Name: xenograft skin model to manipulate human immune responses in vivo
Uploaded: 2022-06-29T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo at JoVE.com

تم تمويل هذا العمل جزئيا من خلال اتفاقيات البحث التي ترعاها TRex Bio والمنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (1R01AR075864-01A1). يتم دعم JMM من قبل جمعية أبحاث السرطان (منحة 26005). نحن نعترف بنواة قياس التدفق الخلوي Parnassus المدعومة جزئيا بمنح NIH P30 DK063720 و S10 1S10OD021822-01 و S10 1S10OD018040-01.

تمت الموافقة على الدراسة الحالية وتنفيذها وفقا لبروتوكولات UCSF IACUC (AN191105-01H) و IRB (13-11307). تم استخدام عينات الجلد ، التي تم التخلص منها كجزء من الإجراءات الجراحية الاختيارية الروتينية ، مثل إصلاح الفتق ، في البحث الحالي. يتم إلغاء تحديد عينات الجلد واعتمادها على أنها ليست أبحاث مواضيع بشرية أو ...

<ol>
	<li>Zomer, H. D., Trentin, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wound+healing+in+humans+and+mice:+Challenges+in+translational+research.">Skin wound healing in humans and mice: Challenges in translational research.</a> Journal of Dermatological Science. 90 (1), 3-12 (2018).</li><li>Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+approaches+to+create+murine+models+of+human+wound+healing.">Surgical approaches to create murine models of human wound healing.</a> Journal of Biomedicine &amp; Biotechnology. 2011, 969618 (2011).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> The Journal of Immunology. 172 (5), 2731-2738 (2004).</li><li>Pasparakis, M., Haase, I., Nestle, F. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+skin+immunity+and+inflammation.">Mechanisms regulating skin immunity and inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 14 (5), 289-301 (2014).</li><li>Sun, H., Zhang, Y. -. X., Li, Y. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+skin+organoids:+potential+opportunities+and+challenges.">Generation of skin organoids: potential opportunities and challenges.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 3176 (2021).</li><li>Crist&#243;bal, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+human+skin+transplantation:+a+systematic+review.">Mouse models for human skin transplantation: a systematic review.</a> Cells Tissues Organs. 210 (4), 250-259 (2021).</li><li>Rossi, G., Manfrin, A., Lutolf, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+potential+in+organoid+research.">Progress and potential in organoid research.</a> Nature Reviews Genetics. 19 (11), 671-687 (2018).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/&#947;cnull+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/&#947;cnull mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Meraz, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+patient-derived+xenograft+humanized+mouse+model+for+evaluation+of+lung+cancer+immune+responses.">An improved patient-derived xenograft humanized mouse model for evaluation of lung cancer immune responses.</a> Cancer Immunology Research. 7 (8), 1267-1279 (2019).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Meehan, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+a+xenograft+model+of+human+vasculature+in+the+mouse+ear+pinna.">Developing a xenograft model of human vasculature in the mouse ear pinna.</a> Scientific Reports. 10 (1), 2058 (2020).</li><li>Gokkaya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+graft+storage+in+platelet+rich+plasma+(PRP).">Skin graft storage in platelet rich plasma (PRP).</a> Dermatologic Therapy. 33 (1), 13178 (2020).</li><li>. The Humeca D42 and D80 battery operated cordless dermatomes Available from: <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=YCRowX-TdA">https://www.youtube.com/watch?v=YCRowX-TdA</a> (2021)</li><li>Rodriguez, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+regulatory+T+cells+reside+in+human+skin.">Memory regulatory T cells reside in human skin.</a> The Journal of Clinical Investigation. 124 (3), 1027-1036 (2014).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+rodent+aseptic+surgery.">Techniques in rodent aseptic surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82 (1), 12-14 (2008).</li><li>Karim, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+ischemia+and+neovascularization+in+a+murine+model+of+full+thickness+human+wound+healing.">Evolution of ischemia and neovascularization in a murine model of full thickness human wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 28 (6), 812-822 (2020).</li><li>Ali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenogeneic+graft-versus-host-disease+in+NOD-scid+IL-2R&#947;null+mice+display+a+T-effector+memory+phenotype.">Xenogeneic graft-versus-host-disease in NOD-scid IL-2R&#947;null mice display a T-effector memory phenotype.</a> PloS One. 7 (8), 44219 (2012).</li><li>Souci, L., Denesvre, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+skin+models+in+domestic+animals.">3D skin models in domestic animals.</a> Veterinary Research. 52 (1), 21 (2021).</li><li>Holtkamp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+clocks+guide+dendritic+cells+into+skin+lymphatics.">Circadian clocks guide dendritic cells into skin lymphatics.</a> Nature Immunology. 22 (11), 1375-1381 (2021).</li></ol>

