Name: facilitating cerebral organoid culture via lateral soft light illumination
Uploaded: 2022-06-06T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Facilitating Cerebral Organoid Culture via Lateral Soft Light Illumination at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי הקרן למדעי הטבע של מחוז גואנגדונג (מענק מס ' 2020A0505100062), פרויקט נושאי מפתח למדע וטכנולוגיה של העיר גואנגג'ואו (מענק מס '201904020025), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס '31872800, 32070582, 82101937), ופרויקט מענק המחקר הפוסט-דוקטורט של העיר גואנגג'ואו (לבנגז'ו צ'ן).

הפרוטוקול נערך בעקבות הצהרת הלסינקי. האישור ניתן על ידי ועדת האתיקה של בית החולים המסונף השלישי של האוניברסיטה הרפואית של גואנגג'ואו (סקירה רפואית ואתית [2021] מס '022). לפני הניסוי, כל מדיום הוכן על פי הנוסחה12 של יורגן א. קנובליך (טבלאות משלימות 1-4), או שנעשה שימוש בערכת אור...

<ol>
	<li>Jensen, C., Teng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+it+time+to+start+transitioning+from+2D+to+3D+cell+culture.">Is it time to start transitioning from 2D to 3D cell culture.</a> Frontiers in Molecular Biosciences. 7 (33), (2020).</li><li>Quadrato, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+diversity+and+network+dynamics+in+photosensitive+human+brain+organoids.">Cell diversity and network dynamics in photosensitive human brain organoids.</a> Nature. 545 (7652), 48-53 (2017).</li><li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly.">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501 (7467), 373-379 (2013).</li><li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.Brain-region-specific+organoids+using+mini-bioreactors+for+modeling+ZIKV+exposure.">et al.Brain-region-specific organoids using mini-bioreactors for modeling ZIKV exposure.</a> Cell. 165 (5), 1238-1254 (2016).</li><li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+organoids+analyzed+on+microwell+arrays+predict+drug+responses+of+patients+within+a+week.">Lung cancer organoids analyzed on microwell arrays predict drug responses of patients within a week.</a> Nature Communications. 12 (1), 2581 (2021).</li><li>Jung, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+one-stop+microfluidic-based+lung+cancer+organoid+culture+platform+for+testing+drug+sensitivity.">A one-stop microfluidic-based lung cancer organoid culture platform for testing drug sensitivity.</a> Lab on a Chip. 19 (17), 2854-2865 (2019).</li><li>Jalili-Firoozinezhad, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+complex+human+gut+microbiome+cultured+in+an+anaerobic+intestine-on-a-chip.">A complex human gut microbiome cultured in an anaerobic intestine-on-a-chip.</a> Nature Biomedical Engineering. 3 (7), 520-531 (2019).</li><li>Gkatzis, K., Taghizadeh, S., Huh, D., Stainier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+three-dimensional+organoids+and+lung-on-a-chip+methods+to+study+lung+development,+regeneration+and+disease.">Use of three-dimensional organoids and lung-on-a-chip methods to study lung development, regeneration and disease.</a> The European Respiratory Journal. 52 (5), 1800876 (2018).</li><li>Ye, Y., Pui, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+nanoparticles+suspended+in+a+light+scattering+medium.">Detection of nanoparticles suspended in a light scattering medium.</a> Scientific Reports. 11 (1), 20268 (2021).</li><li>Staven, V., Waaseth, M., Wang, S., Gr&#248;nlie, I., Tho, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+the+tyndall+effect+for+enhanced+visual+detection+of+particles+in+compatibility+testing+of+intravenous+fluids:+Validity+and+reliability.">Utilization of the tyndall effect for enhanced visual detection of particles in compatibility testing of intravenous fluids: Validity and reliability.</a> PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology. 69 (2), 270-283 (2015).</li><li>Fukuma, Y., Inui, T., Imashiro, C., Kurashina, Y., Takemura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homogenization+of+initial+cell+distribution+by+secondary+flow+of+medium+improves+cell+culture+efficiency.">Homogenization of initial cell distribution by secondary flow of medium improves cell culture efficiency.</a> PloS One. 15 (7), 0235827 (2020).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+cerebral+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of cerebral organoids from human pluripotent stem cells.</a> Nature Protocols. 9 (10), 2329-2340 (2014).</li><li>Ouyang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9-targeted+deletion+of+polyglutamine+in+spinocerebellar+ataxia+type+3-derived+induced+pluripotent+stem+cells.">CRISPR/Cas9-targeted deletion of polyglutamine in spinocerebellar ataxia type 3-derived induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cells and Development. 27 (11), 756-770 (2018).</li><li>Xian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+safety+and+effectiveness+of+genetically+corrected+iPSCs+derived+from+&#946;-thalassaemia+patients+in+nonmyeloablative+&#946;-thalassaemic+mice.">The safety and effectiveness of genetically corrected iPSCs derived from &#946;-thalassaemia patients in nonmyeloablative &#946;-thalassaemic mice.</a> Stem Cell Research and Therapy. 11 (1), 288 (2020).</li><li>Kanof, M. E., Smith, P. D., Zola, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+whole+mononuclear+cells+from+peripheral+blood+and+cord+blood.">Isolation of whole mononuclear cells from peripheral blood and cord blood.</a> Current Protocols in Immunology. , (2001).</li><li>Knight, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+induction+of+singular+neural+rosette+emergence+within+hPSC-derived+tissues.">Engineering induction of singular neural rosette emergence within hPSC-derived tissues.</a> eLife. 7, 37549 (2018).</li><li>Rieder, H. L., Smithwick, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RPM+or+RCF.">RPM or RCF.</a> The American Review of Respiratory Disease. 132 (6), 1371 (1985).</li><li>Dole, V. P., Cotzias, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nomogram+for+the+calculation+of+relative+centrifugal+force.">A nomogram for the calculation of relative centrifugal force.</a> Science. 113 (2941), 552-553 (1951).