Name: models of murine vaginal colonization by anaerobically grown bacteria
Uploaded: 2022-05-25T14:30:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Models of Murine Vaginal Colonization by Anaerobically Grown Bacteria at JoVE.com

Мы выражаем признательность Линн Фостер за техническую помощь в разработке этих моделей. Мы ценим стартовые средства от Департамента молекулярной микробиологии и Центра исследований инфекционных заболеваний женщин (для AL), а также March of Dimes (награда Бэзила О'Коннора для AL), которые помогли поддержать эксперименты на ранней стадии. Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний (R01 AI114635) также поддержал разработку этих моделей.

<ol>
	<li>Hillier, S. L., Krohn, M. A., Rabe, L. K., Klebanoff, S. J., Eschenbach, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+normal+vaginal+flora,+H2O2-producing+lactobacilli,+and+bacterial+vaginosis+in+pregnant+women.">The normal vaginal flora, H2O2-producing lactobacilli, and bacterial vaginosis in pregnant women.</a> Clinical Infectious Diseases. 16, 273-281 (1993).</li><li>Ravel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaginal+microbiome+of+reproductive-age+women.">Vaginal microbiome of reproductive-age women.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 4680-4687 (2011).</li><li>Hill, G. B., Eschenbach, D. A., Holmes, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacteriology+of+the+vagina.">Bacteriology of the vagina.</a> Scandinavian Journal of Urology and Nephrology. 86, 23-39 (1984).</li><li>van de Wijgert, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vaginal+microbiome+and+sexually+transmitted+infections+are+interlinked:+Consequences+for+treatment+and+prevention.">The vaginal microbiome and sexually transmitted infections are interlinked: Consequences for treatment and prevention.</a> PLoS Medicine. 14 (12), 1002478 (2017).</li><li>Srinivasan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+communities+in+women+with+bacterial+vaginosis:+high+resolution+phylogenetic+analyses+reveal+relationships+of+microbiota+to+clinical+criteria.">Bacterial communities in women with bacterial vaginosis: high resolution phylogenetic analyses reveal relationships of microbiota to clinical criteria.</a> PLoS One. 7 (6), 37818 (2012).</li><li>Shipitsyna, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composition+of+the+vaginal+microbiota+in+women+of+reproductive+age-sensitive+and+specific+molecular+diagnosis+of+bacterial+vaginosis+is+possible.">Composition of the vaginal microbiota in women of reproductive age-sensitive and specific molecular diagnosis of bacterial vaginosis is possible.</a> PLoS One. 8 (4), 60670 (2013).</li><li>Brotman, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+vaginosis+assessed+by+gram+stain+and+diminished+colonization+resistance+to+incident+gonococcal,+chlamydial,+and+trichomonal+genital+infection.">Bacterial vaginosis assessed by gram stain and diminished colonization resistance to incident gonococcal, chlamydial, and trichomonal genital infection.</a> The Journal of Infectious Diseases. 202 (12), 1907-1915 (2010).</li><li>Peipert, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+vaginosis,+race,+and+sexually+transmitted+infections:+does+race+modify+the+association.">Bacterial vaginosis, race, and sexually transmitted infections: does race modify the association.</a> Sexually Transmitted Diseases. 35 (4), 363-367 (2008).</li><li>Wiesenfeld, H. C., Hillier, S. L., Krohn, M. A., Landers, D. V., Sweet, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+vaginosis+is+a+strong+predictor+of+Neisseria+gonorrhoeae+and+Chlamydia+trachomatis+infection.">Bacterial vaginosis is a strong predictor of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis infection.</a> Clinical Infectious Diseases. 36 (5), 663-668 (2003).</li><li>Spandorfer, S. D., Neuer, A., Giraldo, P. C., Rosenwaks, Z., Witkin, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+abnormal+vaginal+flora,+proinflammatory+cytokines+and+idiopathic+infertility+in+women+undergoing+IVF.">Relationship of abnormal vaginal flora, proinflammatory cytokines and idiopathic infertility in women undergoing IVF.</a> The Journal of Reproductive Medicine. 46 (9), 806-810 (2001).</li><li>Ralph, S. G., Rutherford, A. J., Wilson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+bacterial+vaginosis+on+conception+and+miscarriage+in+the+first+trimester:+cohort+study.">Influence of bacterial vaginosis on conception and miscarriage in the first trimester: cohort study.</a> BMJ. 319 (7204), 220-223 (1999).</li><li>Holst, E., Goffeng, A. R., Andersch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+vaginosis+and+vaginal+microorganisms+in+idiopathic+premature+labor+and+association+with+pregnancy+outcome.">Bacterial vaginosis and vaginal microorganisms in idiopathic premature labor and association with pregnancy outcome.</a> Journal of Clinical Microbiology. 32 (1), 176-186 (1994).</li><li>DiGiulio, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+prevalence,+diversity+and+abundance+in+amniotic+fluid+during+preterm+labor:+a+molecular+and+culture-based+investigation.">Microbial prevalence, diversity and abundance in amniotic fluid during preterm labor: a molecular and culture-based investigation.</a> PLoS One. 3 (8), 3056 (2008).</li><li>Svare, J. A., Schmidt, H., Hansen, B. B., Lose, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+vaginosis+in+a+cohort+of+Danish+pregnant+women:+Prevalence+and+relationship+with+preterm+delivery,+low+birthweight+and+perinatal+infections.">Bacterial vaginosis in a cohort of Danish pregnant women: Prevalence and relationship with preterm delivery, low birthweight and perinatal infections.</a> British Journal of Obstetrics and Gynaecology. 113 (12), 1419-1425 (2006).