Name: xenograft skin model to manipulate human immune responses in vivo
Uploaded: 2022-06-29T13:30:00
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이 연구는 TRex Bio의 후원 연구 계약과 NIH (1R01AR075864-01A1)의 보조금으로 부분적으로 자금을 지원했습니다. JMM은 암 연구 학회 (보조금 26005)의 지원을 받고 있습니다. 우리는 NIH P30 DK063720, S10 1S10OD021822-01 및 S10 1S10OD018040-01에 의해 부분적으로 지원되는 Parnassus 유세포 분석 코어를 인정합니다.

본 연구는 UCSF IACUC (AN191105-01H) 및 IRB (13-11307) 프로토콜에 따라 승인되고 수행되었다. 탈장 복구와 같은 일상적인 선택적 수술 절차의 일부로 폐기 된 피부 샘플이 본 연구에 사용되었습니다. 피부 샘플은 비식별화되고 비인간 피험자 연구로 인증되거나, 다운스트림 분석을 위해 임상적으로 식별 정보가 필요한 경우 환자는 IRB 프로토콜 13-11307에 따라 서면 동의를 제공했습니다. 다른 포함 또는 제?...

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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+a+xenograft+model+of+human+vasculature+in+the+mouse+ear+pinna.">Developing a xenograft model of human vasculature in the mouse ear pinna.</a> Scientific Reports. 10 (1), 2058 (2020).</li><li>Gokkaya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+graft+storage+in+platelet+rich+plasma+(PRP).">Skin graft storage in platelet rich plasma (PRP).</a> Dermatologic Therapy. 33 (1), 13178 (2020).</li><li>. The Humeca D42 and D80 battery operated cordless dermatomes Available from: <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=YCRowX-TdA">https://www.youtube.com/watch?v=YCRowX-TdA</a> (2021)</li><li>Rodriguez, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+regulatory+T+cells+reside+in+human+skin.">Memory regulatory T cells reside in human skin.</a> The Journal of Clinical Investigation. 124 (3), 1027-1036 (2014).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+rodent+aseptic+surgery.">Techniques in rodent aseptic surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82 (1), 12-14 (2008).</li><li>Karim, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+ischemia+and+neovascularization+in+a+murine+model+of+full+thickness+human+wound+healing.">Evolution of ischemia and neovascularization in a murine model of full thickness human wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 28 (6), 812-822 (2020).</li><li>Ali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenogeneic+graft-versus-host-disease+in+NOD-scid+IL-2R&#947;null+mice+display+a+T-effector+memory+phenotype.">Xenogeneic graft-versus-host-disease in NOD-scid IL-2R&#947;null mice display a T-effector memory phenotype.</a> PloS One. 7 (8), 44219 (2012).</li><li>Souci, L., Denesvre, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+skin+models+in+domestic+animals.">3D skin models in domestic animals.</a> Veterinary Research. 52 (1), 21 (2021).</li><li>Holtkamp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+clocks+guide+dendritic+cells+into+skin+lymphatics.">Circadian clocks guide dendritic cells into skin lymphatics.</a> Nature Immunology. 22 (11), 1375-1381 (2021).</li></ol>

마우스 이종이식 피부 이식 모델은 생체내 설정14에서 인간 피부 면역 반응을 기계적으로 해부하는 핵심 기술이다. 성공적인 피부 이종 이식 이식은 마우스 및 피부 표본 및 마우스의 적절한 준비와 무균 설치류 수술 방법15의 준수에 달려 있습니다. 배지(예: 멸균 식염수)의 차가운 온도에서 피부 샘플을 급속 냉각 및 적절하게 보관하는 것은 이식 전에 ?...

