Name: expanding the comprehension of the tumor microenvironment using mass spectrometry imaging of formalin-fixed and paraffin-embedded tissue samples
Uploaded: 2022-06-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples at JoVE.com

Os autores reconhecem Don Norwood dos Serviços de Edição, Biblioteca Médica de Pesquisa na MD Anderson para edição deste artigo e o Multiplex Immunofluorescence and Image Analysis Laboratory no Departamento de Patologia Molecular Translacional da MD Anderson. Esta publicação resultou em parte de pesquisas facilitadas pelo apoio científico e financeiro para os Centros de Monitoramento e Análise imune do Câncer-Cancer Immunologic Data Commons Network (CIMAC-CIDC) fornecidos através do National Cancer Institute (NCI) Cooperative Agreement (U24CA224285) para o Centro de Monitoramento e Análise De Câncer do Centro de Câncer da Universidade do Texas MD Anderson Cancer Institute (CIMAC).

Amostras de tecido foram obtidas para fins de pesquisa de acordo com o Conselho de Revisão Institucional do Centro de Câncer Anderson da Universidade do Texas, e as amostras foram ainda mais desidentificdas.
1. Seleção de anticorpos
<ol><li>Defina as perguntas de pesquisa para escolher os melhores clones de anticorpos disponíveis. Use o Atlas de Proteína Humana, pesquisa publicada e sites de fabricantes de anticorpos como recursos de pesquisa. NOTA: A seleção de c...

<ol>
	<li>Laplane, L., Duluc, D., Bikfalvi, A., Larmonier, N., Pradeu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+the+tumour+microenvironment.">Beyond the tumour microenvironment.</a> International Journal of Cancer. 145 (10), 2611-2618 (2019).</li><li>Galli, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relevance+of+immune+cell+and+tumor+microenvironment+imaging+in+the+new+era+of+immunotherapy.">Relevance of immune cell and tumor microenvironment imaging in the new era of immunotherapy.</a> Journal of Experimental &amp; Clinical Cancer Research. 39 (1), 89 (2020).</li><li>Liu, C. C., Steen, C. B., Newman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+approaches+for+characterizing+the+tumor+immune+microenvironment.">Computational approaches for characterizing the tumor immune microenvironment.</a> Immunology. 158 (2), 70-84 (2019).</li><li>Eisenstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sorting:+Divide+and+conquer.">Cell sorting: Divide and conquer.</a> Nature. 441 (7097), 1179-1185 (2006).</li><li>Scognamiglio, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+immunohistochemistry+assay+to+evaluate+the+melanoma+tumor+microenvironment.">Multiplex immunohistochemistry assay to evaluate the melanoma tumor microenvironment.</a> Methods in Enzymology. 635, 21-31 (2020).</li><li>Guo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+34-marker+panel+for+imaging+mass+cytometric+analysis+of+human+snap-frozen+tissue.">A 34-marker panel for imaging mass cytometric analysis of human snap-frozen tissue.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1466 (2020).</li><li>Fu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+architecture+of+the+immune+microenvironment+orchestrates+tumor+immunity+and+therapeutic+response.">Spatial architecture of the immune microenvironment orchestrates tumor immunity and therapeutic response.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 14 (1), 98 (2021).</li><li>Rost, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+ion+beam+imaging+analysis+for+quantitation+of+protein+expresssion+in+cancer+tissue+sections.">Multiplexed ion beam imaging analysis for quantitation of protein expresssion in cancer tissue sections.</a> Laboratory Investigation. 97 (8), 992-1003 (2017).</li><li>Keren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+structured+tumor-immune+microenvironment+in+triple+negative+breast+cancer+revealed+by+multiplexed+ion+beam+imaging.">A structured tumor-immune microenvironment in triple negative breast cancer revealed by multiplexed ion beam imaging.</a> Cell. 174 (6), 1373-1387 (2018).</li><li>Mathieson, W., Thomas, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+formalin-fixed,+paraffin-embedded+biospecimens+must+be+used+in+genomic+medicine:+An+evidence-based+review+and+conclusion.">Why formalin-fixed, paraffin-embedded biospecimens must be used in genomic medicine: An evidence-based review and conclusion.</a> The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 68 (8), 543-552 (2020).</li><li>Baghban, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microenvironment+complexity+and+therapeutic+implications+at+a+glance.">Tumor microenvironment complexity and therapeutic implications at a glance.</a> Cell Communication and Signaling. 18 (1), 59 (2020).</li><li>Cai, S., Allam, M., Coskun, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+spatial+bioimaging+for+combination+therapy+design.">Multiplex spatial bioimaging for combination therapy design.</a> Trends in Cancer. 6 (10), 813-818 (2020).</li><li>Allam, M., Cai, S., Coskun, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+bioimaging+of+single-cell+spatial+profiles+for+precision+cancer+diagnostics+and+therapeutics.">Multiplex bioimaging of single-cell spatial profiles for precision cancer diagnostics and therapeutics.</a> NPJ Precision Oncology. 4, 11 (2020).</li><li>Rad, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Pandora's+box+of+novel+technologies+that+may+revolutionize+lung+cancer.">The Pandora's box of novel technologies that may revolutionize lung cancer.</a> Lung Cancer. 159, 34-41 (2021).</li><li>Tan, W. C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+multiplex+immunohistochemistry/immunofluorescence+techniques+in+the+era+of+cancer+immunotherapy.">Overview of multiplex immunohistochemistry/immunofluorescence techniques in the era of cancer immunotherapy.</a> Cancer Commununications. 40 (4), 135-153 (2020).</li><li>Ptacek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+ion+beam+imaging+(MIBI)+for+characterization+of+the+tumor+microenvironment+across+tumor+types.">Multiplexed ion beam imaging (MIBI) for characterization of the tumor microenvironment across tumor types.</a> Laboratory Investigation. 100 (8), 1111-1123 (2020).</li></ol>