</li><li>&#193;d&#225;m, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture-+and+PCR-based+detection+of+BV+associated+microbiological+profile+of+the+removed+IUDs+and+correlation+with+the+time+period+of+IUD+in+place+and+the+presence+of+the+symptoms+of+genital+tract+infection.">Culture- and PCR-based detection of BV associated microbiological profile of the removed IUDs and correlation with the time period of IUD in place and the presence of the symptoms of genital tract infection.</a> Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials. 17 (1), 40 (2018).</li><li>Di Paola, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cervico-vaginal+microbiota+in+women+developing+persistent+high-risk+Human+Papillomavirus+infection.">Characterization of cervico-vaginal microbiota in women developing persistent high-risk Human Papillomavirus infection.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10200 (2017).</li><li>Bullman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Fusobacterium+persistence+and+antibiotic+response+in+colorectal+cancer.">Analysis of Fusobacterium persistence and antibiotic response in colorectal cancer.</a> Science. 358 (6369), 1443-1448 (2017).</li><li>Brennan, C. A., Garrett, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota,+inflammation,+and+colorectal+cancer.">Gut microbiota, inflammation, and colorectal cancer.</a> Annual Review of Microbiology. 70, 395-411 (2016).</li><li>Hill, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preterm+birth:+associations+with+genital+and+possibly+oral+microflora.">Preterm birth: associations with genital and possibly oral microflora.</a> Annals of Periodontology. 3 (1), 222-232 (1998).</li><li>Hitti, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaginal+indicators+of+amniotic+fluid+infection+in+preterm+labor.">Vaginal indicators of amniotic fluid infection in preterm labor.</a> Obstetrics &amp; Gynecology. 97 (2), 211-219 (2001).</li><li>DiGiulio, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+of+microbes+in+amniotic+fluid.">Diversity of microbes in amniotic fluid.</a> Seminars in Fetal and Neonatal. 17 (1), 2-11 (2012).</li><li>Patras, K. A., Doran, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+Group+B+Streptococcus+vaginal+colonization.">A murine model of Group B Streptococcus vaginal colonization.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (117), e54708 (2016).</li><li>Jerse, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol-treated+female+mice+as+surrogate+hosts+for+Neisseria+gonorrhoeae+genital+tract+infections.">Estradiol-treated female mice as surrogate hosts for Neisseria gonorrhoeae genital tract infections.</a> Frontiers in Microbiology. 2, 107 (2011).</li><li>Gilbert, N. M., Lewis, W. G., Lewis, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+features+of+bacterial+vaginosis+in+a+murine+model+of+vaginal+infection+with+Gardnerella+vaginalis.">Clinical features of bacterial vaginosis in a murine model of vaginal infection with Gardnerella vaginalis.</a> PLoS One. 8 (3), 59539 (2013).</li><li>Gilbert, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gardnerella+vaginalis+and+Prevotella+bivia+trigger+distinct+and+overlapping+phenotypes+in+a+mouse+model+of+bacterial+vaginosis.">Gardnerella vaginalis and Prevotella bivia trigger distinct and overlapping phenotypes in a mouse model of bacterial vaginosis.</a> The Journal of Infectious Diseases. 220 (7), 1099-1108 (2019).</li><li>Agarwal, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycan+cross-feeding+supports+mutualism+between+Fusobacterium+and+the+vaginal+microbiota.">Glycan cross-feeding supports mutualism between Fusobacterium and the vaginal microbiota.</a> PLOS Biology. 18 (8), 3000788 (2020).</li><li>Liehr, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+estradiol+a+genotoxic+mutagenic+carcinogen.">Is estradiol a genotoxic mutagenic carcinogen.</a> Endocrine Reviews. 21 (1), 40-54 (2000).</li><li>Yager, J. D., Davidson, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+carcinogenesis+in+breast+cancer.">Estrogen carcinogenesis in breast cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 354 (3), 270-282 (2006).</li><li>Adeel, M., Song, X., Wang, Y., Francis, D., Yang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+impact+of+estrogens+on+human,+animal+and+plant+life:+A+critical+review.">Environmental impact of estrogens on human, animal and plant life: A critical review.</a> Environment International. 99, 107-119 (2017).</li><li>Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+injection+of+mice.">Intraperitoneal injection of mice.</a> Journal of Applied Microbiology. 17 (2), 250-251 (1969).</li><li>Lewis, W. G., Robinson, L. S., Gilbert, N. M., Perry, J. C., Lewis, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Degradation,+foraging,+and+depletion+of+mucus+sialoglycans+by+the+vagina-adapted+Actinobacterium+Gardnerella+vaginalis.">Degradation, foraging, and depletion of mucus sialoglycans by the vagina-adapted Actinobacterium Gardnerella vaginalis.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (17), 12067-12079 (2013).</li><li>Robinson, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+sequences+of+15+Gardnerella+vaginalis+strains+isolated+from+the+vaginas+of+women+with+and+without+bacterial+vaginosis.">Genome sequences of 15 Gardnerella vaginalis strains isolated from the vaginas of women with and without bacterial vaginosis.</a> Genome Announcements. 4 (5), 00879 (2016).</li><li>Adapted from &amp;#34;mouse posterior turn&amp;#34; by BioRender.com. BioRender.com Available from: <a target="_blank" href="https://app.biorender.com/biorender-templates">https://app.biorender.com/biorender-templates</a> (2022)</li><li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats.">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (67), e2771 (2012).</li><li>Verollet, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+major+step+towards+efficient+sample+preparation+with+bead-beating.">A major step towards efficient sample preparation with bead-beating.</a> Biotechniques. 44 (6), 832-833 (2008).</li></ol>

