Name: xenograft skin model to manipulate human immune responses in vivo
Uploaded: 2022-06-29T13:30:00
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この研究の一部は、TRex Bioからのスポンサー付き研究契約とNIHからの助成金(1R01AR075864-01A1)によって資金提供されました。JMMは、Cancer Research Society(助成金26005)の支援を受けています。我々は、助成金NIH P30 DK063720、S10 1S10OD021822-01、およびS10 1S10OD018040-01によって部分的にサポートされているParnassusフローサイトメトリーコアを認めます。

本研究は承認され、UCSF IACUC(AN191105-01H)およびIRB(13-11307)プロトコルに準拠して実施されました。ヘルニア修復などの日常的な選択的外科的処置の一部として廃棄された皮膚サンプルを本研究に使用しました。皮膚サンプルは、非識別化され、非ヒト被験者研究として認定されるか、臨床的に識別情報が下流の分析に必要な場合は、IRBプロトコル13-11307に基づいて患者が書面による同意を提供し?...

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	<li>Zomer, H. D., Trentin, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wound+healing+in+humans+and+mice:+Challenges+in+translational+research.">Skin wound healing in humans and mice: Challenges in translational research.</a> Journal of Dermatological Science. 90 (1), 3-12 (2018).</li><li>Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+approaches+to+create+murine+models+of+human+wound+healing.">Surgical approaches to create murine models of human wound healing.</a> Journal of Biomedicine &amp; Biotechnology. 2011, 969618 (2011).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+a+xenograft+model+of+human+vasculature+in+the+mouse+ear+pinna.">Developing a xenograft model of human vasculature in the mouse ear pinna.</a> Scientific Reports. 10 (1), 2058 (2020).</li><li>Gokkaya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+graft+storage+in+platelet+rich+plasma+(PRP).">Skin graft storage in platelet rich plasma (PRP).</a> Dermatologic Therapy. 33 (1), 13178 (2020).</li><li>. The Humeca D42 and D80 battery operated cordless dermatomes Available from: <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=YCRowX-TdA">https://www.youtube.com/watch?v=YCRowX-TdA</a> (2021)</li><li>Rodriguez, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+regulatory+T+cells+reside+in+human+skin.">Memory regulatory T cells reside in human skin.</a> The Journal of Clinical Investigation. 124 (3), 1027-1036 (2014).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+rodent+aseptic+surgery.">Techniques in rodent aseptic surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82 (1), 12-14 (2008).</li><li>Karim, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+ischemia+and+neovascularization+in+a+murine+model+of+full+thickness+human+wound+healing.">Evolution of ischemia and neovascularization in a murine model of full thickness human wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 28 (6), 812-822 (2020).</li><li>Ali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenogeneic+graft-versus-host-disease+in+NOD-scid+IL-2R&#947;null+mice+display+a+T-effector+memory+phenotype.">Xenogeneic graft-versus-host-disease in NOD-scid IL-2R&#947;null mice display a T-effector memory phenotype.</a> PloS One. 7 (8), 44219 (2012).</li><li>Souci, L., Denesvre, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+skin+models+in+domestic+animals.">3D skin models in domestic animals.</a> Veterinary Research. 52 (1), 21 (2021).</li><li>Holtkamp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+clocks+guide+dendritic+cells+into+skin+lymphatics.">Circadian clocks guide dendritic cells into skin lymphatics.</a> Nature Immunology. 22 (11), 1375-1381 (2021).</li></ol>

マウス異種移植皮膚移植モデルは、 in vivo 設定でヒト皮膚免疫応答を機械的に解剖するための重要な技術です14。皮膚異種移植の成功は、マウスと皮膚標本とマウスの適切な準備と無菌げっ歯類手術方法の順守に依存しています15。皮膚サンプルを培地(滅菌生理食塩水など)に低温で迅速に冷却して適切に保管することは、移植前の継続的な組織の健?...

