Name: expanding the comprehension of the tumor microenvironment using mass spectrometry imaging of formalin-fixed and paraffin-embedded tissue samples
Uploaded: 2022-06-29T13:00:00
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Los autores agradecen a Don Norwood de Editing Services, Research Medical Library del MD Anderson por editar este artículo y al Multiplex Immunofluorescence and Image Analysis Laboratory del Department of Translational Molecular Pathology del MD Anderson. Esta publicación resultó en parte de la investigación facilitada por el apoyo científico y financiero para los Centros de Análisis y Monitoreo Inmunológico del Cáncer-Red de Datos Inmunológicos del Cáncer (CIMAC-CIDC) proporcionado a través del Acuerdo de Cooperación del Instituto Nacional del Cáncer (NCI) (U24CA224285) al Centro de Análisis y Monitoreo Inmunológico del Cáncer (CIMAC) del MD Anderson Cancer Center de la Universidad de Texas.

Las muestras de tejido se obtuvieron con fines de investigación de acuerdo con la Junta de Revisión Institucional del MD Anderson Cancer Center de la Universidad de Texas, y las muestras se desidentificaron aún más.
1. Selección de anticuerpos
<ol><li>Definir las preguntas de investigación para elegir los mejores clones de anticuerpos disponibles. Utilice el Atlas de proteínas humanas, la investigación publicada y los sitios web de fabricantes de anticuerpos como rec...

<ol>
	<li>Laplane, L., Duluc, D., Bikfalvi, A., Larmonier, N., Pradeu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+the+tumour+microenvironment.">Beyond the tumour microenvironment.</a> International Journal of Cancer. 145 (10), 2611-2618 (2019).</li><li>Galli, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relevance+of+immune+cell+and+tumor+microenvironment+imaging+in+the+new+era+of+immunotherapy.">Relevance of immune cell and tumor microenvironment imaging in the new era of immunotherapy.</a> Journal of Experimental &amp; Clinical Cancer Research. 39 (1), 89 (2020).</li><li>Liu, C. C., Steen, C. B., Newman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+approaches+for+characterizing+the+tumor+immune+microenvironment.">Computational approaches for characterizing the tumor immune microenvironment.</a> Immunology. 158 (2), 70-84 (2019).</li><li>Eisenstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sorting:+Divide+and+conquer.">Cell sorting: Divide and conquer.</a> Nature. 441 (7097), 1179-1185 (2006).</li><li>Scognamiglio, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+immunohistochemistry+assay+to+evaluate+the+melanoma+tumor+microenvironment.">Multiplex immunohistochemistry assay to evaluate the melanoma tumor microenvironment.</a> Methods in Enzymology. 635, 21-31 (2020).</li><li>Guo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+34-marker+panel+for+imaging+mass+cytometric+analysis+of+human+snap-frozen+tissue.">A 34-marker panel for imaging mass cytometric analysis of human snap-frozen tissue.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1466 (2020).</li><li>Fu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+architecture+of+the+immune+microenvironment+orchestrates+tumor+immunity+and+therapeutic+response.">Spatial architecture of the immune microenvironment orchestrates tumor immunity and therapeutic response.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 14 (1), 98 (2021).</li><li>Rost, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+ion+beam+imaging+analysis+for+quantitation+of+protein+expresssion+in+cancer+tissue+sections.">Multiplexed ion beam imaging analysis for quantitation of protein expresssion in cancer tissue sections.</a> Laboratory Investigation. 97 (8), 992-1003 (2017).</li><li>Keren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+structured+tumor-immune+microenvironment+in+triple+negative+breast+cancer+revealed+by+multiplexed+ion+beam+imaging.">A structured tumor-immune microenvironment in triple negative breast cancer revealed by multiplexed ion beam imaging.</a> Cell. 174 (6), 1373-1387 (2018).</li><li>Mathieson, W., Thomas, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+formalin-fixed,+paraffin-embedded+biospecimens+must+be+used+in+genomic+medicine:+An+evidence-based+review+and+conclusion.">Why formalin-fixed, paraffin-embedded biospecimens must be used in genomic medicine: An evidence-based review and conclusion.</a> The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 68 (8), 543-552 (2020).</li><li>Baghban, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microenvironment+complexity+and+therapeutic+implications+at+a+glance.">Tumor microenvironment complexity and therapeutic implications at a glance.</a> Cell Communication and Signaling. 18 (1), 59 (2020).</li><li>Cai, S., Allam, M., Coskun, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+spatial+bioimaging+for+combination+therapy+design.">Multiplex spatial bioimaging for combination therapy design.</a> Trends in Cancer. 6 (10), 813-818 (2020).</li><li>Allam, M., Cai, S., Coskun, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+bioimaging+of+single-cell+spatial+profiles+for+precision+cancer+diagnostics+and+therapeutics.">Multiplex bioimaging of single-cell spatial profiles for precision cancer diagnostics and therapeutics.</a> NPJ Precision Oncology. 4, 11 (2020).</li><li>Rad, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Pandora's+box+of+novel+technologies+that+may+revolutionize+lung+cancer.">The Pandora's box of novel technologies that may revolutionize lung cancer.</a> Lung Cancer. 159, 34-41 (2021).</li><li>Tan, W. C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+multiplex+immunohistochemistry/immunofluorescence+techniques+in+the+era+of+cancer+immunotherapy.">Overview of multiplex immunohistochemistry/immunofluorescence techniques in the era of cancer immunotherapy.</a> Cancer Commununications. 40 (4), 135-153 (2020).</li><li>Ptacek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+ion+beam+imaging+(MIBI)+for+characterization+of+the+tumor+microenvironment+across+tumor+types.">Multiplexed ion beam imaging (MIBI) for characterization of the tumor microenvironment across tumor types.</a> Laboratory Investigation. 100 (8), 1111-1123 (2020).</li></ol>