يعد نموذج زرع جلد الفأر xenograft تقنية رئيسية لتشريح الاستجابات المناعية لجلد الإنسان ميكانيكيا في وضع في الجسم الحي 14. تعتمد عمليات زرع الطعم الأجنبي الناجحة على التحضير المناسب للفئران وعينات الجلد والفئران والالتزام بطرق جراحة القوارض المعقمة15. يعد التبري?...

كثيرا ما تستخدم نماذج الفئران لعمل استنتاجات حول البيولوجيا البشرية والمرض ، ويرجع ذلك جزئيا إلى قابليتها للتكاثر التجريبي وقدرتها على التلاعب الجيني. ومع ذلك ، فإن فسيولوجيا الفئران لا تلخص تماما أنظمة الأعضاء البشرية ، وخاصة الجلد ، وبالتالي لديها قيود للاستخدام كنموذج قبل سريري في تطوير الأدوية1. تشمل الاختلافات التشريحية بين جلد الفأر والإنسان الاختلافات في سمك الظهارة والهندسة المعمارية ، ونقص الغدد العرقية المفرزة للفئران ، والاختلافات في دورة الشعر2. علاوة على ذلك ، فإن كلا من الأذرع الفطرية والتكيفية للجهاز المناعي متباعدة بين النوعين3. يحتوي جلد الفأر على مجموعة مناعية فريدة من الخلايا التائية للبشرة المتغصنة (DETCs) ، ولديه وفرة أعلى من الخلايا التائية الجلدية γδ ، ويختلف في توطين المجموعة الفرعية للخلايا المناعية مقارنة بالأنسجة البشرية4. لذلك ، تستفيد النتائج التجريبية المتعلقة ببيولوجيا الجلد البشري والالتهاب من التحقق من صحة الأنسجة البشرية. في حين أن أنظمة الزراعة العضوية والمختبرية تستخدم على نطاق واسع أدوات لدراسة الأنسجة البشرية ، فإن هذه الأنظمة محدودة بسبب إعادة تكوين المناعة الغائبة أو غير المكتملة وعدم الاتصال بالأوعية الدموية الطرفية5. يهدف نموذج زرع الجلد xenograft المتوافق مع البشر إلى السماح بالتلاعب العلاجي أو البيولوجي للمسارات المناعية وغير المناعية في الأنسجة البشرية في الجسم الحي.
تم استخدام نموذج xenograft للجلد البشري لدراسة فسيولوجيا الجلد وعلم الأدوية ، وتحليل الرفض والاستجابات المناعية ، وتشريح آليات سرطان الجلد البشري ، وفهم الأمراض الجلدية والتئام الجروح6. في حين أن نموذج xenograft قابل للتطبيق على مجالات متعددة من أبحاث الجلد ، إلا أنه يحتوي على إنتاجية أقل من الدراسات المختبرية ويفتقر إلى سهولة التلاعب الجيني المستخدم في نماذج الفئران. قد تتراوح النقاط الزمنية ضمن هذا النموذج من أسابيع إلى أشهر ، ويتطلب التطعيم الناجح مرافق ومعدات مناسبة لإجراء هذه العمليات الجراحية. ومع ذلك ، فإن نموذج xenograft يوفر السياق البيولوجي والفسيولوجي للتجارب ، في حين أن أنظمة الزراعة العضوية ، مثل explants الأنسجة ، غالبا ما تتطلب تكرار عدد لا يحصى من الأجزاء المتحركة ، مثل الإشارات الخارجية ، في فترات زمنية محددة7. لذلك ، يتم استخدام هذا النموذج بشكل أفضل للتحقق من صحة النتائج التي لوحظت في المختبر وداخل نماذج الفئران ، أو للعمل غير الممكن بيولوجيا بطريقة أخرى. يوفر الاستخدام المناسب لنموذج xenograft فرصة فريدة لدراسة ومعالجة الأنسجة البشرية السليمة في الجسم الحي.
اعتمد تحسين نموذج زراعة الجلد xenograft على عقود من البحث للحفاظ على سلامة الكسب غير المشروع بمرور الوقت. من الأهمية بمكان لهذه العملية استخدام فأر مستقبلات سلسلة جاما (NSG) غير البدين (NOD) -scid interleukin-2 ، والذي يفتقر إلى الخلايا المناعية التكيفية B و T ، والخلايا القاتلة الطبيعية الوظيفية ، ولديه أوجه قصور في الخلايا البلعمية والخلايا المتغصنة8. تسمح الطبيعة التي تعاني من نقص المناعة لمضيفات NSG هذه بزرع الخلايا المكونة للدم البشرية والسرطانات المشتقة من المريض والجلد8،9،10. على الرغم من هذه البيئة المضيفة المثبطة للمناعة ، فإن القمع الإضافي للاستجابات المناعية للعدلات في الفئران عن طريق الإدارة المضادة ل GR1 ضروري لنجاح الكسب غير المشروع10. تتمثل الحواجز الرئيسية في زرع الأنسجة السليمة في العدوى والرفض وصعوبة إعادة تدفق الدم إلى الكسب غير المشروع ، مما يؤدي في بعض الأحيان إلى فقدان سلامة الجلد والبشرة11. التقنيات بما في ذلك إعطاء مضاد FR1 واستخدام عمق الكسب غير المشروع المناسب تحسين بقاء الكسب غير المشروع10. يتيح التحسين الدقيق إجراء عمليات زرع جلد xenograft البشرية على فئران NSG بكفاءة عالية ومعدلات بقاء ، تتراوح من 90٪ إلى 100٪.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>SF100-20</td>
			<td>Fixative for histology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M Vetbond Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>surgical glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 700 CD45 monoclonal antibody (Clone 30F11)</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>56-0451-82</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GR1 clone RB6-8C5</td>
			<td>BioXcell</td>
			<td>BE0075</td>
			<td>Anti-rejection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC mouse anti-human CD25&#160; (Clone 2A3)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>340939</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-eFluor 780 anti-human HLA-DR (Clone LN3)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>47-9956-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave pouches</td>
			<td>VWR&#160;</td>
			<td>89140-800</td>
			<td>For autoclaving tools and paper towels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 60 anti-human CD4 antibody (Clone OKT4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317438</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 65 anti-human CD8a antibody (Clone RPA-T8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>301042</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 711 anti-human CD3 antibody (Clone OKT3)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317328</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex 0.3 mg/mL</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>059122</td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen 50 mg/mL</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>NADA # 141-199</td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>4188</td>
			<td>Skin digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D42 Dermatome blade</td>
			<td>Humeca</td>
			<td>5.D42BL10</td>