マウスモデルは、実験的な再現性と遺伝子操作の能力のために、人間の生物学と病気についての推論を行うために頻繁に使用されます。しかし、マウス生理学はヒトの臓器系、特に皮膚を完全に再現するものではないため、創薬における前臨床モデルとしての利用には限界があります1。マウスとヒトの皮膚の解剖学的違いには、上皮の厚さと構造の違い、マウスエクリン汗腺の欠如、およびヘアサイクリングの変化が含まれます2。さらに、免疫系の先天的アームと適応アームの両方が2つの種の間で分岐しています3。マウスの皮膚は、樹状表皮T細胞(DETC)のユニークな免疫集団を含み、真皮γδT細胞の存在量が高く、ヒト組織と比較して免疫細胞サブセットの局在が異なります4。したがって、ヒトの皮膚生物学および炎症に関する実験的知見は、ヒト組織による検証の恩恵を受ける。 in vitro およびオルガノイド培養システムは、ヒト組織の研究に広く利用されているツールですが、これらのシステムは、免疫再構成の欠如または不完全、および末梢血管系との関連性の欠如によって制限されています5。ヒト化異種移植皮膚移植モデルは、 in vivoでのヒト組織における免疫経路および非免疫経路の治療的または生物学的操作を可能にすることを目的としています。
ヒト皮膚異種移植片モデルは、皮膚生理学と薬理学の研究、免疫拒絶反応と反応の分析、ヒト皮膚がんのメカニズムの解剖、皮膚疾患と創傷治癒の理解に利用されています6。皮膚研究の複数の分野に適用できますが、異種移植片モデルは in vitro 研究よりもスループットが低く、マウスモデルで採用されている遺伝子操作の容易さに欠けています。このモデル内の時点は数週間から数か月の範囲であり、移植を成功させるには、これらの手術を実行するための適切な施設と機器が必要です。しかしながら、異種移植片モデルは実験に生物学的および生理学的文脈を提供するが、組織外植片などのオルガノイド培養系は、しばしば特定の時間間隔で外因性シグナルなどの無数の可動部分を複製することを必要とする7。したがって、このモデルは、 in vitro およびマウスモデル内で観察された所見をさらに検証するため、または生物学的に実現不可能な研究のために最もよく利用されます。異種移植片モデルの適切な使用は、 in vivoで無傷のヒト組織を研究し、操作するユニークな機会を提供します。
異種移植片皮膚移植モデルの最適化は、移植片の完全性を長期にわたって維持するために数十年の研究に依存してきました。このプロセスに重要なのは、BおよびT適応免疫細胞、機能的なNK細胞を欠き、マクロファージと樹状細胞に欠損している非肥満糖尿病(NOD)-scidインターロイキン-2ガンマ鎖受容体(NSG)マウスを利用することです8。これらのNSG宿主の免疫不全の性質は、ヒト造血細胞、患者由来の癌、および皮膚の移植を可能にする8,9,10。この免疫抑制宿主環境にもかかわらず、抗GR1投与によるマウス好中球免疫応答のさらなる抑制が移植片の成功に必要である10。無傷の組織を移植する際の主な障害は、感染、拒絶反応、および移植片への血流の再確立の難しさであり、皮膚および表皮の完全性の喪失につながることがあります11。抗FR1の投与および適切な移植深さの使用を含む技術は、移植片生存を改善する10。綿密な最適化により、NSGマウスにヒト異種移植片皮膚移植を90%〜100%の範囲の高効率と生存率で実施することが可能になります。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>SF100-20</td>
			<td>Fixative for histology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M Vetbond Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>surgical glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 700 CD45 monoclonal antibody (Clone 30F11)</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>56-0451-82</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GR1 clone RB6-8C5</td>
			<td>BioXcell</td>
			<td>BE0075</td>
			<td>Anti-rejection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC mouse anti-human CD25&#160; (Clone 2A3)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>340939</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-eFluor 780 anti-human HLA-DR (Clone LN3)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>47-9956-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave pouches</td>
			<td>VWR&#160;</td>
			<td>89140-800</td>
			<td>For autoclaving tools and paper towels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 60 anti-human CD4 antibody (Clone OKT4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317438</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 65 anti-human CD8a antibody (Clone RPA-T8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>301042</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 711 anti-human CD3 antibody (Clone OKT3)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317328</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex 0.3 mg/mL</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>059122</td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen 50 mg/mL</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>NADA # 141-199</td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>4188</td>
			<td>Skin digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D42 Dermatome blade</td>
			<td>Humeca</td>
			<td>5.D42BL10</td>
			<td>dermatome (1 blade per sample)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermatome D42</td>
			<td>Humeca</td>
			<td>4.D42</td>
			<td>dermatome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpel</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td>skin preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting T-Pins; 1-1/2 inch, 1000/CS 1.5</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-10915-03</td>
			<td>To pin skin specimen for dermatome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors</td>
			<td>medicon</td>
			<td>02.04.10</td>
			<td>sample preparation and mouse dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DN25-1G</td>
			<td>Skin digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience Foxp3 / Transcription Factor Fixation/Permeabilization Concentrate and Diluent</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-5521-00</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Cell Fixation and Permeabilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eFluor-450 FOXP3 monoclonal antibody (Clone PCH101)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-4776-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td>Kent</td>