A elucidação abrangente das interações complexas e intrincadas entre os múltiplos componentes de um TME continua sendo um objetivo crucial da pesquisa do câncer. Os fabricantes introduziram inúmeros ensaios multiplexados como parte desse esforço, especialmente nos últimos 5 anos. A análise espacial multiplexada é uma ferramenta versátil e poderosa que facilita a categorização simultânea de vários alvos, preservando a morfologia estrutural em amostras de tumores. Técnicas de análise espacial podem ser re...

A importância dos numerosos tipos de células em torno das populações de tumores clonais é um elemento crucial na categorização da carcinogênese. O interesse em elucidar essa composição do microambiente tumoral (TME) e as interações tem aumentado continuamente após o estabelecimento de terapia de base imunológica como parte do arsenal de tratamento do câncer. Portanto, as estratégias de tratamento mudaram de uma abordagem centrada no tumor para uma centrada no TME1.
Os esforços para elucidar os papéis das células imunes na vigilância do tumor e no desenvolvimento do câncer aumentaram de forma impressionante nos últimos anos 2,3. Na pesquisa médica, uma infinidade de métodos, incluindo métodos baseados em citometria e tecnologias de imagem singleplex e multiplex, surgiu como parte dessa tentativa de decifrar as interações únicas de múltiplos elementos de TMEs.
Métodos pioneiros como citometria de fluxo (inventada na década de 1960), classificação celular ativada por fluorescência e citometria de massa são focados principalmente na identificação e quantificação dos componentes TME4. Embora as técnicas quantitativas baseadas em citometria permitam fenotipagem da paisagem imunológica, determinar a distribuição espacial celular é impossível. Por outro lado, métodos como a imunohistoquímica singleplex padrão preservam a arquitetura tecidual e permitem aos pesquisadores analisar a distribuição celular, embora um número reduzido de alvos em uma única seção de tecido seja uma limitação desses métodos 5,6. Nos últimos anos, tecnologias de imagem multiplexed para resolução unicelular, como imunofluorescência multiplex, imagem de fluorescência de codificação de barras e espectrometria de massa de imagem surgiram como estratégias abrangentes para a aquisição de informações sobre coloração simultânea de marcadores usando a mesma seçãode tecido 7.
Aqui apresentamos uma tecnologia que casa anticorpos com etiqueta metálica e espectrometria de massa de íons secundários e permite quantificação de resolução de células únicas, co-expressão de marcador (fenotipagem) e análise espacial usando amostras de tecido 8,9. As amostras de FFPE são os materiais mais utilizados para amostras de arquivamento de tecidos e representam um recurso mais facilmente disponível para tecnologias de imagem multiplexada do que amostras congeladas frescas10. Além disso, essa tecnologia oferece a possibilidade de readquirivelmente imagens meses depois. Aqui, discutimos nossos protocolos de coloração e processamento de imagens usando amostras de tecido FFPE.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R3404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R3279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20X TBS-T</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Low-Barium PBS pH 7.4</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Tris pH 8.5&#160;</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#176;C Refrigerator</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>REVCO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P10</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P20</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P200</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P1000</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal Filter Ultrafree-MC</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>UFC30VV00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized H2O</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Slide Staining Jar, Green</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71385-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Slide Staining Jar, Yellow</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71385-Y</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Slide Staining Kit (Jar+Rack), White</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71388-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Stainless