			<td>dermatome (1 blade per sample)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermatome D42</td>
			<td>Humeca</td>
			<td>4.D42</td>
			<td>dermatome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpel</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td>skin preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting T-Pins; 1-1/2 inch, 1000/CS 1.5</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-10915-03</td>
			<td>To pin skin specimen for dermatome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors</td>
			<td>medicon</td>
			<td>02.04.10</td>
			<td>sample preparation and mouse dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DN25-1G</td>
			<td>Skin digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience Foxp3 / Transcription Factor Fixation/Permeabilization Concentrate and Diluent</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-5521-00</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Cell Fixation and Permeabilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eFluor-450 FOXP3 monoclonal antibody (Clone PCH101)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-4776-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td>Kent</td>
			<td>CL8787-KIT</td>
			<td>hair removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia&#160;Shandon Instant Eosin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6765040</td>
			<td>H&#38;E</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia&#160;Shandon Instant Hematoxylin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6765015</td>
			<td>H&#38;E</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD45 (Clone HI30)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>35-0459-T100</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps&#160;</td>
			<td>medicon</td>
			<td>07.60.07</td>
			<td>sample preparation and mouse dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td>Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating lamp</td>
			<td>Morganville Scientific</td>
			<td>HL0100</td>
			<td>Post-surgical care</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pads 4&#34; x 10&#34;</td>
			<td>Pristech</td>
			<td>20415</td>
			<td>Surgical heat supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin 1cc 12.7 mm syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329410</td>
			<td>drug administration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>United States Pharmacopeia (USP)&#160;</td>
			<td>NDC 66794-013-25</td>
			<td>Anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane machine</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>911103</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair for Men</td>
			<td>Nair</td>
			<td>&#8206; 10022600588556</td>
			<td>hair removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin and Polymyxin Bisulfates and Bacitracin Zinc Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>&#160;NDC 17478-235-35</td>
			<td>eye ointment to prevent drying</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>005557</td>
			<td>Mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Kleenex</td>
			<td>100848</td>
			<td>May be autoclaved for sterile surfaces</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>Semitransparent sealing film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE mouse anti-human CD127 (Clone HIL-7R-M21)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557938</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy-7 mouse anti-Ki-67 (Clone B56)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561283</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-eFluor-710 CD152 (CTLA-4) monoclonal antibody (Clone 14D3)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>46-1529-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permeabilization Buffer 10x</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-8333-56</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish 150 mm</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430597</td>
			<td>Sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Wrap</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-305-654</td>
			<td>Site preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Providone-Iodine Swab stick</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41350</td>
			<td>Site sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft-Feed and Oral Hydration (Napa Nectar)</td>
			<td>Se Lab Group Inc</td>
			<td>NC9066511&#160;</td>
			<td>For supplementing poorly recovering mice post-surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen Collection Cups</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-150-266</td>
			<td>sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pad</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td>skin preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Media for sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-02</td>
			<td>For drug dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film 4&#8221; x 43/4&#8221;&#160;</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626</td>
			<td>transparent film wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline Petrolatum Gauze 3&#8221; x 8&#8221;&#160;</td>
			<td>Kendall</td>
			<td>414600</td>
			<td>wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Violet 510 Ghost Dye&#160;</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>13-0870-T100</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Viability dye</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

