Name: in vitro reconstitution of the actin cytoskeleton inside giant unilamellar vesicles
Uploaded: 2022-08-25T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles at JoVE.com

ARO MURI W911NF-14-1-0403'ün M.P.M.'ye, Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) R01 1R01GM126256'dan M.P.M.'ye, Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) U54 CA209992, NIH RO1 GM126256, NIH U54 CA209992, Michigan Üniversitesi / Genentech, SUBK00016255 ve İnsan Sınırları Bilim Programı (HFSP) hibe numarası RGY0073/2018'den M.P.M.'ye fon sağladığını kabul ediyoruz. Bu materyalde ifade edilen herhangi bir görüş, bulgu, sonuç veya öneri yazar(lar)a aittir ve mutlaka ARO, NIH veya HFSP'nin görüşlerini yansıtmaz. S.C., V. Yadav, C. Muresan ve S. Amiri ile verimli tartışmalar yaptığını kabul eder.

1. Tamponların ve protein çözeltilerinin hazırlanması
<ol><li>Sulu İç Polimerizasyon Olmayan (INP) Tamponunu, 0,1 mM CaCl2, 10 mM HEPES (pH 7,5), 1 mM DTT, 0,5 mM Dabco, 320 mM sakkaroz ve 0,2 mM ATP'yi karıştırarak toplam 5 mL hacimde hazırlayın.</li>
	<li>Aşağıdaki konsantrasyonlarda 4 ° C'de INP tamponuna proteinler ekleyerek Protein Karışımını (PM) hazırlayın: 11.2 μM floresan olmayan G-aktin, 2.8 μM floresan etiketli aktin ve 0.24 μM Arp2/3 (Malzeme Tab...

Birkaç önemli adım, hazırlık sürecinde yüksek miktarda lipozomun başarısını belirler. Lipit filmini yağda tamamen çözmek için, cam şişenin altındaki lipit filmi tamamen kaybolana kadar numune sonikleştirilmelidir. Sonikasyondan sonra, lipit-yağ karışımı, lipit moleküllerinin daha fazla dağılması için karanlık koşullar altında oda sıcaklığında gece boyunca saklanmalıdır29. Karışım 4 ° C'de bir haftaya kadar saklanabilir. İlgilenilen proteini içeren tek ka...

