Name: expanding the comprehension of the tumor microenvironment using mass spectrometry imaging of formalin-fixed and paraffin-embedded tissue samples
Uploaded: 2022-06-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples at JoVE.com

يعترف المؤلفون دون نوروود من خدمات التحرير ، ومكتبة الأبحاث الطبية في MD Anderson لتحرير هذه المقالة ومختبر التألق المناعي المتعدد وتحليل الصور في قسم علم الأمراض الجزيئية الانتقالية في MD Anderson. نتج هذا المنشور جزئيا عن بحث تم تيسيره من خلال الدعم العلمي والمالي لمراكز مراقبة وتحليل مناعة السرطان - شبكة كومنز البيانات المناعية للسرطان (CIMAC-CIDC) المقدمة من خلال اتفاقية التعاون بين المعهد الوطني للسرطان (NCI) (U24CA224285) إلى مركز جامعة تكساس إم دي أندرسون للسرطان مركز مراقبة وتحليل مناعة السرطان (CIMAC).

تم الحصول على عينات الأنسجة لأغراض البحث وفقا لمجلس المراجعة المؤسسية لمركز إم دي أندرسون للسرطان بجامعة تكساس ، وتم إلغاء تحديد العينات بشكل أكبر.
1. اختيار الأجسام المضادة
<ol><li>حدد أسئلة البحث لاختيار أفضل استنساخ الأجسام المضادة المتاحة. استخدم أطلس البروتين ا...

<ol>
	<li>Laplane, L., Duluc, D., Bikfalvi, A., Larmonier, N., Pradeu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+the+tumour+microenvironment.">Beyond the tumour microenvironment.</a> International Journal of Cancer. 145 (10), 2611-2618 (2019).</li><li>Galli, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relevance+of+immune+cell+and+tumor+microenvironment+imaging+in+the+new+era+of+immunotherapy.">Relevance of immune cell and tumor microenvironment imaging in the new era of immunotherapy.</a> Journal of Experimental &amp; Clinical Cancer Research. 39 (1), 89 (2020).</li><li>Liu, C. C., Steen, C. B., Newman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+approaches+for+characterizing+the+tumor+immune+microenvironment.">Computational approaches for characterizing the tumor immune microenvironment.</a> Immunology. 158 (2), 70-84 (2019).</li><li>Eisenstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sorting:+Divide+and+conquer.">Cell sorting: Divide and conquer.</a> Nature. 441 (7097), 1179-1185 (2006).</li><li>Scognamiglio, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+immunohistochemistry+assay+to+evaluate+the+melanoma+tumor+microenvironment.">Multiplex immunohistochemistry assay to evaluate the melanoma tumor microenvironment.</a> Methods in Enzymology. 635, 21-31 (2020).</li><li>Guo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+34-marker+panel+for+imaging+mass+cytometric+analysis+of+human+snap-frozen+tissue.">A 34-marker panel for imaging mass cytometric analysis of human snap-frozen tissue.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1466 (2020).</li><li>Fu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+architecture+of+the+immune+microenvironment+orchestrates+tumor+immunity+and+therapeutic+response.">Spatial architecture of the immune microenvironment orchestrates tumor immunity and therapeutic response.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 14 (1), 98 (2021).</li><li>Rost, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+ion+beam+imaging+analysis+for+quantitation+of+protein+expresssion+in+cancer+tissue+sections.">Multiplexed ion beam imaging analysis for quantitation of protein expresssion in cancer tissue sections.</a> Laboratory Investigation. 97 (8), 992-1003 (2017).</li><li>Keren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+structured+tumor-immune+microenvironment+in+triple+negative+breast+cancer+revealed+by+multiplexed+ion+beam+imaging.">A structured tumor-immune microenvironment in triple negative breast cancer revealed by multiplexed ion beam imaging.</a> Cell. 174 (6), 1373-1387 (2018).</li><li>Mathieson, W., Thomas, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+formalin-fixed,+paraffin-embedded+biospecimens+must+be+used+in+genomic+medicine:+An+evidence-based+review+and+conclusion.">Why formalin-fixed, paraffin-embedded biospecimens must be used in genomic medicine: An evidence-based review and conclusion.</a> The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 68 (8), 543-552 (2020).</li><li>Baghban, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microenvironment+complexity+and+therapeutic+implications+at+a+glance.">Tumor microenvironment complexity and therapeutic implications at a glance.</a> Cell Communication and Signaling. 18 (1), 59 (2020).</li><li>Cai, S., Allam, M., Coskun, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+spatial+bioimaging+for+combination+therapy+design.">Multiplex spatial bioimaging for combination therapy design.</a> Trends in Cancer. 6 (10), 813-818 (2020).</li><li>Allam, M., Cai, S., Coskun, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+bioimaging+of+single-cell+spatial+profiles+for+precision+cancer+diagnostics+and+therapeutics.">Multiplex bioimaging of single-cell spatial profiles for precision cancer diagnostics and therapeutics.</a> NPJ Precision Oncology. 4, 11 (2020).</li><li>Rad, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Pandora's+box+of+novel+technologies+that+may+revolutionize+lung+cancer.">The Pandora's box of novel technologies that may revolutionize lung cancer.</a> Lung Cancer. 159, 34-41 (2021).</li><li>Tan, W. C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+multiplex+immunohistochemistry/immunofluorescence+techniques+in+the+era+of+cancer+immunotherapy.">Overview of multiplex immunohistochemistry/immunofluorescence techniques in the era of cancer immunotherapy.</a> Cancer Commununications. 40 (4), 135-153 (2020).</li><li>Ptacek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+ion+beam+imaging+(MIBI)+for+characterization+of+the+tumor+microenvironment+across+tumor+types.">Multiplexed ion beam imaging (MIBI) for characterization of the tumor microenvironment across tumor types.</a> Laboratory Investigation. 100 (8), 1111-1123 (2020).</li></ol>

