Name: in vitro apical-out enteroid model of necrotizing enterocolitis
Uploaded: 2022-06-08T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis at JoVE.com

Этот контент является исключительной ответственностью авторов и не обязательно представляет официальную точку зрения Национальных институтов здравоохранения. HC поддерживается грантом P20GM134973 от Национальных институтов здравоохранения. KB поддерживается грантом Фонда детских больниц (CHF) и Фонда пресвитерианского здравоохранения (PHF). Мы благодарим Лабораторию молекулярной биологии и исследований цитометрии в OUHSC за использование Core Facility, которая обеспечивала конфокальную визуализацию.

Все процедуры для животных в этом исследовании были одобрены Комитетом по институциональному уходу и использованию животных Центра медицинских наук Университета Оклахомы. Образцы для удобства тонкой кишки от недоношенного нечеловеческого примата (NHP, 90% беременности, оливковый баб...

Недавняя разработка энтероидных моделей, полученных из кишечных эпителиальных крипт, позволяет получить более физиологически значимую ткань in vitro , в которой можно изучать патогенез некротизирующего энтероколита. Несмотря на включение всех основных дифференцированных типов кле...

Некротизирующий энтероколит (НЭК), тяжелое воспалительное заболевание тонкой кишки, встречающееся у 10% недоношенных детей, обычно связано с высокой заболеваемостью и смертностью 1,2. Показатели смертности, приближающиеся к 50% у младенцев с очень низкой массой тела при рождении (<1500 г), требующих хирургического вмешательства, не редкость3. Хотя точная этиология НЭК в настоящее время не понята, считается, что факторы риска, такие как искусственное вскармливание, сочетаются с физиологическими аномалиями, такими как дисбактериоз, незрелый кишечный эпителий и дисфункциональный кишечный барьер, в развитии заболевания 2,4. Несмотря на значительные усилия, за последнее десятилетие5 был достигнут незначительный прогресс в профилактике или лечении НЭК. Новый метод in vitro для изучения NEC и связанной с ним дисфункции кишечного эпителиального барьера необходим для углубления понимания патогенеза заболевания, поскольку результаты животных моделей до сих пор плохо переводились на прикроватную часть6.
Ряд моделей in vitro был использован для исследования механизмов, действующих во время NEC. Клеточная линия эпителия кишечника человека, Caco-2, является одной из наиболее часто используемых моделей IN VITRO NEC 7,8. Клетки Caco-2 имитируют морфологические особенности границы кисти тонкой кишки, но, как клеточная линия, не дифференцируются в широкий спектр типов клеток in vivo, включая слизь-продуцирующие бокалы, необходимые для высокотранслизируемой модели. HT-29-MTX, клетки аденокарциномы толстой кишки человека, включают смешанный фенотип энтероцитарных и бокаловидных клеток, но все еще не имеют типов клеток на основе крипты кишечного эпителия9. IEC-6 и IEC-18 являются нетрансформированными клеточными линиями с незрелой подвздошной криптоподобной морфологией, но не получены из тканей человека, что ограничивает их поступательную способность. Линии клеток кишечника FHs 74-Int и H4 получены из ткани плода человека и не образуют плотных соединений или поляризованных монослоев10,11 и, таким образом, являются незрелыми по сравнению даже с самыми недоношенными детьми, восприимчивыми к NEC. Как правило, модели NEC in vitro используют лечение липополисахаридами (LPS) для индуцирования толл-подобного рецептора 4 (TLR4), основного рецептора, инициирующего воспаление кишечника в NEC12. Повреждение, опосредованное обработкой активными формами кислорода (АФК), обычно через перекись водорода, часто используется для индуцирования NEC-подобного окислительного повреждения и апоптоза13,14. В качестве основного фактора воспаления кишечника фактор некроза опухоли-альфа (TNF-α), последующий компонент воспалительной передачи сигналов TLR4, также обычно используется в этих моделях in vitro для имитации патогенеза in vivo 15.
Органоиды, полученные из индуцируемых плюрипотентных стволовых клеток (iPSCs), стали популярными в качестве модели кишечника in vitro из-за их способности повторять сложную архитектуру in vivo и клеточный состав ткани, из которой они получены16,17. Родственная система in vitro, энтероиды, представляют собой органоиды, полученные из резецированных кишечных крипт, которые легче установить и поддерживать, чем органоиды, полученные из iPSC. Энтероиды обычно выращиваются в трехмерном (3D) внеклеточном матриксе (ECM) с экспериментальным доступом, ограниченным базолатеральной клеточной поверхностью. Методы, такие как микроинъекция18,19, были разработаны для преодоления этого барьера на апикальной поверхности, но накопление слоистого клеточного мусора и слизи в просвете делает микроинъекцию как технически сложной, так и непоследовательной. Поскольку пользовательские роботизированные платформы микроинъекции не являются широко доступными20, лабораторная изменчивость технических возможностей и общей техники становится значительными переменными для преодоления с помощью протоколов микроинъекции. Двумерные (2D) монослои, полученные из диссоциированных 3D-энтероидов, все еще включающие все основные типы клеток кишечного эпителия, обеспечивают доступ к апикальной поверхности, но традиционно их трудно поддерживать без питающего слоя мезенхимальных миофибробластов21. В то время как проницаемые опоры клеточной культуры могут быть использованы для доступа как к апикальной, так и к базолатеральной сторонам энтероидных монослоев без использования нижележащих миофибробластов, эти вставки требуют иссечения и монтажа мембраны перед использованием с такими модальностями, как конфокальная микроскопия, что приводит к более технически сложному и сложному процессу при использовании традиционных методов микроскопии22. NEC был смоделирован in vitro с использованием традиционных 3D-энтероидов 23,24,25 и проницаемых опор 26,27, а воспаление кишечника недавно было воспроизведено с моделями gut-on-a-chip28,29. В то время как модели «кишка на чипе», включающие микрофлюидику, на сегодняшний день являются самыми передовыми и переводимыми моделями, эта технология дорога, сложна и недоступна для большинства исследователей30.
