Name: in vitro apical-out enteroid model of necrotizing enterocolitis
Uploaded: 2022-06-08T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis at JoVE.com

Detta innehåll är enbart författarnas ansvar och representerar inte nödvändigtvis de officiella åsikterna från National Institutes of Health. HC stöds av bidrag P20GM134973 från National Institutes of Health. KB stöds av ett bidrag från Children's Hospital Foundation (CHF) och Presbyterian Health Foundation (PHF). Vi tackar laboratoriet för molekylärbiologi och cytometriforskning vid OUHSC för användningen av Core Facility, som tillhandahöll konfokal avbildning.

Alla djurförsök i denna studie godkändes av University of Oklahoma Health Sciences Center Institutional Animal Care and Use Committee. Tunntarmsprover från en prematur icke-mänsklig primat (NHP, 90% dräktighet, olivbabian, Papio anubis) erhölls efter eutanasi för en separat studie (protokoll #101523-16-039-I).
1. Upprättande av apikal-out enteroid NEC-in-a-dish-modell
<ol><li>Beredning av media och enteroidbehandlingar OBS: När de har beretts enligt sta...

Den senaste utvecklingen av enteroidmodeller härledda från tarmepitelkrypter möjliggör en mer fysiologiskt relevant in vitro-vävnad för att studera nekrotiserande enterokolitpatogenes. Trots att alla större differentierade celltyper i tarmepitelet inkluderas är 3D-enteroider fortfarande föremål för flera betydande begränsningar. De konventionella, basolaterala enteroiderna suspenderas i 3D ECM-hydrogelkupoler, vars sammansättning och densitet kan begränsa normal diffusion inom vävnadsodlingsmiljö...