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Наиболее существенным отличием описанной здесь модели от ранее опубликованных моделей вагинальной прививки является использование анаэробно культивируемых бактерий, которые требуют особых соображений для получения жизнеспособного инокулята и восстановления бактерий у мышей. Конкретные шаги в приведенном выше протоколе могут незначительно варьироваться в зависимости от вида/штамма используемых бактерий, как предложено в Дополнительном файле 1. Кроме того, в этой рукописи описывается новый процедурный метод введения бактерий и вагинальных промывок, который требует меньше опыта со стороны исследователя и меньшей сдержанности для мышей. Если экспериментатора не устраивает форма сдерживания, описанная в шаге 3.2. и на этапе 3.3., мышей можно вместо этого зажимать, какописано ранее 34 , с анестезией или без нее в соответствии с экспериментальным дизайном и институциональными руководящими принципами IACUC.
Важным предостережением к использованию анаэробно культивируемых бактерий в мышиных моделях является то, что определенные шаги (например, с участием живых животных) должны выполняться за пределами анаэробной камеры. Поэтому наиболее важными шагами в этом протоколе являются те, в которых интересующие бактерии будут подвергаться воздействию аэробной среды, например, во время прививки мышей. Использование любого нового анаэроба в этой модели потребует предварительного изучения его способности сохранять жизнеспособность при воздействии кислорода (например, сравнение коЕ до и после инокуляции, как описано на этапе 2.5 и этапе 3.4.). В зависимости от степени чувствительности организма к кислороду и ПБС следует рассматривать различные способы получения инокулята (Дополнительный файл 1, этап 2.4.5.). Для прививок с использованием G. vaginalis JCP8151B мы обнаружили, что одна трубка инокулята может быть приготовлена в PBS и использована для заражения всех мышей. Если используется другая анаэробная бактерия, более чувствительная к кислороду, инокулятив может быть приготовлен в отдельных пробирках для каждой мыши, так что повторное открытие/ закрытие трубки не требуется. Аналогичным образом, если интересующий вид бактерий более привередлив / менее способен выживать в PBS , чем G. vaginalis, вместо этого можно приготовить прививку в питательных средах. Если используемая среда содержит восстановители, такие как анаэробная среда CDC, используемая для культивирования Prevotella bivia (Дополнительный файл 1, шаг 2.1. и шаг 2.2.), то бактерии также будут иметь повышенную защиту от воздействия кислорода.
Также могут быть рассмотрены альтернативные способы гомогенизации, такие как бисерное биение22,35, которое делается с закрытой крышкой трубки и, следовательно, может вводить меньше кислорода, чем ручной гомогенизатор. Кроме того, более чувствительным к кислороду организмам может потребоваться более длительное время равновесия для сред. Индикатор кислорода, такой как ресазурин, может быть использован для проверки того, что анаэробные условия были достигнуты (шаг 2.1.). Альтернативные методы, такие как анаэробные банки, могут влиять на результаты и должны быть проверены на жизнеспособность бактерий перед использованием.
Чувствительность к кислороду и привередливость экспериментального организма могут также играть роль в успешном восстановлении жизнеспособных бактерий у мыши во время промывания/гомогенизации (Дополнительный файл 1, этап 3.2. и этап 5.1.). Для высокочувствительных организмов время между приемом и покрытием лаважа может привести к потере жизнеспособности и вызвать искусственно заниженную оценку бактериальной вагинальной колонизации. Чтобы смягчить этот эффект, собранные промывания можно сразу же разбавить в свежие анаэробные питательные среды (с восстановителем). Аналогичным образом, гомогенизация органов может быть выполнена в свежих питательных средах, а не в PBS для повышения жизнеспособности бактерий, а также может быть выполнена в самой анаэробной камере, чтобы свести к минимуму воздействие кислорода.
В зависимости от цели данного эксперимента экспериментатор должен обращать внимание на контрольные группы. Чтобы проверить гипотезы, базовые показатели неинфицированных контрольных мышей, которые искусственно обрабатываются только транспортным средством, помогут установить, есть ли индукция хемокинов / цитокинов или других конкретных исходов инфекции. Используемое контрольное транспортное средство должно быть таким же, как и транспортное средство, используемое для инокуляции, поэтому, если бактерии инокулируются в питательных средах, то в качестве контроля должны использоваться неинокализованные питательные среды (Дополнительный файл 1, этап 2.4.5.).
Методы, описанные в этом протоколе, также могут быть применены к факультативным бактериям, способным расти анаэробно, но которые традиционно изучаются с использованием аэробных условий культивирования (таких как Escherichia coli или стрептококк группы B). Это может быть особенно актуально для инфекций этими организмами в участках тела, которые, как полагают, содержат низкий уровень кислорода, таких как шейка матки. Может случиться так, что факультативный организм более успешно заражает участки с меньшим количеством кислорода, когда инокулятив готовится анаэробно по сравнению с аэробным. В таком эксперименте восстановление жизнеспособных бактерий для перечисления КОЕ может не требовать анаэробных состояний.