</li><li>Velasco, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Individual+brain+organoids+reproducibly+form+cell+diversity+of+the+human+cerebral+cortex.">Individual brain organoids reproducibly form cell diversity of the human cerebral cortex.</a> Nature. 570 (7762), 523-527 (2019).</li><li>Jacob, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pluripotent+stem+cell-derived+neural+cells+and+brain+organoids+reveal+SARS-CoV-2+neurotropism+predominates+in+choroid+plexus+epithelium.">Human pluripotent stem cell-derived neural cells and brain organoids reveal SARS-CoV-2 neurotropism predominates in choroid plexus epithelium.</a> Cell Stem Cell. 27 (6), 937-950 (2020).</li><li>Kathuria, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomic+landscape+and+functional+characterization+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cerebral+organoids+in+schizophrenia.">Transcriptomic landscape and functional characterization of induced pluripotent stem cell-derived cerebral organoids in schizophrenia.</a> JAMA Psychiatry. 77 (7), 745-754 (2020).</li><li>Pa&#351;ca, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+cortical+neurons+and+astrocytes+from+human+pluripotent+stem+cells+in+3D+culture.">Functional cortical neurons and astrocytes from human pluripotent stem cells in 3D culture.</a> Nature Methods. 12 (7), 671-678 (2015).</li><li>Hu, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+follows+developmental+principles+but+with+variable+potency.">Neural differentiation of human induced pluripotent stem cells follows developmental principles but with variable potency.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (9), 4335-4340 (2010).</li><li>Tang, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DSCAM/PAK1+pathway+suppression+reverses+neurogenesis+deficits+in+iPSC-derived+cerebral+organoids+from+patients+with+Down+syndrome.">DSCAM/PAK1 pathway suppression reverses neurogenesis deficits in iPSC-derived cerebral organoids from patients with Down syndrome.</a> The Journal of Clinical Investigation. 131 (12), 135763 (2021).</li><li>Costa, M., Paulson, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+understanding+Machado-Joseph+disease.">Toward understanding Machado-Joseph disease.</a> Progress in Neurobiology. 97 (2), 239-257 (2012).</li><li>Trapnell, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcript+assembly+and+quantification+by+RNA-Seq+reveals+unannotated+transcripts+and+isoform+switching+during+cell+differentiation.">Transcript assembly and quantification by RNA-Seq reveals unannotated transcripts and isoform switching during cell differentiation.</a> Nature Biotechnology. 28 (5), 511-515 (2010).</li><li>Love, M. I., Huber, W., Anders, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderated+estimation+of+fold+change+and+dispersion+for+RNA-seq+data+with+DESeq2.">Moderated estimation of fold change and dispersion for RNA-seq data with DESeq2.</a> Genome Biology. 15 (12), 550 (2014).</li><li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+development+and+disease+with+organoids.">Modeling development and disease with organoids.</a> Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).</li><li>Klockgether, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+related+axonal+neuropathy+in+spinocerebellar+ataxia+type+3/Machado-Joseph+disease+(SCA3/MJD).">Age related axonal neuropathy in spinocerebellar ataxia type 3/Machado-Joseph disease (SCA3/MJD).</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 66 (2), 222-224 (1999).</li><li>Khan, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanded+polyglutamines+impair+synaptic+transmission+and+ubiquitin-proteasome+system+in+Caenorhabditis+elegans.">Expanded polyglutamines impair synaptic transmission and ubiquitin-proteasome system in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Neurochemistry. 98 (2), 576-587 (2006).</li><li>Teixeira-Castro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonergic+signalling+suppresses+ataxin+3+aggregation+and+neurotoxicity+in+animal+models+of+Machado-Joseph+disease.">Serotonergic signalling suppresses ataxin 3 aggregation and neurotoxicity in animal models of Machado-Joseph disease.</a> Brain: A Journal of Neurology. 138, 3221-3237 (2015).</li><li>Joers, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurochemical+abnormalities+in+premanifest+and+early+spinocerebellar+ataxias.">Neurochemical abnormalities in premanifest and early spinocerebellar ataxias.</a> Annals of Neurology. 83 (4), 816-829 (2018).</li><li>Sivitilli, A., Ghiasi, P., Attisano, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+phenotypically+uniform+human+cerebral+organoids+from+pluripotent+stem+cells.">Production of phenotypically uniform human cerebral organoids from pluripotent stem cells.</a> Bio-protocol. 11 (8), 3985 (2021).</li><li>Sivitilli, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+production+of+uniform+human+cerebral+organoids+from+pluripotent+stem+cells.">Robust production of uniform human cerebral organoids from pluripotent stem cells.</a> Life Science Alliance. 3 (5), (2020).</li><li>Camp, J. G., Treutlein, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+development:+Advances+in+mini-brain+technology.">Human development: Advances in mini-brain technology.</a> Nature. 545 (7652), 39-40 (2017).</li><li>Giandomenico, S. L., Sutcliffe, M., Lancaster, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+long-term+culture+of+advanced+cerebral+organoids+for+studying+later+stages+of+neural+development.">Generation and long-term culture of advanced cerebral organoids for studying later stages of neural development.</a> Nature Protocols. 16 (2), 579-602 (2021).</li><li>Yoon, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+of+human+cortical+organoid+generation.">Reliability of human cortical organoid generation.</a> Nature Methods. 16 (1), 75-78 (2019).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organogenesis+in+a+dish:+Modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies.">Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125 (2014).</li><li>Driehuis, E., Kretzschmar, K., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+cancer+organoids+for+drug-screening+applications.">Establishment of patient-derived cancer organoids for drug-screening applications.</a> Nature Protocols. 15 (10), 3380-3409 (2020).</li></ol>