لا يزال التوضيح الشامل للتفاعلات المعقدة والمعقدة بين المكونات المتعددة ل TME هدفا محوريا لأبحاث السرطان. قدم المصنعون العديد من الفحوصات متعددة الإرسال كجزء من هذا الجهد ، خاصة على مدى السنوات ال 5 الماضية. التحليل المكاني متعدد الإرسال هو أداة متعددة الاستخدامات وقوية تسهل التصنيف المتز...

تعد أهمية أنواع الخلايا العديدة المحيطة بمجموعات الأورام النسيلة عنصرا حاسما في تصنيف التسرطن. وقد ازداد الاهتمام بتوضيح تكوين وتفاعلات البيئة الدقيقة للورم (TME) باستمرار بعد إنشاء العلاج القائم على المناعة كجزء من ترسانة علاج السرطان. لذلك ، تحولت استراتيجيات العلاج من نهج يركز على الورم إلى نهج يركز على TME1.
زادت الجهود المبذولة لتوضيح أدوار الخلايا المناعية في مراقبة الورم وتطور السرطان بشكل لافت للنظر في السنوات الأخيرة 2,3. في البحوث الطبية ، نشأت مجموعة كبيرة من الأساليب ، بما في ذلك الأساليب القائمة على قياس الخلايا وتقنيات التصوير أحادية البلكس والمتعددة ، كجزء من هذه المحاولة لفك رموز التفاعلات الفريدة لعناصر متعددة من TMEs.
تركز الطرق الرائدة مثل قياس التدفق الخلوي (اخترع في 1960s) ، وفرز الخلايا المنشطة بالفلور ، وقياس الخلايا الجماعية بشكل أساسي على تحديد مكونات TMEوقياسها كميا 4. على الرغم من أن التقنيات الكمية القائمة على قياس الخلايا تسمح بالتنميط الظاهري للمناظر الطبيعية المناعية ، إلا أن تحديد التوزيع المكاني الخلوي أمر مستحيل. على العكس من ذلك ، فإن طرقا مثل الكيمياء النسيجية المناعية أحادية البلكس القياسية تحافظ على بنية الأنسجة وتمكن الباحثين من تحليل التوزيع الخلوي ، على الرغم من أن انخفاض عدد الأهداف في قسم نسيج واحد هو قيد على هذه الطرق 5,6. على مدى السنوات العديدة الماضية ، ظهرت تقنيات التصوير متعددة الإرسال لدقة الخلية الواحدة مثل التألق المناعي المتعدد ، والتصوير الفلوري بالترميز الشريطي ، وقياس الطيف الكتلي التصويري كاستراتيجيات شاملة للحصول على معلومات حول تلطيخ العلامات المتزامنة باستخدام نفس قسم الأنسجة7.
نقدم هنا تقنية تجمع بين الأجسام المضادة الموسومة بالمعادن وقياس الطيف الكتلي الأيوني الثانوي وتمكن من تحديد كمية دقة الخلية الواحدة ، والتعبير المشترك للعلامة (النمط الظاهري) ، والتحليل المكاني باستخدام عينات الأنسجة الثابتة من الفورمالين ، والبارافين المدمج (FFPE) ، وعينات الأنسجة المجمدة الطازجة (FF) 8,9. عينات FFPE هي المواد الأكثر استخداما على نطاق واسع لأرشفة عينات الأنسجة وتمثل موردا متاحا بسهولة أكبر لتقنيات التصوير متعددة الإرسال من العينات المجمدة الطازجة10. بالإضافة إلى ذلك ، توفر هذه التقنية إمكانية استعادة الصور بعد أشهر. هنا ، نناقش بروتوكولات التلطيخ ومعالجة الصور باستخدام عينات أنسجة FFPE.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R3404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R3279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20X TBS-T</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Low-Barium PBS pH 7.4</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Tris pH 8.5&#160;</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#176;C Refrigerator</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>REVCO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P10</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P20</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P200</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P1000</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal Filter Ultrafree-MC</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>UFC30VV00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized H2O</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Slide Staining Jar, Green</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71385-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Slide Staining Jar, Yellow</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71385-Y</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Slide Staining Kit (Jar+Rack), White</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71388-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Stainless Steel Holder</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71388-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 70% EM Grade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>16360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) buffer: 10X Tris with EDTA, pH 9</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S2367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat resistant slide chamber</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62705-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-550-221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBI/O software</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBIcontrol software</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBIslide</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBIscope</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5415D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisture Chamber (Humid Chamber)</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M922-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS) Tablets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2944100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PT Module</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A80400012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapid-Flow Sterile Disposable Filter Units</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>097403A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>BioRocker</td>
			<td>S2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin column (Ultrafree-MC Spin Filter, 0.5mL 0.1&#956;m )</td>
			<td>MillQ</td>
			<td>UFC30VV00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide oven</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaccum Cabinet Desiccator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>30621-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Task-whipe</td>
			<td>Kimberly Clark</td>
			<td>34155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>534056-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

expanding the comprehension of the tumor microenvironment using mass spectrometry imaging of formalin-fixed and paraffin-embedded tissue samples

