Name: in vitro reconstitution of the actin cytoskeleton inside giant unilamellar vesicles
Uploaded: 2022-08-25T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles at JoVE.com

אנו מכירים במימון ARO MURI W911NF-14-1-0403 ל- M.P.M., המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) R01 1R01GM126256 ל- M.P.M., המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) U54 CA209992, NIH RO1 GM126256, NIH U54 CA209992, אוניברסיטת מישיגן / Genentech, SUBK00016255 ותוכנית המדע של גבולות האדם (HFSP) מספר מענק RGY0073/2018 ל- M.P.M. כל דעה, ממצא, מסקנות או המלצות המובעות בחומר זה הן של המחברים/ים ואינן משקפות בהכרח את דעותיהם של ה-ARO, NIH או HFSP. ס.צ. מכיר בדיונים פוריים עם ו' ידב, ג' מורסן וס' אמירי.

1. הכנת מאגרים ותמיסות חלבון
<ol><li>הכן את המאגר הפנימי המיימי למניעת פילמור (INP) בנפח כולל של 5 מ"ל על ידי ערבוב של 0.1 mM CaCl 2, 10 mM HEPES (pH 7.5), 1 mM DTT, 0.5 mM Dabco, 320 mM סוכרוז ו-0.2 mM ATP.</li>
	<li>הכינו את תערובת החלבונים (PM) על ידי הוספת חלבונים למאגר INP בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עם הריכוזים הבאים: 11....

מספר שלבים מרכזיים קובעים את ההצלחה של תשואה גבוהה של ליפוזומים במהלך תהליך ההכנה. כדי להמיס לחלוטין את שכבת השומנים בשמן, יש לנתק את הדגימה עד ששכבת השומנים בתחתית בקבוקון הזכוכית תיעלם לחלוטין. לאחר הסוניקציה, יש לאחסן את תערובת שמן השומנים למשך הלילה בטמפרטורת החדר בתנאים חשוכים כדי שמ...