אורגנואידים מוחיים פותחים אפיקים חדשים למחקר רפואי. יישומים שימושיים רבים של טכנולוגיה זו מתחילים להיחקר רק28. מחקר זה מצא כי תוצאות ריצוף השעתוק של אורגנואידים מוחיים חולים גנטית ואורגנואידים מוחיים רגילים יכולות לשקף את ההבדלים בין מחלה לבריאות. לדוגמה, תוצאות ניתוח הנתונ?...

בהשוואה למערכות תרביות דו-ממדיות (דו-ממדיות), למערכות תרביות תלת-ממדיות (תלת-ממדיות) יש מספר יתרונות, כולל שכפול אמיתי ושחזור יעיל של מבנים מורכבים של איברים מסוימים1. לכן, אורגנואידים מוחיים הם אחת משיטות העזר החשובות לתחומי המחקר של התפתחות המוח האנושי ומחלות2, בדיקת תרופות וטיפול בתאים.
גידול אורגנואידים מוחיים בשיטת ההשעיה המסתובבת תורם להתפתחותם ולהבשלתם3. למרות שמערכות תרביות אורגנואידיות מוחיות זכו להצלחה רבה, הן עדיין מתמודדות עם אתגרים קריטיים המגבילים את יישומן. לדוגמה, טיפוח ידני כרוך בשלבי מניפולציה מסובכים ומציג מכשולים להשגת יישומים בקנה מידה גדול. בנוסף, בכל שלב התפתחותי בתרבית האורגנואידים המוחיים, יש צורך בשינויים במדיה ובציטוקינים שונים4. עם זאת, בשלב המוקדם, האורגנואידים או ה- EBs הם בעלי גדלים זעירים (כ-200 מיקרומטר עד 300 מיקרומטר) והם כמעט בלתי נגישים מבחינה חזותית ללא מנגנון מתאים. באופן בלתי נמנע, כמות מסוימת של דגימות אורגנואידיות יקרות נשטפות כאשר המדיום משתנה. טכניקות רבות נחקרו כדי להתגבר על כך בסוגים אחרים של תרביות אורגנואידיות, וכמה דוגמאות כוללות טבילה של שבבי אורגנואידים שלמים במדיום תרבית למשך 3 ימים ללא התערבות5; הוספת מדיום טרי דרך הכיסוי לאחר שהמדיום הישן נספג באמצעות נייר סופג5; או החלת צינורות מיקרופלואידיים מורכבים להחלפת נוזלים 6,7,8. מכשול נוסף שנתקל בו בשלב המוקדם של גידול האורגנואידים הוא הקושי להשיג תצפיות ישירות בעין בלתי, מה שעלול לגרום לפעולות לקויות שמובילות לנזק ואובדן אורגנואידים במהלך שלבי העברת האורגנואידים. לכן, יש צורך להקים פרוטוקול ריאלי יותר המאפשר שינוי בינוני והעברת אורגנואידים כדי ליצור אורגנואידים.
פעולה מותאמת המתאימה המבוססת על עקרונות הנדסיים מוצעת כדי להתגבר על בעיות אלה, אשר באופן משמעותי ונוח מקל על הליכים אורגנואידים רבים. בטבע, כאשר השמש זורחת לתוך בית דרך מרווח חלון, העין הבלתי יכולה לראות את האבק רוקד בקרן האור. בשל ההשתקפות המפוזרת של אור השמש על האבק, חלק מהאור נשבר לתוך גלגל העין כדי לייצר תמונה חזותית. בהשראת העיקרון של תופעה זו 9,10, מחקר זה יצר מנורת אור רכה והאיר את ה- EBs לרוחב. נמצא כי EBs יכולים להיות ברורים מבחינה ויזואלית מבלי להשפיע על היקף הצפייה. זרימה משנית המצביעה על המרכז נוצרת בנוזל על ידי סיבוב צלחת התרבית עקב זרמי אדי11. EBs מפוזרים במקור מצטברים במרכז הצלחת. בהתבסס על זה, ועל התופעה כי מהירות השקיעה של אורגנואידים היא מהירה יותר מזו של תאים, מוצעת שיטת פעולה קלה של שינוי בינוני והעברה אורגנואידית ללא צנטריפוגה. האורגנואידים במדיום התרבית יכולים להיות מופרדים ביעילות מתאים חופשיים ושברי תאים מתים באמצעות פעולת העברה זו.
כאן, פרוטוקול קל לתפעול מוצע כדי ליצור אורגנואידים מוחיים מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים. טכנולוגיית הפעולה עברה אופטימיזציה על ידי יישום העיקרון ההנדסי, מה שהופך את הפעולות בתרבות התלת-ממדית לפשוטות וישימות כמו אלה שבתרבות הדו-ממדית. שיטת החלפת הנוזלים המשופרת ופעולת העברת האורגנואידים מועילות גם לסוגים אחרים של תרבית אורגנואידים ולתכנון של מכונות תרבית אוטומטיות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 &#956;m Filter</td>
			<td>NEST Biotechnology, China</td>
			<td>331001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#956;L wide-bore pipette tip</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>9405163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#956;L wide-bore pipette tip</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>9405020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>8057400005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Paraformaldehyde</td>
			<td>Servicebio, China</td>
			<td>G1101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well low adhesion plate</td>
			<td>NEST Biotechnology, China</td>
			<td>703011</td>
			<td>It is used for EBs suspension cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aaccute cell detachment solution</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>07920</td>
			<td>It is used to digest iPSC into single cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AggreWell800 24-well</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>34811</td>
			<td>Microporous culture plate for EBs preparation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Adherence Rinsing Solution</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>07010</td>
			<td>Rinsing solution for cultureware to prevent cell adhesion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27-vit. A supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>Peprotech, USA</td>
			<td>GMP100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Beyotime Biotechnology, China</td>
			<td>ST025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>5810 R</td>
			<td>It can be used for centrifugation of various types of centrifuge tubes, reagent bottles and working plates.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>Shitai Laboratory Equipment, China</td>
			<td>10212020C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Beyotime Biotechnology, China</td>