xenograft skin model to manipulate human immune responses in vivo

يعد نموذج xenograft للجلد البشري ، حيث يتم زرع جلد متبرع بشري على مضيف فأر يعاني من نقص المناعة ، خيارا مهما للبحث الانتقالي في علم المناعة الجلدي. يختلف جلد الفئران والإنسان اختلافا كبيرا في التشريح وتكوين الخلايا المناعية. لذلك ، فإن نماذج الماوس التقليدية لها قيود على أبحاث الأمراض الجلدية واكتشاف الأدوية. ومع ذلك ، فإن عمليات الزرع الخارجية الناجحة تمثل تحديا تقنيا وتتطلب إعداد مثالي لموقع الكسب غير المشروع للعينات والفئران من أجل الكسب غير المشروع وبقاء المضيف. يوفر البروتوكول الحالي تقنية محسنة لزرع جلد الإنسان على الفئران ويناقش الاعتبارات اللازمة للأهداف التجريبية النهائية. يصف هذا التقرير التحضير المناسب لعينة جلد متبرع بشري ، وتجميع الإعداد الجراحي ، وإعداد الفئران والموقع الجراحي ، وزرع الجلد ، ومراقبة ما بعد الجراحة. يسمح الالتزام بهذه الطرق بالحفاظ على الطعوم الخارجية لأكثر من 6 أسابيع بعد الجراحة. تسمح التقنيات الموضحة أدناه بأقصى قدر من كفاءة التطعيم بسبب تطوير الضوابط الهندسية والتقنية المعقمة والتكييف قبل الجراحة وبعدها. ينتج عن الأداء المناسب لنموذج xenograft عينات طعم جلد الإنسان طويلة العمر للتوصيف التجريبي لجلد الإنسان والاختبار قبل السريري للمركبات في الجسم الحي.

تم إجراء الطعوم الأجنبية لجلد الإنسان على فئران NSG داخل منشأة حيوانية فائقة الحاجز. تم تعريف النجاح من خلال الكسب غير المشروع لفترات طويلة وبقاء الفئران والصحة السلوكية للفئران بعد الزرع. لوحظ في البداية أن ضعف البقاء على قيد الحياة خلال الأسبوع التالي للجراحة هو أكبر عائق أمام النجاح الت...

Watch this Scientific Journal Video about Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo at JoVE.com

Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo

يصف البروتوكول الحالي كيفية تطعيم جلد الإنسان على الفئران غير المصابة بالسمنة والسكرية (NOD) -scid interleukin-2 مستقبلات سلسلة غاما (NSG). يتضمن التقرير وصفا مفصلا لإعداد جلد الإنسان للزراعة ، وإعداد الفئران للزراعة ، وزرع جلد الإنسان ذي السماكة المنقسمة ، وإجراء التعافي بعد الزرع.

نموذج Xenograft للجلد للتلاعب بالاستجابات المناعية البشرية في الجسم الحي

The human skin xenograft model, in which human donor skin is transplanted onto an immunodeficient mouse host, is an important option for translational ...