Nekrotiserande enterokolit (NEC), en allvarlig inflammatorisk sjukdom i tunntarmen som förekommer hos upp till 10% av för tidigt födda barn, är vanligtvis förknippad med hög sjuklighet och dödlighet 1,2. Dödligheten närmar sig 50% hos spädbarn med mycket låg födelsevikt (<1500 g), som kräver kirurgisk ingrepp, är inte ovanliga3. Medan den exakta etiologin för NEC för närvarande inte är förstådd, tros riskfaktorer, såsom formelmatning, förvärras med fysiologiska anomalier, såsom dysbios, ett omoget tarmepitel och en dysfunktionell tarmbarriär, i utvecklingen av sjukdomen 2,4. Trots betydande ansträngningar har få framsteg gjorts när det gäller förebyggande eller behandling av NEC under det senaste årtiondet5. En ny in vitro-metod för att studera NEC och tillhörande tarmepitelbarriärdysfunktion krävs för att öka förståelsen för sjukdomspatogenesen, eftersom resultat från djurmodeller hittills har översatts dåligt till sängkanten6.
Ett antal in vitro-modeller har använts för att undersöka mekanismerna som spelar in under NEC. Den humana tarmepitelcelllinjen, Caco-2, är bland de vanligaste in vitro-modellerna av NEC 7,8. Caco-2-celler emulerar borstgränsmorfologiska egenskaper hos tunntarmen, men som en cellinje skiljer de sig inte åt i det stora utbudet av in vivo-celltyper, inklusive slemproducerande bägareceller, som krävs för en mycket översättbar modell. HT-29-MTX, humana kolon adenokarcinomceller, inkluderar en blandad enterocyt- och bägare cellfenotyp, men saknar fortfarande kryptbaserade celltyper av tarmepitelet9. IEC-6 och IEC-18 är icke-transformerade cellinjer med en omogen ileal kryptliknande morfologi men härrör inte från mänsklig vävnad, vilket begränsar deras translationella kapacitet. FHs 74-Int och H4 tarmcellinjer härrör från mänsklig fostervävnad och bildar inte täta korsningar eller polariserade monolager10,11, och är därmed omogna jämfört med även de mest för tidigt födda barn som är mottagliga för NEC. Vanligtvis använder NEC in vitro-modeller lipopolysackarid (LPS) behandlingar för att inducera tollliknande receptor 4 (TLR4), en viktig receptor som initierar tarminflammation i NEC12. Skador medierade genom behandling av reaktiva syrearter (ROS), vanligtvis via väteperoxid, används ofta för att inducera NEC-liknande oxidativ skada och apoptos13,14. Som den främsta drivkraften för tarminflammation används tumörnekrosfaktor-alfa (TNF-α), en nedströms komponent i den inflammatoriska TLR4-signaleringen, också vanligtvis i dessa in vitro-modeller för att efterlikna in vivo-patogenes 15.
Organoider, genererade från inducerbara pluripotenta stamceller (iPSC), har vuxit i popularitet som en in vitro-modell av tarmen på grund av deras förmåga att rekapitulera den komplexa in vivo-arkitekturen och celltypskompositionen hos vävnaden från vilken de härrör16,17. Ett besläktat in vitro-system, enteroider, är organoider härledda från resekterade tarmkrypter som lättare kan etableras och underhållas än iPSC-härledda organoider. Enteroider odlas vanligtvis i en tredimensionell (3D) extracellulär matris (ECM) med experimentell åtkomst begränsad till den basolaterala cellytan. Metoder, såsom mikroinjektion18,19, har utvecklats för att övervinna denna barriär mot den apikala ytan, men uppbyggnaden av sloughed cellulärt skräp och slem i lumen gör mikroinjektion både tekniskt svårt och inkonsekvent. Eftersom anpassade robotmikroinjektionsplattformar inte är allmänt tillgängliga20, blir lab-to-lab-variabilitet i teknisk förmåga och allmän teknik betydande variabler att övervinna med mikroinjektionsprotokoll. Tvådimensionella (2D) monolager härledda från dissocierade 3D-enteroider, som fortfarande består av alla större celltyper i tarmepitelet, möjliggör åtkomst till den apikala ytan men har traditionellt varit svåra att upprätthålla utan ett matarskikt av mesenkymala myofibroblaster21. Medan cellodlingspermeabla stöd kan användas för att komma åt både apikala och basolaterala sidor av enteroidmonolager utan användning av underliggande myofibroblaster, kräver dessa insatser excision och montering av membranet före användning med modaliteter som konfokalmikroskopi, vilket resulterar i en mer tekniskt krävande och svår process vid användning av traditionella mikroskopimetoder22. NEC har modellerats in vitro med traditionella 3D-enteroider 23,24,25 och permeabla stöder 26,27, och tarminflammation har nyligen replikerats med gut-on-a-chip-modeller 28,29. Medan gut-on-a-chip-modeller som innehåller mikrofluidik är de överlägset mest avancerade och översättningsbara modellerna, är denna teknik dyr, komplex och otillgänglig för de flesta utredare30.
De senaste framstegen inom apikal-out enteroidtekniker har möjliggjort enklare åtkomst till den apikala ytan av 3D-enteroider utan att riskera att skada den strukturella integriteten hos in vitro-epitelet31,32,33. Apikala enteroider delar celltypskompositionen och barriärfunktionen hos in vivo tarmepitel, men till skillnad från typiska 3D-enteroider vetter de apikala ytorna på dessa celler mot odlingsmediet, vilket möjliggör mer fysiologiskt relevanta studier om näringsabsorption, mikrobiell infektion och luminalsekretion31. En ytterligare fördel med apikala enteroider är förmågan att homogent distribuera experimentella medel till enteroider. Varierande behandlingsvolymer baserat på enteroidstorlek krävs inte, som det är med mikroinjektion, och förmågan att upprätthålla dessa enteroider i suspensionskultur förnekar all ECM-interferens vid experimentell agentdiffusion32.
Nekrotiserande enterokolit är en multifaktoriell sjukdom som involverar flera tarmepitelcelltyper och en mängd olika miljö- och patofysiologiska faktorer34. Den varierade cellsammansättningen av intestinala enteroider är en klar förbättring jämfört med monokulturer vid modellering av en komplex sjukdom som NEC. Intressant nog, medan en enda inflammatorisk exponering ofta är tillräcklig för att inducera skador i in vitro-monokulturer, verkar enteroider, som med musmodeller23, kräva minst två inflammatoriska komponenter för att inducera NEC-liknande skada6. Här presenterar vi en apikal-ut NEC-in-a-dish-modell, med apikala enteroider i kombination med hypoxi (en viktig klinisk egenskap hos NEC6) och antingen LPS eller TNF-α, som en förbättrad och mer fysiologiskt relevant in vitro-modell för att studera epitelsvar på NEC-liknande inflammation och potentiellt identifiera terapeutiska mål. Vi beskriver ett protokoll för att vända polariteten hos tunntarmens 3D-enteroider, samt ett immunofluorescerande färgningsprotokoll för att identifiera epitelbarriärstörningar och korsande proteinuttrycksförändringar. Slutligen demonstrerar vi ytterligare en enkel enteroid viabilitetsanalys för att bestämma effekten av vår dual-hit, apikal-out NEC-in-a-dish-modell.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15575-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Conical tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G9681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar Ultra-Low Attachment 24-Well Microplates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200-602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glass 24 mm x 60 mm</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>102460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A-21202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Anti-Rabbit IgG Antibody, Cy3 conjugate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>AP182C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium/Nutrient Ham&#39;s Mixture F-12 (DMEM-F12) with 15 mM HEPES buffer</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>36254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E-cadherin antibody (7H12)</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NBP2-19051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde solution 4%, buffered, pH 6.9</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>1004960700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Fiji</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IntestiCult Organoid Growth Medium (Human)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>06010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 Confocal Microscope</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharides from Escherichia coli O111:B4, purified by gel filtration chromatography</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>L3012-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>566460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc MicroWell 96-Well, Nunclon Delta-Treated, Flat-Bottom Microplate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>136101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate Buffered Saline), 1x [-] calcium, magnesium, pH 7.4</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Glass Antifade Mountant with NucBlue</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P36983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Anti-Villin antibody [SP145]</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab130751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human TNF-&#945; protein 100 &#181;g</td>
			<td>Bio-Techne</td>
			<td>210-TA-100/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraMax iD3 Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Forma Series II Water-Jacketed Tri-Gas Incubator, 184L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TO-PRO-3 Iodide (642/661)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>T3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubes, 0.5 mL, flat cap</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AB0350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro apical-out enteroid model of necrotizing enterocolitis