У млекопитающих влагалище является домом для консорциума видов бактерий. Микробиом влагалища человека уникален среди млекопитающих обилием представителей рода Lactobacillus и соответствующим низким рН влагалища (3,8-4,5)1,2,3,4. Нарушение этого доминирования Lactobacillus связано с различными негативными последствиями для здоровья.
При бактериальном вагинозе (БВ) меньше лактобактерий и повышенное обилие разнообразных анаэробных бактерий, таких как Gardnerella vaginalis и Prevotella bivia 5,6. Женщины с БВ подвергаются повышенному риску инфекций, передающихся половым путем 7,8,9, бесплодия10, потерь беременности11, преждевременных родов 12,13,14, внутриутробных инфекций15, инфекций шейки матки 16 и рака 16,17,18 . BV также связан с более высокой вероятностью вагинальной колонизации потенциально патогенными бактериями, такими как Fusobacterium nucleatum 1,19,20, распространенный изолят от инфекций амниотической жидкости21.
Из-за важности анаэробных бактерий в здоровье влагалища человека существует потребность в животных моделях, которые могут быть использованы для исследования биологии и патогенеза этих организмов. Здесь мы описываем методы вагинальной прививки и жизнеспособного восстановления Gardnerella vaginalis у эстрогенизированных мышей и предлагаем дополнительные стратегии для Prevotella bivia и Fusobacterium nucleatum. Другие модели вагинальной колонизации мышей были ранее описаны, но они были сосредоточены на инокуляции и восстановлении факультативных анаэробных бактерий, таких как Streptococcus22 группы B и Neisseria gonorrhoeae23 , которые культивировались аэробно. Инокуляция и восстановление облигатных анаэробов могут быть успешно выполнены с помощью соответствующих экспериментальных стратегий. Мы обсуждаем подходы к жизнеспособному восстановлению нескольких бактериальных таксонов и предлагаем эмпирическую оценку условий жизнеспособности дополнительных видов/штаммов, представляющих интерес.
Классическим методом оценки колонизации живыми бактериями является восстановление колониеобразующих единиц (КОЕ). У традиционно выращенных мышей с собственной эндогенной микробиотой это требует восстановления на агаровой среде, которая выбирает против членов эндогенной вагинальной микробиоты, в то же время позволяя инокулированному штамму бактерий расти. Здесь мы используем устойчивый к стрептомицину изолят G. vaginalis24 , который может быть избирательно восстановлен на стрептомицинсодержащей агаровой среде. Чтобы среда была достаточно селективной и, наоборот, чтобы в эндогенном микробиоме отсутствовали устойчивые к стрептомицину бактерии, вагинальные лаважи, собранные непосредственно перед инокуляцией, должны быть покрыты селективным (стрептомицинсодержащим) агаром.
Лучший способ приготовления инокулята может варьироваться в зависимости от вида и штаммов бактерий. До начала экспериментов на мышах следует провести предварительную работу по определению предпочтительных условий для питательной среды, конечной точки роста и приготовления инокулята, а также восприимчивости к кислороду и жизнеспособности в ПБС. В случае более чувствительных к кислороду бактерий можно рассмотреть альтернативные препараты инокулята (например, в анаэробной питательной среде с соответствующей контрольной группой транспортного средства)25,26.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#946;-estradiol 17-valerate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E1631</td>
			<td>estrogenization of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m, 50 mL Steriflip vacuum filter</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>&#160;SCGP00525</td>
			<td>sterile filtering sesame oil</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 mL tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352059</td>
			<td>estrogenization of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>190-proof ethanol</td>
			<td>Koptec</td>
			<td>&#160;V1105M</td>
			<td>dissection, tissue homogenization, CDC and Columbia media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x PBS</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MT21040CM</td>
			<td>vaginal lavage, G. vaginlalis inoculum prep, tissue collection and homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G &#215; 5/8 -in needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td>estrogenization of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352063</td>
			<td>Tissue collection and homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaerobic chamber</td>
			<td>Coy</td>
			<td>7200000</td>
			<td>Growth of anaerobic bacteria</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto agar</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>DF0140074</td>
			<td>G. vaginalis, F. nucleatum, and P. bivia agar plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto peptone</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>DF0118170</td>
			<td>CDC anaerobic media for P. bivia growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Columbia broth</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>DF0944170</td>
			<td>Columbia media for F. nucleatum growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Defibrinated sheep blood</td>
			<td>Hemostat</td>
			<td>DSB500</td>
			<td>CDC anaerobic media for P. bivia growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>&#160;11008-13</td>
			<td>mouse/tissue dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7528</td>
			<td>NYCIII media for G. vaginalis growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handheld homogenizer</td>
			<td>ISC Bio</td>
			<td>3305500</td>
			<td>Tissue homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>51280</td>
			<td>CDC anaerobic media for P. bivia growth, Columbia media for F. nucleatum growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>25-060-Cl</td>
			<td>NYCIII media for G. vaginalis growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>Hemostat</td>
			<td>SHS500</td>
			<td>NYCIII media for G. vaginalis growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen gas mix (5% hydrogen, 10% CO2, 85% nitrogen)</td>
			<td>Matheson</td>
			<td></td>
			<td>Gas for anaerobic chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluorane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>502017</td>
			<td>mouse anaethesia at sacrifice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-cysteine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C1276</td>
			<td>CDC anaerobic media for P. bivia growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G1626</td>
			<td>CDC anaerobic media for P. bivia growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Water Purifier</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>IQ-7000</td>
			<td>for making media and homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3014</td>
			<td>NYCIII media for G. vaginalis growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH tablets</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5881</td>
			<td>CDC anaerobic media for P. bivia growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen gas</td>
			<td>&#160;Airgas</td>
			<td></td>
			<td>&#160;Gas for anaerobic chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-200 filter tips</td>
			<td>ISC Bio</td>
			<td>&#160;P-1237-200</td>
			<td>vaginal lavages and bacterial inoculations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pancreatic digest of casein</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>70169</td>
			<td>CDC anaerobic media for P. bivia growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteose peptone #3</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>DF-122-17-4</td>
			<td>NYCIII media for G. vaginalis growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>&#160;14084-08</td>
			<td>mouse/tissue dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sesame oil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>&#160;ICN15662191</td>
			<td>estrogenization of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single edge surgical carbon steel razor blades</td>
			<td>VWR</td>
			<td>55411-050</td>
			<td>tissue dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3014</td>
			<td>CDC anaerobic media for P. bivia growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>BioChrom</td>
			<td>80-3000-45</td>
			<td>measuring bacterial OD600</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11860038</td>
			<td>add to agar media to make selective plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tuberculin slip tip 1ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td>estrogenization of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitaim K3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M5625</td>
			<td>Columbia media for F. nucleatum growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitamin K1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>95271</td>
			<td>CDC anaerobic media for P. bivia growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>DF0127-17-9</td>
			<td>NYCIII media for G. vaginalis growth</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