			<td>CL8787-KIT</td>
			<td>hair removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia&#160;Shandon Instant Eosin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6765040</td>
			<td>H&#38;E</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia&#160;Shandon Instant Hematoxylin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6765015</td>
			<td>H&#38;E</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD45 (Clone HI30)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>35-0459-T100</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps&#160;</td>
			<td>medicon</td>
			<td>07.60.07</td>
			<td>sample preparation and mouse dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td>Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating lamp</td>
			<td>Morganville Scientific</td>
			<td>HL0100</td>
			<td>Post-surgical care</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pads 4&#34; x 10&#34;</td>
			<td>Pristech</td>
			<td>20415</td>
			<td>Surgical heat supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin 1cc 12.7 mm syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329410</td>
			<td>drug administration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>United States Pharmacopeia (USP)&#160;</td>
			<td>NDC 66794-013-25</td>
			<td>Anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane machine</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>911103</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair for Men</td>
			<td>Nair</td>
			<td>&#8206; 10022600588556</td>
			<td>hair removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin and Polymyxin Bisulfates and Bacitracin Zinc Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>&#160;NDC 17478-235-35</td>
			<td>eye ointment to prevent drying</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>005557</td>
			<td>Mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Kleenex</td>
			<td>100848</td>
			<td>May be autoclaved for sterile surfaces</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>Semitransparent sealing film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE mouse anti-human CD127 (Clone HIL-7R-M21)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557938</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy-7 mouse anti-Ki-67 (Clone B56)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561283</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-eFluor-710 CD152 (CTLA-4) monoclonal antibody (Clone 14D3)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>46-1529-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permeabilization Buffer 10x</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-8333-56</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish 150 mm</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430597</td>
			<td>Sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Wrap</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-305-654</td>
			<td>Site preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Providone-Iodine Swab stick</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41350</td>
			<td>Site sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft-Feed and Oral Hydration (Napa Nectar)</td>
			<td>Se Lab Group Inc</td>
			<td>NC9066511&#160;</td>
			<td>For supplementing poorly recovering mice post-surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen Collection Cups</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-150-266</td>
			<td>sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pad</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td>skin preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Media for sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-02</td>
			<td>For drug dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film 4&#8221; x 43/4&#8221;&#160;</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626</td>
			<td>transparent film wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline Petrolatum Gauze 3&#8221; x 8&#8221;&#160;</td>
			<td>Kendall</td>
			<td>414600</td>
			<td>wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Violet 510 Ghost Dye&#160;</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>13-0870-T100</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Viability dye</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