Последние достижения в области апикальных энтероидных методов позволили облегчить доступ к апикальной поверхности 3D-энтероидов без риска повреждения структурной целостности эпителия in vitro 31,32,33. Апикальные энтероиды разделяют состав клеточного типа и барьерную функцию кишечного эпителия in vivo, но, в отличие от типичных 3D-энтероидов, апикальные поверхности этих клеток обращены к культуральной среде, что позволяет проводить более физиологически значимые исследования абсорбции питательных веществ, микробной инфекции и люминальной секреции31. Дополнительным преимуществом апикально-ауттероидов является способность гомогенно распределять экспериментальные агенты по энтероидам. Изменение объемов обработки в зависимости от размера энтероидов не требуется, как это происходит при микроинъекции, а способность поддерживать эти энтероиды в культуре суспензии сводит на нет любые интерференции ECM на экспериментальной диффузии агента32.
Некротизирующий энтероколит представляет собой многофакторное заболевание, включающее множественные типы эпителиальных клеток кишечника и различные факторы окружающей среды и патофизиологические факторы34. Разнообразный клеточный состав кишечных энтероидов является явным улучшением по сравнению с монокультурами в моделировании сложного заболевания, такого как NEC. Интересно, что в то время как одного воспалительного воздействия часто достаточно, чтобы вызвать повреждение монокультур in vitro , энтероиды, как и в случае с мышиными моделями23, по-видимому, требуют как минимум двух воспалительных компонентов, чтобы вызвать NEC-подобное повреждение6. Здесь мы представляем апикальную модель NEC-in-a-dish, использующую апикальные энтероиды в сочетании с гипоксией (важная клиническая особенность NEC6) и либо LPS, либо TNF-α, в качестве улучшенной и более физиологически значимой модели in vitro для изучения эпителиальных реакций на воспаление, подобное NEC, и, потенциально, определения терапевтических мишеней. Мы описываем протокол для изменения полярности 3D-энтероидов тонкой кишки, а также протокол иммунофлуоресцентного окрашивания для выявления нарушения эпителиального барьера и изменений экспрессии соединительного белка. Наконец, мы дополнительно демонстрируем простой анализ энтероидной жизнеспособности, чтобы определить влияние нашей модели NEC-in-a-dish с двойным ударом.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15575-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Conical tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar Ultra-Low Attachment 24-Well Microplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200-602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glass 24 mm x 60 mm</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>102460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A-21202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Anti-Rabbit IgG Antibody, Cy3 conjugate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>AP182C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium/Nutrient Ham&#39;s Mixture F-12 (DMEM-F12) with 15 mM HEPES buffer</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>36254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E-cadherin antibody (7H12)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-19051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde solution 4%, buffered, pH 6.9</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>1004960700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Fiji</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IntestiCult Organoid Growth Medium (Human)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>06010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 Confocal Microscope</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharides from Escherichia coli O111:B4, purified by gel filtration chromatography</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>L3012-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>566460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well, Nunclon Delta-Treated, Flat-Bottom Microplate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>136101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate Buffered Saline), 1x [-] calcium, magnesium, pH 7.4</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Glass Antifade Mountant with NucBlue</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P36983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Anti-Villin antibody [SP145]</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab130751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human TNF-&#945; protein 100 &#181;g</td>
			<td>Bio-Techne</td>
			<td>210-TA-100/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraMax iD3 Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Forma Series II Water-Jacketed Tri-Gas Incubator, 184L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TO-PRO-3 Iodide (642/661)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>T3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubes, 0.5 mL, flat cap</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AB0350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro apical-out enteroid model of necrotizing enterocolitis