			<td>C1002</td>
			<td>Used for nuclear staining. After DAPI was combined with double stranded DNA, the maximum excitation wavelength was 364nm and the maximum emission wavelength was 454nm.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM-F12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>11330032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ES-quality FBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Paque</td>
			<td>General Electric Company, USA</td>
			<td>17-5442-02</td>
			<td>Isolate the peripheral blood mononuclear cells according to Ficoll-Paque method.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sangon Bioteach, China</td>
			<td>A609764</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Chicken IgY&#160; secondary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab150171</td>
			<td>Goat anti-Chicken IgG. Conjugation: Alexa Fluor 647. Ex: 652 nm, Em: 668 nm. Use at 1:500 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG secondary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab150120</td>
			<td>Goat anti-Mouse IgG. Conjugation: Alexa Fluor 594. Ex: 590 nm, Em: 617 nm. Use at 1:500 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG secondary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab150077</td>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG. Conjugation: Alexa Fluor 488. Ex: 495 nm, Em: 519 nm. Use at 1:500 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horizontal shaker</td>
			<td>Servicebio, China</td>
			<td>DS-H200</td>
			<td>Relative centrifugal force (RCF) of 0.11808 x g is more appropriate, according to the manufacturer INFORS HT (Switzerland).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>I9278-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOSR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning, USA</td>
			<td>354277</td>
			<td>Matrigel will solidify in the environment higher than 4 &#176;C, so it should be sub packed at low temperature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM-NEAA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR1</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>85850</td>
			<td>iPSC culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT4 primary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab19857</td>
			<td>Host: Rabbit. Dissolve with 500 &#956;L PBS. Use at 1:200 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathological frozen slicer</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>Leica CM1860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAX6 primary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab78545</td>
			<td>Host: Mouse. Use at 1:100 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>37350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSC dissociation solution</td>
			<td>Beijing Saibei Biotechnology, China</td>
			<td>CA3001500</td>
			<td>Enzyme free dissociation solution can be used for iPSC digestion and passage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sendai Reprogramming Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>A16518</td>
			<td>Establish iPSC according to the protocol of Sendai Reprogramming Kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Glass</td>
			<td>Shitai Laboratory Equipment, China</td>
			<td>188105W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft light lamp</td>
			<td>NUT</td>
			<td>NUT</td>
			<td>A simple self made device, refer to supplementary figure 2 for preparation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STEMdiff Cerebral Organoid Kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>8570</td>
			<td>Contain: 1. EB Formation Medium; 2. Induction Medium; 3. Expansion Medium; 4. Maturation Medium.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STEMdiff Cerebral Organoid Maturation Kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>8571</td>
			<td>Maturation Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sangon Bioteach, China</td>
			<td>A502792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TUJ1 primary antibody</td>
			<td>Abcam, UK</td>
			<td>ab41489</td>
			<td>Host: Chicken. Use at 1:1000 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline</td>
			<td>Sangon Bioteach, China</td>
			<td>A510146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Canada</td>
			<td>72302</td>
			<td>Prepare a 5 mM stock solution in PBS, resuspend 1 mg in 624 &#181;L of PBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weblink</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raw sequencing data</td>
			<td>Genome Sequence Archive (Genomics, Proteomics &#38; Bioinformatics 2021) in National Genomics Data Center (Nucleic Acids Res 2022), China National Center for Bioinformation / Beijing Institute of Genomics, Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>GSA-Human: HRA002430</td>
			<td>https://ngdc.cncb.ac.cn/gsa-human/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