models of murine vaginal colonization by anaerobically grown bacteria

Влагалище млекопитающих может быть колонизировано многими бактериальными таксонами. В микробиоме влагалища человека часто доминируют виды Lactobacillus , но каждая четвертая женщина испытывает бактериальный вагиноз, при котором низкий уровень лактобактерий сопровождается чрезмерным ростом разнообразных анаэробных бактерий. Это состояние было связано со многими осложнениями со здоровьем, включая риски для репродуктивного и сексуального здоровья. Хотя появляется все больше доказательств, свидетельствующих о сложной природе микробных взаимодействий в здоровье влагалища человека, индивидуальные роли этих различных анаэробных бактерий не полностью поняты. Это осложняется отсутствием адекватных моделей для изучения анаэробно выращенных вагинальных бактерий. Мышиные модели позволяют исследовать биологию и вирулентность этих организмов in vivo. Ранее были описаны другие мышиные модели вагинальной бактериальной инокуляции. Здесь мы описываем методы инокуляции анаэробно выращенных бактерий и их жизнеспособного восстановления у традиционно выращенных мышей C57Bl/6. Также описан новый, менее стрессовый процедурный метод вагинальной прививки и промывания. Подробно описаны инокуляция и жизнеспособное восстановление Gardnerella , а также обсуждаются стратегии для дополнительных анаэробов, таких как Prevotella bivia и Fusobacterium nucleatum .