Aktin sitoiskeleti, moleküler düzeyde kontraktiliteyi ve kuvvet üretimi 1,2,3'ü koordine ederek hücrenin hücre içi mimarisinin oluşturulmasında temel bir rol oynar. Sonuç olarak, hücre deformasyonu4,5, bölüm6, göç 7,8 ve yapışma9 dahil olmak üzere çok sayıda temel hücresel aktiviteye aracılık eder. Aktin ağlarının in vitro yeniden yapılanması son yıllarda10,11,12,13,14,15,16,17 gibi büyük ilgi görmüştür. Yeniden yapılanmanın amacı, canlı hücrelerde var olan karmaşık biyokimyasal düzenlemeden yoksun minimal bir hücre modeli oluşturmaktır. Bu, spesifik hücre içi aktiviteleri araştırmak için kontrol edilebilir bir ortam sunar ve aktin sitoiskeletinin farklı bileşenlerinin tanımlanmasını ve analizini kolaylaştırır18,19. Ayrıca, fosfolipid dev unilamellar veziküller (GUV'ler, lipozomlar) içindeki in vitro aktin ağlarının kapsüllenmesi, yarı geçirgen bir sınıra sahip sınırlı fakat deforme edilebilir bir alan sağlar. 9,20,21,22 hücresi içindeki aktin makinesinin fizyolojik ve mekanik mikro çevresini taklit eder.
Lipozomları hazırlamak için çeşitli yöntemler arasında, lipit filmi hidrasyon yöntemi (şişme yöntemi olarak da bilinir) en eski tekniklerden biridir23. Kuru lipit filmi, tamponların eklenmesiyle hidratlanır ve sonunda vezikül haline gelen membranöz kabarcıklar oluşturur24. Daha yüksek verime sahip daha büyük veziküller üretmek için, elektroformasyon yöntemi25 olarak bilinen film hidrasyon yönteminden ilerleyen geliştirilmiş bir yöntem, hidrasyon işlemini verimli bir şekilde teşvik etmek için bir AC elektrik alanı uygular26. Aktin kapsülleme için bu hidrasyon bazlı yöntemlerin başlıca sınırlamaları, yüksek konsantrasyonlu proteinlerin düşük kapsülleme verimliliğine sahip olması ve sadece spesifik lipit bileşimleri ile uyumlu olmasıdır24. Tersine çevrilmiş emülsiyon tekniği, karşılaştırıldığında, lipit bileşenleri ve protein konsantrasyonları20,27,28,29 için daha az sınırlamaya sahiptir. Bu yöntemde, kapsülleme için bir protein karışımı, daha sonra lipit içeren bir mineral yağ çözeltisinde emülsifiye edilen ve lipit-tek katmanlı damlacıklar oluşturan iç sulu tampona eklenir. Tek katmanlı lipit damlacıkları daha sonra iki katmanlı lipit vezikülleri (lipozomlar) oluşturmak için santrifüjleme yoluyla başka bir lipit / yağ-su arayüzünden geçer. Bu tekniğin aktin kapsülleme24,30 için en başarılı stratejilerden biri olduğu kanıtlanmıştır. Ayrı olarak, darbeli püskürtme31,32, geçici membran ejeksiyonu 33 ve cDICE yöntemi34 dahil olmak üzere bazı mikroakışkan cihaz yöntemleri vardır. Ters emülsiyon yöntemi ile mikroakışkan yöntem arasındaki benzerlikler, kullanılan lipit çözücü (yağ) ve lipozomların dış broşürünün oluşumu için lipit/yağ-su arayüzünün kullanılmasıdır. Buna karşılık, mikroakışkan yöntemle lipozomların üretilmesi, mikroakışkan cihazların kurulmasını gerektirir ve iki katmanın iki yaprağı arasında sıkışmış yağ eşlik eder, bu da yağın çıkarılması için ekstra bir adım gerektirir35.
Bu yazıda, daha önce kullanıldığı gibi polimerize bir F-aktin ağını kapsülleyen lipozomları hazırlamak için ters emülsiyon tekniğini kullandık22. Kapsülleme için protein karışımı ilk önce aktinin küresel (G) formunda kalması için polimerize olmayan koşullara sahip bir tampona yerleştirildi. Tüm işlem, daha sonra numunenin oda sıcaklığına ısınmasına izin verilerek tetiklenen erken aktin polimerizasyonunu önlemek için 4 ° C'de gerçekleştirildi. Oda sıcaklığına ulaştığında, aktin filamentli (F) formuna polimerize olur. Protein işlevlerini ve özelliklerini incelemek için iç sulu tampon çözeltisine çeşitli aktin bağlayıcı proteinler eklenebilir, böylece aktin ağı ve membran yüzeyi ile etkileşimi hakkında daha fazla bilgi sağlar. Bu yöntem aynı zamanda ilgilenilen çeşitli proteinlerin36 ve son lipozomların büyüklüğüne yakın büyük nesnelerin (mikropartiküller, kendinden tahrikli mikroyüzücüler, vb.)kapsüllenmesine de uygulanabilir 28,37.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-{[n(5-amino-1-carboxypentyl)iminodiacetic acid]succinyl} nickel salt (DOGS-NTA-Ni)&#160;</td>
			<td>Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td>231615773</td>
			<td>Nickel Lipid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,4-Diazabicyclo[2.2.2]octane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D27802-25G</td>
			<td>DABCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actin protein (&#62;99% pure): rabbit skeletal muscle</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>AKL99-D</td>
			<td>non-fluorescent G-actin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>AR05</td>
			<td>fluorescently labeled actin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2383-10G</td>
			<td>ATP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 dye</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
			<td>fluorescent dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Andor iQ3</td>
			<td>Andor Technologies</td>
			<td></td>
			<td>control and acquisition software for confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arp2/3 Protein Complex: Porcine Brain</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>RP01P-A</td>
			<td>Arp 2/3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10035048</td>
			<td>CaCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamlide Chambers (4-well for 12 mm round coverslip)</td>
			<td>Quorum Technologies</td>
			<td></td>
			<td>incubation chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cofilin protein: human recombinant</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>CF01-C</td>
			<td>cofilin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope (63&#215; oil-immersion objective)</td>
			<td>Andor Technologies</td>
			<td>LEICA DMi8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-GLUCOSE BIOXTRA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7528</td>
			<td>glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol</td>
			<td>DOT Scientific&#160;</td>
			<td>DSD11000-10</td>
			<td>DTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelsolin Protein: Homo Sapiens Recombinant</td>
			<td>Cytoskeleton, Inc</td>
			<td>HPG6</td>
			<td>gelsolin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton 1750 Gastight Syringe, 500 &#181;L, cemented needle, 22 G, 2&#34; conical tip</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-07940-53</td>
			<td>glass syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AmericanBio</td>
			<td>7365-45-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ/Fiji</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://imagej.net/tutorials/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-alpha-Phosphatidylcholine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td>97281442</td>
			<td>EPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7786303</td>
			<td>MgCl2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil, BioReagent, for molecular biology, light oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>8042475</td>
			<td>mineral oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-WASP fragment WWA (aa400&#8211;501, VCA-His)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>VCA-His is purified using lab protocol. The protocol can be provided upon reasonable requests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oregon Green 488 1,2-Dihexadecanoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine (Oregon Green 488 DHPE)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>O12650</td>
			<td>DHPE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7447407</td>
			<td>KCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>57-50-1</td>
			<td>sucrose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Casein from bovine milk</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6905-250MG</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro reconstitution of the actin cytoskeleton inside giant unilamellar vesicles