facilitating cerebral organoid culture via lateral soft light illumination

נכון לעכשיו, טכנולוגיית תרבית אורגנואידית מוחית עדיין מסובכת לתפעול וקשה ליישום בקנה מידה גדול. יש צורך למצוא פתרון פשוט ומעשי. לכן, פרוטוקול אורגנואידים מוחי אפשרי יותר מוצע במחקר הנוכחי. כדי לפתור את אי הנוחות הבלתי נמנעת בשינוי בינוני והעברה אורגנואידית בשלב מוקדם, המחקר הנוכחי מייעל את טכנולוגיית הפעולה על ידי יישום העיקרון ההנדסי. מנורת אור רכה אומצה כדי להאיר לרוחב את דגימות הגוף העוברי (EB), מה שמאפשר לראות את ה-EBs בעין בלתי דרך אפקט ההשתקפות המפוזרת המשופרת. באמצעות העיקרון של זרימה משנית שנוצרת על ידי סיבוב, האורגנואידים מתאספים לכיוון מרכז הבאר, מה שמקל על פעולת השינוי הבינוני או העברת האורגנואידים. בהשוואה לתא המפוזר, הגוף העוברי מתיישב מהר יותר בפיפטה. באמצעות תופעה זו, ניתן להסיר ביעילות את רוב התאים החופשיים ואת שברי התאים המתים בצורה פשוטה, ולמנוע מ-EBs לגרום נזק מצנטריפוגה. מחקר זה מקל על הפעולה של תרבית אורגנואידים מוחית ומסייע לקדם את היישום של אורגנואידים במוח.