마우스 모델은 인간 생물학 및 질병에 대한 추론을 위해 자주 사용되며, 부분적으로는 실험적 재현성과 유전자 조작 능력 때문입니다. 그러나, 마우스 생리학은 인간 장기 시스템, 특히 피부를 완전히 재현하지 못하므로,약물 개발에서 전임상 모델로 사용하기에는 한계가 있다1. 마우스와 인간 피부의 해부학적 차이에는 상피 두께와 구조의 차이, 쥐 에크린 땀샘의 부족, 모발 순환의 변화가포함됩니다2. 또한, 면역계의 선천적 팔과 적응 팔은 두 종 사이에서 갈라진다3. 마우스 피부는 수지상 표피 T 세포 (DETC)의 독특한 면역 집단을 함유하고, 진피 γδ T 세포의 풍부함이 더 많으며, 인간 조직과 비교하여 면역 세포 하위 집합 국소화가 다양합니다4. 따라서 인간 피부 생물학 및 염증에 관한 실험 결과는 인간 조직을 사용한 검증의 이점을 얻습니다. 시험관 내 및 오가노이드 배양 시스템은 인체 조직을 연구하기 위해 널리 활용되는 도구이지만, 이러한 시스템은 부재하거나 불완전한 면역 재구성 및 말초 혈관구조에 대한 연결 부족으로 인해제한됩니다5. 인간화 이종이식 피부 이식 모델은 생체 내에서 인간 조직에서 면역 및 비면역 경로의 치료적 또는 생물학적 조작을 허용하는 것을 목표로 합니다.
인간 피부 이종이식 모델은 피부 생리학 및 약리학을 연구하고, 면역 거부 반응 및 반응을 분석하고, 인간 피부암 메커니즘을 해부하고, 피부 질환 및상처 치유를 이해하는 데 활용되었습니다6. 피부 연구의 여러 분야에 적용 할 수 있지만, 이종 이식 모델은 시험관 내 연구보다 처리량이 낮고 마우스 모델에 사용되는 유전자 조작의 용이성이 부족합니다. 이 모델 내의 시점은 몇 주에서 몇 달까지 다양할 수 있으며 성공적인 이식을 위해서는 이러한 수술을 수행하기 위한 적절한 시설과 장비가 필요합니다. 그러나 이종이식 모델은 실험에 생물학적 및 생리학적 맥락을 제공하는 반면, 조직 외식편과 같은 유기체 배양 시스템은 종종 특정 시간 간격으로 외인성 신호와 같은 무수한 움직이는 부분을 복제해야합니다7. 따라서 이 모델은 시험관 내 및 마우스 모델 내에서 관찰된 결과를 추가로 검증하거나 생물학적으로 실현 가능하지 않은 작업에 가장 잘 활용됩니다. 이종이식 모델의 적절한 사용은 생체 내에서 온전한 인간 조직을 연구하고 조작할 수 있는 독특한 기회를 제공합니다.
이종이식 피부 이식 모델의 최적화는 시간이 지남에 따라 이식편 무결성을 보존하기 위해 수십 년의 연구에 의존해 왔습니다. 이 과정에서 중요한 것은 B 및 T 적응 면역 세포, 기능성 NK 세포가 부족하고 대 식세포 및 수지상 세포8이 결핍 된 비 비만 당뇨병 (NOD) - scid 인터루킨 -2 감마 사슬 수용체 (NSG) 마우스를 활용하는 것입니다. 이들 NSG 숙주의 면역결핍 성질은 인간 조혈 세포, 환자-유래 암, 및 피부 8,9,10의 이식을 허용한다. 이러한 면역억제 숙주 환경에도 불구하고, 이식 성공10을 위해서는 항-GR1 투여에 의한 마우스 호중구 면역 반응의 추가의 억제가 필요하다. 손상되지 않은 조직을 이식하는 데 있어 주요 장애물은 감염, 거부 및 이식편으로의 혈류 재설정의 어려움이며 때로는 피부 및 표피 완전성의 손실로 이어집니다11. 항-FR1의 투여 및 적절한 이식 깊이의 사용을 포함하는 기술은 이식편 생존을 개선한다10. 세심한 최적화를 통해 NSG 마우스에서 인간 이종 이식 피부 이식을 90 % -100 % 범위의 높은 효율성과 생존율로 수행 할 수 있습니다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>SF100-20</td>
			<td>Fixative for histology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M Vetbond Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>surgical glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 700 CD45 monoclonal antibody (Clone 30F11)</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>56-0451-82</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GR1 clone RB6-8C5</td>
			<td>BioXcell</td>
			<td>BE0075</td>
			<td>Anti-rejection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC mouse anti-human CD25&#160; (Clone 2A3)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>340939</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-eFluor 780 anti-human HLA-DR (Clone LN3)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>47-9956-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave pouches</td>
			<td>VWR&#160;</td>
			<td>89140-800</td>
			<td>For autoclaving tools and paper towels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 60 anti-human CD4 antibody (Clone OKT4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317438</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 65 anti-human CD8a antibody (Clone RPA-T8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>301042</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 711 anti-human CD3 antibody (Clone OKT3)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317328</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex 0.3 mg/mL</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>059122</td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen 50 mg/mL</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>NADA # 141-199</td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>4188</td>
			<td>Skin digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D42 Dermatome blade</td>
			<td>Humeca</td>
			<td>5.D42BL10</td>
			<td>dermatome (1 blade per sample)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermatome D42</td>
			<td>Humeca</td>
			<td>4.D42</td>
			<td>dermatome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpel</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td>skin preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting T-Pins; 1-1/2 inch, 1000/CS 1.5</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-10915-03</td>
			<td>To pin skin specimen for dermatome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors</td>
			<td>medicon</td>
			<td>02.04.10</td>
			<td>sample preparation and mouse dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DN25-1G</td>
			<td>Skin digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience Foxp3 / Transcription Factor Fixation/Permeabilization Concentrate and Diluent</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-5521-00</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Cell Fixation and Permeabilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eFluor-450 FOXP3 monoclonal antibody (Clone PCH101)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-4776-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td>Kent</td>