La elucidación exhaustiva de las complejas e intrincadas interacciones entre los múltiples componentes de un TME sigue siendo un objetivo fundamental de la investigación del cáncer. Los fabricantes han introducido numerosos ensayos multiplexados como parte de este esfuerzo, especialmente en los últimos 5 años. El análisis espacial multiplexado es una herramienta versátil y poderosa que facilita la categorización simultánea de varios objetivos al tiempo que preserva la morfología estructural en muestras tumoral...

La importancia de los numerosos tipos de células que rodean a las poblaciones de tumores clonales es un elemento crucial en la categorización de la carcinogénesis. El interés en dilucidar esta composición e interacciones del microambiente tumoral (TME) ha aumentado continuamente después del establecimiento de la terapia basada en el sistema inmunitario como parte del arsenal de tratamiento del cáncer. Por lo tanto, las estrategias de tratamiento han pasado de un enfoque centrado en el tumor a uno centrado en TME1.
Los esfuerzos para dilucidar el papel de las células inmunes en la vigilancia tumoral y el desarrollo del cáncer han aumentado notablemente en los últimos años 2,3. En la investigación médica, surgió una gran cantidad de métodos, incluidos los métodos basados en citometría y las tecnologías de imágenes singleplex y multiplex, como parte de este intento de descifrar las interacciones únicas de múltiples elementos de TME.
Los métodos pioneros como la citometría de flujo (inventada en la década de 1960), la clasificación celular activada por fluorescencia y la citometría de masas se centran principalmente en identificar y cuantificar los componentes de TME4. Aunque las técnicas cuantitativas basadas en la citometría permiten el fenotipado del paisaje inmune, determinar la distribución espacial celular es imposible. Por el contrario, métodos como la inmunohistoquímica singleplex estándar preservan la arquitectura tisular y permiten a los investigadores analizar la distribución celular, aunque un número reducido de dianas en una sola sección de tejido es una limitación de estos métodos 5,6. En los últimos años, las tecnologías de imágenes multiplexadas para la resolución de una sola célula, como la inmunofluorescencia múltiple, las imágenes de fluorescencia de código de barras y la espectrometría de masas de imágenes, han surgido como estrategias integrales para adquirir información sobre la tinción simultánea de marcadores utilizando la misma sección7 de tejido.
Aquí presentamos una tecnología que combina anticuerpos marcados con metales y espectrometría de masas de iones secundarios y permite la cuantificación de resolución de células individuales, la coexpresión de marcadores (fenotipado) y el análisis espacial utilizando muestras de tejido fijado en formalina, embebido en parafina (FFPE) y congelado fresco (FF) 8,9. Las muestras FFPE son los materiales más utilizados para el archivo de muestras de tejidos y representan un recurso más fácilmente disponible para las tecnologías de imágenes multiplexadas que las muestras congeladas frescas10. Además, esta tecnología ofrece la posibilidad de volver a adquirir imágenes meses después. Aquí, discutimos nuestros protocolos de tinción y procesamiento de imágenes utilizando muestras de tejido FFPE.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R3404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R3279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Reagent Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20X TBS-T</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Low-Barium PBS pH 7.4</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Tris pH 8.5&#160;</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#176;C Refrigerator</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>REVCO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P10</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P20</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P200</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Barrier Pipette Tips P1000</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>24-430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal Filter Ultrafree-MC</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>UFC30VV00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized H2O</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Slide Staining Jar, Green</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71385-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Slide Staining Jar, Yellow</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71385-Y</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Slide Staining Kit (Jar+Rack), White</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71388-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasyDip Stainless Steel Holder</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>71388-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 70% EM Grade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>16360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) buffer: 10X Tris with EDTA, pH 9</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S2367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat resistant slide chamber</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62705-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic barrier pen</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-550-221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBI/O software</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBIcontrol software</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBIslide</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>567001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MIBIscope</td>
			<td>Ionpath</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5415D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisture Chamber (Humid Chamber)</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M922-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS) Tablets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2944100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PT Module</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A80400012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapid-Flow Sterile Disposable Filter Units</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>097403A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>BioRocker</td>
			<td>S2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin column (Ultrafree-MC Spin Filter, 0.5mL 0.1&#956;m )</td>
			<td>MillQ</td>
			<td>UFC30VV00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide oven</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaccum Cabinet Desiccator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>30621-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Task-whipe</td>
			<td>Kimberly Clark</td>
			<td>34155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>534056-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