המחקר הנוכחי גרם ל-iPSCs (איור 2B) לתוך אורגנואידים מוחיים (איור 2C). ה-EBs שטופחו בשלב המוקדם ביטאו את סמן OCT4 (איור 2A), שהצביע על פלוריפוטנטיות טובה. בשלב מאוחר יותר, ה-EBs התפתחו לאורגנואידים מוחיים בוגרים (איור 2D). המחקר טיפח iPSCs מאנשי...

Watch this Scientific Journal Video about Facilitating Cerebral Organoid Culture via Lateral Soft Light Illumination at JoVE.com

Facilitating Cerebral Organoid Culture via Lateral Soft Light Illumination

אורגנואידים מוחיים מספקים הזדמנויות חסרות תקדים לחקר התפתחות איברים ופתולוגיה של מחלות אנושיות. למרות שהצלחה רבה הושגה עם מערכות תרבית אורגנואידיות מוחיות, עדיין ישנם קשיים תפעוליים ביישום טכנולוגיה זו. הפרוטוקול הנוכחי מתאר הליך אורגנואידי מוחי המאפשר שינוי בינוני והעברת אורגנואידים.

הקלה על תרבית אורגנואידית מוחית באמצעות תאורת אור רך לרוחב

At present, cerebral organoid culture technology is still complicated to operate and difficult to apply on a large scale. It is necessary to find a simple ...