Nekrotiserande enterokolit (NEC) är en förödande sjukdom som drabbar för tidigt födda barn, kännetecknad av tarminflammation och nekros. Enteroider har nyligen framträtt som ett lovande system för att modellera gastrointestinala patologier. Men för närvarande används metoder för enteroid manipulation antingen saknar tillgång till epitelets apikala yta (tredimensionell [3D]) eller är tidskrävande och resurskrävande (tvådimensionella [2D] monolager). Dessa metoder kräver ofta ytterligare steg, såsom mikroinjektion, för att modellen ska bli fysiologiskt översättbar. Här beskriver vi ett fysiologiskt relevant och billigt protokoll för att studera NEC in vitro genom att vända enteroidpolaritet, vilket resulterar i att den apikala ytan vetter utåt (apikal-ut). Ett immunofluorescerande färgningsprotokoll för att undersöka enteroidbarriärens integritet och korsande proteinuttryck efter exponering för tumörnekrosfaktor-alfa (TNF-α) eller lipopolysackarid (LPS) under normoxiska eller hypoxiska förhållanden tillhandahålls också. Viabiliteten hos 3D-apikala enteroider som utsätts för normoxiska eller hypoxiska LPS eller TNF-α i 24 timmar utvärderas också. Enteroider som utsattes för antingen LPS eller TNF-α, i kombination med hypoxi, uppvisade störningar i epitelarkitekturen, en förlust av adherens korsningsproteinuttryck och en minskning av cellviabiliteten. Detta protokoll beskriver en ny apikal-ut NEC-in-a-dish-modell som presenterar en fysiologiskt relevant och kostnadseffektiv plattform för att identifiera potentiella epitelmål för NEC-terapier och studera det prematura tarmsvaret på terapier.

Användningen av enteroider för att modellera tarminflammation, även inom ramen för nekrotiserande enterokolit, är nu vanligt. De flesta metoder som för närvarande används saknar emellertid antingen tillgång till den apikala ytan av enteroider, vilket förnekar den fysiologiska relevansen av föreningar avsedda för eventuell användning som orala terapier, eller är tekniskt svåra och tidskrävande, som med enteroid-härledda monolager. För att öka användbarheten av nuvarande in vitro-enteroidmodel...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis at JoVE.com

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Detta protokoll beskriver en apikal-ut nekrotiserande enterokolit (NEC) -i-en-skålmodell som använder små intestinala enteroider med omvänd polaritet, vilket möjliggör åtkomst till den apikala ytan. Vi tillhandahåller ett immunofluorescerande färgningsprotokoll för att detektera NEC-relaterade epitelstörningar och en metod för att bestämma livskraften hos apikala enteroider som utsätts för NEC-in-a-dish-protokollet.

In vitro Apical-out Enteroid modell av nekrotiserande enterokolit

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease affecting preterm infants, characterized by intestinal inflammation and necrosis. Enteroids have ...

