Name: in vitro reconstitution of the actin cytoskeleton inside giant unilamellar vesicles
Uploaded: 2022-08-25T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles at JoVE.com

We erkennen de financiering van ARO MURI W911NF-14-1-0403 aan M.P.M., de National Institutes of Health (NIH) R01 1R01GM126256 aan M.P.M., de National Institutes of Health (NIH) U54 CA209992, NIH RO1 GM126256, NIH U54 CA209992, University of Michigan / Genentech, SUBK00016255 en Human Frontiers Science Program (HFSP) subsidienummer RGY0073/2018 aan M.P.M. Alle meningen, bevindingen, conclusies of aanbevelingen die in dit materiaal worden uitgedrukt, zijn die van de auteurs en weerspiegelen niet noodzakelijkerwijs de standpunten van de ARO, NIH of HFSP. S.C. erkent vruchtbare gesprekken met V. Yadav, C. Muresan en S. Amiri.

1. Bereiding van buffers en eiwitoplossingen
<ol><li>Bereid de waterige Inwendige Niet-Polymerisatiebuffer (INP) in een totaal volume van 5 ml door 0,1 mM CaCl2, 10 mM HEPES (pH 7,5), 1 mM DTT, 0,5 mM Dabco, 320 mM sucrose en 0,2 mM ATP te mengen.</li>
	<li>Bereid de Protein Mix (PM) door eiwitten toe te voegen aan de INP-buffer bij 4 °C met de volgende concentraties: 11,2 μM niet-fluorescerend G-actine, 2,8 μM fluorescerend gelabeld actine en 0,24 μM Arp2/3 (Tabel met materialen...

Verschillende belangrijke stappen bepalen het succes van een hoge opbrengst van liposomen tijdens het bereidingsproces. Om de lipidefilm in de olie volledig op te lossen, moet het monster worden gesoniseerd totdat de lipidefilm op de bodem van de glazen injectieflacon volledig verdwijnt. Na de ultrasoonapparaat moet het lipide-oliemengsel 's nachts bij kamertemperatuur onder donkere omstandigheden worden bewaard om de lipidemoleculen verder te laten dispergeren29. Het mengsel kan maximaal een week...

