Name: assay for adhesion and agar invasion in s. cerevisiae
Uploaded: 2006-11-08T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae at JoVE.com

Vi vill tacka Lisa Schneper och Katrin Duevel för sina insikter i utvecklingen av denna analys.

<ol><li> Sätt 200ul av växande kulturer av ränta på syntetiska material tallrikar med erforderlig svält villkoren (SC med 2% glukos jämfört med SC med 0,2% glukos, till exempel) Om tätheten av kulturer är alltför olika varandra, justera celler per 200ul kultur så varje droppe har ungefär samma mängd celler. </li><li> Se till att föra register över vilka droppe på plattorna som är kultur. </li><li> Håll glänt plattan locket och lämna antingen i rumstemperatur eller vid 30 ° C tills droppar är torra. </li><li> Täta plattor ...

<ol>
	<li>Costerton, J. W., Lewandowski, Z., Caldwell, D. E., Korber, D. R., Lappin-Scott, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+biofilms.">Microbial biofilms.</a> Annu Rev Microbiol. 49, 711-745 (1995).</li><li>Elortondo, F. J. P., Salmeron, J., Albisu, M., Casas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms+in+the+food+industry.">Biofilms in the food industry.</a> Food Science and Technology International. 5, 25-30 (1999).</li><li>Keinanen, M. M., Martikainen, P. J., Kontro, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+community+structure+and+biomass+in+developing+drinking+water+biofilms.">Microbial community structure and biomass in developing drinking water biofilms.</a> Can J Microbiol. 50, 183-191 (2004).</li><li>Biffinger, J. C., Pietron, J., Ray, R., Little, B., Ringeisen, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biofilm+enhanced+miniature+microbial+fuel+cell+using+Shewanella+oneidensis+DSP10+and+oxygen+reduction+cathodes.">A biofilm enhanced miniature microbial fuel cell using Shewanella oneidensis DSP10 and oxygen reduction cathodes.</a> Biosens Bioelectron. 22, 1672-1679 (2007).</li><li>Kim, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+community+structure,+compartmentalization+and+activity+in+a+microbial+fuel+cell.">Bacterial community structure, compartmentalization and activity in a microbial fuel cell.</a> J Appl Microbiol. 101, 698-710 (2006).</li><li>Kim, J. R., Jung, S. H., Regan, J. M., Logan, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electricity+generation+and+microbial+community+analysis+of+alcohol+powered+microbial+fuel+cells.">Electricity generation and microbial community analysis of alcohol powered microbial fuel cells.</a> Bioresour Technol. 98, 2568-2577 (2007).</li><li>Picioreanu, C., Head, I. M., Katuri, K. P., Loosdrecht, M. C. v. a. n., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+computational+model+for+biofilm-based+microbial+fuel+cells.">A computational model for biofilm-based microbial fuel cells.</a> Water Res. 41, 2921-2940 (2007).</li><li>Singh, R., Paul, D., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+implications+in+bioremediation.">Biofilms: implications in bioremediation.</a> Trends in Microbiology. 14, 389-397 (2006).</li><li>Cullen, P. J., Sprague, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+depletion+causes+haploid+invasive+growth+in+yeast.">Glucose depletion causes haploid invasive growth in yeast.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13619-13224 (2000).</li><li>Gimeno, C. J., Ljungdahl, P. O., Styles, C. A., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unipolar+cell+divisions+in+the+yeast+S.+cerevisiae+lead+to+filamentous+growth:+regulation+by+starvation+and+RAS.">Unipolar cell divisions in the yeast S. cerevisiae lead to filamentous growth: regulation by starvation and RAS.