			<td>CL8787-KIT</td>
			<td>hair removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia&#160;Shandon Instant Eosin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6765040</td>
			<td>H&#38;E</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia&#160;Shandon Instant Hematoxylin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6765015</td>
			<td>H&#38;E</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD45 (Clone HI30)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>35-0459-T100</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps&#160;</td>
			<td>medicon</td>
			<td>07.60.07</td>
			<td>sample preparation and mouse dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td>Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating lamp</td>
			<td>Morganville Scientific</td>
			<td>HL0100</td>
			<td>Post-surgical care</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pads 4&#34; x 10&#34;</td>
			<td>Pristech</td>
			<td>20415</td>
			<td>Surgical heat supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin 1cc 12.7 mm syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329410</td>
			<td>drug administration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>United States Pharmacopeia (USP)&#160;</td>
			<td>NDC 66794-013-25</td>
			<td>Anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane machine</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>911103</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair for Men</td>
			<td>Nair</td>
			<td>&#8206; 10022600588556</td>
			<td>hair removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin and Polymyxin Bisulfates and Bacitracin Zinc Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>&#160;NDC 17478-235-35</td>
			<td>eye ointment to prevent drying</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>005557</td>
			<td>Mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Kleenex</td>
			<td>100848</td>
			<td>May be autoclaved for sterile surfaces</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>Semitransparent sealing film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE mouse anti-human CD127 (Clone HIL-7R-M21)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557938</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy-7 mouse anti-Ki-67 (Clone B56)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561283</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-eFluor-710 CD152 (CTLA-4) monoclonal antibody (Clone 14D3)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>46-1529-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permeabilization Buffer 10x</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-8333-56</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish 150 mm</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430597</td>
			<td>Sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Wrap</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-305-654</td>
			<td>Site preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Providone-Iodine Swab stick</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41350</td>
			<td>Site sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft-Feed and Oral Hydration (Napa Nectar)</td>
			<td>Se Lab Group Inc</td>
			<td>NC9066511&#160;</td>
			<td>For supplementing poorly recovering mice post-surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen Collection Cups</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-150-266</td>
			<td>sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pad</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td>skin preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Media for sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-02</td>
			<td>For drug dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film 4&#8221; x 43/4&#8221;&#160;</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626</td>
			<td>transparent film wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline Petrolatum Gauze 3&#8221; x 8&#8221;&#160;</td>
			<td>Kendall</td>
			<td>414600</td>
			<td>wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Violet 510 Ghost Dye&#160;</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>13-0870-T100</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Viability dye</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