שלד האקטין ממלא תפקיד בסיסי בבניית הארכיטקטורה התוך-תאית של התא על ידי תיאום התכווצות ברמה המולקולרית ויצירת כוח 1,2,3. כתוצאה מכך, הוא מתווך פעילויות תאיות חיוניות רבות, כולל עיוות תאים4,5, חלוקה6, נדידה 7,8 והידבקות9. שחזור מבחנה של רשתות אקטין זכה לתשומת לב עצומה בשנים האחרונות 10,11,12,13,14,15,16,17. מטרת השיקום היא לבנות מודל מינימלי של התא נטול הרגולציה הביוכימית המורכבת הקיימת בתוך תאים חיים. זה מציע סביבה ניתנת לשליטה כדי לחקור פעילויות תוך תאיות ספציפיות ומקל על זיהוי וניתוח של מרכיבים שונים של שלד אקטין18,19. יתר על כן, המעטפת של רשתות אקטין במבחנה בתוך שלפוחיות חד-עיניות ענקיות פוספוליפידיות (GUVs, ליפוזומים) מספקת מרחב מוגבל אך מעוות עם גבול חדיר למחצה. הוא מחקה את המיקרו-סביבה הפיזיולוגית והמכנית של מנגנון האקטין בתוך התא 9,20,21,22.
בין שיטות שונות להכנת ליפוזומים, שיטת הידרציה סרט שומנים (הידוע גם בשם שיטת הנפיחות) היא אחת הטכניקות המוקדמות ביותר23. סרט השומנים היבש מתמזג עם תוספת של מאגרים, ויוצר בועות ממברניות שהופכות בסופו של דבר לשלפוחיות24. כדי לייצר שלפוחיות גדולות יותר עם תפוקה גבוהה יותר, שיטה משופרת המתקדמת משיטת הידרציה הסרט, המכונה שיטת האלקטרופורמציה25, מפעילה שדה חשמלי AC כדי לקדם ביעילות את תהליך ההידרציה26. המגבלות העיקריות של שיטות מבוססות הידרציה אלה לכמוסות אקטין הן שיש לו יעילות אנקפסולציה נמוכה של חלבונים מרוכזים מאוד, והוא תואם רק להרכבי שומנים ספציפיים24. לשיטת האמולסיה ההפוכה, לשם השוואה, יש פחות מגבלות על מרכיבי השומנים וריכוזי החלבון20,27,28,29. בשיטה זו, תערובת של חלבונים עבור אנקפסולציה מתווספת למאגר מימי פנימי, אשר מתחלב מאוחר יותר בתמיסת שמן מינרלי המכילה שומנים, ויוצרת טיפות שומנים חד-שכבתיים. טיפות השומנים החד-שכבתיות עוברות דרך ממשק אחר של שומנים/שמן-מים דרך צנטריפוגה ויוצרות שלפוחיות ליפידים דו-שכבתיות (ליפוזומים). טכניקה זו הוכיחה את עצמה כאחת האסטרטגיות המוצלחות ביותר לאנקפסולציהשל אקטין 24,30. בנפרד, ישנן כמה שיטות של התקנים מיקרופלואידיים, כולל סילון פועם31,32, פליטת ממברנה חולפת33, ושיטת cDICE 34. קווי הדמיון בין שיטת התחליב ההפוך לבין השיטה המיקרופלואידית הם ממס השומנים (שמן) המשמש והכנסת ממשק שומנים/שמן-מים ליצירת העלון החיצוני של הליפוזומים. לעומת זאת, יצירת ליפוזומים בשיטה המיקרופלואידית דורשת מערך של התקנים מיקרופלואידיים ומלווה בשמן הכלוא בין שני העלונים של הדו-שכבתי, מה שדורש צעד נוסף להסרת שמן35.
בכתב יד זה, השתמשנו בטכניקת האמולסיה ההפוכה כדי להכין ליפוזומים העוטפים רשת F-אקטין פולימרית כפי שהיה נהוג בעבר22. תערובת החלבונים לאנקפסולציה הוכנסה לראשונה למאגר עם תנאים נון-פולימריזציה כדי לשמור על אקטין בצורתו הגלובולרית (G). התהליך כולו בוצע בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס כדי למנוע פילמור מוקדם של אקטין, אשר הופעל מאוחר יותר על ידי מתן אפשרות לדגימה להתחמם לטמפרטורת החדר. ברגע שהוא מגיע לטמפרטורת החדר, האקטין מתפלמר לצורתו החוטית (F). ניתן להוסיף מגוון חלבונים קושרי אקטין לתמיסת המאגר המימית הפנימית כדי לחקור את הפונקציונליות והתכונות של חלבונים, ובכך לספק עוד תובנות לגבי האינטראקציה שלו עם רשת האקטין ופני הממברנה. שיטה זו יכולה להיות מיושמת גם על אנקפסולציה של חלבונים שונים בעלי עניין36 ואובייקטים גדולים (מיקרו-חלקיקים, מיקרו-סווימימרים בעלי הנעה עצמית וכו') הקרובים לגודל הליפוזומים הסופיים 28,37.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-{[n(5-amino-1-carboxypentyl)iminodiacetic acid]succinyl} nickel salt (DOGS-NTA-Ni)&#160;</td>
			<td>Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td>231615773</td>
			<td>Nickel Lipid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,4-Diazabicyclo[2.2.2]octane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D27802-25G</td>
			<td>DABCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actin protein (&#62;99% pure): rabbit skeletal muscle</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>AKL99-D</td>
			<td>non-fluorescent G-actin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>AR05</td>
			<td>fluorescently labeled actin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2383-10G</td>
			<td>ATP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 dye</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
			<td>fluorescent dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Andor iQ3</td>
			<td>Andor Technologies</td>
			<td></td>
			<td>control and acquisition software for confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arp2/3 Protein Complex: Porcine Brain</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>RP01P-A</td>
			<td>Arp 2/3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10035048</td>
			<td>CaCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamlide Chambers (4-well for 12 mm round coverslip)</td>
			<td>Quorum Technologies</td>
			<td></td>
			<td>incubation chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cofilin protein: human recombinant</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>CF01-C</td>
			<td>cofilin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope (63&#215; oil-immersion objective)</td>
			<td>Andor Technologies</td>
			<td>LEICA DMi8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-GLUCOSE BIOXTRA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7528</td>
			<td>glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol</td>
			<td>DOT Scientific&#160;</td>
			<td>DSD11000-10</td>
			<td>DTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelsolin Protein: Homo Sapiens Recombinant</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>HPG6</td>
			<td>gelsolin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton 1750 Gastight Syringe, 500 &#181;L, cemented needle, 22 G, 2&#34; conical tip</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-07940-53</td>
			<td>glass syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AmericanBio</td>
			<td>7365-45-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ/Fiji</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://imagej.net/tutorials/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-alpha-Phosphatidylcholine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td>97281442</td>
			<td>EPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7786303</td>
			<td>MgCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil, BioReagent, for molecular biology, light oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8042475</td>
			<td>mineral oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-WASP fragment WWA (aa400&#8211;501, VCA-His)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>VCA-His is purified using lab protocol. The protocol can be provided upon reasonable requests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oregon Green 488 1,2-Dihexadecanoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine (Oregon Green 488 DHPE)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>O12650</td>
			<td>DHPE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7447407</td>
			<td>KCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>57-50-1</td>
			<td>sucrose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Casein from bovine milk</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6905-250MG</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro reconstitution of the actin cytoskeleton inside giant unilamellar vesicles