</a> Cell. 68, 1077-1090 (1992).</li><li>Blankenship, J. R., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+build+a+biofilm:+a+fungal+perspective.">How to build a biofilm: a fungal perspective.</a> Curr Opin Microbiol. 9, 588-594 (2006).</li><li>Reynolds, T. B., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bakers'+yeast,+a+model+for+fungal+biofilm+formation.">Bakers' yeast, a model for fungal biofilm formation.</a> Science. 291, 878-881 (2001).</li><li>Verstrepen, K. J., Klis, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flocculation,+adhesion+and+biofilm+formation+in+yeasts.">Flocculation, adhesion and biofilm formation in yeasts.</a> Mol Microbiol. 60, 5-15 (2006).</li><li>Liu, H., Styles, C. A., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elements+of+the+yeast+pheromone+response+pathway+required+for+filamentous+growth+of+diploids.">Elements of the yeast pheromone response pathway required for filamentous growth of diploids.</a> Science. 262, 1741-1744 (1993).</li><li>Madhani, H. D., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+of+filamentous+differentiation+and+virulence+in+fungi.">The control of filamentous differentiation and virulence in fungi.</a> Trends Cell Biol. 8, 348-353 (1998).</li><li>Mosch, H. U., Kubler, E., Krappmann, S., Fink, G. R., Braus, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crosstalk+between+the+Ras2p-controlled+mitogen-activated+protein+kinase+and+cAMP+pathways+during+invasive+growth+of+Saccharomyces+cerevisiae.">Crosstalk between the Ras2p-controlled mitogen-activated protein kinase and cAMP pathways during invasive growth of Saccharomyces cerevisiae.</a> Mol Biol Cell. 10, 1325-1335 (1999).</li><li>Mosch, H. U., Roberts, R. L., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ras2+signals+via+the+Cdc42/Ste20/mitogen-activated+protein+kinase+module+to+induce+filamentous+growth+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Ras2 signals via the Cdc42/Ste20/mitogen-activated protein kinase module to induce filamentous growth in Saccharomyces cerevisiae.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 5352-5356 (1996).</li><li>Pan, X., Heitman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP-dependent+protein+kinase+regulates+pseudohyphal+differentiation+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Cyclic AMP-dependent protein kinase regulates pseudohyphal differentiation in Saccharomyces cerevisiae.</a> Mol Cell Biol. 19, 4874-4887 (1999).</li><li>Roberts, R. L., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elements+of+a+single+MAP+kinase+cascade+in+Saccharomyces+cerevisiae+mediate+two+developmental+programs+in+the+same+cell+type:+mating+and+invasive+growth.">Elements of a single MAP kinase cascade in Saccharomyces cerevisiae mediate two developmental programs in the same cell type: mating and invasive growth.</a> Genes Dev. 8, 2974-2985 (1994).</li><li>Robertson, L. S., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+three+yeast+A+kinases+have+specific+signaling+functions+in+pseudohyphal+growth.">The three yeast A kinases have specific signaling functions in pseudohyphal growth.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13783-13787 (1998).</li><li>Reynolds, T. B., Jansen, A., Peng, X., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mat+formation+in+Saccharomyces+cerevisiae+requires+nutrient+and+pH+gradients.">Mat formation in Saccharomyces cerevisiae requires nutrient and pH gradients.</a> Eukaryot Cell. , (2007).</li></ol>