xenograft skin model to manipulate human immune responses in vivo

인간 기증자 피부를 면역결핍 마우스 숙주에 이식하는 인간 피부 이종이식 모델은 피부 면역학의 중개 연구를 위한 중요한 옵션입니다. 뮤린 및 인간의 피부는 해부학적 및 면역 세포 조성에서 실질적으로 상이하다. 따라서 전통적인 마우스 모델은 피부과 연구 및 약물 발견에 한계가 있습니다. 그러나 성공적인 이종 이식은 기술적으로 어렵고 이식 및 숙주 생존을 위해 최적의 표본 및 마우스 이식 부위 준비가 필요합니다. 본 프로토콜은 마우스 상에 인간 피부를 이식하기 위한 최적화된 기술을 제공하고 다운스트림 실험 목표에 필요한 고려사항을 논의한다. 이 보고서는 인간 기증자 피부 샘플의 적절한 준비, 수술 설정의 조립, 마우스 및 수술 부위 준비, 피부 이식 및 수술 후 모니터링을 설명합니다. 이러한 방법을 준수하면 수술 후 6 주 이상 이종 이식편을 유지할 수 있습니다. 아래에 설명된 기술은 엔지니어링 제어, 멸균 기술 및 수술 전 및 수술 후 컨디셔닝의 개발로 인해 최대 이식 효율성을 허용합니다. 이종이식 모델의 적절한 성능은 인간 피부의 실험적 특성화 및 생체내 화합물의 전임상 시험을 위한 수명이 긴 인간 피부 이식편 샘플을 초래합니다.

인간 피부 이종 이식은 슈퍼 배리어 동물 시설 내부의 NSG 마우스에서 수행되었습니다. 성공은 이식 후 마우스의 연장 이식편 및 마우스 생존 및 행동 건강에 의해 정의되었습니다. 수술 후 일주일 동안의 열악한 생존은 처음에는 실험 성공의 가장 큰 장벽으로 관찰되었으며, 마우스의 최대 50 %가 안락사를 필요로했습니다. 멸균 기술을 개선하고 수술 중 및 수술 직후 마우스 체온을 더 잘 지원하면...

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Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo

본 프로토콜은 비비만 당뇨병(NOD)-scid 인터루킨-2 감마사슬 수용체(NSG) 마우스에 인간 피부를 이식하는 방법을 설명합니다. 이식을 위한 인간 피부의 준비, 이식을 위한 마우스의 준비, 분할 두께의 인간 피부의 이식 및 이식 후 회복 절차에 대한 자세한 설명이 보고서에 포함되어 있습니다.

생체 내에서 인간 면역 반응을 조작하기 위한 이종이식 피부 모델

The human skin xenograft model, in which human donor skin is transplanted onto an immunodeficient mouse host, is an important option for translational ...

