Name: in vitro apical-out enteroid model of necrotizing enterocolitis
Uploaded: 2022-06-08T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis at JoVE.com

Dette indhold er udelukkende forfatternes ansvar og repræsenterer ikke nødvendigvis de officielle synspunkter fra National Institutes of Health. HC er støttet af tilskud P20GM134973 fra National Institutes of Health. KB er støttet af en Children's Hospital Foundation (CHF) og Presbyterian Health Foundation (PHF) bevilling. Vi takker Laboratoriet for Molekylærbiologi og Cytometriforskning på OUHSC for brugen af Kernefaciliteten, som gav konfokal billeddannelse.

Alle dyreforsøg i denne undersøgelse blev godkendt af University of Oklahoma Health Sciences Center Institutional Animal Care and Use Committee. Tyndtarmens bekvemmelighedsprøver fra en for tidlig ikke-human primat (NHP, 90% drægtighed, olivenbavian, Papio anubis) blev opnået efter eutanasi til en separat undersøgelse (protokol #101523-16-039-I).
1. Etablering af apikal-out enteroid NEC-in-a-dish model
<ol><li>Forberedelse af medier og enteroid behandlinger<br...

Den nylige udvikling af enteroide modeller afledt af intestinale epitelkrypter giver mulighed for et mere fysiologisk relevant in vitro-væv , hvor man kan studere nekrotiserende enterocolitis patogenese. På trods af at alle større differentierede celletyper af tarmepitelet er 3D-enteroider stadig underlagt flere væsentlige begrænsninger. De konventionelle, basolaterale enteroider suspenderes i 3D ECM hydrogelkupler, hvis sammensætning og densitet kan begrænse normal diffusion inden for vævskulturmiljøet...