Схематическое представление примера эксперимента показывает некоторые способы выполнения описанного протокола (рисунок 1).
Некоторые животные будут нести эндогенные микробы в своих вагинальных микробиомах, которые будут расти на неселективных средах. Методы, описанные здесь, основаны на стрептомицин-резистентных изолятах исследуемых бактериальных штаммов вместе с селективными средами, содержащими стрептомицин, для отбора против эндогенных бактерий (рисунок 2A,B). Устойчивость к стрептомицину может развиваться спонтанно, поэтому проверка мышей перед инфекцией (стирки 0-го дня) может помочь установить, может ли это быть проблемой.
Восстановление жизнеспособных бактерий из вагинальных промывок осуществляется путем последовательного разбавления и нанесения покрытия на агаровые среды. Стандартная чашка Петри может вмещать до 6 x 6 массива пятен 5 мкл, что позволяет перечислять бактериальные титры из шести реплик пятен на шесть порядков величины для каждого образца при использовании 10-кратных последовательных разведений (рисунок 3A). Этот метод может быть использован для перечисления титров бактерий, начиная от Gardnerella до Prevotella и Fusobacterium (рисунок 3B-D).
Вместе эти методы позволяют проверить гипотезы и сделать интерпретации о бактериальной колонизации/инфекции женского репродуктивного тракта. Например, сравнение титров Gardnerella в вагинальных промывках и гомогенатах влагалищной ткани продемонстрировало соответствие между этими методами (рисунок 4A). Аналогичным образом, в модели вагинальной коинокуляции титры Prevotella в ткани матки были значительно выше (примерно в 20 раз) во время коинфекции Gardnerella по сравнению с моноинфекцией Prevotella (рисунок 4B). Наконец, в этих моделях можно сравнить штаммы бактерий дикого типа и мутантные бактерии, чтобы установить роль, которую играют конкретные гены и их продукты в процессах колонизации /инфекции репродуктивных путей. Например, мутантный штамм Fusobacterium, не обладающий способностью транспортировать и потреблять углеводную сиаловую кислоту, привел к снижению уровня колонизации через 3 дня после посева (рисунок 4C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64032/64032fig01.jpg"> Рисунок 1: Схема примера эксперимента33. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64032/64032fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64032/64032fig02.jpg"> Рисунок 2: Рост эндогенных мышиных вагинальных микробов на селективном и неселективном агаре. Влагалищные промывания пяти самок мышей C57Bl/6 (1-5) наносили на две разные агаровые пластины NYC III и инкубировали анаэробно. (A) Пластина слева не содержит антибиотиков и позволяет расти эндогенным анаэробным бактериям из мышиных вагинальных путей. (B) Пластина справа содержит 1 мг/мл стрептомицина и отбирает против роста эндогенных бактерий. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64032/64032fig02large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64032/64032fig03.jpg"> Рисунок 3: Восстановление жизнеспособных G. vaginalis, P. bivia и F. nucleatum CFU из вагинальных промываний. (A) КОЕ G. vaginalis JCP8151B-SmR inoculum, покрытые репликами в виде серии разбавления на агаре NYC III. (Б-Д) Восстановление жизнеспособных (B) G. vaginalis24, (C) P. bivia25 и (D) F. nucleatum26 из влагалищных промываний моноинфицированных животных. Для каждого графика (B-D) данные объединяются из двух независимых экспериментов, с 10-15 мышами на эксперимент 24,25,26. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64032/64032fig03large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64032/64032fig04v2.jpg"> Рисунок 4: Дальнейший анализ анаэробной бактериальной колонизации в модели посева влагалища мышей. (A) Титры G. vaginalis во влагалищных промывках коррелируют с титрами G. vaginalis , извлеченными из гомогенатов влагалищной ткани через 24 ч и 72 ч после посева (комбинация двух независимых экспериментов, n = 10 каждый. Значимость, определяемая тестом Спирмена на ранговую корреляцию)24. (B) Коинфекция с G. vaginalis приводит к увеличению титров P. bivia в ткани рога матки по сравнению с моноинфицированными животными P. bivia через 48 ч после посева (комбинация двух независимых экспериментов, каждый с 6-10 мышами в группе). Значимость, определяемая U-тестом Манна-Уитни, **p = 0,0017)25. (C) Мутант F. nucleatum с нарушенным переносчиком сиаловой кислоты (Ω SiaT) снизил титры во влагалищных лаважах моноинфицированных мышей по сравнению с F. nucleatum дикого типа через 72 ч после посева (комбинация двух независимых экспериментов, каждый с 10 мышами на группу). Значимость определяется U-тестом Манна-Уитни, **p < 0,01)26. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64032/64032fig04largev2.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
Дополнительный файл 1: Примеры методов, используемых для различных вагинальных бактерий, выращиваемых в анаэробных условиях. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64032/64032_SupplementalFile.zip" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Models of Murine Vaginal Colonization by Anaerobically Grown Bacteria at JoVE.com

Models of Murine Vaginal Colonization by Anaerobically Grown Bacteria

В протоколе представлена мышиная модель вагинальной колонизации анаэробно культивируемыми вагинальными бактериями человека. Мы фокусируемся на Gardnerella vaginalis, включая предложения для Prevotella bivia и Fusobacterium nucleatum. Этот протокол также может быть использован в качестве руководства для вагинальных прививок и жизнеспособного восстановления других анаэробно выращенных бактерий.