لقد أحدث التقدم في العلاجات القائمة على المناعة ثورة في علاج السرطان وأبحاثه. وقد أدى ذلك إلى تزايد الطلب على توصيف المشهد المناعي للورم. على الرغم من أن الكيمياء النسيجية المناعية القياسية مناسبة لدراسة بنية الأنسجة ، إلا أنها تقتصر على تحليل عدد صغير من العلامات. على العكس من ذلك ، يمكن لتقنيات مثل قياس التدفق الخلوي تقييم علامات متعددة في وقت واحد ، على الرغم من فقدان المعلومات حول مورفولوجيا الأنسجة. في السنوات الأخيرة ، ظهرت استراتيجيات متعددة الإرسال تدمج التحليل الظاهري والمكاني كنهج شاملة لتوصيف المشهد المناعي للورم. هنا ، نناقش تقنية مبتكرة تجمع بين الأجسام المضادة ذات العلامات المعدنية ومطياف الكتلة الأيونية الثانوية مع التركيز على الخطوات التقنية في تطوير الفحص وتحسينه ، وإعداد الأنسجة ، والحصول على الصور ومعالجتها. قبل تلطيخ ، يجب تطوير لوحة الأجسام المضادة ذات العلامات المعدنية وتحسينها. يدعم نظام الصور عالي الضفيرة هذا ما يصل إلى 40 جسما مضادا موسوما بعلامات معدنية في قسم واحد من الأنسجة. وتجدر الإشارة إلى أن خطر تداخل الإشارة يزداد مع زيادة عدد العلامات المدرجة في اللوحة. بعد تصميم اللوحة ، ينبغي إيلاء اهتمام خاص لتعيين النظائر المعدنية للجسم المضاد لتقليل هذا التداخل. يتم إجراء اختبار اللوحة الأولي باستخدام مجموعة فرعية صغيرة من الأجسام المضادة والاختبار اللاحق للوحة بأكملها في أنسجة التحكم. يتم الحصول على أقسام الأنسجة المثبتة بالفورمالين والبارافين وتركيبها على شرائح مغلفة بالذهب وملطخة أكثر. يستغرق التلطيخ 2 أيام ويشبه إلى حد كبير تلطيخ المناعة النسيجية الكيميائية القياسية. بمجرد تلطيخ العينات ، يتم وضعها في أداة الحصول على الصور. يتم تحديد حقول العرض، ويتم الحصول على الصور وتحميلها وتخزينها. المرحلة الأخيرة هي إعداد الصور لتصفية وإزالة التداخل باستخدام برنامج معالجة الصور الخاص بالنظام. عيب هذه المنصة هو عدم وجود برامج تحليلية. ومع ذلك ، يتم دعم الصور التي تم إنشاؤها بواسطة برامج علم الأمراض الحسابية المختلفة.

تم الحصول على أجزاء أنسجة TMA من سرطان اللوزتين والرئة الغدي (بسمك 5 مم) ووضعها في منتصف الشرائح المطلية بالذهب وفقا للمواصفات المتعلقة بحجم الأنسجة والهوامش الآمنة للشرائح. تعد الهوامش الزجاجية الحرة التي تبلغ 5 مم و 10 مم بين حافة الأنسجة والحدود الجانبية والسفلية للشرائح الزجاجية ، على ال?...

Watch this Scientific Journal Video about Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples at JoVE.com

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

في عصر العلاج المناعي للسرطان ، زاد الاهتمام بتوضيح ديناميكيات البيئة الدقيقة للورم بشكل ملحوظ. يفصل هذا البروتوكول تقنية تصوير مطياف الكتلة فيما يتعلق بخطوات التلطيخ والتصوير ، والتي تسمح بالتحليل المكاني المتعدد الإرسال للغاية.

توسيع فهم البيئة الدقيقة للورم باستخدام تصوير قياس الطيف الكتلي لعينات الأنسجة الثابتة بالفورمالين والبارافين المضمنة