הפרוטוקול מקל על פעולתה של תרבית אורגנואידים מוחית ומסייע לקדם את היישום של אורגנואידים במוח. את האורגנואיד בשלב מוקדם יותר ניתן לראות בעין בלתי באמצעות מנורת אור רכה לרוחב הנוחה לפעולות רבות. שיטות שינוי המדיום המשופרות ופעולות העברת האורגנואידים מועילות גם לסוגים אחרים של תרביות אורגנואידים ולתכנון מכונות תרביות אוטומטיות.כדי להתחיל, תרבית את iPSCs עם mTeSR1 בינוני ב matrigel כיסה 35 מילימטר צלחת פטרי ולשנות את המדיום מדי יום. צפיפות הצמיחה של iPSC לא תעלה על 75% לאחר מכן, פיפטו את מדיום mTeSR1 מה-iPSCs ושטפו אותו פעמיים עם מילימטר אחד של PBS. לאחר פירוק ה-PBS, הוסיפו 300 מיקרוליטרים של תמיסת ניתוק תאים כדי לעכל את ה-iPSCs לתאים בודדים למשך שלוש עד ארבע דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.מאוחר יותר, החייאת התאים בשני מילימטרים של מדיום היווצרות EB וצנטריפוגה של הדגימה במשך חמש דקות ב 300 פעמים גרם. יש לטפל בצלחת המיוחדת של 24 קידוחים עם 500 מיקרוליטרים לכל באר של תמיסת שטיפה נגד הדבקות למשך חמש דקות. כעת, בצעו החייאה של התאים במדיום היווצרות ה-EB המכיל את מעכב ה-Rho kinase Y27632.לאחר הסרת תמיסת השטיפה נגד הדבקות, יש לשטוף כל באר בשני מיליליטרים של מדיום היווצרות EB. לאחר מכן, מוסיפים את התאים ל-24 לוחות הבאר המיוחדים בצפיפות של שלוש פעמים 10 עד התאים השישיים לכל באר וצנטריפוגות הצלחת ב-100 פעמים גרם למשך שתי דקות בטמפרטורת החדר. מפזרים באופן אחיד את התאים בכל תא בתחתית הצלחת.הדגירה של הדגימות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני למשך 24 שעות. אם לא נעשה שימוש בצנטריפוגה בשלב הקודם, דגרו במשך 36 שעות ושמרו על יציבות הדגימה. השתמשו בלוח אקרילי שקוף בעובי של 0.3 עד 0.5 ס"מ בגודל של נייר A5 והדביקו רפידות לבנות בחלק הקדמי והאחורי של הצלחת האקרילית.לאחר מכן, התקן שורה של נורות LED לבנות על קצה הצלחת, כך שהאורות יוכלו להיכנס מהצד של הלוחית האקרילית ולאחר מכן לירות החוצה במקביל. כעת, הכינו צלחת הידבקות נמוכה חדשה של שש בארות והוסיפו שני מיליליטרים של מדיום היווצרות EB לכל באר. לאחר הסרת ה- EBs יחד עם המדיום באמצעות 1000 מיקרוליטרים רחבים נשאו קצה פיפטה, העבר כ -100 EBs לכל באר לצלחת ההדבקה הנמוכה של ששת הקידוחים.כדי להחליף את מדיום היווצרות ה-EB מדי יום באותו נפח של מדיום טרי, לגרום לזרימת מערבולת על ידי סיבוב המנה לאורך מסלול מעגלי. ה- EBs או האורגנואידים מתכנסים למרכז הבאר בשל הזרימה המשנית הנוצרת באמצעות סיבוב. שאפו למדיום הישן על ידי צנרת לקצה הבאר באיטיות.אל תמצוץ חזק מדי, אחרת ה- EBs יוסרו יחד. לאחר מכן, הוסף מדיה טרייה כדי להחיות את ה- EBs. עבור אינדוקציה עצבית, הכינו צלחת חדשה של שישה לוחות הידבקות נמוכים היטב עם שלושה מיליליטרים של מדיום אינדוקציה עצבית לכל באר.הדליקו את האור הרך לרוחב וכבו מקורות תאורה פנימיים אחרים. כעת העבירו את ה-EBs לצלחת ששת הקידוחים עם תוספת של מדיום אינדוקציה עצבית על ידי שימוש בקצה פיפטה רחב לפה כדי למצוץ גם את ה-EBs וגם את מדיום התרבית. לאחר מכן, החזיקו את הפיפטה זקופה.ה-EBs ישקעו בהדרגה תחת כוח הכבידה ויתכנסו לעבר פיו של קצה הפיפטה. כאשר הפה של קצה הפיפטה נוגע שוב במשטח הנוזלי, ובשל מתח פני השטח הנוזלי, ה- EBs שוקעים במהירות לתוך המדיום. הדגירה של הדגימות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני למשך 24 שעות.מניחים את מטריצת הממברנה במקרר של ארבע מעלות צלזיוס למשך 60 דקות כדי להתמוסס. לאחר הפעלת האור הרך לרוחב, כבו את מקור האור בחלק העליון של הקונסולה ושמרו על מטריצת הממברנה על קרח כדי למנוע התמצקות. העבר כמות קטנה של EBs למנה של 60 מילימטר המכילה מדיום הרחבה טרי כדי להקל על הסרת EB יחיד. באמצעות קצה פיפטה רחב של 200 מיקרוליטרים, מוצצים EB יחיד המכיל כ-10 מיקרוליטרים בינוניים בכל פעם, ולאחר מכן יוצרים טיפות על ידי הוספתו לתחתית צלחת הבאר של ששת הקידוחים.השתמש בחמש טיפות לכל באר. הוסף 15 מיקרוליטרים של מטריצת הממברנה לכל EB המכיל טיפה. ערבבו והטמיעו במהירות את כדור ה-EB במרכז הטיפה.אפשרו לטיפות המכילות EBs להתמצק על ידי הצבת צלחת הבאר שש לחממה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. לאחר מכן, הוסיפו שלושה מיליליטרים של מדיום ההתפשטות לכל באר ופוצצו בעדינות את ה-EBs המשובצים במטריצה כדי להשעות אותם ולדגום במשך שלושה ימים. להבשלה אורגנואידית, הסר בעדינות את המדיום המקורי והוסף שלושה מיליליטרים של מדיום התבגרות לכל באר.מניחים את הלוח האורגנואידי על שייקר אופקי באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס וממשיכים לסובב את התרבית אופקית. החליפו את מדיום ההתבגרות הטרי כל יומיים-שלושה. בשל כוח הכבידה והצפיפות הגבוהה יחסית מהתווך, ה-EBs המוחזרים ישקעו בהדרגה.לפיכך, ניתן להעביר את ה- EBs בנוחות. בהשוואה ל-EBs, תאים חופשיים ושברי תאים מתים שוקעים לאט יותר. לפיכך ניתן להסיר את רוב התאים החופשיים ואת שברי התאים המתים.ה- EBs שטופחו בשלב המוקדם ביטאו את סמן OCT4 שהצביע על פלוריפוטנטיות טובה. בשלב מאוחר יותר, ה- EBs התפתחו לאורגנואידים מוחיים בוגרים. האורגנואידים המוחיים הבוגרים היו חיוביים עבור תאי אב אפיים סמן PAX6 וסמן ספציפי לנוירון טובולין J1. ה-iPSCs של אנשים בריאים וחולי SCA3 טופחו כדי לגדול לאורגנואידים.פרופילי ביטוי הגנים של קבוצת האורגנואידים המוחיים הנורמלית וקבוצת האורגנואידים המוחיים SCA3 הראו הבדלים משמעותיים במסלולים כגון הובלת נוירוטרנסמיטר, היווצרות סינפסות וויסות. בעת הטמעת ה- EB עם מטריצת קרום המרתף, זמני הפעולה לא צריכים להיות ארוכים מדי כדי למנוע ייבוש EBs. מומלץ להגן במהירות.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Facilitating Cerebral Organoid Culture via Lateral Soft Light Illumination