نحدد التقنيات اللازمة لنموذج زرع الجلد xenograft البشري ، وهو أداة مهمة للتلاعب بالمسارات المناعية وغير المناعية في الأنسجة البشرية في الجسم الحي. تلخص هذه التقنية فسيولوجيا الجلد البشري بشكل أفضل من الطرق المختبرية ، مما يسمح بالتلاعب التجريبي قبل السريري في الجسم الحي. يمكن استخدام عمليات زرع الجلد Xenograft للاختبار قبل السريري للمركبات التي تستهدف التهاب الجلد البشري في الجسم الحي.يمكن أن يكون تضميد الفئران أمرا صعبا بشكل خاص ، لذلك ننصح بممارسة عملية الضمادات على الفئران المخدرة السليمة قبل إجراء العمليات الجراحية. للبدء ، استعد لجلد عينة جلد الإنسان في غطاء زراعة الأنسجة المعقم بالضغط السلبي على لوح تشريح معقم. ضع عينة الجلد بحيث يكون جانب البشرة لأعلى على لوحة التشريح وامسح البشرة بوسادة تحضير كحول معقمة متبوعة ببرنامج تلفزيوني.الآن استخدم دبوس تشريح T مقاس 1.5 بوصة لإصلاح الحافة الأقرب للجلد. ثم جلدي عينة الجلد بسمك 400 ميكرومتر وتطبيق ضغط ثابت أثناء القطع للأمام بزاوية 30 إلى 45 درجة. ضع شاشا معقما منقوعا في PBS معقم في قاع طبق بتري وضع الجلد مع جانب البشرة لأعلى على الشاش الرطب.قم بإغلاق وتغطية حواف اللوحة بغشاء مانع للتسرب شبه شفاف لضمان عدم تلوث العينة وتخزين العينة عند أربع درجات مئوية قبل التطعيم. قم بإعداد الأدوات المعقمة والمحطة الجراحية للتطعيم واستخدم المناشف الورقية المعقمة كأسطح معقمة لوضع الأدوات والماوس. بعد تحريض التخدير ، انقل الماوس إلى وسادة تدفئة أو مصدر حرارة آخر وقم بإدارة مرهم العيون عن طريق وضع قطرة صغيرة من المرهم على العين بإصبع قفاز.قرصة الجلد وحقن المسكنات تحت الجلد بزاوية موازية للجسم. بعد رفع الماوس من الذيل ، فضح البطن وحقن 100 ميكروغرام لكل 100 ميكرولتر من مضاد Gr1 داخل الصفاق بزاوية 30 درجة باستخدام حقنة الأنسولين ملليلتر واحد. ثم استخدم كليبرز كهربائي آمن للحيوانات لحلق الأجزاء الوسطى والعلوية من الجانب الظهري للماوس.بعد إزالة جميع الشعر ، ضع كمية وفيرة من مرهم إزالة الشعر على الجلد المحلوق. انتظر لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة ، ثم امسح مرهم إزالة الشعر تماما بمنشفة ورقية و PBS. بعد نقل الماوس إلى المحطة الجراحية ، قم بتعقيم المنطقة الجراحية ووضع غلاف بلاستيكي معقم فوق الماوس.قطع نافذة في البلاستيك أكبر قليلا من حجم المنطقة المراد تطعيمها. ثبت جلد المتبرع بإحكام في مكانه باستخدام الملقط الخلفي وقطع جزء مستطيل الشكل 10 × 10 ملليمتر من جلد المتبرع ليتم تطعيمه جنبا إلى جنب مع الملقط بمشرط. اسحب الجلد بعيدا عن الجسم لتجنب القطع بعمق في اللفافة.لإنشاء سرير كسب غير مشروع ، قم بقص منطقة مستطيلة من جلد الفأر تتوافق مع حجم قطعة جلد المتبرع. ثم ضع قطعة جلد المتبرع بحيث يكون جانب البشرة لأعلى على سرير الكسب غير المشروع المجهز. باستخدام الجزء الخلفي من الملقط ، تعامل مع الجلد الذي ينزلق ذهابا وإيابا حتى يصبح جلد المتبرع مسطحا تماما على سرير الكسب غير المشروع.أضف قطرات لاصقة أنسجة الغراء الجراحي حيث يلتقي جلد المتبرع بجلد الفأر وأمسك جلد الفأر والمتبرع معا بالملقط لمدة ثانية إلى ثانيتين حتى يلتصق الغراء بالأنسجة. أغلق حافة الكسب غير المشروع تماما واترك الغراء يجف تماما. بعد ذلك ، قم بقطع شاش الفازلين الكبير بما يكفي لتغطية منطقة الكسب غير المشروع بالكامل.قم بتغطية الكسب غير المشروع بشاش الفازلين واضغط برفق على الشاش على الجلد باستخدام الملقط. قم بقص شريط من ضمادة فيلم شفاف بالطول بحيث يكون العرض كبيرا بما يكفي لتغطية جرح الماوس. اضغط بقوة على ضمادة الفيلم الشفاف مع الجانب اللاصق لأسفل فوق الشاش.لف الماوس بسرعة للف الضمادة بالكامل حول الجذع ، وتأكد من ملاءمتها بإحكام دون إعاقة التنفس وأن جميع الأطراف حرة للحركة. بعد وضع الماوس في قفص الاسترداد ، راقبه حتى يصبح في حالة تأهب ويتحرك. توفير مصدر حرارة على جزء من القفص لمدة 15 دقيقة على الأقل بعد الشفاء.أظهر تحليل الطعوم بعد 10 إلى 21 يوما من الزرع أن الكسب غير المشروع ظل ملتصقا حول الحواف حيث يلتقي جلد المتبرع بجلد الفأر وظل الكسب غير المشروع أكثر سمكا وأكثر التهابا من جلد الإنسان السليم. كشف التحليل عن طريق قياس التدفق الخلوي عن الوجود المستمر للخلايا المناعية البشرية داخل معظم الطعوم ، لكن الأعداد تباينت بين الطعوم الأجنبية. حافظ الكسب غير المشروع الناجح على الخلايا المناعية البشرية.ومع ذلك ، على الرغم من استمرار الالتزام وبقاء الأنسجة المانحة ، فإن الطعوم التي فشلت في الحفاظ على الخلايا المناعية البشرية تعتبر غير ناجحة. أظهر تحليل الهيماتوكسيلين وأقسام الكسب غير المشروع الملطخة بالهيماتوكسيلين والإيوزين بعد 35 يوما بشرة سليمة والأدمة خلوية معتدلة تتكون من خلايا ليفية بيضاوية ممتلئة الجسم مع سيتوبلازم مخلوي شاحب وخلايا ليمفاوية متناثرة. أظهر تحليل الكسب غير المشروع بعد 50 يوما نتائج مماثلة مع البشرة السليمة والأدمة التي تحتوي على الخلايا الليفية البيضاوية وترسب المصفوفة خارج الخلية المحسن قليلا.تعتمد الطعوم الخارجية الجلدية الناجحة على التحضير المناسب لعينات الجلد ، وقمع الاستجابات المناعية للعدلات في الفئران عن طريق الإدارة المضادة ل Gr1 ، والالتزام بطرق جراحة القوارض المعقمة ، وضمادات آمنة للفئران. يسمح نموذج زراعة الجلد بطعم الطعم الأجنبي البشري للباحثين بدراسة الاستجابات المناعية البشرية في العضو السليم في الجسم الحي ، مما يوفر وسيلة جديدة للبحث الانتقالي.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