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

تمكن هذه البروتوكولات من تحديد كمية دقة الخلية الواحدة ، والتعبير المشترك عن العلامات والتحليل الخاص باستخدام عينات الأنسجة المجمدة المثبتة بالفورمالين والبارافين والمجمدة الطازجة لتوضيح أدوار الخلايا المناعية في السرطان. هذه التقنية هي أداة قوية تسهل التوصيف المتزامن لعلامة 40 على قسم نسيج واحد ، وتحافظ على نطاق واسع على بنية الأنسجة في العينات. الخطوة الحاسمة هي تحسين الأجسام المضادة والتحقق من صحتها.يمكن أن يؤدي الفشل في إكمال الخطوة إلى صور منخفضة الجودة قد تعرض للخطر الاحتفاظ ببيانات ونتائج قابلة للتكرار عالية الجودة. ابدأ بتدوير جميع الأنابيب التي تحتوي على الأجسام المضادة عند 10،000 × G لمدة خمس دقائق ، وأضف الأجسام المضادة الفردية إلى المخزن المؤقت المانع واخلطها جيدا. لا تزعج الجزء السفلي من أنبوب الأجسام المضادة عند سحبه.قم بتصفية لوحة الأجسام المضادة عن طريق الترطيب المسبق لجهاز مرشح الطرد المركزي بسعة 0.1 ميكرومتر مع 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت المانع. قم بتدوير الفلتر عند 10،000 × G لمدة دقيقتين وقم بإزالة تدفق المخزن المؤقت المانع باستخدام ماصة. ثم انقل لوحة الأجسام المضادة إلى عمود دوران وقم بتدوير المرشح عند 10،000 × G لمدة دقيقتين.تخلص من عمود الدوران واستخدم التدفق كلوحة الأجسام المضادة التي تمت تصفيتها. بالنسبة لتلطيخ الأجسام المضادة، قم بإزالة المخزن المؤقت المانع من الشرائح عن طريق قلب كل شريحة على جانبها والنقر برفق على الحواف مقابل ممسحة المهام. ضع الشرائح في غرفة رطوبة وأضف 100 إلى 200 ميكرولتر من مزيج الأجسام المضادة الرئيسي إلى الأنسجة.أضف شرائح تحكم إيجابية وسلبية إلى دفعة التلطيخ واحتضن الشرائح عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها. لإعداد الأداة، قم بتسجيل الدخول إلى برنامج التحكم، وانقر على الاستيقاظ، إذا كان الجهاز في وضع السكون. انقر فوق نموذج Exchange لتحميل شريحة ثم انقر فوق متابعة لفتح الباب.