שלד האקטין (actin cytoskleton), המנגנון המכני העיקרי בתא, מתווך מספר רב של פעילויות פיזיות חיוניות, כולל דפורמציה של התא, חלוקה, נדידה והידבקות. עם זאת, חקר הדינמיקה והמבנה של רשת האקטין in vivo מסובך על ידי הרגולציה הביוכימית והגנטית בתוך תאים חיים. כדי לבנות מודל מינימלי נטול ויסות ביוכימי תוך-תאי, אקטין עטוף בתוך שלפוחיות חד-עיניות ענקיות (GUVs, הנקראות גם ליפוזומים). הליפוזומים הביומימטיים הם בגודל של תאים ומאפשרים תובנה כמותית לגבי התכונות המכניות והדינמיות של רשת השלד הציטוסקולרי, מה שפותח נתיב בר קיימא לביולוגיה סינתטית מלמטה למעלה. כדי ליצור ליפוזומים לאנקפסולציה, נעשה שימוש בשיטת האמולסיה ההפוכה (המכונה גם שיטת העברת האמולסיה), שהיא אחת הטכניקות המוצלחות ביותר לכמוסות תמיסות מורכבות לליפוזומים כדי להכין מערכות שונות המחקות תאים. בשיטה זו, תערובת של חלבונים מעניינים מתווספת למאגר הפנימי, אשר מתחלב מאוחר יותר בתמיסת שמן מינרלי המכילה פוספוליפידים ליצירת טיפות שומנים חד-שכבתיות. הליפוזומים הרצויים מופקים מטיפות ליפידים חד-שכבתיות החוצות ממשק שומנים/שמן-מים. שיטה זו מאפשרת עטיפה של פולימרי אקטין מרוכזים לתוך הליפוזומים עם מרכיבי השומנים הרצויים, ובכך סוללת את הדרך לשחזור במבחנה של רשת ציטוסקלטון ביומימיק.

הכנת ליפוזומים המבוססים על טכניקת האמולסיה ההפוכה מודגמת באופן גרפי וסכמטי באיור 1.
ראשית, הוכנו ליפוזומים ריקים (בקוטר ~5-50 מיקרומטר) שהורכבו מפוספוליפידים (EPC) ושומנים פלואורסצנטיים (DHPE). צבע פלואורסצנטי אדום בוהק נעטף בליפוזומים חשופים כניסוי בקרה. ניתן לק?...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles at JoVE.com

In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles

בכתב יד זה, אנו מדגימים את הטכניקות הניסיוניות לתמצת את השלד הציטוסקולרי F-actin לשלפוחיות ליפידים חד-עיניות ענקיות (הנקראות גם ליפוזומים), ואת השיטה ליצירת שכבת F-actin הביולוגית של קליפת המוח בעלון הפנימי של קרום הליפוזום.