Het actinecytoskelet speelt een fundamentele rol bij het construeren van de intracellulaire architectuur van de cel door contractiliteit op moleculair niveau en krachtgeneratie 1,2,3 te coördineren. Als gevolg hiervan bemiddelt het tal van essentiële cellulaire activiteiten, waaronder celvervorming 4,5, deling6, migratie 7,8 en adhesie9. De in vitro reconstitutie van actinenetwerken heeft de afgelopen jaren enorme aandacht gekregen 10,11,12,13,14,15,16,17. Het doel van reconstitutie is om een minimaal model van de cel te bouwen zonder de complexe biochemische regulatie die bestaat in levende cellen. Dit biedt een controleerbare omgeving om specifieke intracellulaire activiteiten te onderzoeken en vergemakkelijkt de identificatie en analyse van verschillende componenten van het actinecytoskelet 18,19. Verder biedt de inkapseling van in vitro actinenetwerken in fosfolipide gigantische unilamellaire blaasjes (GUVs, liposomen) een beperkte maar vervormbare ruimte met een semi-permeabele grens. Het bootst de fysiologische en mechanische micro-omgeving van de actinemachinerie na in de cel 9,20,21,22.
Onder verschillende methoden om liposomen te bereiden, is de lipidefilmhydratatiemethode (ook bekend als de zwellingsmethode) een van de vroegste technieken23. De droge lipidefilm hydrateert met de toevoeging van buffers en vormt vliezige bubbels die uiteindelijk blaasjes worden24. Om grotere blaasjes met een hogere opbrengst te produceren, past een verbeterde methode die voortgaat op de filmhydratatiemethode, bekend als de elektroformatiemethode25, een AC elektrisch veld toe om het hydratatieproces efficiënt te bevorderen26. De belangrijkste beperkingen van deze op hydratatie gebaseerde methoden voor actine-inkapseling zijn dat het een lage inkapselingsefficiëntie van sterk geconcentreerde eiwitten heeft en alleen compatibel is met specifieke lipidesamenstellingen24. De omgekeerde emulsietechniek heeft in vergelijking minder beperkingen voor lipidecomponenten en eiwitconcentraties 20,27,28,29. Bij deze methode wordt een mengsel van eiwitten voor inkapseling toegevoegd aan de binnenste waterige buffer, die later wordt geëmulgeerd in een lipidebevattende minerale olieoplossing, waarbij lipide-monolaagdruppeltjes worden gevormd. De monolaagse lipidedruppels kruisen vervolgens door een andere lipide / olie-water-interface door centrifugatie om bilayer lipide blaasjes (liposomen) te vormen. Deze techniek is een van de meest succesvolle strategieën gebleken voor actine-inkapseling24,30. Afzonderlijk zijn er enkele microfluïdische apparaatmethoden, waaronder gepulseerde jetting31,32, transiënte membraanuitwerping33 en de cDICE-methode34. De overeenkomsten tussen de omgekeerde emulsiemethode en de microfluïdische methode zijn het lipideoplosmiddel (olie) dat wordt gebruikt en de introductie van lipide / olie-water-interface voor de vorming van de buitenste folder van liposomen. Daarentegen vereist het genereren van liposomen door de microfluïdische methode een opstelling van microfluïdische apparaten en gaat gepaard met olie die tussen de twee blaadjes van de bilayer is opgesloten, wat een extra stap vereist voor olieverwijdering35.
In dit manuscript gebruikten we de omgekeerde emulsietechniek om liposomen te bereiden die een gepolymeriseerd F-actinenetwerk inkapselen zoals eerder gebruikt22. Het eiwitmengsel voor inkapseling werd eerst in een buffer met niet-polymeriserende omstandigheden geplaatst om actine in zijn bolvormige (G) vorm te behouden. Het hele proces werd uitgevoerd bij 4 °C om vroege actinepolymerisatie te voorkomen, die later werd geactiveerd door het monster te laten opwarmen tot kamertemperatuur. Eenmaal op kamertemperatuur polymeriseert de actine in zijn filamenteuze (F) vorm. Een verscheidenheid aan actinebindende eiwitten kan worden toegevoegd aan de binnenste waterige bufferoplossing om eiwitfunctionaliteiten en -eigenschappen te bestuderen, waardoor verdere inzichten worden verkregen in de interactie met het actinenetwerk en het membraanoppervlak. Deze methode kan ook worden toegepast op de inkapseling van verschillende eiwitten van belang36 en grote objecten (microdeeltjes, zelfrijdende microswimmers, enz.) dicht bij de grootte van de uiteindelijke liposomen28,37.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-{[n(5-amino-1-carboxypentyl)iminodiacetic acid]succinyl} nickel salt (DOGS-NTA-Ni)&#160;</td>
			<td>Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td>231615773</td>
			<td>Nickel Lipid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,4-Diazabicyclo[2.2.2]octane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D27802-25G</td>
			<td>DABCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actin protein (&#62;99% pure): rabbit skeletal muscle</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>AKL99-D</td>
			<td>non-fluorescent G-actin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>AR05</td>
			<td>fluorescently labeled actin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2383-10G</td>
			<td>ATP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 dye</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
			<td>fluorescent dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Andor iQ3</td>
			<td>Andor Technologies</td>
			<td></td>
			<td>control and acquisition software for confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arp2/3 Protein Complex: Porcine Brain</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>RP01P-A</td>
			<td>Arp 2/3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10035048</td>
			<td>CaCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamlide Chambers (4-well for 12 mm round coverslip)</td>
			<td>Quorum Technologies</td>
			<td></td>
			<td>incubation chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cofilin protein: human recombinant</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>CF01-C</td>
			<td>cofilin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope (63&#215; oil-immersion objective)</td>
			<td>Andor Technologies</td>
			<td>LEICA DMi8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-GLUCOSE BIOXTRA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7528</td>
			<td>glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol</td>
			<td>DOT Scientific&#160;</td>
			<td>DSD11000-10</td>
			<td>DTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelsolin Protein: Homo Sapiens Recombinant</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>HPG6</td>
			<td>gelsolin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton 1750 Gastight Syringe, 500 &#181;L, cemented needle, 22 G, 2&#34; conical tip</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-07940-53</td>
			<td>glass syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AmericanBio</td>
			<td>7365-45-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ/Fiji</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://imagej.net/tutorials/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-alpha-Phosphatidylcholine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td>97281442</td>
			<td>EPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7786303</td>
			<td>MgCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil, BioReagent, for molecular biology, light oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8042475</td>
			<td>mineral oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-WASP fragment WWA (aa400&#8211;501, VCA-His)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>VCA-His is purified using lab protocol. The protocol can be provided upon reasonable requests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oregon Green 488 1,2-Dihexadecanoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine (Oregon Green 488 DHPE)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>O12650</td>
			<td>DHPE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7447407</td>
			<td>KCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>57-50-1</td>
			<td>sucrose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Casein from bovine milk</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6905-250MG</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro reconstitution of the actin cytoskeleton inside giant unilamellar vesicles