ضع الشريحة في فتحة التحميل مع عينة متجهة لأعلى والملصق على اليمين ، انقر فوق متابعة لإغلاق الباب. حدد المشروع ثم حدد اسم الشريحة للعينة التي تم تحميلها. تصور الصورة البانورامية على جزء الصورة البصرية الشريحية لمجال الرؤية أو تحديد FOV ، وانقر فوق قائمة الوضع وحدد كاشف الإلكترون الثانوي ، ثم انقر فوق قائمة وضع التصوير واختر QC 300 ميكرومتر.انقر فوق Jog Stage للتحكم في موقع FOV ثم انقر فوق الأسهم للتنقل وتحديد موضع FOV. انقر فوق إضافة FOV ، وتعيين 400 ميكرومتر × 400 ميكرومتر كحجم الحقل وحدد Fine كوضع التصوير و 1 مللي ثانية من وقت الإقامة ، انقر فوق تأكيد. بعد إنشاء قائمة FOV ، انتقل إلى تركيز الصورة واضبط الوصمة عن طريق تحريك الشعاع إلى منطقة نسيج لن يتم تصويرها.اضبط المعلمات حتى يتم الحصول على صورة مركزية واضحة ، انقر فوق Start Run. سيتم تحميل الصور التي تم الحصول عليها تلقائيا وتخزينها في تطبيق إدارة الصور المستند إلى الويب. تصف المصفوفة الموضحة هنا النسبة المئوية للحديث المتبادل المستمدة من نقاء المسبار وأكاسيده.هنا تشير المربعات الزرقاء إلى أكبر من أو يساوي 0.5٪ من المحادثة المتقاطعة وتشير المربعات الواضحة إلى أقل من 0.5٪ من المحادثة المتقاطعة. بالنسبة لعلامات القداس ، يتم عرض التحقيقات التي ساهمت بنسبة 0.5٪ على الأقل في أي قنوات أو قناة أو قناتين أو أكثر من قناتين هنا. كما يتم عرض القنوات الجماعية التي تتلقى ما لا يقل عن 0.5٪ من المحادثات المتقاطعة من أي مجسات أو مسبارين أو أكثر من مسبارين.يتم تصوير صور التلطيخ التمثيلية في أنسجة مختلفة مثل سرطان الرئة الغدي والكلى غير الورمية واللوزتين هنا. يتم عرض صورة لقسم أنسجة اللوزتين ملطخة باستخدام هذه التقنية وتصورها باستخدام برنامج تحليل الصور الرقمية التابع لجهة خارجية قبل التصفية والتصحيح هنا. تظهر هنا صورة القسم نفسه تحت نفس الشروط بعد خطوات التصفية والتصحيح.تقوم هذه الطريقة بإنشاء صور يمكن تحميلها إلى برنامج تحليل الصور الرقمية التابع لجهة خارجية ، مما يسمح بإجراء تحليل شامل مثل تجزئة الأنسجة ، وتجزئة الخلايا ، والتعبير المشترك عن العلامة ، بالإضافة إلى تحليل الجيران والتحليل البعيد. تتوفر طرق التصوير متعددة الإرسال للغاية من خلال البحث. من خلال بناء لوحات مختلفة ، يمكن للباحثين التحقيق في عينات السرطان والطبيعية وشبه الأورام والالتهابات والمعدية.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