במבחנה שחזור של שלד אקטין ציטוסקלטון בתוך שלפוחית אונילמלרית ענקית

The actin cytoskeleton, the principal mechanical machinery in the cell, mediates numerous essential physical cellular activities, including cell ...

מדד זה בונה מודל מינימלי של התא נטול תקנות ביוכימיות מורכבות. הטכניקה בה נעשה שימוש יכולה לייצר תפוקה גבוהה של ליפוזומים ובעלת נצילות אנקפסולציה גבוהה עבור חלבוני שלד ציטוסקולרי. אמצעי זה יכול להיות מיושם על אנקפסולציה של מגוון חלבונים וחפצים גדולים כגון מיקרו-חלקיקים ומיקרו-שחיינים המכינים את עצמם.אדם נאבק להגדיל את תשואת הליפוזום עבור הניסיונות הראשונים. מומלץ לדון באופן קבוע בחלק של כתב היד לקבלת פרטים נוספים כדי להגדיל את התשואה. כדי להתחיל, הכינו את חיץ אי-הפילמור הפנימי מימי בנפח כולל של חמישה מיליליטר על ידי ערבוב 0.1 מילימולר CACL שניים, 10 מילימולאר HEPES, DTT מילימולרי אחד, 0.5 מילימולאר DAPCO, 320 מילימולאר סוכרוז ו-0.2 מילימולאר ATP.הכינו את תערובת החלבונים על ידי הוספת חלבונים למאגר אי-הפילמור הפנימי בארבע מעלות צלזיוס. כדי ליצור שכבת אקטין, הוסיפו לתערובת החלבון 100 ננומולר גלקלין, ארבעה מיקרומולר קוקלין ו-2.2 מיקרומולר VCA HEZ. כניסוי בקרה, החלף את תערובת החלבון ב-100 מיקרוגרם למיליליטר צבע פלואורסצנטי.הכן את חיץ הפילמור הפנימי מימי בנפח כולל של חמישה מיליליטר על ידי ערבוב 100 מילימולר אשלגן כלורי. ארבעה מילימולרים מגנזיום כלוריד, 10 מילימולר HEPES, DTT מילימולרי אחד, 0.5 מילימולאר DABCO, 10 מילימולאר ATP ו-80 מילימולאר סוכרוז. הכן את החיץ הסופי על ידי ערבוב חיץ אי-פילמור פנימי וחיץ פילמור פנימי ביחס נפח של אחד לאחד, כדי להניב את התמיסה המימית הפנימית בנפח כולל של 30 מיקרוליטרים שיכוסו בתוך הליפוזום.הכן את החיץ החיצוני מימי בנפח כולל של 150 מיקרוליטר על ידי ערבוב 10 מילימולר HEPES, 50 מילימולר אשלגן כלורי, שני מילימולאר מגנזיום כלוריד, 0.2 מילימולר סידן כלורי, שני מילימולאר ATP, DTT מילימולרי אחד, 0.5 מילימולר DAPCO, 212 מילימולר גלוקוז ו 0.1 מיליגרם למעטפת בטא מיליליטר. כדי להכין את תערובת שמן השומנים, להתחיל על ידי הוספת 100 microliters של 25 מיליגרם למיליליטר EGGPC לתוך בקבוקון זכוכית. מאדים כלורופורם עם גז ארגון ומשאירים שכבת שומנים מוצקה יבשה בתחתית הבקבוקון.כדי ליצור שכבת אקטין, מוסיפים ליפיד ניקל ביחס של 10 לאחד של EGGPC לליפיד ניקל ומערבבים, לפני אידוי הכלורופורם. מוסיפים שני מיליליטר של שמן מינרלי. מאדים את הכלורופורם ומסננים את תערובת שמן השומנים בטמפרטורת החדר באמבטיה למשך שעה, כדי להשעות את השומנים.הכינו חיץ אחרון בתחליב שמן להכנת טיפות שומנים חד-שכבתיות המכילות את החלבון המעניין. התחילו בנטילת 100 מיקרוליטרים מתערובת שמן השומנים בצינור פלסטיק והוסיפו 10 מיקרוליטרים של חיץ סופי לתערובת שמן השומנים. ודא שהמאגר הסופי נמצא בטיפה אחת.באמצעות מזרק זכוכית שואבים תחילה כמות קטנה של תערובת שמן שומנים ולאחר מכן את טיפת החיץ הסופית על ידי הנחת קצה המזרק בשולי הטיפה כדי לפרק אותו לטיפות זעירות. יש לשאוף בעדינות למעלה ולמטה מספר פעמים עד שנוצר תחליב מעונן. שים 30 מיקרוליטר של חיץ חיצוני בצינור פלסטיק נפרד.