Het actinecytoskelet, de belangrijkste mechanische machinerie in de cel, bemiddelt tal van essentiële fysieke cellulaire activiteiten, waaronder celvervorming, deling, migratie en adhesie. Het bestuderen van de dynamiek en structuur van het actinenetwerk in vivo wordt echter bemoeilijkt door de biochemische en genetische regulatie in levende cellen. Om een minimaal model te bouwen zonder intracellulaire biochemische regulatie, wordt actine ingekapseld in gigantische unilamellaire blaasjes (GUVs, ook wel liposomen genoemd). De biomimetische liposomen zijn celgroot en vergemakkelijken een kwantitatief inzicht in de mechanische en dynamische eigenschappen van het cytoskeletnetwerk, waardoor een levensvatbare route wordt geopend voor bottom-up synthetische biologie. Om liposomen voor inkapseling te genereren, wordt de omgekeerde emulsiemethode (ook wel de emulsieoverdrachtsmethode genoemd) gebruikt, wat een van de meest succesvolle technieken is voor het inkapselen van complexe oplossingen in liposomen om verschillende celnabootsingssystemen voor te bereiden. Met deze methode wordt een mengsel van interessante eiwitten toegevoegd aan de binnenbuffer, die later wordt geëmulgeerd in een fosfolipide-bevattende minerale olieoplossing om monolaagse lipidedruppeltjes te vormen. De gewenste liposomen worden gegenereerd uit monolaagse lipidedruppels die een lipide / olie-water-interface kruisen. Deze methode maakt de inkapseling van geconcentreerde actinepolymeren in de liposomen met gewenste lipidecomponenten mogelijk, waardoor de weg wordt vrijgemaakt voor in vitro reconstitutie van een biomimicking cytoskeletnetwerk.

De bereiding van liposomen op basis van de omgekeerde emulsietechniek wordt grafisch en schematisch geïllustreerd in figuur 1.
Eerst werden lege (kale) liposomen (~ 5-50 μm in diameter) bereid die waren samengesteld uit fosfolipide (EPC) en fluorescerend lipide (DHPE). Een heldere, verrode fluorescerende kleurstof werd ingekapseld in kale liposomen als een controle-experiment. Of een lipide monolaag zich met succes heeft gevormd in het perifere deel van de drupp...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles at JoVE.com

In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles

In dit manuscript demonstreren we de experimentele technieken om het F-actinecytoskelet in te kapselen in gigantische unilamellaire lipideblaasjes (ook wel liposomen genoemd), en de methode om een cortex-biomimicking F-actinelaag te vormen aan de binnenste folder van het liposoommembraan.

In vitro Reconstitutie van het Actin Cytoskelet Inside Giant Unilamellar Vesicles

The actin cytoskeleton, the principal mechanical machinery in the cell, mediates numerous essential physical cellular activities, including cell ...