Nekrotiserende enterocolitis (NEC), en alvorlig inflammatorisk sygdom i tyndtarmen, der forekommer hos op til 10% af for tidligt fødte spædbørn, er almindeligvis forbundet med høj sygelighed og dødelighed 1,2. Dødelighed, der nærmer sig 50% hos spædbørn med meget lav fødselsvægt (<1500 g), der kræver kirurgisk indgreb, er ikke ualmindelige3. Mens den nøjagtige ætiologi af NEC i øjeblikket ikke forstås, menes risikofaktorer, såsom formelfodring, at forbinde med fysiologiske anomalier, såsom dysbiose, et umodent tarmepitel og en dysfunktionel tarmbarriere i udviklingen af sygdommen 2,4. På trods af en betydelig indsats er der kun sket få fremskridt med hensyn til forebyggelse eller behandling af NEC i løbet af det sidste årti5. En ny in vitro-metode til undersøgelse af NEC og tilhørende dysfunktion i tarmepitelbarrieren er nødvendig for at fremme forståelsen af patogenesen af sygdommen, da fund fra dyremodeller hidtil har oversat dårligt til sengekanten6.
En række in vitro-modeller er blevet brugt til at undersøge de mekanismer, der er i spil under NEC. Den humane tarmepitelcellelinje, Caco-2, er blandt de mest almindeligt anvendte in vitro-modeller af NEC 7,8. Caco-2-celler emulerer børstekantmorfologiske træk ved tyndtarmen, men som cellelinje differentierer de ikke til den brede vifte af in vivo-celletyper, herunder slimproducerende bægerceller, der kræves til en meget oversættelig model. HT-29-MTX, humane kolon adenocarcinomceller, inkluderer en blandet enterocyt- og bægercellefænotype, men mangler stadig kryptbaserede celletyper af tarmepitelet9. IEC-6 og IEC-18 er ikke-transformerede cellelinjer med en umoden ileal kryptlignende morfologi, men er ikke afledt af humant væv, hvilket begrænser deres translationelle kapacitet. FHs 74-Int og H4 tarmcellelinjer er afledt af humant føtalvæv og danner ikke tætte kryds eller polariserede monolag10,11 og er således umodne sammenlignet med selv de mest for tidligt fødte spædbørn, der er modtagelige for NEC. Typisk anvender NEC in vitro-modeller lipopolysaccharidbehandlinger (LPS) til at inducere tolllignende receptor 4 (TLR4), en vigtig receptor, der initierer tarmbetændelse i NEC12. Skader medieret gennem reaktive iltarter (ROS) behandling, typisk via hydrogenperoxid, bruges ofte til at inducere NEC-lignende oxidativ skade og apoptose 13,14. Som den vigtigste drivkraft for tarmbetændelse anvendes tumornekrosefaktor-alfa (TNF-α), en nedstrøms komponent i den inflammatoriske TLR4-signalering, også almindeligt anvendt i disse in vitro-modeller til at efterligne in vivo patogenese15.
Organoider, der genereres fra inducerbare pluripotente stamceller (iPSC'er), er vokset i popularitet som en in vitro-model af tarmen på grund af deres evne til at rekapitulere den komplekse in vivo-arkitektur og celletypesammensætning af det væv, hvorfra de er afledt16,17. Et beslægtet in vitro-system, enteroider, er organoider afledt af resekterede tarmkrypter, der er lettere etableret og vedligeholdt end iPSC-afledte organoider. Enteroider dyrkes typisk i en tredimensionel (3D) ekstracellulær matrix (ECM) med eksperimentel adgang begrænset til den basolaterale celleoverflade. Metoder, såsom mikroinjektion18,19, er blevet udviklet til at overvinde denne barriere mod den apikale overflade, men opbygningen af sloughed cellulært affald og slim i lumen gør mikroinjektion både teknisk vanskelig og inkonsekvent. Da brugerdefinerede robotmikroinjektionsplatforme ikke er bredt tilgængelige20, bliver lab-to-lab-variation i teknisk evne og generel teknik betydelige variabler, der skal overvindes med mikroinjektionsprotokoller. Todimensionale (2D) monolag afledt af dissocierede 3D-enteroider, der stadig omfatter alle større celletyper i tarmepitelet, giver adgang til den apikale overflade, men har traditionelt været vanskelige at opretholde uden et fødelag af mesenkymale myofibroblaster21. Mens cellekulturpermeable understøtninger kan bruges til at få adgang til både de apikale og basolaterale sider af enteroide monolag uden brug af underliggende myofibroblaster, kræver disse indsatser udskæring og montering af membranen før brug med modaliteter såsom konfokal mikroskopi, hvilket resulterer i en mere teknisk krævende og vanskelig proces ved anvendelse af traditionelle mikroskopimetoder22. NEC er blevet modelleret in vitro ved hjælp af traditionelle 3D-enteroider 23,24,25 og permeable understøtter 26,27, og tarmbetændelse er for nylig blevet replikeret med gut-on-a-chip modeller28,29. Mens gut-on-a-chip-modeller, der indeholder mikrofluidik, er langt de mest avancerede og oversættelige modeller, er denne teknologi dyr, kompleks og utilgængelig for de fleste efterforskere30.
Nylige fremskridt inden for apikale enteroide teknikker har givet lettere adgang til den apikale overflade af 3D-enteroider uden at risikere skade på den strukturelle integritet af in vitro-epitelet 31,32,33. Apikale enteroider deler celletypesammensætningen og barrierefunktionen af in vivo intestinal epitel, men i modsætning til typiske 3D-enteroider vender de apikale overflader af disse celler mod kulturmediet, hvilket giver mulighed for mere fysiologisk relevante undersøgelser af næringsstofabsorption, mikrobiel infektion og luminal sekretion31. En yderligere fordel ved apikale enteroider er evnen til homogent at distribuere eksperimentelle midler til enteroider. Varierende behandlingsvolumener baseret på enteroid størrelse er ikke påkrævet, som det er med mikroinjektion, og evnen til at opretholde disse enteroider i suspensionskultur negerer enhver ECM-interferens på eksperimentel middeldiffusion32.
Nekrotiserende enterocolitis er en multifaktoriel sygdom, der involverer flere intestinale epitelcelletyper og en række miljømæssige og patofysiologiske faktorer34. Den varierede cellesammensætning af intestinale enteroider er en klar forbedring i forhold til monokulturer i modellering af en kompleks sygdom som NEC. Interessant nok, mens en enkelt inflammatorisk eksponering ofte er tilstrækkelig til at fremkalde skade i in vitro-monokulturer , synes enteroider, som med musemodeller23, at kræve mindst to inflammatoriske komponenter for at inducere NEC-lignende skade6. Her præsenterer vi en apikal NEC-in-a-dish-model ved hjælp af apikale enteroider i kombination med hypoxi (et vigtigt klinisk træk ved NEC6) og enten LPS eller TNF-α som en forbedret og mere fysiologisk relevant in vitro-model til at studere epitelresponser på NEC-lignende inflammation og potentielt identificere terapeutiske mål. Vi beskriver en protokol til at vende polariteten af tyndtarms 3D-enteroider samt en immunofluorescerende farvningsprotokol til identifikation af epitelbarriereforstyrrelse og junctional proteinekspressionsændringer. Endelig demonstrerer vi yderligere et simpelt enteroid levedygtighedsassay for at bestemme virkningen af vores dual-hit, apikale NEC-in-a-dish-model.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15575-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Conical tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar Ultra-Low Attachment 24-Well Microplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200-602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glass 24 mm x 60 mm</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>102460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A-21202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Anti-Rabbit IgG Antibody, Cy3 conjugate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>AP182C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium/Nutrient Ham&#39;s Mixture F-12 (DMEM-F12) with 15 mM HEPES buffer</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>36254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E-cadherin antibody (7H12)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-19051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde solution 4%, buffered, pH 6.9</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>1004960700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Fiji</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IntestiCult Organoid Growth Medium (Human)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>06010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 Confocal Microscope</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharides from Escherichia coli O111:B4, purified by gel filtration chromatography</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>L3012-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>566460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well, Nunclon Delta-Treated, Flat-Bottom Microplate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>136101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate Buffered Saline), 1x [-] calcium, magnesium, pH 7.4</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Glass Antifade Mountant with NucBlue</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P36983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Anti-Villin antibody [SP145]</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab130751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human TNF-&#945; protein 100 &#181;g</td>
			<td>Bio-Techne</td>
			<td>210-TA-100/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraMax iD3 Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Forma Series II Water-Jacketed Tri-Gas Incubator, 184L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TO-PRO-3 Iodide (642/661)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>T3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubes, 0.5 mL, flat cap</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AB0350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro apical-out enteroid model of necrotizing enterocolitis