Light-mediated Formation and Patterning of Hydrogels for Cell Culture Applications

אור בתיווך גיבוש דפוסים של הידרוג עבור יישומי תרבית תאים

Click chemistries have been investigated for use in numerous biomaterials applications, including drug delivery, tissue engineering, and cell culture. In ...

Soft Lithographic Procedure for Producing Plastic Microfluidic Devices with View-ports Transparent to Visible and Infrared Light

הליך ליטוגרפית רך לייצור מכשירים Microfluidic פלסטיק עם יציאות תצוגה שקוף לאור גלויים ולא אינפרא-אדום

Infrared (IR) spectro-microscopy of living biological samples is hampered by the absorption of water in the mid-IR range and by the lack of suitable ...

Production of Extracellular Matrix Fibers via Sacrificial Hollow Fiber Membrane Cell Culture

ייצור סיבים מטריצה חוץ-תאית באמצעות תרבית תאים הממברנה ההקרבה הולופייבר

Engineered scaffolds derived from extracellular matrix (ECM) have driven significant interest in medicine for their potential in expediting wound closure ...

Handling and Assessment of Human Primary Prostate Organoid Culture

הטיפול והערכה של התרבות האנושית תא צורב הערמונית ראשי

This paper describes a detailed protocol for three-dimensional (3D) culturing, handling, and evaluation of human primary prostate organoids. The process ...

Applications for Open Source Microplate-Compatible Illumination Panels

יישומים ללוחות תאורה בקוד פתוח מיקרופלייט

Microplates are commonly used in the modern laboratory environment for a wide variety of tasks both in small-scale laboratory benchtop operations as well ...

Bioinspired Soft Robot with Incorporated Microelectrodes

ביוהשראת רובוט רך עם מיקרואלקטרודות משולבות

Bioinspired soft robotic systems that mimic living organisms using engineered muscle tissue and biomaterials are revolutionizing the current biorobotics ...

Building a Simple and Versatile Illumination System for Optogenetic Experiments

בניית מערכת תאורה פשוטה ומגוונת לניסויים אופטוגנטיים

Controlling biological processes using light has increased the accuracy and speed with which researchers can manipulate many biological processes. Optical ...

Experimental and Data Analysis Workflow for Soft Matter Nanoindentation

זרימת עבודה ניסיונית וניתוח נתונים עבור ננו-אינדנציה של חומר רך

Nanoindentation refers to a class of experimental techniques where a micrometric force probe is used to quantify the local mechanical properties of soft ...

Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5&#8242;-Phosphate

Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5&#8242;-Phosphate

השבתה של פתוגנים באמצעות פוטוליזה של אור נראה של ריבופלבין-5′-פוספט

Riboflavin-5&#39;-phosphate (or flavin mononucleotide; FMN) is sensitive to visible light. Various compounds, including reactive oxygen species (ROS), can ...

Reconstituting Cytoarchitecture and Function of Human Epithelial Tissues on an Open-Top Organ-Chip

שחזור ציטוארכיטקטורה ותפקוד של רקמות אפיתל אנושיות על שבב-איבר פתוח

Nearly all human organs are lined with epithelial tissues, comprising one or multiple layers of tightly connected cells organized into three-dimensional ...