Steel Holder</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71388-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 70% EM Grade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>16360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) buffer: 10X Tris with EDTA, pH 9</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S2367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat resistant slide chamber</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62705-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-550-221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBI/O software</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBIcontrol software</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBIslide</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBIscope</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5415D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisture Chamber (Humid Chamber)</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M922-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS) Tablets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2944100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PT Module</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A80400012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapid-Flow Sterile Disposable Filter Units</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>097403A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>BioRocker</td>
			<td>S2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin column (Ultrafree-MC Spin Filter, 0.5mL 0.1&#956;m )</td>
			<td>MillQ</td>
			<td>UFC30VV00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide oven</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaccum Cabinet Desiccator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>30621-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Task-whipe</td>
			<td>Kimberly Clark</td>
			<td>34155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>534056-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

expanding the comprehension of the tumor microenvironment using mass spectrometry imaging of formalin-fixed and paraffin-embedded tissue samples

Os avanços nas terapias imunológicas revolucionaram o tratamento e a pesquisa do câncer. Isso desencadeou uma demanda crescente pela caracterização da paisagem imunológica do tumor. Embora a imunohistoquímica padrão seja adequada para estudar a arquitetura tecidual, limita-se à análise de um pequeno número de marcadores. Por outro lado, técnicas como citometria de fluxo podem avaliar múltiplos marcadores simultaneamente, embora as informações sobre morfologia tecidual sejam perdidas. Nos últimos anos, estratégias multiplexadas que integram a análise fenotípica e espacial surgiram como abordagens abrangentes para a caracterização da paisagem imunológica tumoral. Aqui, discutimos uma tecnologia inovadora que combina anticorpos com rótulos metálicos e espectrometria de massa de íons secundários com foco nas etapas técnicas de desenvolvimento e otimização de ensaios, preparação de tecidos e aquisição e processamento de imagens. Antes da coloração, um painel de anticorpos com etiqueta metálica deve ser desenvolvido e otimizado. Este sistema de imagem hi-plex suporta até 40 anticorpos com etiqueta metálica em uma única seção de tecido. Note-se que o risco de interferência de sinal aumenta com o número de marcadores incluídos no painel. Após o desenho do painel, deve-se dar especial atenção à atribuição do isótopo metálico ao anticorpo para minimizar essa interferência. Testes preliminares do painel são realizados usando um pequeno subconjunto de anticorpos e testes subsequentes de todo o painel em tecidos de controle. Seções de tecido fixas em parafina são obtidas e montadas em lâminas revestidas de ouro e ainda mais manchadas. A coloração leva 2 dias e se assemelha muito à coloração imunohistoquímica padrão. Uma vez que as amostras são manchadas, elas são colocadas no instrumento de aquisição de imagens. Os campos de exibição são selecionados e as imagens são adquiridas, carregadas e armazenadas. O estágio final é a preparação de imagens para a filtragem e remoção de interferências usando o software de processamento de imagens do sistema. Uma desvantagem dessa plataforma é a falta de software analítico. No entanto, as imagens geradas são suportadas por diferentes softwares de patologia computacional.