xenograft skin model to manipulate human immune responses in vivo

ヒトドナー皮膚を免疫不全マウス宿主に移植するヒト皮膚異種移植モデルは、皮膚免疫学におけるトランスレーショナル研究の重要な選択肢です。マウスとヒトの皮膚は、解剖学的構造および免疫細胞組成において実質的に異なる。したがって、従来のマウスモデルには、皮膚科学的研究と創薬には限界があります。ただし、異種移植を成功させるには技術的に困難であり、移植片と宿主の生存のために最適な標本とマウスの移植部位の準備が必要です。本プロトコルは、ヒトの皮膚をマウスに移植するための最適化された技術を提供し、下流の実験目的に必要な考慮事項について説明します。このレポートでは、ヒトドナー皮膚サンプルの適切な調製、手術セットアップの組み立て、マウスおよび手術部位の準備、皮膚移植、および術後のモニタリングについて説明します。これらの方法を順守することで、術後6週間以上異種移植片を維持することができます。以下に概説する技術は、工学的制御、滅菌技術、および術前および術後のコンディショニングの開発により、最大の移植効率を可能にします。異種移植片モデルの適切な性能により、ヒト皮膚の実験的特性評価および in vivo化合物の前臨床試験のための長寿命のヒト皮膚移植サンプルが得られます。

ヒト皮膚異種移植片は、スーパーバリア動物施設内のNSGマウスで実施されました。成功は、移植後のマウスの長期の移植片およびマウスの生存および行動の健康によって定義されました。手術後の1週間の生存率の低下は、当初、実験の成功に対する最大の障壁として観察され、マウスの最大50%が安楽死を必要としていました。手術中および手術直後の無菌技術を改善し、マウスの体温をより...

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Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo

本プロトコルは、非肥満糖尿病(NOD)-scidインターロイキン-2ガンマ鎖受容体(NSG)マウスにヒト皮膚を移植する方法を記載している。移植のためのヒト皮膚の準備、移植のためのマウスの準備、分割厚さのヒト皮膚の移植、および移植後の回復手順の詳細な説明がレポートに含まれています。

in vivoでヒト免疫応答を操作するための異種移植片皮膚モデル

The human skin xenograft model, in which human donor skin is transplanted onto an immunodeficient mouse host, is an important option for translational ...