Nekrotiserende enterocolitis (NEC) er en ødelæggende sygdom, der påvirker for tidligt fødte spædbørn, karakteriseret ved tarmbetændelse og nekrose. Enteroider er for nylig opstået som et lovende system til modellering af gastrointestinale patologier. Imidlertid mangler de i øjeblikket anvendte metoder til enteroid manipulation enten adgang til epitelets apikale overflade (tredimensionel [3D]) eller er tidskrævende og ressourceintensive (todimensionelle [2D] monolag). Disse metoder kræver ofte yderligere trin, såsom mikroinjektion, for at modellen kan oversættes fysiologisk. Her beskriver vi en fysiologisk relevant og billig protokol til undersøgelse af NEC in vitro ved at vende enteroid polaritet, hvilket resulterer i, at den apikale overflade vender udad (apikal-ud). En immunofluorescerende farvningsprotokol til undersøgelse af enteroid barriereintegritet og junctional proteinekspression efter eksponering for tumornekrosefaktor-alfa (TNF-α) eller lipopolysaccharid (LPS) under normoxiske eller hypoxiske forhold er også tilvejebragt. Levedygtigheden af 3D apikale enteroider udsat for normoxisk eller hypoxisk LPS eller TNF-α i 24 timer evalueres også. Enteroider udsat for enten LPS eller TNF-α i kombination med hypoxi udviste forstyrrelse af epitelarkitektur, et tab af tilhængere junction proteinekspression og en reduktion i cellelevedygtighed. Denne protokol beskriver en ny apikal-out NEC-in-a-dish-model, der præsenterer en fysiologisk relevant og omkostningseffektiv platform til at identificere potentielle epitelmål for NEC-terapier og studere det for tidlige tarmrespons på terapi.

Brugen af enteroider til modellering af tarmbetændelse, selv inden for rammerne af nekrotiserende enterocolitis, er nu almindelig. Imidlertid mangler de fleste metoder, der i øjeblikket anvendes, enten adgang til den apikale overflade af enteroider, hvilket negerer den fysiologiske relevans af forbindelser beregnet til eventuel anvendelse som oral terapi eller er teknisk vanskelige og tidskrævende, som med enteroidafledte monolag. For at øge nytten af nuværende in vitro enteroide modeller af NEC vendte vi p...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis at JoVE.com

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Denne protokol beskriver en apikal-ud nekrotiserende enterocolitis (NEC)-in-a-dish model ved hjælp af tyndtarmsindatoider med omvendt polaritet, hvilket giver adgang til den apikale overflade. Vi leverer en immunfluorescerende farvningsprotokol til påvisning af NEC-relateret epitelforstyrrelse og en metode til at bestemme levedygtigheden af apikale enteroider, der udsættes for NEC-in-a-dish-protokollen.

In vitro Apikal-out enteroid model af nekrotiserende enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease affecting preterm infants, characterized by intestinal inflammation and necrosis. Enteroids have ...