expanding the comprehension of the tumor microenvironment using mass spectrometry imaging of formalin-fixed and paraffin-embedded tissue samples

Los avances en las terapias basadas en el sistema inmunitario han revolucionado el tratamiento y la investigación del cáncer. Esto ha desencadenado una creciente demanda para la caracterización del paisaje inmune tumoral. Aunque la inmunohistoquímica estándar es adecuada para estudiar la arquitectura de los tejidos, se limita al análisis de un pequeño número de marcadores. Por el contrario, técnicas como la citometría de flujo pueden evaluar múltiples marcadores simultáneamente, aunque se pierde información sobre la morfología del tejido. En los últimos años, las estrategias multiplexadas que integran el análisis fenotípico y espacial han surgido como enfoques integrales para la caracterización del paisaje inmune tumoral. Aquí, discutimos una tecnología innovadora que combina anticuerpos marcados con metal y espectrometría de masas de iones secundarios que se centra en los pasos técnicos en el desarrollo y optimización de ensayos, la preparación de tejidos y la adquisición y procesamiento de imágenes. Antes de la tinción, se debe desarrollar y optimizar un panel de anticuerpos marcado con metal. Este sistema de imagen hi-plex admite hasta 40 anticuerpos marcados con metal en una sola sección de tejido. Cabe destacar que el riesgo de interferencia de señal aumenta con el número de marcadores incluidos en el panel. Después del diseño del panel, se debe prestar especial atención a la asignación de isótopos metálicos al anticuerpo para minimizar esta interferencia. Las pruebas preliminares de panel se realizan utilizando un pequeño subconjunto de anticuerpos y pruebas posteriores de todo el panel en tejidos de control. Las secciones de tejido fijadas en formalina e incrustadas en parafina se obtienen y montan en portaobjetos recubiertos de oro y se tiñen aún más. La tinción dura 2 días y se parece mucho a la tinción inmunohistoquímica estándar. Una vez que las muestras se tiñen, se colocan en el instrumento de adquisición de imágenes. Se seleccionan los campos de vista y se adquieren, cargan y almacenan las imágenes. La etapa final es la preparación de la imagen para el filtrado y la eliminación de interferencias utilizando el software de procesamiento de imágenes del sistema. Una desventaja de esta plataforma es la falta de software analítico. Sin embargo, las imágenes generadas son compatibles con diferentes software de patología computacional.