Hücredeki başlıca mekanik mekanizma olan aktin sitoiskeleti, hücre deformasyonu, bölünme, göç ve yapışma dahil olmak üzere çok sayıda temel fiziksel hücresel aktiviteye aracılık eder. Bununla birlikte, aktin ağının dinamiklerini ve yapısını in vivo olarak incelemek , canlı hücrelerdeki biyokimyasal ve genetik düzenleme ile karmaşıktır. Hücre içi biyokimyasal düzenlemeden yoksun minimal bir model oluşturmak için, aktin dev unilamellar veziküllerin (lipozomlar olarak da adlandırılan GUV'lar) içinde kapsüllenir. Biyomimetik lipozomlar hücre büyüklüğündedir ve sitoiskelet ağının mekanik ve dinamik özelliklerine nicel bir bakış açısı kazandırarak aşağıdan yukarıya sentetik biyoloji için uygun bir yol açar. Kapsülleme için lipozomlar üretmek için, çeşitli hücre taklit sistemleri hazırlamak için karmaşık çözeltileri lipozomlara kapsüllemek için en başarılı tekniklerden biri olan ters emülsiyon yöntemi (emülsiyon transfer yöntemi olarak da adlandırılır) kullanılır. Bu yöntemle, daha sonra tek katmanlı lipit damlacıkları oluşturmak için fosfolipit içeren bir mineral yağ çözeltisinde emülsifiye edilen iç tampona ilgili proteinlerin bir karışımı eklenir. İstenilen lipozomlar, lipit/yağ-su arayüzünden geçen tek katmanlı lipit damlacıklarından üretilir. Bu yöntem, konsantre aktin polimerlerinin istenen lipit bileşenleri ile lipozomlara kapsüllenmesini sağlar ve biyomimikting bir sitoiskelet ağının in vitro olarak yeniden sulandırılmasının yolunu açar.