نموذج مثلي من سرطان المبيض في الفئران مصلي مناعيا ل في الجسم الحي التصوير الورم ورصد الاستجابات المناعية ورم

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Seven Steps to Stellate Cells

سبع خطوات لخلايا النجمية

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

قياس الحمولة الجرثومية والاستجابات المناعية في الفئران المصابة المستوحدة الليستيريا</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

زرع الجلد الذيل لدراسة خيفي CD4 T الردود الخليوي في الفئران

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

عزل الخلايا اللمفاوية من الجلد البشري لتحليل المظهري و<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; زراعة الخلايا

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

ل<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج لقياس الاستجابات المناعية لمكافحة الملاريا في سياق الفيروس المسبب للإيدز

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

Using Zebrafish Models of Human Influenza A Virus Infections to Screen Antiviral Drugs and Characterize Host Immune Cell Responses

باستخدام نماذج الزرد من الإنسان الأنفلونزا فيروس العدوى الى الشاشة المضادة للفيروسات المخدرات وتوصيف المضيف المناعي الردود خلية

Each year, seasonal influenza outbreaks profoundly affect societies worldwide. In spite of global efforts, influenza remains an intractable healthcare ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

عزل السالمونيلا تيفيموريوم-التي تحتوي على فاجوسوميس من الضامة

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

بروتوكول نفطة شفط لدراسة الخلية تي البشرية استدعاء الاستجابات في فيفو

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...