Модели вагинальной колонизации мышей анаэробно выращенными бактериями

The mammalian vagina can be colonized by many bacterial taxa. The human vaginal microbiome is often dominated by Lactobacillus species, but one-in-four ...

Этот метод поможет исследователям изучить биологию и патофизиологию анаэробных бактерий, которые живут и вызывают инфекции в женском репродуктивном тракте. Предыдущие модели мышиной вагинальной прививки были сосредоточены на бактериях, выращенных и восстановленных в аэробных условиях. Наш метод инструктирует по инокуляции и восстановлению облигатно анаэробных бактерий, которые требуют дополнительных стратегий для минимизации воздействия кислорода.В зависимости от того, насколько они привередливы, новые бактериальные штаммы, используемые в этой модели, могут потребовать изменения определенных шагов. Мы предоставили предложения по возможным изменениям в таблице первой рукописи. Для начала добавьте 200 микролитров 16-часовой бактериальной культуры в 1,5-миллилитровую кювету с 800 микролитрами свежих сред в анаэробной камере.Затем измеряли оптическую плотность, или OD, разбавленной культуры при 600 нанометрах в спектрофотометре, используя отдельную кювету только с носителем в качестве заготовки. Чтобы получить фактическое значение OD культуры, умножьте показания спектрофотометра на пять, затем определите объем инокулята, необходимый для эксперимента, и рассчитайте объем бактериальной культуры, необходимый для достижения требуемой плотности инокулята. Затем пипетку необходимого объема бактериальной культуры в стерильную микроцентрифужную трубку и центрифугу в 16 000 раз G в течение одной-трех минут.После удаления супернатанта повторно суспендируют гранулу в анаэробном PBS для достижения необходимого объема инокулята, рассчитанного ранее. Чтобы определить количество бактериальных колониеобразующих единиц в подготовленном инокуляте, во-первых, используют 10 микролитров бактериальной суспензии, чтобы сделать несколько последовательных разведений в PBS и используют многоканальную пипетку для обнаружения разведения пластин инокулята на агаровых пластинах. В то же время подготовьте вагинальные промывные трубки в анаэробной камере путем пипетирования 70 микролитров стерильного анаэробного PBS в 1,5-миллилитровые микроцентрифужные трубки, помеченные номерами мышей.Плотно закройте трубки и выньте их из камеры. Для выполнения вагинального промывания, во-первых, поместите мышь поверх клетки, которую она может схватить передними лапами. Затем осторожно захватите среднюю часть хвоста и поднимите ее так, чтобы задние четверти были слегка приподняты и влагалищное отверстие было открыто.После извлечения 50 микролитров PBS из меченой промывочной трубки аккуратно вставьте наконечник пипетки на два-три миллиметра во влагалищный просвет, чтобы промыть его PBS путем пипетки внутрь и наружу три-четыре раза. Затем перенесите моющий материал обратно в оригинальную промывочную трубку с оставшимися 20 микролитрами неиспользованной PBS. Сразу после этого промывания влагалища прививайте каждую мышь, вагинально передавая 20 микролитров бактериальной суспензии или контроля транспортного средства.Для экспериментов по совместной вакцинации двумя различными бактериальными штаммами отдельно прививайте по 10 микролитров каждой бактериальной суспензии, а не смешивайте штаммы заранее. Чтобы предотвратить немедленное накопление введенного объема во влагалищном интроитусе, продолжайте удерживать заднюю часть мыши в течение 10-20 секунд. Перенесите привитую мышь в новую клетку или с уже привитыми товарищами по клетке и повторите процедуру с другими мышами.После инокуляции всех мышей получают пост-инокулятивные колониеобразующие единицы путем покрытия последовательных разведений инокулята в анаэробной камере. Чтобы собрать органы мыши, подготовьте пятимиллилитрные трубки для сбора органов в анаэробной камере, добавив один миллилитр стерильного анаэробного PBS в каждую трубку для влагалища и шейки матки. Добавьте 750 миллилитров PBS в трубы, помеченные для маточных рогов.Для сбора окончательного промывания при жертвоприношении подготовьте еще один набор вагинальных лаважных трубок, как показано ранее. Кроме того, для промывки и стерилизации инструментов для рассечения готовят 50-миллилитровый стакан деионизированной воды и 50-миллилитровый стакан от 70 до 90% этанола. Непосредственно перед или после жертвоприношения мышей выполните окончательное промывание, как показано ранее.После жертвоприношения опрыскайте брюшко и спину мыши 70% этанолом. Затем используйте этанольно-стерилизованные и высушенные ножницы, чтобы открыть брюшную полость таза мыши вертикальными разрезами. Затем используйте щипцы, чтобы оттянуть кожу.Чтобы обнажить репродуктивный тракт, осторожно вытолкните кишечник из полости тела в сторону открытого поля и удалите мочевой пузырь у мыши, чтобы получить доступ к нижней части репродуктивного тракта. После этого обрежьте центр лобковой кости ножницами, не разрезая влагалище. Затем используйте два набора щипцов, чтобы захватить каждую сторону таза и потянуть таз, открытый сбоку, чтобы обнажить нижнюю часть влагалища под ним.Аккуратно захватите шейку матки щипцами и подтяните ее вверх, чтобы обнажить толстую кишку. После этого используйте небольшие ножницы, чтобы освободить влагалище от наружных соединительных тканей. Осторожно отпустите влагалище от толстой кишки, не проколовывая кишечный тракт.Когда влагалище полностью освобождается от толстой кишки, используйте ножницы, чтобы обрамить влагалище в интроитусе, а затем разрезать, чтобы удалить его из тела мыши. Сохраняя мягкий захват шейки матки, подтяните ее вверх, чтобы сделать маточные рога более заметными и разрезайте прямо под яичниками с правой и левой стороны, чтобы освободить рога матки. Далее удалите репродуктивный тракт из тела мыши и поместите его в стерильную чашку Петри.Затем, используя лезвие бритвы, отделите рога матки, шейку матки и влагалище. Поместите каждую ткань в соответствующую маркированную коллекционную трубку. Для гомогенизации органов сделайте ручной гомогенизатор готовым в шкафу биобезопасности.Сначала подготовьте набор из трех 50-миллилитровых трубок с деионизированной водой, 70% этанолом и PBS соответственно для промывки лопастей гомогенизатора после гомогенизации каждого органа. Чтобы очистить гомогенизатор, окуните лезвие в водяную трубку и включите машину на полной скорости примерно на три секунды. Затем встряхните лезвие на бумажном полотенце, чтобы удалить лишнюю воду.Промывайте лезвие последовательно в 70% этаноле и PBS. После первоначального промывания опустите зонд гомогенизатора на дно трубки с органами, чтобы захватить ткань под ней. Затем включите гомогенизатор, чтобы измельчить ткань и осторожно перемещайте зонд вверх и вниз примерно в пять раз, удерживая его под водой.Выключите и извлеките гомогенизатор и визуально обеспечьте полное разрушение тканей. После гомогенизации циклического образца обратно в анаэробную камеру и выполните последовательное разбавление для восстановления КОЕ. Следуя этому протоколу, восстановление жизнеспособных бактерий и перечисление колониеобразующих единиц из влагалищных промываний могут быть успешно выполнены для бактериальных штаммов, Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia и Fusobacterium nucleatum.Кроме того, количество колониеобразующих единиц Gardnerella vaginalis, полученных из вагинальных промываний, коррелировало с теми, которые были извлечены из гомогенатов влагалищной ткани. Этот метод также показал, что титры Prevotella bivia и ткани матки мыши были значительно выше во время коинфекции Gardnerella vaginalis по сравнению с моноинфекцией Prevotella. Кроме того, этот метод может быть успешно использован для сравнения вагинальной стойкости мутантного штамма Fusobacterium nucleatum с диким типом через 24 и 72 часа после посева.Чтобы исследовать иммунный ответ на вагинальную бактериальную прививку, цитокиновые анализы могут быть проведены на гомогенатах тканей. В качестве альтернативы, ткани могут быть сохранены для гистологического исследования для оценки признаков воспаления.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Сотрудничество культуры Модели Синегнойной палочки Биопленки выращенных на живые человеческие клетки дыхательных путей