Detta protokoll beskriver den första apikal-out-in-a-dish-modellen och är en kritisk förbättring jämfört med basala laterala enteroida in-a-dish-modeller när man etablerar in vitro-modellering av potentiella terapier avsedda för oral administrering. Denna metod ger tillgång till den apikala ytan av enteroider. Föreningar kan tillsättas till cellmedier och föreningarna tas upp apikalt som de skulle vara in vivo.Utredare som är intresserade av att etablera ett in vitro-system av tarminflammation för att testa potentiella orala terapier kan tycka att denna teknik är särskilt användbar. Vävnad från olika åldrar och arter kan kräva ytterligare standardisering. Så patienter som etablerar polaritetsvändningstider kan krävas.För att vända polariteten hos 3D-enteroider aspirerar media från varje brunn i en 24-brunnsplatta av etablerade 3D-basolaterala enteroider. Tillsätt 500 mikroliter fem millimolar iskall, EDTA eller PBS till varje brunn på en 24-brunnsplatta och stör försiktigt mekaniskt källarmembranextraktet eller extracellulär matriskupol genom att pipettera upp och ner fem till sex gånger med en P 200-pipett. Överför innehållet i fyra brunnar till ett 15 ml krönikerat rör.Tillsätt sedan åtta milliliter iskall EDTA slash PBS till röret. Överför de återstående 20 brunnarna på samma sätt. Inkubera rören vid fyra grader Celsius i en timme på en roterande plattform eller shaker vid 330 rpm.Efter inkubation centrifugera rören och kassera supernatanten från varje rör. Kombinera och tvätta pellets med fem milliliter DMEM F12. Centrifugera sedan cellernas suspension och ta bort supernatanten innan du tillsätter 12 ml antibiotikafritt medium till röret så att cellpelletsen återupplivas.Pippet 500 mikroliter av enteroidsuspensionen i varje brunn i en 24 brunn ultralåg fästplatta. Inkubera plattan vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid i två till fem dagar eller tills enteroiderna har omvänd polaritet. På dag ett avstår, överför innehållet i fyra brunnar i en 24-brunnsplatta till ett 1,5 ml mikrocentrifugrör.Upprepa för alla önskade brunnar med varje behandling i ett separat rör. Centrifugera rören och återsuspendera pelleten i 300 mikroliter 4% från aldehydfixeringsmedel vid rumstemperatur. Tvätta pellets efter 30 minuter med 500 mikroliter PBS.Tillsätt 500 mikroliter 0,1% Triton X 100 till rören. Inkubera rören i en timme vid rumstemperatur. Placera sedan rören på en rotator eller shaker vid 200 varv / min i 15 minuter vid två till åtta grader Celsius.Efter den sista inkubationen tillsätt 500 mikroliter 10% NDS i PBS T och inkubera vid rumstemperatur i 45 minuter. Under inkubation, förbered primär antikroppslösning. Nästa dag tillsätt 250 till 500 mikroliter PBS T till rören beroende på pelletsens storlek och placera dem på rotatorn eller skakaren vid 200 varv / min i en timme vid två till åtta grader Celsius.Tillsätt 200 mikroliter av den sekundära antikroppslösningen och inkubera rören vid två till åtta grader Celsius i mörkret. Nästa dag, fortsätt för montering av färgade apikala enteroider genom att snurra rören och ta bort 100 mikroliter supernatant. Återsuspendera cellerna i de återstående 100 mikroliter supernatant och överför cellsuspensionen till 500 mikroliterrör.Centrifugera rören i en minicentrifug i 20 sekunder. Ta bort supernatanten och återsuspendera pelletsen i 100 mikroliter rumstemperatur långt röd nukleinsyrafläck. Efter 20 minuters inkubation centrifugerar cellerna och återuppfinner pelletsen i 100 mikroliter PBS.Efter den andra tvätten och centrifugeringen avlägsna 70 mikroliter av supernatanten och återsuspendera pellets i den återstående volymen PBS. Överför sedan cellsuspensionen till en märkt 24 x 60 millimeter täckglidning. Applicera 75 mikroliter monteringsmedel direkt på provet och ta bort eventuella bubblor med en pipettspets.Efter härdning över natten i mörkret, applicera ett tunt lager glycerol på lockets glidningar, montera sedan lockets glidningar på glasskivan och tryck försiktigt på den på plats. Tryck för att ta bort eventuella bubblor mellan lockglidningen och bilden. Låt locket glida in vid rumstemperatur i mörkret i två timmar innan du avbildar enteroiderna vid 20 gångers förstoring med ett konfokalmikroskop.För enteroidbehandlingar, upprätta en apikal nekrotiserande enterokolit i en skålmodell i 24 timmar enligt beskrivningen i textmanuskriptet. Innan du utför analysen, ta bort 100 mikroliter media från varje brunn och lämna de återstående 400 mikroliterna. Tillsätt 400 mikroliter cellviabilitetsanalysreagens till varje brunn.Blanda innehållet kraftigt på en plattskakare i fem minuter vid 200 rpm för att inducera celllys. Överför sedan 200 mikroliter till en enda brunn av en 96 väl klar bottenplatta. Upprepa för de återstående 600 mikroliter och skapa fyra tekniska replikat per brunn.Använd en plattläsare som kan luminiscens, registrera värden vid 0,25 millisekunders integration och jämför de relativa värdena mellan behandlingar. Den representativa immunofluorescensfärgningen av kontrollen bekräftade den apikala lokaliseringen av kärnor mot lumen och detekteringen av skurk vid epitelets ytterkant. Jämfört med kontrollen inducerade exponering för lipopolysackarid, tumörnekros alfa eller hypoxi ensam inte öppna förändringar i bruttocellmorfologin E-cadherin eller skurklokalisering eller fluorescerande intensitet.Behandling med lipopolysackarid eller tumörnekros alfa i kombination med hypoxi störde epitelarkitekturen och visade en signifikant förlust av vidhäftningskorsning och borstgränsproteinuttryck som avslöjades av förlusten av ECA-hörsel och skurkfärgning. Den apikala cellviabiliteten bestämdes under normoxiska eller hypoxiska förhållanden. Under normoxiska förhållanden jämfört med kontrollen lipo polysackarid eller tumörnekros alfa påverkade inte signifikant cellviabiliteten hos enteroider.Emellertid, signifikanta minskningar i livskraft observerades i lipo polysackarid eller tumörnekros alfa i kombination med hypoxi jämfört med hypoxi ensam. Samtidigt som man etablerar apikal ut i-en-skål-modell. Kom ihåg att hålla EDTA i cellsuspensionen iskall.Detta kommer att förbättra polaritetsomvandlingen och säkerställa att all ECM är korrekt flytande och borttagen. Andra nedströms applikationer såsom QPCR, RNA-seq, western blotting eller funktionella utvärderingar av barriärpermeabilitet kan utföras ytterligare för att karakterisera svaret på inflammatorisk signalering vid hypoxi.