Jästceller visa olika differentiering lägen beroende på tillgången på näringsämnen och miljöförhållanden, inklusive sporer bildas i svält och stress, filamentation under olika näringsämnen påfrestningar och flockning. Olika jäst, inklusive S. cerevisiae och C. albicans kan också hittas i biofilmer som bildas av en mångfald av mikroorganismer. Även om det finns någon korrelation med filamentation och invasiva beteende är det inte klart exakt hur filamentation kan orsaka invasion och kolonisering av ytor och vävnader. Jä...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Moticam 350</td>
<td>Camera</td>
<td>Motic</td>
<td>discontinued (new model: Moticam 352)</td>
<td>A relatively cheap camera that attaches to eye pieces of microscopes and captures digital images for PC or Mac.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

assay for adhesion and agar invasion in s. cerevisiae

Jäst finns i naturliga biofilm, där många mikroorganismer kolonisera ytor. I konstgjorda miljöer, såsom ytor av syntet-objekt kan biofilmer minska industriell produktivitet, förstöra strukturer och hotar människors liv. 1-3 Å andra sidan kan utnyttja kraften i biofilmen hjälper till att rena miljön och skapa hållbar energi. 4-8 förmåga S. cerevisiae att kolonisera ytor och delta i komplexa biofilm var mestadels ignoreras tills återupptäckten av differentiering program som utlöses av olika signalvägar och miljömässiga ledtrådar i denna organism. 9, 10 Den fortsatta intresset för att använda S. cerevisiae som modellorganism för att förstå interaktion och konvergens av signalvägar, som Ras-PKA, Kss1 MAPK och Hog1 vägar osmolaritet, snabbt placeras S. cerevisiae i korsningen av biofilm biologi och signaltransduktion forskning. 11-20 Därför blev differentiering av jästceller till långa, lim, pseudohyphal filament en bekväm avläsning för aktivering av signaltransduktionsvägar på olika miljöförändringar. Det är dock filamentation en komplex samling av fenotyper, vilket gör testmetoder för det som om det vore en enkel fenotyp missvisande. Under det senaste decenniet har flera analyser framgångsrikt antogs från bakteriell biofilm studier till jäst forskning, såsom analyser MAT bildningen för att mäta koloni sprids på mjuk agar och kristallviolett färgning för att kvantitativt mäta cellytan följsamhet. 12, 21 Däremot har det skett en viss förvirring i analyser utvecklats för att kvalitativt bedöma lim och invasiva fenotyper av jäst i agar. Här presenterar vi en enkel och tillförlitlig metod för att beräkna lim och invasiva kvalitet jäststammar med lätt att förstå steg för att isolera vidhäftning bedömningen från invasion bedömning. Vår metod, som antogs från tidigare studier, 10, 16 innebär att växande celler i flytande media och bordläggning på differentiell näringsämnen förutsättningar för tillväxt av stora fläckar, som vi sedan tvätta med vatten för att bedöma vidhäftning och gnugga cellerna helt bort agarytan att bedöma invasion i agarn. Vi eliminera behovet av strimmor celler på agar, vilket påverkar invasion av celler i agar. I allmänhet noterade vi att haploida stammar som invaderar agar alltid lim, men inte alla lim stammar kan invadera agarsubstratet. Vår strategi kan användas tillsammans med andra analyser att noggrant dissekera den differentiering steg och krav av jäst signaltransduktion, differentiering, quorum sensing och biofilm bildas.

Watch this Scientific Journal Video about Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae at JoVE.com

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

Vi beskriver en kvalitativ analys för jäst vidhäftning och agar invasion som ett mått på invasiv och pseudohyphal differentiering. Denna enkla analys kan användas för att bedöma invasiv fenotyp av olika mutanter samt effekterna miljö-signaler och signalvägar i jäst differentiering.

Analys för vidhäftningsförmåga och agar Invasion i S. cerevisiae

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Research

JoVE Journal

Biology

A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

En hög genomströmning metod för att globalt studera organell morfologi i S. cerevisiae

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

Kartläggning av protein komplex med kvantitativa proteomik i S. cerevisiae

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

En In vitro FluoroBlok tumör Invasion analys

The hallmark of metastatic cells is their ability to invade through the basement membrane and migrate to other parts of the body. Cells must be able to ...

Agar-Block Microcosms for Controlled Plant Tissue Decomposition by Aerobic Fungi

Agar-Block mikrokosmos för kontrollerad växtvävnad Nedbrytning av Aerobic Svampar

The two principal methods for studying fungal biodegradation of lignocellulosic plant tissues were developed for wood preservative testing (soil-block; ...

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

En fluorescensmikroskopi-analys för övervakning Mitophagy i jästen Saccharomyces cerevisiae

Autophagy is important for turnover of cellular components under a range of different conditions. It serves an essential homeostatic function as well as a ...

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

Studying Age-dependent Genomic Instability using the S. cerevisiae Chronological Lifespan Model

Studera age-dependent genomisk instabilitet med S. cerevisiae Kronologisk Livslängd Modell

Studies using the Saccharomyces cerevisiae aging model have uncovered life span regulatory pathways that are partially conserved in higher eukaryotes1-2. ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

Isolering av primära celler Mus trofoblaster och trofoblaster Invasion Assay

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Flödescytometri-baserad rening av<em&gt; S. cerevisiae</em&gt; Zygoter

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisering och analys av mRNA-molekyler användning av fluorescens<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Kopplade Analyser för övervakning Proteinåterveckningssteg i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...