Deze maatregel bouwt een minimummodel van de cel zonder complexe biochemische voorschriften. De gebruikte techniek kan een hoge opbrengst van liposomen genereren en heeft een hoge inkapselingsefficiëntie voor cytoskeleteiwitten. Deze maatregel kan worden toegepast op inkapseling van verschillende eiwitten en grote objecten zoals microdeeltjes en zelfvoorbereidende microzwemmers.Een individu worstelt met het verhogen van de liposoomopbrengst voor de eerste paar pogingen. Het wordt aanbevolen om regelmatig een gedeelte van het manuscript te bespreken voor meer details om de opbrengst te verhogen. Bereid om te beginnen de waterige binnenste niet-polymerisatiebuffer in een totaal volume van vijf milliliter door 0,1 millimol CACL twee, 10 millimol HEPES, één millimolar DTT, 0,5 millimol DAPCO, 320 millimol sucrose en 0,2 millimol ATP te mengen.Bereid de eiwitmix voor door eiwitten toe te voegen aan de binnenste niet-polymerisatiebuffer bij vier graden Celsius. Om een actinelaag te vormen, voegt u 100 nanomolaire gellcaline, vier micromolaire coughaline en 2,2 micromolaire VCA HEZ toe aan de eiwitmix. Vervang als controle-experiment de eiwitmix door 100 microgram per milliliter fluorescerende kleurstof.Bereid de waterige binnenpolymerisatiebuffer voor in een totaal volume van vijf milliliter door 100 millimolair kaliumchloride te mengen. Vier millimol magnesiumchloride, 10 millimol HEPES, één millimolar DTT, 0,5 millimolar DABCO, 10 millimol ATP en 80 millimolar sucrose. Bereid de laatste buffer voor door de binnenste niet-polymerisatiebuffer en de binnenste polymerisatiebuffer te mengen in een volumeverhouding van één op één, om de binnenste waterige oplossing te verkrijgen in een totaal volume van 30 microliter die in het liposoom worden ingekapseld.Bereid de waterige buitenbuffer in een totaal volume van 150 microliter door 10 millimol HEPES, 50 millimol kaliumchloride, twee millimol magnesiumchloride, 0,2 millimol calciumchloride, twee millimol ATP, één millimolar DTT, 0,5 millimol DAPCO, 212 millimolglucose en 0,1 milligram per milliliter bètabehuizing te mengen. Om het lipideoliemengsel te bereiden, begint u met het toevoegen van 100 microliter van 25 milligram per milliliter EGGPC aan een glazen injectieflacon. Verdamp chloroform met argongas en laat een droge vaste lipidefilm achter op de bodem van de injectieflacon.Om een actinelaag te vormen, voegt u nikkellipiden toe in een verhouding van 10 op één van EGGPC tot nikkellipide en mengt u, vóór de verdamping van chloroform. Voeg twee milliliter minerale olie toe. Verdamp de chloroform en soniceer het lipideoliemengsel bij kamertemperatuur in een bad gedurende een uur, om de lipiden te resuspenderen.Bereid een laatste buffer in olie-emulsie voor het bereiden van monolaagse lipidedruppeltjes die het eiwit van belang bevatten. Begin met het nemen van 100 microliter van het lipideoliemengsel in een plastic buis en voeg 10 microliter eindbuffer toe aan het lipidenoliemengsel. Zorg ervoor dat de laatste buffer in één druppel zit.Trek met behulp van een glazen spuit eerst een kleine hoeveelheid lipidenoliemengsel en vervolgens de laatste bufferdruppel door de punt van de spuit aan de rand van de druppel te plaatsen om deze in kleine druppeltjes te breken. Aspirateer voorzichtig meerdere keren op en neer totdat een troebele emulsie is gevormd. Doe 30 microliter buitenbuffer in een aparte plastic buis.Plaats 30 microliter van het lipideoliemengsel bovenop de buitenbuffer en laat het ongeveer 10 minuten zitten om een lipide monolaag op het grensvlak te ontwikkelen. Om liposomen te bereiden, voegt u voorzichtig 50 microliter van de uiteindelijke bufferolie-emulsie toe aan de bovenste oliefase van de buis. Centrifugeer de plastic buis op 100 maal G gedurende 15 minuten bij vier graden Celsius.Varieer de tijd en centrifugatiesnelheid om te optimaliseren voor liposoomvorming. Verwijder de oliefase voorzichtig door extra volume te pipeten door het pipet te zuigen. Zorg ervoor dat u de pipetpunt niet aan de zijkant van de buis plaatst om te voorkomen dat er een meniscus van olie bovenop de liposoomfase ontstaat.Snijd met een nieuwe pipet de punt van de pipet door. Steek de pipet langzaam in de resterende onderste fase en aspirateer het waterige volume om liposomen te verzamelen. Giet 100 microliter buitenbuffer in de put van een incubatiekamer.Deponeer de verzamelde liposomen voorzichtig in de buitenbuffer en plaats vervolgens een andere afdekslip bovenop de kamer. Observeer liposomen met een confocale microscoop met behulp van een 63 x olie-onderdompelingsobjectief. Gebruik laserlijnen van 488, 647 en 561 nanometer.Om fluorescerend gelabelde lipide, ingekapselde fluorescerende kleurstof en ingekapselde fluorescerend gelabelde actine respectievelijk waar te nemen. Leg de interessante frames vast en sla de afbeeldingen op in TIF-indeling. Verwerk en analyseer afbeeldingen in afbeelding J.Start door het TIF-bestand te openen met behulp van image J-software.Ga naar de afbeelding en klik op aanpassen. Gevolgd door helderheidscontrast, past u de helderheid en het contrast van de afbeelding aan de gewenste schaal aan door de minimale en maximale instellingen en de schuifregelaars voor helderheid en contrast aan te passen. Klik op het rechthoekige selectiegereedschap in de werkbalk en selecteer het interessegebied.Ga naar de afbeelding en klik op bijsnijden om de ROI bij te snijden. Ga naar analyseren en klik vervolgens op Schaal instellen. Voer in het pop-upvenster 1.0 in het veld pixelverhouding in en stel micrometer in als de lengte-eenheid.Voer in het veld afstand in pixels de afbeeldingsbreedte in pixels in. Voer in het veld bekende afstand de werkelijke afbeeldingsbreedte in micron in. Om de grootte van het liposoom te meten, tekent u met behulp van het ovale selectiegereedschap in de werkbalk een cirkel langs de rand van het liposoom.Ga naar analyseren en klik vervolgens op meten om het gebied van de cirkel te meten, waaruit de diameter van het liposoom kan worden berekend. Succesvolle liposoomgeneratie wordt geverifieerd door de visualisatie van de dunne cirkelvormige ring die de groene fluorescerende lipide bilayer is. Onder een 488 nanometer laser met behulp van confocale microscopie om de inkapseling van de fluorescerende kleurstof te bevestigen.De interne omgeving van de liposomen moet gelijkmatig fluorescerend zijn onder een laser van 647 nanometer. De vorming van liposomen kon worden gevisualiseerd door de dunne groene cirkelvormige ringen. Het gereconstitueerde effect in netwerken binnen liposomen is heterogeen en manifesteert zich als vertakte netwerkstructuren van actinefilamenten.De takarchitectuur werd geactiveerd door de introductie van het ARP two three-complex, dat tegelijkertijd de nucleatie en vertakking van actinefilamenten regelt, samen met VCA HEZ. In de binnenste folder van de bilayer liposomen wordt een dunne, maar dicht vertakte actinelaag gecreëerd die als een fluorescerend moet worden gevisualiseerd. Het lipide audio eindbuffermengsel moet over het algemeen heen en weer worden gepompt door een glazen spuit, om te voorkomen dat luchtbellen worden geïntroduceerd.Het mengsel moet na het proces witachtig zijn. Deze techniek maakte de weg vrij voor het bouwen van een minimaal model van de cel, verstoken van complexe biochemische regulaties. Met dit celnabootsingssysteem kunnen onderzoekers de mechanische en dynamische eigenschappen van cytoskeleteiwitten, nucleator en de moleculaire motor onderzoeken.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles

