles dans l’application de cette technologie. Le présent protocole décrit une procédure organoïde cérébrale qui facilite le changement de milieu et le transfert organoïde.

Faciliter la culture organoïde cérébrale grâce à l’éclairage latéral à lumière douce

At present, cerebral organoid culture technology is still complicated to operate and difficult to apply on a large scale. It is necessary to find a simple ...

Le protocole facilite le fonctionnement de la culture d’organoïdes cérébraux et aide à promouvoir l’application d’organoïdes cérébraux. L’organoïde à un stade précoce peut être vu à l’œil nu en utilisant une lampe à lumière douce latérale qui est pratique pour de nombreuses opérations. Les méthodes améliorées de changement de milieu et les opérations de transfert organoïde sont également utiles pour d’autres types de cultures organoïdes et la conception de machines de cultures automatiques.Pour commencer, cultivez les iPSC avec un milieu mTeSR1 dans une boîte de Petri de 35 millimètres recouverte de matrigel et changez le milieu tous les jours. La densité de croissance iPSC ne doit pas dépasser 75% Ensuite, pipetez le milieu mTeSR1 des iPSC et lavez-le deux fois avec un millimètre de PBS. Après avoir pipeté le PBS, ajoutez 300 microlitres de solution de détachement cellulaire pour digérer les CSPi en cellules individuelles pendant trois à quatre minutes à 37 degrés Celsius.Plus tard, remettez en suspension les cellules dans deux millimètres de milieu de formation EB et centrifugez l’échantillon pendant cinq minutes à 300 fois g. Traiter la plaque spécialisée de 24 puits avec 500 microlitres par puits de solution de rinçage antiadhésive pendant cinq minutes. Maintenant, ressuspendez les cellules dans le milieu de formation EB contenant l’inhibiteur de rho kinase Y27632.Après avoir retiré la solution de rinçage antiadhésive, rincez chaque puits avec deux millilitres de milieu de formation EB. Ensuite, ajoutez les cellules aux 24 plaques de puits spécialisées à une densité de trois fois 10 aux sixièmes cellules par puits et centrifugez la plaque à 100 fois g pendant deux minutes à température ambiante. Répartir uniformément les cellules dans chaque chambre au bas de la plaque.Incuber les échantillons à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone pendant 24 heures. Si la centrifugation n’a pas été utilisée à l’étape précédente, incuber pendant 36 heures et maintenir l’échantillon stable. Utilisez un panneau acrylique transparent d’une épaisseur de 0,3 à 0,5 centimètres de la taille d’un papier A5 et collez des tampons blancs à l’avant et à l’arrière de la plaque acrylique.Ensuite, installez une rangée de lumières blanches LED sur le bord de la plaque afin que les lumières puissent entrer par le côté de la plaque acrylique, puis tirer en parallèle. Maintenant, préparez une nouvelle plaque à faible adhérence de six puits et ajoutez deux millilitres de milieu de formation EB à chaque puits. Après avoir retiré les EB avec le milieu à l’aide de la pointe de pipette à alésage large de 1000 microlitres, transférez environ 100 EB par puits vers la plaque de faible adhérence de six puits.Pour remplacer le milieu de formation EB tous les jours par le même volume de milieu frais, induire un flux tourbillonnant en faisant pivoter la parabole le long d’une orbite circulaire. Les EB ou organoïdes convergent vers le centre du puits en raison du flux secondaire généré par la rotation. Aspirer l’ancien milieu en canalisant lentement jusqu’au bord du puits.Ne pas sucer trop fort, sinon les EB seront enlevés ensemble. Ensuite, ajoutez de nouveaux médias pour remettre en suspension les EB. Pour l’induction neuronale, préparez une nouvelle plaque à six puits à faible adhérence avec trois millilitres de milieu d’induction neuronal par puits.Allumez la lumière douce latérale et éteignez les autres sources de lumière intérieure. Maintenant, transférez les EB dans la plaque à six puits avec un milieu d’induction neuronal ajouté en utilisant une pointe de pipette à bouche large pour aspirer à la fois les EB et le milieu de culture. Ensuite, tenez la pipette à la verticale.Les EB s’enfonceront progressivement sous la gravité et convergeront vers l’embouchure de la pointe de la pipette. Lorsque la bouche de la pointe de la pipette touche à nouveau la surface du liquide et, en raison de la tension superficielle du liquide, les EB s’enfoncent rapidement dans le milieu. Incuber les échantillons à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone pendant 24 heures.Placez la matrice membranaire dans un réfrigérateur à quatre degrés Celsius pendant 60 minutes pour la dissoudre. Après avoir allumé la lumière douce latérale, éteignez la source lumineuse sur le dessus de la console et maintenez la matrice de membrane sur la glace pour éviter la solidification. Transférez une petite quantité d’EB dans un plat de 60 millimètres contenant un milieu d’expansion frais pour faciliter l’élimination d’un seul EB. À l’aide d’une pointe de pipette de 200 microlitres de large, aspirez un seul EB contenant environ 10 microlitres à chaque fois, puis faites des gouttelettes en l’ajoutant au fond de la plaque de six puits.Utilisez cinq gouttelettes par puits. Ajouter 15 microlitres de la matrice membranaire à chaque EB contenant de la goutte. Mélangez et incorporez rapidement la boule EB au centre de la gouttelette.Laissez les gouttelettes contenant des EB se solidifier en plaçant la plaque de six puits dans un incubateur de 37 degrés Celsius pendant 30 minutes. Ensuite, ajoutez trois millilitres de milieu d’expansion à chaque puits et faites sauter doucement les EB intégrés à la matrice pour les suspendre et incuber pendant trois jours. Pour la maturation organoïde, retirez doucement le milieu d’origine et ajoutez trois millilitres de milieu de maturation à chaque puits.Placez la plaque organoïde sur un agitateur horizontal dans un incubateur à 37 degrés Celsius et continuez à faire pivoter la culture horizontalement. Changez le milieu de maturation frais tous les deux à trois jours. En raison de la gravité et de la densité relativement plus élevée que le milieu, les EB remis en suspension vont progressivement couler.Par conséquent, les EB peuvent être facilement transférés. Par rapport aux EB, les cellules libres et les fragments de cellules mortes coulent plus lentement. La plupart des cellules libres et des fragments de cellules mortes peuvent ainsi être éliminés.Les EB cultivés au stade précoce ont exprimé le marqueur OCT4 qui indiquait une bonne pluripotence. Dans la dernière étape, les EB se sont développés en organoïdes cérébraux matures. Les organoïdes cérébraux matures étaient positifs pour le marqueur des cellules progénitrices apicales PAX6 et le marqueur spécifique des neurones, la tubuline J1. Les CSPi d’individus en bonne santé et de patients atteints de SCA3 ont été cultivés pour devenir des organoïdes.Les profils d’expression génique du groupe organoïde cérébral normal et du groupe organoïde cérébral SCA3 ont montré des différences significatives dans les voies telles que le transport des neurotransmetteurs, la formation de synapses et la régulation. Lors de l’intégration de l’EB avec la matrice de la membrane basale, les temps de fonctionnement ne doivent pas être trop longs pour éviter le dessèchement des EB. Il est recommandé de protéger rapidement.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Facilitating Cerebral Organoid Culture via Lateral Soft Light Illumination

Light-mediated Formation and Patterning of Hydrogels for Cell Culture Applications

Formation et Patterning Light-médiée hydrogels pour la culture cellulaire Applications

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