أربعة ألوان مضان المناعية من الخلايا السكانية الفرعية T- خلية في الأرشيفية الفورمالين ثابتة، جزءا لا يتجزأ من البارافين الإنسان البلعوم الخلايا الحرشفية سرطان الخلايا العينات

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

هلام ثنائي الأبعاد التفريد مقترنة بأساليب الطيف الكتلي لتحليل البروتين الأنسجة البشرية الورم الحميد الغدة النخامية

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Phosphopeptide Enrichment Coupled with Label-free Quantitative Mass Spectrometry to Investigate the Phosphoproteome in Prostate Cancer

تخصيب فوسفوبيبتيدي مقترنة بكمية خالية من تسمية الطيف الكتلي للتحقيق في فوسفوبروتيومي في سرطان البروستاتا

Phosphoproteomics involves the large-scale study of phosphorylated proteins. Protein phosphorylation is a critical step in many signal transduction ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

تلطيخ مطاطي على الشرائح جزءا لا يتجزأ من البارافين من أنسجة سرطان المعدة pT3N0M0

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

لوحة الفلورة تعدد الإرسال الآلي للدراسات المناعية-علم الأورام في عينات الأنسجة الكبدية الفورمالين--ثابت

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry

قياس إعادة عرض العظام وإعادة إنشاء بيئة الورم والعظام الدقيقة باستخدام ثقافة كالفاريا المشتركة والقياس الHISTOMORPHometry

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength ...

Capturing Small Molecule Communication Between Tissues and Cells Using Imaging Mass Spectrometry

التقاط الاتصالات جزيء صغير بين الأنسجة والخلايا باستخدام التصوير الكتلي

Imaging mass spectrometry (IMS) has routinely been applied to three types of samples: tissue sections, spheroids, and microbial colonies. These sample ...

Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and Fixed Tissue Analysis

تقييم البيئة الدقيقة للورم من الانبثاث المدخل بوساطة الأوعية الدموية المرتبطة بنشر الخلايا السرطانية باستخدام التصوير داخل الحيوية وتحليل الأنسجة الثابتة

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

التحليل المرضي لنقائل الرئة بعد الحقن الجانبي الوريد الذيل من الخلايا السرطانية

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

عزل السوائل القريبة للتحقيق في البيئة الدقيقة للورم من سرطان البنكرياس الغدي

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...