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

Оценка изменения Печеночная Метаболический Во Прогрессивная Колонизация зародыш без мыши по 1 Н-ЯМР-спектроскопии

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin ...

Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays

Количественная грибковой колонизации, спорогенеза, и производство микотоксинов Использование ядра Биопробы

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks ...

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Колонизация Euprymna scolopes Squid по Vibrio fischeri</em

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no ...

Purification and Visualization of Lipopolysaccharide from Gram-negative Bacteria by Hot Aqueous-phenol Extraction

Очистка и визуализация липополисахарида из грамотрицательных бактерий горячих водно-фенольной экстракции

Lipopolysaccharide (LPS)  is a major component of Gram-negative bacterial outer membranes. It is a tripartite molecule consisting of  lipid A, which is ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Характеристика воспалительных реакций во время интраназальной колонизации стрептококковой пневмонией

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Application of Fluorescent Nanoparticles to Study Remodeling of the Endo-lysosomal System by Intracellular Bacteria

Применение люминесцентных наночастиц по изучению ремоделирования Endo-лизосом Системе внутриклеточных бактерий

Fluorescent nanoparticles (NPs) with desirable chemical, optical and mechanical properties are promising tools to label intracellular organelles. Here, we ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

Т-клеток Захват бактерий Transinfection от дендритных клеток

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

РНК Очистка от внутриклеточно Grown<em&gt; листерий</em&gt; В клетках макрофагальной

Analysis of the transcriptome of bacterial pathogens during mammalian infection is a valuable tool for studying genes and factors that mediate infection. ...

Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi

Определение биопленки инициации на инфицированные вирусом клетки с помощью бактерий и грибов

The study of polymicrobial interactions across the taxonomic kingdoms that include fungi, bacteria and virus have not been previously examined with ...