Denne protokol beskriver den første apikale in-a-dish-model og er en kritisk forbedring i forhold til basale laterale ud enteroide in-a-dish-modeller, når der etableres in vitro-modellering af potentielle terapier beregnet til oral administration. Denne metode giver adgang til den apikale overflade af enteroider. Forbindelser kan tilsættes til cellemedier, og forbindelserne optages apikalt, som de ville være in vivo.Forskere, der er interesseret i at etablere et in vitro-system af tarmbetændelse for at teste potentielle orale terapier, kan finde denne teknik særlig nyttig. Væv fra forskellige aldre og arter kan kræve yderligere standardisering. Så patienter, mens de etablerer polaritetsvendingstider, kan være påkrævet.Til at vende polariteten af 3D-enteroider aspirerer medier fra hver brønd af en 24 brøndplade af etablerede 3D-basolaterale enteroider. Tilsæt 500 mikroliter fem millimolar iskold, EDTA eller PBS til hver brønd i en 24 brøndplade og forstyrre forsigtigt mekanisk kældermembranekstraktet eller ekstracellulær matrixkuppel ved at pipettere op og ned fem til seks gange med en P 200 pipette. Overfør indholdet af fire brønde til et 15 ml kroniseret rør.Tilsæt derefter otte milliliter iskold EDTA skråstreg PBS til røret. Overfør de resterende 20 brønde på samme måde. Inkuber rørene ved fire grader Celsius i en time på en roterende platform eller ryster ved 330 o / min.Efter inkubation centrifugeres rørene og kasseres supernatanten fra hvert rør. Kombiner og vask pellets med fem milliliter DMEM F12. Derefter centrifugeres cellesuspensionen og fjernes supernatanten, inden der tilsættes 12 ml antibiotikafrit medium til røret, hvilket sikrer, at cellepillerne genbruges.Pippet 500 mikroliter af enteroidsuspensionen i hver brønd i en 24 brønd ultralav fastgørelsesplade. Inkuber pladen ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid i to til fem dage, eller indtil enteroiderne har vendt polariteten. På førstedagen, hvor man undlader at stemme, overføres indholdet af fire brønde i en 24 brøndplade til et 1,5 milliliter mikrocentrifugerør.Gentag for alle ønskede brønde med hver behandling i et separat rør. Centrifuge rørene og resuspender pelleten i 300 mikroliter 4% fra aldehydfikseringsmiddel ved stuetemperatur. Efter 30 minutter vaskes pellets med 500 mikroliter PBS.Tilsæt 500 mikroliter 0,1% Triton X 100 til rørene. Inkuber rørene i en time ved stuetemperatur. Placer derefter rørene på en rotator eller ryster ved 200 o / min i 15 minutter ved to til otte grader Celsius.Efter den sidste inkubation tilsættes 500 mikroliter 10% NDS i PBS T og inkuberes ved stuetemperatur i 45 minutter. Under inkubation fremstilles primær antistofopløsning. Den næste dag tilsættes 250 til 500 mikroliter PBS T til rørene afhængigt af pellets størrelse, og læg dem på rotatoren eller rysteren ved 200 o / min i en time ved to til otte grader Celsius.Tilsæt 200 mikroliter af den sekundære antistofopløsning og inkuber rørene ved to til otte grader Celsius i mørke. Den næste dag skal du fortsætte med at montere farvede apikale enteroider ved at dreje rørene og fjerne 100 mikroliter supernatant. Resuspender cellerne i de resterende 100 mikroliter supernatant og overfør cellesuspensionen til 500 mikroliter rør.Centrifuger rørene i en minicentrifuge i 20 sekunder. Fjern supernatanten og suspender pellets i 100 mikroliter stuetemperatur langt rød nukleinsyreplet. Efter 20 minutters inkubation centrifugeres cellerne og resuspenderer pellets i 100 mikroliter PBS.Efter den anden vask og centrifugering fjernes 70 mikroliter supernatant, og pellets resuspenderes i det resterende volumen PBS. Overfør derefter cellesuspensionen til en mærket 24 x 60 millimeter dæksel. Påfør 75 mikroliter monteringsmiddel direkte på prøven, og fjern eventuelle bobler med en pipettespids.Efter hærdning natten over i mørket påføres et tyndt lag glycerol på dækgliderne, monter derefter dækslet glider på glasrutsjebanen og tryk det forsigtigt på plads. Tryk for at fjerne eventuelle bobler mellem dækslappen og diaset. Lad dækslet glide til stuetemperatur i mørke i to timer, før du forestiller enteroiderne ved 20 gange forstørrelse med et konfokalt mikroskop.For enteroidbehandlinger skal du etablere en apikal ud nekrotiserende enterocolitis i en skålmodel i 24 timer som beskrevet i tekstmanuskriptet. Før du udfører analysen, skal du fjerne 100 mikroliter medier fra hver brønd og efterlade de resterende 400 mikroliter. Tilsæt 400 mikroliter cellelevedygtighedsanalysereagens til hver brønd.Bland indholdet kraftigt på en tallerkenryster i fem minutter ved 200 o / min for at inducere cellelyse. Overfør derefter 200 mikroliter til en enkelt brønd af en 96 godt klar bundplade. Gentag for de resterende 600 mikroliter, hvilket skaber fire tekniske replikater pr. Brønd.Ved hjælp af en pladelæser, der er i stand til luminescens, skal du registrere værdier ved 0,25 millisekunder integration og sammenligne de relative værdier blandt behandlinger. Den repræsentative immunfluorescensfarvning af kontrol bekræftede den apikale lokalisering af kerner mod lumen og påvisning af skurk ved epitelets ydre kant. Sammenlignet med kontrollen inducerede eksponering for lipopolysaccharid, tumornekrose alfa eller hypoxi alene ikke åbenlyse ændringer i bruttocellemorfologi E-cadherin eller skurklokalisering eller fluorescerende intensitet.Behandling med lipopolysaccharid eller tumornekrose alfa i kombination med hypoxi forstyrrede epitelarkitekturen og viste et signifikant tab af adhærenskryds og børstekantproteinekspression afsløret ved tab af ECA-hørelse og skurkfarvning. Den apikale ud celle levedygtighed blev bestemt under normoxiske eller hypoxiske forhold. Under normoxiske forhold sammenlignet med kontrollipopolysaccharid eller tumornekrose alfa påvirkede ikke signifikant enteroidernes cellelevedygtighed.Imidlertid blev der observeret signifikante reduktioner i levedygtighed i lipopolysaccharid eller tumornekrose alfa i kombination med hypoxi sammenlignet med hypoxi alene. Mens du etablerer apikal ud i en skålmodel. Husk at holde EDTA i cellesuspensionen iskold.Dette vil forbedre polaritetsvendingen og sikre, at al ECM er korrekt flydende og fjernet. Andre downstream-applikationer såsom QPCR, RNA-seq, western blotting eller funktionelle evalueringer af barrierepermeabilitet kan udføres yderligere for at karakterisere responsen på inflammatorisk signalering i hypoxi.