İnverted emülsiyon tekniğine dayalı lipozomların hazırlanması Şekil 1'de grafiksel ve şematik olarak gösterilmiştir.
İlk olarak, fosfolipid (EPC) ve floresan lipidden (DHPE) oluşan boş (çıplak) lipozomlar (~5-50 μm çapında) hazırlandı. Parlak, çok kırmızı bir floresan boya, bir kontrol deneyi olarak çıplak lipozomların içinde kapsüllendi. Damlacığın periferiğinde bir lipit tek katmanının başarılı bir şekilde oluşup oluşmad...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles at JoVE.com

In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles

Bu yazıda, F-aktin sitoiskeletini dev unilamellar lipid veziküllerine (lipozomlar olarak da adlandırılır) kapsüllemek için deneysel teknikleri ve lipozom zarının iç broşüründe korteks-biyomimik yapan bir F-aktin tabakası oluşturma yöntemini göstereceğiz.

İn Vitro Aktin Hücre İskeletinin Dev Unilameller Veziküller İçinde Yeniden Sulandırılması

The actin cytoskeleton, the principal mechanical machinery in the cell, mediates numerous essential physical cellular activities, including cell ...

Bu önlem, karmaşık biyokimyasal düzenlemelerden yoksun hücrenin minimum bir modelini oluşturur. Kullanılan teknik, yüksek miktarda lipozom üretebilir ve sitoiskelet proteinleri için yüksek kapsülleme verimliliğine sahip olabilir. Bu önlem, çeşitli proteinlerin ve mikropartiküller ve kendi kendini hazırlayan mikro yüzücüler gibi büyük nesnelerin kapsüllenmesine uygulanabilir.Bir birey ilk birkaç girişim için lipozom verimini arttırmak için mücadele ediyor. Verimi artırmak için daha fazla ayrıntı için makalenin düzenli olarak tartışılması önerilir. Başlamak için, 0.1 milimolar CACL iki, 10 milimolar HEPES, bir milimolar DTT, 0.5 milimolar DAPCO, 320 milimolar sakkaroz ve 0.2 milimolar ATP'yi karıştırarak sulu iç polimerizasyon tamponunu toplam beş mililitre hacimde hazırlayın.Protein karışımını, polimerizasyon içermeyen iç tampona dört santigrat derecede proteinler ekleyerek hazırlayın. Bir aktin tabakası oluşturmak için, protein karışımına 100 nanomolar gellcalin, dört mikromolar coughalin ve 2.2 mikromolar VCA HEZ ekleyin. Bir kontrol deneyi olarak, protein karışımını mililitre floresan boya başına 100 mikrogram ile değiştirin.Sulu iç polimerizasyon tamponunu, 100 milimolar potasyum klorürü karıştırarak toplam beş mililitre hacimde hazırlayın. Dört milimolar magnezyum klorür, 10 milimolar HEPES, bir milimolar DTT, 0.5 milimolar DABCO, 10 milimolar ATP ve 80 milimolar sakaroz. İç polimerizasyon tamponunu ve iç polimerizasyon tamponunu bire bir hacim oranında karıştırarak son tamponu hazırlayın, iç sulu çözeltiyi lipozom içinde kapsüllenecek toplam 30 mikrolitre hacimde verin.Sulu dış tamponu, 10 milimolar HEPES, 50 milimolar potasyum klorür, iki milimolar magnezyum klorür, 0.2 milimolar kalsiyum klorür, iki milimolar ATP, bir milimolar DTT, 0.5 milimolar DAPCO, 212 milimolar glikoz ve mililitre beta kasa başına 0.1 miligram karıştırarak toplam 150 mikrolitre hacimde hazırlayın. Lipid yağı karışımını hazırlamak için, bir cam şişeye mililitre EGGPC başına 100 mikrolitre 25 miligram ekleyerek başlayın. Kloroformu, şişenin dibinde kuru bir katı lipit filmi bırakarak argon gazı ile buharlaştırın.Bir aktin tabakası oluşturmak için, kloroformun buharlaşmasından önce EGGPC'nin nikel lipitine 10 ila bir oranında nikel lipit ekleyin ve karıştırın. İki mililitre mineral yağ ekleyin. Lipitleri yeniden askıya almak için kloroformu buharlaştırın ve lipit yağı karışımını oda sıcaklığında bir saat boyunca bir banyoda sonikleştirin.