Se obtuvieron secciones de tejido TMA de adenofégdalas y pulmón (5 mm de espesor) y se colocaron en el centro de portaobjetos recubiertos de oro siguiendo las especificaciones con respecto al tamaño del tejido y los márgenes seguros de los portaobjetos. Los márgenes de vidrio libre de 5 mm y 10 mm entre el borde del tejido y los bordes lateral e inferior de los portaobjetos de vidrio, respectivamente, son necesarios para una tinción óptima. Las secciones de tejido se hornearon durante la noche en un horno antes de...

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Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

En la era de la inmunoterapia contra el cáncer, el interés en dilucidar la dinámica del microambiente tumoral ha aumentado sorprendentemente. Este protocolo detalla una técnica de imagen de espectrometría de masas con respecto a sus pasos de tinción e imagen, que permiten un análisis espacial altamente multiplexado.

Ampliación de la comprensión del microambiente tumoral mediante imágenes de espectrometría de masas de muestras de tejido fijadas en formalina e incrustadas en parafina

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Estos protocolos permiten la cuantificación de la resolución de células individuales, la coexpresión de marcadores y un análisis especial utilizando muestras de tejido fresco congelado fijado en formalina e incrustado en parafina para dilucidar las funciones de las células inmunes en el cáncer. Esta técnica es una poderosa herramienta que facilita la caracterización simultánea de un marcador 40 en una sola sección de tejido, preservando ampliamente la estructura del tejido en las muestras. El paso crítico es la optimización y validación de anticuerpos.Si no se completa el paso, se pueden producir imágenes de baja calidad que pueden comprometer la retención de datos y resultados reproducibles de alta calidad. Comience girando todos los tubos que contienen anticuerpos a 10, 000 x G durante cinco minutos, agregue anticuerpos individuales al tampón de bloqueo y mezcle bien. No altere la parte inferior del tubo de anticuerpos al pipetearlo.Filtre el panel de anticuerpos humedeciendo previamente un dispositivo de filtro centrífugo de 0,1 micrómetros con 100 microlitros de tampón de bloqueo. Gire el filtro a 10, 000 x G durante dos minutos y retire el flujo del búfer de bloqueo con una pipeta. Luego transfiera el panel de anticuerpos a una columna de centrifugado y gire el filtro a 10, 000 x G durante dos minutos.Deseche la columna de centrifugado y utilice el flujo como panel de anticuerpos filtrados. Para la tinción de anticuerpos, retire el amortiguador de bloqueo de las diapositivas inclinando cada portaobjetos de lado y golpeando suavemente los bordes contra un limpiaparabrisas de tareas. Coloque los portaobjetos en una cámara de humedad y agregue de 100 a 200 microlitros de mezcla maestra de anticuerpos al tejido.Agregue portaobjetos de control positivo y negativo al lote de tinción e incube los portaobjetos a 4 grados centígrados durante la noche. Para configurar el instrumento, inicie sesión en el software de control y haga clic en Despertar, si el instrumento está en modo de suspensión. Haga clic en Exchange Sample para cargar una diapositiva y luego haga clic en Continue para abrir la puerta.Coloque la diapositiva en la ranura de carga con una muestra hacia arriba y la etiqueta a la derecha, haga clic en Continuar para cerrar la puerta. Seleccione el proyecto y, a continuación, seleccione el nombre de diapositiva para la muestra cargada. Visualice la imagen panorámica en el panel de imagen óptica de diapositiva para el campo de visión o la selección de campo de visión, haga clic en el menú Modo y seleccione Detector de electrones secundario, luego haga clic en el menú Modo de imagen y seleccione QC 300 micrómetros.Haga clic en Jog Stage para controlar la ubicación del campo de visión y luego haga clic en las flechas para navegar y seleccionar la posición del FOV. Haga clic en agregar FOV, establezca 400 micrómetros por 400 micrómetros como tamaño de campo y seleccione Fino como Modo de imagen y 1 milisegundo de Tiempo de permanencia, haga clic en Confirmar. Después de crear una lista de campo de visión, continúe con el enfoque de la imagen y ajuste la estigmatización moviendo el haz a una región de tejido que no se visualizará.Ajuste los parámetros hasta obtener una imagen central clara, haga clic en Iniciar ejecución. Las imágenes adquiridas se cargarán automáticamente y se almacenarán en la aplicación de gestión de imágenes basada en la web. La matriz que se muestra aquí describe el porcentaje de diafonía derivada de la pureza y los óxidos de la sonda.Aquí los cuadros azules indican mayor o igual que 0.5% diafonía y los cuadros claros indican menos de 0.5% diafonía. Para las etiquetas Mass se muestran aquí las sondas que contribuyeron con al menos un 0,5% de diafonía en ningún canal, uno o dos canales, o más de dos canales. También se muestran canales masivos que reciben al menos 0,5% de diafonía sin sondas, una o dos sondas, o más de dos sondas.Aquí se representan las imágenes representativas de tinción en diferentes tejidos como adenocarcinoma de pulmón, riñón no neoplásico y amígdalas. Aquí se presenta una imagen de una sección de tejido de amígdalas teñida con esta técnica y visualizada utilizando un programa de software de análisis de imágenes digitales de terceros antes del filtrado y la corrección. Aquí se muestra la imagen de la misma sección en las mismas condiciones después de los pasos de filtrado y corrección.Este método genera imágenes que se pueden cargar en un software de análisis de imágenes digitales de terceros, lo que permite un análisis exhaustivo como la compartimentación de tejidos, la segmentación celular, la coexpresión de marcadores, así como el análisis de vecinos y el análisis a distancia. Los métodos de imagen altamente multiplex están disponibles a través de la investigación. Mediante la construcción de diferentes paneles, los investigadores pueden investigar muestras de cáncer, normales, paraneoplásicas, inflamatorias e infecciosas.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