Некротизирующий энтероколит (НЭК) является разрушительным заболеванием, поражающим недоношенных детей, характеризующимся воспалением кишечника и некрозом. Энтероиды в последнее время стали перспективной системой для моделирования желудочно-кишечных патологий. Однако используемые в настоящее время методы энтероидных манипуляций либо не имеют доступа к апикальной поверхности эпителия (трехмерные [3D]), либо являются трудоемкими и ресурсоемкими (двумерные [2D] монослои). Эти методы часто требуют дополнительных шагов, таких как микроинъекция, чтобы модель стала физиологически переводимой. Здесь мы описываем физиологически значимый и недорогой протокол для изучения NEC in vitro путем обращения вспять энтероидной полярности, в результате чего апикальная поверхность обращена наружу (апикально-наружу). Также предусмотрен протокол иммунофлуоресцентного окрашивания для изучения целостности энтероидного барьера и экспрессии соединительного белка после воздействия фактора некроза опухоли-альфа (TNF-α) или липополисахарида (ЛПС) в нормоксических или гипоксических условиях. Также оценивается жизнеспособность 3D-апикально-ауттероидных энтероидов, подвергшихся воздействию нормоксических или гипоксических ЛПС или TNF-α в течение 24 ч. Энтероиды, подвергшиеся воздействию ЛПС или TNF-α в сочетании с гипоксией, демонстрировали нарушение эпителиальной архитектуры, потерю экспрессии белка соединения адгезий и снижение жизнеспособности клеток. Этот протокол описывает новую апикальную модель NEC-in-a-dish, которая представляет собой физиологически значимую и экономически эффективную платформу для выявления потенциальных эпителиальных целей для терапии NEC и изучения преждевременного кишечного ответа на терапию.

Использование энтероидов для моделирования воспаления кишечника, даже в контексте некротизирующего энтероколита, в настоящее время распространено. Однако большинство используемых в настоящее время способов либо не имеют доступа к апикальной поверхности энтероидов, что сводит на не?...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis at JoVE.com

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Этот протокол описывает модель апикального некротизирующего энтероколита (NEC) в чашке, использующую энтероиды тонкой кишки с обратной полярностью, позволяющую получить доступ к апикальной поверхности. Мы предоставляем протокол иммунофлуоресцентного окрашивания для обнаружения эпителиальных нарушений, связанных с NEC, и метод определения жизнеспособности апикальных энтероидов, подвергающихся протоколу NEC-in-a-dish.

В пробирке Апикально-аутентоидная модель некротизирующего энтероколита

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease affecting preterm infants, characterized by intestinal inflammation and necrosis. Enteroids have ...