The Encapsulation of Cell-free Transcription and Translation Machinery in Vesicles for the Construction of Cellular Mimics

De inkapseling van de Cell-free transcriptie en vertaling Machines in Blaasjes voor de bouw van Cellular Mimics

As interest shifts from individual molecules to systems of molecules, an increasing number of laboratories have sought to build from the bottom up ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

Test op oogirritatie (EIT) voor Risico oog irriterende stoffen met gereconstrueerde humane Cornea-achtige Epithelial (RHCE) Tissue Model

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

Een<em&gt; In Vitro</em&gt; Organ Culture Model van het Muizen tussenwervelschijf

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

The Organoid Reconstitution Assay (ORA) for the Functional Analysis of Intestinal Stem and Niche Cells

The Organoid Reconstitution Assay ORA for the Functional Analysis of Intestinal Stem and Niche Cells

De Organoid reconstitutie Assay (ORA) voor de functionele analyse van intestinale stam en Niche cellen

The intestinal epithelium is characterized by an extremely rapid turnover rate. In mammals, the entire epithelial lining is renewed within 4 - 5 days. ...

Decellularization of Whole Human Heart Inside a Pressurized Pouch in an Inverted Orientation

Decellularization van gehele menselijk hart binnen een hydrofoor tasje in een omgekeerde richting

The ultimate solution for patients with end-stage heart failure is organ transplant. But donor hearts are limited, immunosuppression is required, and ...

Evaluation of the Storage Stability of Extracellular Vesicles

Evaluatie van de opslag stabiliteit van extracellulaire blaasjes

Extracellular vesicles (EVs) are promising targets in current research, to be used as drugs, drug-carriers, and biomarkers. For their clinical ...

Bioparticle Microarrays for Chemotactic and Molecular Analysis of Human Neutrophil Swarming in vitro

Bioparticle Microarrays voor Chemotactic en Moleculaire Analyse van menselijke Neutrofiele Zwermen in vitro

Neutrophil swarming is a cooperative process by which neutrophils seal off a site of infection and promote tissue reorganization. Swarming has classically ...

Advanced 3D Liver Models for In vitro Genotoxicity Testing Following Long-Term Nanomaterial Exposure

Geavanceerde 3D-levermodellen voor in vitro genotoxiciteitstests na langdurige blootstelling aan nanomaterialen

Due to the rapid development and implementation of a diverse array of engineered nanomaterials (ENM), exposure to ENM is inevitable and the development of ...