Inmunohistoquímica de fluorescencia de cuatro colores de las subpoblaciones de células T en muestras de carcinoma de células escamosas humanas orofaríngeas fijadas con formol fijadas en parafina

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

Two-dimensional Gel Electrophoresis Coupled with Mass Spectrometry Methods for an Analysis of Human Pituitary Adenoma Tissue Proteome

Electroforesis en Gel bidimensional juntada con métodos de espectrometría de masas para el análisis del proteoma de tejido humano Adenoma pituitario

Human pituitary adenoma (PA) is a common tumor that occurs in the human pituitary gland in the hypothalamus-pituitary-targeted organ axis systems, and may ...

Phosphopeptide Enrichment Coupled with Label-free Quantitative Mass Spectrometry to Investigate the Phosphoproteome in Prostate Cancer

Enriquecimiento de fosfopéptidos acoplada con espectrometría de masa libre de etiqueta cuantitativa para investigar la Phosphoproteome en cáncer de próstata

Phosphoproteomics involves the large-scale study of phosphorylated proteins. Protein phosphorylation is a critical step in many signal transduction ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Tinción elástica en diapositivas incrustadas en parafina de tejido de cáncer gástrico pT3N0M0

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

Panel de inmunofluorescencia Multiplex automatizado para estudios de inmuno-Oncología en los especímenes del tejido formalina-fijo Carcinoma

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry

Medición de la remodelación ósea y recreación del microambiente tumor-óseo utilizando la cocultura calvaria y la histomorfometría

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength ...

Capturing Small Molecule Communication Between Tissues and Cells Using Imaging Mass Spectrometry

Molécula pequeña comunicación entre tejidos y células mediante espectrometría de masas en la proyección de imagen de captura

Imaging mass spectrometry (IMS) has routinely been applied to three types of samples: tissue sections, spheroids, and microbial colonies. These sample ...

Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and Fixed Tissue Analysis

Evaluación del microambiente tumoral de la permeabilidad vascular mediada por la puerta de la puerta asociada con la diseminación de células cancerosas mediante imágenes intravitales y análisis de tejido fijo

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Análisis patológico de metástasis pulmonares después de la inyección lateral de células tumorales en la vena de la cola

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Isolation of Proximal Fluids to Investigate the Tumor Microenvironment of Pancreatic Adenocarcinoma

Aislamiento de líquidos proximales para investigar el microambiente tumoral del adenocarcinoma pancreático

Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is the fourth leading cause of cancer-related death, and soon to become the second. There is an urgent need of variables ...