Этот протокол описывает первую модель апикального выхода в чашке и является критическим улучшением по сравнению с базальными боковыми энтероидными моделями в чашке при установлении моделирования in vitro потенциальных терапевтических средств, предназначенных для перорального введения. Этот метод позволяет получить доступ к апикальной поверхности энтероидов. Соединения могут быть добавлены в клеточные среды, и соединения принимаются апикально, как они были бы in vivo.Исследователи, заинтересованные в создании системы воспаления кишечника in vitro для тестирования потенциальных пероральных терапевтических средств, могут найти этот метод особенно полезным. Ткани, полученные из разных возрастов и видов, могут потребовать дальнейшей стандартизации. Таким образом, пациентам при установлении времени изменения полярности может потребоваться.Для реверсирования полярности 3D энтероидов аспирируют среды из каждой лунки 24 луночной пластины установленных 3D базолатеральных энтероидов. Добавьте 500 микролитров пяти миллимоляров ледяного холода, ЭДТА или PBS в каждую лунку из 24-луночной пластины и осторожно механически нарушите экстракт базальной мембраны или купол внеклеточного матрикса, пипеткой вверх и вниз пять-шесть раз пипеткой P 200. Перенесите содержимое четырех скважин в 15-миллилитровую летописную трубу.Затем добавьте восемь миллилитров ледяного EDTA слэша PBS в трубку. Перенесите оставшиеся 20 скважин таким же образом. Инкубируйте трубки при четырех градусах Цельсия в течение одного часа на вращающейся платформе или шейкере при 330 об/мин.После инкубации центрифугируют трубки и выбрасывают супернатант из каждой трубки. Соедините и промывайте гранулы пятью миллилитрами DMEM F12. Затем центрифугируют клеточную суспензию и удаляют супернатант перед добавлением 12 миллилитров среды, свободной от антибиотиков, в трубку, гарантируя, что клеточные гранулы будут повторно суспендированы.Pippet 500 микролитров энтероидной суспензии в каждую лунку из 24 скважин сверхнизкой крепежной пластины. Инкубируйте пластину при 37 градусах Цельсия и 5% углекислого газа в течение двух-пяти дней или до тех пор, пока энтероиды не изменят полярность. В первый день воздержания перенесите содержимое четырех скважин из 24-луночной пластины в 1,5-миллилитровую микроцентрифужную трубку.Повторяйте для всех желаемых лунок с каждой обработкой в отдельной трубке. Центрифугируйте трубки и повторно суспендируйте гранулы в 300 микролитрах 4% из альдегидного фиксатора при комнатной температуре. Через 30 минут промыть гранулы 500 микролитрами PBS.Добавьте в пробирки 500 микролитров 0,1% Triton X 100. Инкубировать пробирки в течение одного часа при комнатной температуре. Затем поместите трубки на ротатор или шейкер при 200 об/мин в течение 15 минут при температуре от двух до восьми градусов Цельсия.После последней инкубации добавьте 500 микролитров 10%NDS в PBS T и инкубируйте при комнатной температуре в течение 45 минут. Во время инкубации готовят раствор первичных антител. На следующий день добавьте от 250 до 500 микролитров PBS T в трубки в зависимости от размера гранулы и поместите их на ротатор или шейкер при 200 об/мин в течение одного часа при температуре от двух до восьми градусов Цельсия.Добавьте 200 микролитров раствора вторичного антитела и инкубируйте трубки при двух-восьми градусах Цельсия в темноте. На следующий день приступайте к монтажу окрашенных апикальных энтероидов, вращая трубки и удаляя 100 микролитров супернатанта. Повторно суспендируют клетки в оставшихся 100 микролитрах супернатанта и переносят клеточную суспензию в 500 микролитровых пробирок.Центрифугируйте трубки в мини-центрифуге в течение 20 секунд. Удалите супернатант и повторно суспендируйте гранулы в 100 микролитрах комнатной температуры, а также в пятнах красной нуклеиновой кислоты. После 20 минут инкубации центрифугируют клетки и повторно суспендируют гранулы в 100 микролитрах PBS.После второй промывки и центрифугирования удаляют 70 микролитров супернатанта и повторно суспендируют гранулы в оставшемся объеме ПБС. Затем перенесите суспензию ячейки на маркированный скольжение крышки 24 на 60 миллиметров. Нанесите 75 микролитров монтажника непосредственно на образец и удалите все пузырьки кончиком пипетки.После ночного отверждения в темноте нанесите тонкий слой глицерина на крышку, затем установите крышку на стеклянную горку и осторожно прижмите ее к месту. Нажмите, чтобы удалить пузырьки между крышкой и слайдом. Дайте крышке проскользнуть, чтобы установить комнатную температуру в темноте в течение двух часов, прежде чем визуализировать энтероиды с 20-кратным увеличением с помощью конфокального микроскопа.Для энтероидного лечения установите апикальный некротизирующий энтероколит в модели блюда в течение 24 часов, как описано в текстовой рукописи. Перед выполнением анализа удалите 100 микролитров среды из каждой лунки, оставив оставшиеся 400 микролитров. Добавьте 400 микролитров реагента для анализа жизнеспособности клеток в каждую лунку.Энергично перемешайте содержимое на пластинчатом шейкере в течение пяти минут при 200 оборотах в минуту, чтобы вызвать лизис клеток. Затем переложите 200 микролитров в одну скважину из 96 скважин с прозрачным дном плиты. Повторите для оставшихся 600 микролитров, создав четыре технические реплики на скважину.Используя пластинчатый считыватель, способный к люминесценции, записывайте значения с интеграцией 0,25 миллисекунды и сравнивайте относительные значения между обработками. Представительное иммунофлуоресцентное окрашивание контроля подтвердило апикальную локализацию ядер по направлению к просвету и обнаружение злодея на внешнем краю эпителия. По сравнению с контролем, воздействие липополисахарида, альфа-некроза опухоли или гипоксии само по себе не вызывало явных изменений в морфологии грубых клеток E-кадгерина или локализации злодея или флуоресцентной интенсивности.Лечение липополисахаридом или альфа-некрозом опухоли в сочетании с гипоксией нарушило эпителиальную архитектуру и продемонстрировало значительную потерю адгезии соединения и экспрессии белка границы кисти, выявленную потерей слуха ЭКА и окрашиванием злодеев. Жизнеспособность апикальной клетки определяли в нормоксических или гипоксических условиях. В нормоксических условиях по сравнению с контрольным липополисахаридом или опухолевым некрозом альфа не оказывал существенного влияния на жизнеспособность клеток энтероидов.Однако значительное снижение жизнеспособности наблюдалось при липополисахариде или альфа-некрозе опухоли в сочетании с гипоксией по сравнению с одной только гипоксией. При установлении апикальной модели в тарелке. Не забывайте хранить ЭДТА в клетке суспензии холодным.Это усилит изменение полярности и обеспечит правильную сжижение и удаление всех ECM. Другие последующие приложения, такие как QPCR, RNA-seq, вестерн-блоттинг или функциональные оценки барьерной проницаемости, могут быть выполнены дополнительно для характеристики ответа на воспалительную передачу сигналов при гипоксии.