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vitro Apical-Out Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stamcellstransplantation i en In vitro Simulerad ischemi / Reperfusion Modell

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Bedömning Teratogena Förändringar i ett Zebrafish modell av Fetal Alcohol Exponering

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells (cEND) as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Stretch in Brain Microvascular Endothelial Cells cEND as an In Vitro Traumatic Brain Injury Model of the Blood Brain Barrier

Stretch i Brain mikrovaskulära endotelceller (cEND) som en<em&gt; In Vitro</em&gt; Traumatisk hjärnskada Modell av blodhjärnbarriären

Due to the high mortality incident brought about by traumatic brain injury (TBI), methods that would enable one to better understand the underlying ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxisk Stimulering av Brain Microslices som en<em&gt; In vitro</em&gt; Modell av stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk kontraktilitet mätning av mus mesenterica artär med Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

In Vitro Modell av födans Angiogenes

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

An In Vitro Hemodynamic Loop Model to Investigate the Hemocytocompatibility and Host Cell Activation of Vascular Medical Devices

En In Vitro Hemodynamic Loop Modell för att undersöka hemocytokompatibilitet och värdcell aktivering av Vaskulär medicintekniska produkter

In this study, the hemocompatibility of tubes with an inner diameter of 5 mm made of polyvinyl chloride (PVC) and coated with different bioactive ...

In vitro Assessment of Myocardial Protection following Hypothermia-Preconditioning in a Human Cardiac Myocytes Model

In vitro-bedömning av myokardskydd efter hypotermiförkonditionering i en human hjärt myocytmodell

Ischemia/reperfusion-derived myocardial dysfunction is a common clinical scenario in patients after cardiac surgery. In particular, the sensitivity of ...

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

En modell av experimentell steatos in vitro:Hepatocyt cellkultur i lipid överbelastning-konditionerat medium

Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease (MAFLD), previously known as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), is the most prevalent liver ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

En neonatal BALB/c Musmodell av nekrotiserande enterokolit

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...