As seções de tecido TMA de amígdalas e pulmonares (5 mm de espessura) foram obtidas e colocadas no meio de lâminas revestidas de ouro seguindo as especificações relativas ao tamanho do tecido e margens seguras dos slides. As margens de vidro livres de 5 mm e 10 mm entre a borda do tecido e as bordas laterais e inferiores das lâminas de vidro, respectivamente, são necessárias para uma coloração ideal. As seções de tecido foram assadas durante a noite em um forno antes da coloração para garantir a adequada a...

Watch this Scientific Journal Video about Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples at JoVE.com

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

Na era da imunoterapia contra o câncer, o interesse em elucidar a dinâmica do microambiente tumoral aumentou de forma impressionante. Este protocolo detalha uma técnica de imagem de espectrometria de massa em relação às suas etapas de coloração e imagem, que permitem uma análise espacial altamente multiplexada.

Expandindo a compreensão do microambiente tumoral usando imagens de espectrometria de massa de amostras de tecido fixo e parafina

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Esses protocolos permitem quantificação de resolução de células únicas, co-expressão de marcadores e uma análise especial usando amostras de tecido congelado com estatação fixa e parafina parafina para elucidar os papéis das células imunes no câncer. Esta técnica é uma ferramenta poderosa que facilita a caracterização simultânea de um marcador 40 em uma única seção de tecido, preservando amplamente a estrutura do tecido nas amostras. O passo crítico é a otimização e validação de anticorpos.A não conclusão da etapa pode resultar em imagens de baixa qualidade que podem comprometer a retenção de dados e resultados reprodutíveis de alta qualidade. Comece girando para baixo todos os anticorpos contendo tubos a 10.000 x G por cinco minutos, adicione anticorpos individuais ao tampão de bloqueio e misture bem. Não perturbe a parte inferior do tubo de anticorpos ao cano-lo.Filtre o painel de anticorpos pré-molhando um dispositivo de filtro centrífugo de 0,1 micrômetro com 100 microliters de tampão de bloqueio. Gire o filtro a 10.000 x G por dois minutos e remova o fluxo de tampão de bloqueio com uma pipeta. Em seguida, transfira o painel de anticorpos para uma coluna de giro e gire o filtro a 10.000 x G por dois minutos.Descarte a coluna de giro e use o fluxo através como o painel de anticorpos filtrado. Para a coloração do anticorpo, remova o tampão de bloqueio dos slides, derrubando cada slide de lado e tocando suavemente as bordas contra um limpador de tarefas. Coloque os slides em uma câmara de umidade e adicione 100 a 200 microliters de mistura mestre de anticorpos ao tecido.Adicione slides de controle positivos e negativos ao lote de coloração e incubar os slides a 4 graus Celsius durante a noite. Para configurar o instrumento, faça login no software de controle e clique em Wake Up, se o instrumento estiver no modo de sono. Clique em Trocar amostra para carregar um slide e, em seguida, clique em Continuar abrindo a porta.Coloque o slide no slot de carregamento com uma amostra voltada para cima e a etiqueta à direita, clique em Continuar a fechar a porta. Selecione o projeto e selecione o nome de slides para a amostra carregada. Visualize a imagem panorâmica no painel de imagem óptica de slide para o campo de exibição ou seleção FOV, clique no menu Mode e selecione O Detector de Elétrons Secundário, em seguida, clique no menu modo de imagem e escolha QC 300 micrômetro.Clique em Jog Stage para controlar o local FOV e clique nas setas para navegar e selecione a posição do FOV. Clique em adicionar FOV, defina 400 micrômetros por 400 micrômetros como o tamanho do campo e selecione Fine como o Modo de Imagem e 1 milissegundo de Dwell Time, clique em Confirmar. Depois de criar uma lista de FOV, proceda ao foco da imagem e ajuste a Estigmas movendo o feixe para uma região de tecido que não será imageda.Ajuste os parâmetros até que uma imagem central clara seja obtida, clique em Iniciar Run. As imagens adquiridas serão automaticamente carregadas e armazenadas no aplicativo de gerenciamento de imagens baseado na Web. A matriz mostrada aqui descreve a porcentagem de crosstalk derivada da pureza da sonda e óxidos.Aqui as caixas azuis indicam maior ou igual a 0,5% de crosstalk e caixas claras indicam menos de 0,5% de crosstalk. Para as tags de massa, sondas que contribuíram com pelo menos 0,5% de crosstalk em nenhum canal, um ou dois canais, ou mais de dois canais são mostrados aqui. Canais em massa que recebem pelo menos 0,5% de crosstalk de nenhuma sonda, uma ou duas sondas, ou mais de duas sondas também são mostrados.As imagens representativas de coloração em diferentes tecidos como adenocarcinoma pulmonar, rim não neoplásico e amígdalas são retratadas aqui. Uma imagem de uma seção de tecido de amígdalas manchada usando essa técnica e visualizada usando um programa de software de análise de imagem digital de terceiros antes de filtrar e corrigir é apresentada aqui. A imagem da mesma seção sob as mesmas condições após as etapas de filtragem e correção é mostrada aqui.Esse método gera imagens que podem ser carregadas para um software de análise de imagem digital de terceiros, permitindo análises abrangentes como compartimentação de tecidos, segmentação celular, co-expressão de marcadores, bem como análise de vizinhos e análises distantes. Métodos de imagem altamente multiplex estão disponíveis através de pesquisas. Ao construir diferentes painéis, os pesquisadores podem investigar amostras de câncer, normal, paraneoplásica, inflamatória e infecciosa.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