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Трансплантация стволовых клеток в В пробирке Имитация ишемии / реперфузии модели

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Оценка Тератогенные Изменения в модели данио рерио внутриутробного развития плода алкоголь

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells (cEND) as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells cEND as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Растянуть в мозге эндотелиальные клетки микрососудов (CEND) в качестве<em&gt; In Vitro</em&gt; Травматические повреждения мозга Модель из гематоэнцефалического барьера

Due to the high mortality incident brought about by traumatic brain injury (TBI), methods that would enable one to better understand the underlying ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Экзайтотоксическим Стимуляция мозга Microslices как<em&gt; В пробирке</em&gt; Модель инсульта

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Изометрические сократимости измерение верхней брыжеечной артерии мыши, с помощью проволоки миография

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

В vitro Модель коронарного ангиогенеза

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

An In Vitro Hemodynamic Loop Model to Investigate the Hemocytocompatibility and Host Cell Activation of Vascular Medical Devices

Модель гемодинамической петли In Vitro для исследования гемоцитосовместимости и активации клеток-хостов сосудистых медицинских устройств

In this study, the hemocompatibility of tubes with an inner diameter of 5 mm made of polyvinyl chloride (PVC) and coated with different bioactive ...

In vitro Assessment of Myocardial Protection following Hypothermia-Preconditioning in a Human Cardiac Myocytes Model

In vitro Оценка защиты миокарда после гипотермии-предпосылок в модели миоцитов сердца человека

Ischemia/reperfusion-derived myocardial dysfunction is a common clinical scenario in patients after cardiac surgery. In particular, the sensitivity of ...

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

Модель экспериментального стеатоза in vitro:культура клеток гепатоцитов в липидной среде, обусловленной перегрузкой

Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease (MAFLD), previously known as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), is the most prevalent liver ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

Неонатальная модель некротизирующего энтероколита BALB/c

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...