İlgilenilen proteini içeren tek katmanlı lipit damlacıklarını hazırlamak için yağ emülsiyonunda son bir tampon hazırlayın. Plastik bir tüpe 100 mikrolitre lipit yağı karışımı alarak başlayın ve lipit yağı karışımına 10 mikrolitre son tampon ekleyin. Son tamponun tek bir damlacıkta olduğundan emin olun.Bir cam şırınga kullanarak önce az miktarda lipit yağı karışımı ve daha sonra şırınganın ucunu damlacığın çevresine yerleştirerek son tampon damlacığını küçük damlacıklara ayırın. Bulutlu bir emülsiyon oluşana kadar yavaşça yukarı ve aşağı doğru birkaç kez aspire edin. Ayrı bir plastik tüpe 30 mikrolitre dış tampon koyun.Dış tamponun üzerine 30 mikrolitre lipit yağı karışımı yerleştirin ve arayüzde bir lipit tek katmanı geliştirmek için yaklaşık 10 dakika bekletin. Lipozomları hazırlamak için, tüpün üst yağ fazına 50 mikrolitre son tampon yağı emülsiyonunu dikkatlice ekleyin. Plastik tüpü dört santigrat derecede 15 dakika boyunca 100 kez G'de santrifüj yapın.Lipozom oluşumunu optimize etmek için zamanı ve santrifüjleme hızını değiştirin. Gerekirse yağ fazını pipet aspirat ekstra hacmi ile dikkatlice çıkarın. Lipozom fazının üstünde bir yağ menisküsü oluşturmamak için pipet ucunu tüpün yanına koymadığınızdan emin olun.Yeni bir pipetle pipetin ucunu kesin. Pipetleri yavaşça kalan alt faza yapıştırın ve lipozomları toplamak için sulu hacmi aspire edin. Bir inkübasyon odasının kuyucuğuna 100 mikrolitre dış tampon dökün.Toplanan lipozomları yavaşça dış tampona koyun ve ardından odanın üstüne başka bir kapak kayması yerleştirin. 63 x yağ daldırma hedefi kullanarak lipozomları konfokal mikroskopla gözlemleyin. 488, 647 ve 561 nanometre lazer hatları kullanın.Floresan olarak etiketlenmiş lipitleri gözlemlemek için, sırasıyla kapsüllenmiş floresan boya ve kapsüllenmiş floresan etiketli aktin. İlgilendiğiniz kareleri yakalayın ve görüntüleri TIF formatında kaydedin. TIF dosyasını açıp image J yazılımını kullanarak görüntü J.Start'taki görüntüleri işleyin ve analiz edin.Görsele gidin ve ardından ayarla'yı tıklayın. Ardından parlaklık kontrastı, minimum ve maksimum ayarları ve parlaklık ve kontrast kaydırıcılarını ayarlayarak görüntünün parlaklığını ve kontrastını istenen ölçeğe ayarlayın. Araç çubuğundaki dikdörtgen seçim aracına tıklayın ve ilgilendiğiniz bölgeyi seçin.Resme gidin, ardından YG'yi kırpmak için kırp'ı tıklayın. Analiz etmeye gidin ve ardından ölçeği ayarla'yı tıklayın. Açılır pencerede, piksel en boy oranı alanına 1,0 girin ve mikrometreyi uzunluk birimi olarak ayarlayın.Piksel cinsinden uzaklık alanına, görüntü genişliğini piksel cinsinden girin. Bilinen mesafe alanına, gerçek görüntü genişliğini mikron cinsinden girin. Lipozomun boyutunu ölçmek için, araç çubuğundaki oval seçim aracını kullanarak, lipozomun kenarı boyunca bir daire çizin.Analize gidin, ardından lipozomun çapının hesaplanabileceği dairenin alanını ölçmek için ölç'ü tıklayın. Başarılı lipozom oluşumu, yeşil floresan lipid çift katmanı olan ince dairesel halkanın görselleştirilmesiyle doğrulanır. Floresan boyanın kapsüllenmesini doğrulamak için konfokal mikroskopi kullanan 488 nanometrelik bir lazer altında.Lipozomların iç ortamı, 647 nanometrelik bir lazer altında eşit şekilde floresan olmalıdır. Lipozomların oluşumu ince yeşil dairesel halkalar tarafından görselleştirilebilir. Lipozomların içindeki ağlarda yeniden yapılandırılmış etki heterojendir ve aktin filamentlerinin dallanmış ağ yapıları olarak kendini gösterir.Dal mimarisi, VCA HEZ ile birlikte aktin filamentlerinin çekirdeklenmesini ve dallanmasını aynı anda kontrol eden ARP iki üç kompleksinin tanıtılmasıyla tetiklendi. Lipozomların çift katmanının iç broşüründe, floresan bir tabaka olarak görselleştirilebilen ince, ancak yoğun dallanmış bir aktin tabakası oluşturulur. Lipid ses son tampon karışımı, hava kabarcıklarının ortaya çıkmasını önlemek için genellikle bir cam şırıngadan ileri geri pompalanmalıdır.İşlemden sonra karışım beyazımsı olmalıdır. Bu teknik, karmaşık biyokimyasal düzenlemelerden yoksun, hücrenin minimal bir modelini oluşturmanın yolunu açtı. Bu hücre taklit sistemi ile araştırmacılar, sitoiskelet proteinlerinin, nükleatörün ve moleküler motorun mekanik ve dinamik özelliklerini keşfedebilirler.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles

The Encapsulation of Cell-free Transcription and Translation Machinery in Vesicles for the Construction of Cellular Mimics

Hücresel Mimics İnşası için Veziküller Hücre-ücretsiz Transkripsiyon ve Çeviri Makine Sarma

As interest shifts from individual molecules to systems of molecules, an increasing number of laboratories have sought to build from the bottom up ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

Yeniden İnşa İnsan Kornea gibi Epitelyal (RHCE) Doku Modeli kullanılarak Göz tahriş Kimyasalların Tehlike Tanımlaması Göz tahrişi Testi (EIT)

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

bir<em&gt; İn Vitro</emKemirgen İntervertebral Disk&gt; Organ Kültürü Modeli

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

The Organoid Reconstitution Assay (ORA) for the Functional Analysis of Intestinal Stem and Niche Cells

The Organoid Reconstitution Assay ORA for the Functional Analysis of Intestinal Stem and Niche Cells

Fonksiyonel analiz bağırsak kök ve niş hücre Organoid sulandırma tahlil (ORA)

The intestinal epithelium is characterized by an extremely rapid turnover rate. In mammals, the entire epithelial lining is renewed within 4 - 5 days. ...

Decellularization of Whole Human Heart Inside a Pressurized Pouch in an Inverted Orientation

Decellularization ters yönde bir basınçlı bir kese içinde bütün insan kalp

The ultimate solution for patients with end-stage heart failure is organ transplant. But donor hearts are limited, immunosuppression is required, and ...

Evaluation of the Storage Stability of Extracellular Vesicles

Ekstrasellüler veziküllerin depolama Istikrarı değerlendirilmesi

Extracellular vesicles (EVs) are promising targets in current research, to be used as drugs, drug-carriers, and biomarkers. For their clinical ...

Bioparticle Microarrays for Chemotactic and Molecular Analysis of Human Neutrophil Swarming in vitro

İnsan Nötrofil Swarming in vitro Kemotaktik ve Moleküler Analizi için Biyopartikül Mikrodizileri

Neutrophil swarming is a cooperative process by which neutrophils seal off a site of infection and promote tissue reorganization. Swarming has classically ...

Advanced 3D Liver Models for In vitro Genotoxicity Testing Following Long-Term Nanomaterial Exposure

Uzun Süreli Nanomalzeme Maruziyetini Takiben İn vitro Genotoksisite Testi için Gelişmiş 3D Karaciğer Modelleri

Due to the rapid development and implementation of a diverse array of engineered nanomaterials (ENM), exposure to ENM is inevitable and the development of ...