Imuno-histoquímica de fluorescência de quatro cores das subpopulações de células T em amostras de carcinoma de células escamosas humano oftaríngeas fixadas em formalina, arquivadas, formadas por formalina

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Pesquisa do câncer

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

Eletroforese em Gel bidimensional juntamente com métodos de espectrometria de massa para uma análise do proteoma de tecido humano Adenoma de hipófise

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Phosphopeptide Enrichment Coupled with Label-free Quantitative Mass Spectrometry to Investigate the Phosphoproteome in Prostate Cancer

Enriquecimento de Fosfopeptida acoplado com espectrometria de massa livre de rótulo quantitativa para investigar o Phosphoproteome no câncer de próstata

Phosphoproteomics involves the large-scale study of phosphorylated proteins. Protein phosphorylation is a critical step in many signal transduction ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Coloração elástica em lâminas de parafina-Embedded de pT3N0M0 tecido de câncer gástrico

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

Painel de imunofluorescência Multiplex automatizada para estudos imuno-oncologia em amostras de Carcinoma fixada em formol

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry

Medição da remodelagem óssea e recriação do microambiente tumor-osso usando a cocultura da Calvaria e a histomormormetria

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength ...

Capturing Small Molecule Communication Between Tissues and Cells Using Imaging Mass Spectrometry

Capturando a molécula pequena comunicação entre os tecidos e células usando a imagem latente de espectrometria de massa

Imaging mass spectrometry (IMS) has routinely been applied to three types of samples: tissue sections, spheroids, and microbial colonies. These sample ...

Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and Fixed Tissue Analysis

Avaliando o microambiente do tumor da permeabilidade vascular entrada-negociada metástase associada com a disseminação da pilha do cancro usando a imagem latente intravital e a análise fixa do tecido

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Análise patológica da metástase pulmonar após injeção lateral de cauda-veia de células tumorais

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

Isolamento de Fluidos Proximais para Investigar o Microambiente Tumoral do Adenocarcinoma Pancreático

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...