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stamcelletransplantation i en In vitro Simuleret Iskæmi / reperfusion Model

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Evaluering Teratogene Ændringer i en Zebrafisk Model af Føtalt Alkohol Eksponering

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells (cEND) as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells cEND as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Stræk i Brain mikrovaskulære endotelceller (cEND) som et<em&gt; In Vitro</em&gt; Traumatisk Hjerneskade Model af blod-hjerne barrieren

Due to the high mortality incident brought about by traumatic brain injury (TBI), methods that would enable one to better understand the underlying ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoksiske Stimulering af Brain Microslices som en<em&gt; In vitro</em&gt; Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk kontraktilitet måling af musen mesenterica arterie ved hjælp af Wire blodkar

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

In Vitro Model af koronar Angiogenese

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

An In Vitro Hemodynamic Loop Model to Investigate the Hemocytocompatibility and Host Cell Activation of Vascular Medical Devices

En In Vitro Hemodynamic Loop Model til at undersøge Hæmocytocompatibility og Host Cell Aktivering af vaskulære medicinsk udstyr

In this study, the hemocompatibility of tubes with an inner diameter of 5 mm made of polyvinyl chloride (PVC) and coated with different bioactive ...

In vitro Assessment of Myocardial Protection following Hypothermia-Preconditioning in a Human Cardiac Myocytes Model

In vitro vurdering af myokardie beskyttelse efter hypotermi-forkonditionering i en human hjerte myocytter model

Ischemia/reperfusion-derived myocardial dysfunction is a common clinical scenario in patients after cardiac surgery. In particular, the sensitivity of ...

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

En model af eksperimentel Steatosis In Vitro:Hepatocyt Cell Kultur i Lipid Overbelastning-Conditioned Medium

Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease (MAFLD), previously known as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), is the most prevalent liver ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

En neonatal BALB / c musemodel af nekrotiserende enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...