הניחו 30 מיקרוליטרים של תערובת שמן השומנים על גבי חיץ חיצוני ותנו לה לשבת כ-10 דקות כדי לפתח מונו-שכבה של שומנים בממשק. כדי להכין ליפוזומים, מוסיפים בזהירות 50 מיקרוליטרים של תחליב שמן המאגר הסופי, לשלב השמן העליון של הצינור. צנטריפוגה צינור פלסטיק ב 100 פעמים G במשך 15 דקות בארבע מעלות צלזיוס.זמן משתנה ומהירות צנטריפוגה, כדי לייעל להיווצרות ליפוזום. הסר בזהירות את שלב השמן על ידי פיפטה לשאוף נפח נוסף במידת הצורך. הקפידו לא לשים את קצה הפיפטה בצד הצינור כדי למנוע יצירת מניסקוס של שמן על גבי שלב הליפוזום.בעזרת פיפטה חדשה, חותכים את קצה הפיפטה. הדביקו באיטיות את הפיפטה לשלב התחתון שנותר ושאפו את הנפח המיימי לאיסוף ליפוזומים. יוצקים 100 מיקרוליטרים של חיץ חיצוני לתוך הבאר של תא הדגירה.הפקידו בעדינות את הליפוזומים שנאספו לתוך החיץ החיצוני ולאחר מכן הניחו כיסוי נוסף על גבי התא. התבונן בליפוזומים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי באמצעות מטרת טבילה של 63 x שמן. השתמש בקווי לייזר של 488, 647 ו-561 ננומטר.כדי לבחון שומנים המסומנים באופן פלואורסצנטי, צבע פלואורסצנטי עטוף ואקטין המסומן פלואורסצנטי בהתאמה. צלם את מסגרות העניין ושמור את התמונות בפורמט TIF. לעבד ולנתח תמונות בתמונה J.Start על ידי פתיחת קובץ TIF, באמצעות תוכנת תמונה J.עברו אל התמונה ולחצו על 'התאם'. לאחר מכן ניגודיות בהירות, התאם את הבהירות והניגודיות של התמונה לקנה המידה הרצוי על ידי התאמת ההגדרות המינימליות והמקסימליות ומחווני הבהירות והניגודיות. לחץ על כלי בחירת המלבן בסרגל הכלים ובחר את אזור העניין.עבור אל התמונה ולאחר מכן לחץ על חתוך כדי לחתוך את החזר ההשקעה. עבור אל ניתוח ולאחר מכן לחץ על קבע קנה מידה. בחלון המוקפץ, הזן 1.0 בשדה יחסי הגודל של הפיקסלים והגדר מיקרומטר כיחידת האורך.בשדה 'מרחק בפיקסלים', הזינו את רוחב התמונה בפיקסלים. בשדה המרחק הידוע, הזן את רוחב התמונה האמיתי במיקרונים. כדי למדוד את גודל הליפוזום, בעזרת כלי הבחירה הסגלגל בסרגל הכלים, ציירו עיגול לאורך קצה הליפוזום.עבור לנתח, ולאחר מכן לחץ על מדוד, כדי למדוד את שטח המעגל, שממנו ניתן לחשב את קוטר הליפוזום. יצירת ליפוזום מוצלחת מאומתת באמצעות הדמיה של הטבעת העגולה הדקה שהיא דו-שכבת השומנים הפלואורסצנטית הירוקה. תחת לייזר של 488 ננומטר המשתמש במיקרוסקופיה קונפוקלית כדי לאשר אנקפסולציה של הצבע הפלואורסצנטי.הסביבה הפנימית של הליפוזומים צריכה להיות פלואורסצנטית אחידה תחת לייזר של 647 ננומטר. ניתן היה לדמיין את היווצרות הליפוזומים על ידי הטבעות העגולות הירוקות הדקות. ההשפעה המשוחזרת ברשתות בתוך ליפוזומים היא הטרוגנית, ומתבטאת במבני רשת מסועפים של חוטי אקטין.ארכיטקטורת הענף הופעלה על ידי הכנסת ARP שני שלושה מורכבים, אשר בו זמנית שולט על נוקלאציה והסתעפות של חוטי אקטין, יחד עם VCA HEZ. שכבת אקטין דקה, אך מסועפת בצפיפות, נוצרת בעלון הפנימי של הדו-שכבה של הליפוזומים, אשר ניתן לדמיין אותה כפלואורסצנטית. תערובת החיץ הסופי של השומנים חייבת להיות נשאבת בדרך כלל קדימה ואחורה דרך מזרק זכוכית, כדי למנוע החדרת בועות אוויר.התערובת חייבת להיות לבנבן לאחר התהליך. טכניקה זו סללה את הדרך לבניית מודל מינימלי של התא, נטול תקנות ביוכימיות מורכבות. בעזרת מערכת חיקוי תאים זו חוקרים יכולים לחקור את התכונות המכניות והדינמיות של חלבוני ציטוסקלטון, נוקלאטור והמנוע המולקולרי.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles

The Encapsulation of Cell-free Transcription and Translation Machinery in Vesicles for the Construction of Cellular Mimics

Encapsulation של תמלול נטול סלולרי ומכונות בתרגום לשלפוחית ​​לבניית מחקה סלולרי

As interest shifts from individual molecules to systems of molecules, an increasing number of laboratories have sought to build from the bottom up ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

גירוי מבחן העין (EIT) לסיכוני זיהוי כימיקלים עיניים מעצבנים באמצעות אפיתל דגם רקמות כמו-קרנית משוחזר אדם (RHCE)

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם תרבות איברים של הדיסק הבין חולייתי Murine

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

The Organoid Reconstitution Assay (ORA) for the Functional Analysis of Intestinal Stem and Niche Cells

The Organoid Reconstitution Assay ORA for the Functional Analysis of Intestinal Stem and Niche Cells

וזמינותו שיחזור תא צורב (אורה) לניתוח פונקציונלי של מעיים גזע ותאים נישה

The intestinal epithelium is characterized by an extremely rapid turnover rate. In mammals, the entire epithelial lining is renewed within 4 - 5 days. ...

Decellularization of Whole Human Heart Inside a Pressurized Pouch in an Inverted Orientation

Decellularization של הלב האנושי כולו בתוך נרתיק מווסת בכיוון הפוך

The ultimate solution for patients with end-stage heart failure is organ transplant. But donor hearts are limited, immunosuppression is required, and ...

Evaluation of the Storage Stability of Extracellular Vesicles

הערכת יציבות האחסון של שלפוחיות ומסחטות

Extracellular vesicles (EVs) are promising targets in current research, to be used as drugs, drug-carriers, and biomarkers. For their clinical ...

Bioparticle Microarrays for Chemotactic and Molecular Analysis of Human Neutrophil Swarming in vitro

ביו-מאמר מיקרומערכים למיקרוטקטיקה וניתוח מולקולרי של נויטרופילים אנושיים

Neutrophil swarming is a cooperative process by which neutrophils seal off a site of infection and promote tissue reorganization. Swarming has classically ...

Advanced 3D Liver Models for In vitro Genotoxicity Testing Following Long-Term Nanomaterial Exposure

דגמי כבד תלת-ממדיים מתקדמים לבדיקות גנוטוקסיות במבחנה בעקבות חשיפה ננו-חומרית לטווח ארוך

Due to the rapid development and implementation of a diverse array of engineered nanomaterials (ENM), exposure to ENM is inevitable and the development of ...