ヒト異種移植皮膚移植モデルに必要な技術の概要を説明し、in vivoでのヒト組織における免疫経路と非免疫経路を操作するための重要なツールです。この技術は、in vitro法よりもヒトの皮膚生理学をよりよく再現し、in vivoでの前臨床実験的操作を可能にします。異種移植片皮膚移植は、in vivoでヒト皮膚炎症を標的とする化合物の前臨床試験に使用できます。マウスに包帯を巻くことは特に難しい場合があるため、手術を行う前に、健康な麻酔をかけたマウスで包帯プロセスを練習することをお勧めします。はじめに、滅菌された解剖ボード上の滅菌された負圧組織培養フードでヒト皮膚サンプルをダーマトームする準備をします。表皮側を上にして皮膚サンプルを解剖板に置き、滅菌アルコール準備パッドとそれに続くPBSで表皮を拭きます。次に、1.5インチの解剖Tピンを使用して、皮膚のより近い端を固定します。次に、皮膚標本を400マイクロメートルの厚さでダーマトメークし、30〜45度の角度で前方に切断しながら安定した圧力をかけます。ペトリ皿の底に滅菌PBSに浸した滅菌ガーゼを置き、表皮側を上にして皮膚を湿ったガーゼの上に置きます。プレートの端を半透明のシーリングフィルムで密封して覆い、サンプルが汚染されていないことを確認し、グラフトする前にサンプルを摂氏4度で保管します。移植用の滅菌器具と手術ステーションを準備し、オートクレーブ滅菌されたペーパータオルを器具とマウスを配置するための滅菌表面として使用します。麻酔導入後、マウスを加熱パッドまたは別の熱源に移し、手袋をはめた指で目に少量の軟膏を軽くたたくことによって眼科用軟膏を投与します。皮膚をつまんで、体に平行な角度で鎮痛薬を皮下注射します。マウスを尾で持ち上げた後、腹部を露出させ、1ミリリットルのインスリン注射器を使用して、100マイクロリットルの抗Gr1を腹腔内に30度の角度で100マイクログラム注射する。次に、動物に安全な電気バリカンを使用して、マウスの背側の中央部と上部を剃ります。すべての毛をきれいにした後、剃った肌にたっぷりの脱毛軟膏を塗ります。30秒から1分待ってから、ペーパータオルとPBSで脱毛軟膏を完全に拭きます。マウスを手術ステーションに移した後、手術部位を滅菌し、滅菌ラップをマウスの上に置きます。接ぎ木する領域のサイズよりわずかに大きいプラスチックの窓を切り取ります。鉗子の裏側でドナーの皮膚をしっかりと固定し、メスで鉗子の横に移植するドナーの皮膚の10 x 10ミリメートルの長方形の部分を切り取ります。筋膜に深く食い込まないように、皮膚を体から引き離します。グラフトベッドを作成するには、ドナースキンピースのサイズに一致するマウススキンの長方形の領域を切り取ります。次に、表皮側を上にしたドナースキンピースを準備したグラフトベッドに置きます。鉗子の背面を使用して、ドナーの皮膚が移植床に対して完全に平らになるまで、皮膚を前後にスライドさせます。ドナーの皮膚がマウスの皮膚と出会う場所に外科用接着剤の組織接着剤滴を追加し、接着剤が組織に付着するように、マウスとドナーの皮膚を鉗子で1〜2秒間保持します。グラフトの端を完全に密閉し、接着剤を完全に乾かします。次に、移植片領域を完全に覆うのに十分な大きさのワセリンガーゼを切ります。移植片をワセリンガーゼで覆い、鉗子を使用してガーゼを皮膚に軽く押し付けます。幅がマウスの傷を覆うのに十分な大きさになるように、透明フィルムドレッシングのストリップを縦にカットします。透明フィルムドレッシングを粘着面を下にしてガーゼの上にしっかりと押し付けます。マウスをすばやく転がしてドレッシングを胴体に完全に巻き付け、呼吸を妨げることなくしっかりとフィットし、すべての手足が自由に動くようにします。マウスを回復ケージに入れた後、マウスが警戒して動き回るまで監視します。回復後少なくとも15分間、ケージの部分に熱源を提供します。移植後10〜21日の移植片の分析は、移植片がドナーの皮膚がマウスの皮膚と出会う端の周りに付着したままであり、移植片が健康な人間の皮膚よりも厚く炎症を起こしたままであることを示しました。フローサイトメトリーによる分析により、ほとんどの移植片にヒト免疫細胞が持続的に存在することが明らかになりましたが、異種移植片間で数は異なりました。成功した移植片はヒト免疫細胞を維持しました。しかし、ドナー組織の継続的な接着と生存にもかかわらず、ヒト免疫細胞を維持できなかった移植片は失敗したと見なされます。35日後の移植片のヘマトキシリンおよびエオジン染色切片の分析は、無傷の表皮を示し、真皮は淡い合胞体細胞質と散在するリンパ球を有するふっくらとした楕円形の線維芽細胞からなる適度に細胞性である。50日後の移植片の分析は、楕円形の線維芽細胞およびわずかに増強された細胞外マトリックス沈着を含む無傷の表皮および真皮で同様の結果を示した。皮膚異種移植片の成功は、皮膚標本の適切な調製、抗Gr1投与によるマウス好中球免疫応答の抑制、無菌げっ歯類手術方法の順守、およびマウスの安全な包帯に依存しています。ヒト異種移植皮膚移植モデルは、研究者がin vivoで無傷の臓器におけるヒト免疫応答を研究することを可能にし、トランスレーショナル研究のための新しい道を提供します。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

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Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

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An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

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Each year, seasonal influenza outbreaks profoundly affect societies worldwide. In spite of global efforts, influenza remains an intractable healthcare ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

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A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

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