우리는 생체 내에서 인간 조직에서 면역 및 비면역 경로를 조작하기 위한 중요한 도구인 인간 이종이식 피부 이식 모델에 필요한 기술을 간략하게 설명합니다. 이 기술은 시험관 내 방법보다 인간의 피부 생리학을 더 잘 요약하여 생체 내 전임상 실험 조작을 허용합니다. 이종이식 피부 이식은 생체 내에서 인간 피부 염증을 표적으로 하는 화합물의 전임상 시험에 사용할 수 있습니다.붕대를 감는 것은 특히 어려울 수 있으므로 수술을 수행하기 전에 건강한 마취 된 쥐에게 붕대 과정을 연습하는 것이 좋습니다. 시작하려면 멸균 된 해부 보드의 멸균 된 음압 조직 배양 후드에서 인간 피부 샘플을 피부 분절로 준비하십시오. 표피가 위로 오도록 피부 샘플을 해부 보드에 놓고 멸균 알코올 준비 패드와 PBS로 표피를 닦습니다.이제 1.5인치 해부 T 핀을 사용하여 피부의 더 가까운 가장자리를 고정합니다. 그런 다음 피부 표본을 400 마이크로 미터 두께로 피부 분혈하고 30-45도 각도로 앞으로 절단하면서 일정한 압력을 가합니다. 멸균 PBS에 적신 멸균 거즈를 페트리 접시 바닥에 놓고 표피 쪽이 위로 오도록 피부를 젖은 거즈 위에 놓습니다.반투명 밀봉 필름으로 플레이트 가장자리를 밀봉하고 덮어 샘플이 오염되지 않도록 하고 접목 전에 샘플을 섭씨 4도에서 보관하십시오. 접목을 위해 멸균 기구와 수술 스테이션을 준비하고 고압멸균 종이 타월을 기구 및 마우스 배치를 위한 멸균 표면으로 사용합니다. 마취 유도 후 마우스를 가열 패드 또는 다른 열원으로 옮기고 장갑을 낀 손가락으로 눈에 작은 연고 방울을 두드려 안과 연고를 투여하십시오.피부를 꼬집고 진통제를 신체와 평행 한 각도로 피하 주사하십시오. 꼬리로 마우스를 들어 올린 후 복부를 노출시키고 1 밀리리터 인슐린 주사기를 사용하여 30도 각도로 복강 내 항 -Gr1 100 마이크로 리터 당 100 마이크로 그램을 주사합니다. 그런 다음 동물용 전기 클리퍼를 사용하여 마우스 등쪽의 중간 및 상부를 면도합니다.모든 머리카락을 제거한 후 면도 한 피부에 충분한 양의 제모 연고를 바르십시오. 30 초에서 1 분 동안 기다린 다음 종이 타월과 PBS로 제모 연고를 완전히 닦으십시오. 마우스를 수술 스테이션으로 옮긴 후 수술 부위를 소독하고 마우스 위에 멸균 플라스틱 랩을 놓습니다.접목 할 영역의 크기보다 약간 큰 플라스틱의 창을 자릅니다. 집게 뒷면으로 기증자 피부를 단단히 잡고 메스로 집게와 함께 접목 할 기증자 피부의 10 x 10mm 직사각형 부분을 자릅니다. 근막이 깊숙이 베이지 않도록 피부를 몸에서 빼내십시오.이식 침대를 만들려면 기증자 피부 조각의 크기와 일치하는 마우스 피부의 직사각형 영역을 잘라냅니다. 그런 다음 표피가 위로 오도록 기증자 피부 조각을 준비된 이식편 침대에 놓습니다. 집게의 뒷면을 사용하여 기증자 피부가 이식 침대에 완전히 평평해질 때까지 피부를 앞뒤로 미끄러지듯 조작합니다.기증자 피부가 마우스 피부와 만나는 곳에 수술 접착제 조직 접착제 방울을 추가하고 접착제가 조직에 부착되도록 마우스와 기증자 피부를 집게로 1-2 초 동안 유지합니다. 이식편의 가장자리를 완전히 밀봉하고 접착제가 완전히 건조되도록 합니다. 다음으로, 이식편 부위를 완전히 덮을만큼 충분히 큰 바셀린 거즈를 자릅니다.바셀린 거즈로 이식편을 덮고 집게를 사용하여 거즈를 피부에 가볍게 누릅니다. 투명 필름 드레싱 스트립을 세로로 잘라 너비가 마우스의 상처를 덮을만큼 충분히 커지도록합니다. 접착면이 아래로 향하도록 투명 필름 드레싱을 거즈 위로 단단히 누릅니다.마우스를 빠르게 굴려 드레싱을 몸통 주위로 완전히 감싸서 호흡을 방해하지 않고 단단히 고정되고 모든 팔다리가 자유롭게 움직일 수 있도록 합니다. 마우스를 복구 케이지에 넣은 후 마우스가 경고하고 움직일 때까지 모니터링합니다. 회복 후 최소 15 분 동안 케이지 부분에 열원을 제공하십시오.이식 후 10-21 일 동안 이식편을 분석 한 결과, 이식편은 기증자의 피부가 마우스의 피부와 만나는 가장자리 주위에 부착되어 있었고 이식편은 건강한 사람의 피부보다 두껍고 염증이 많은 것으로 나타났습니다. 유세포 분석에 의한 분석은 대부분의 이식편 내에서 인간 면역 세포의 지속적인 존재를 밝혀 냈지만 개수는 이종 이식편마다 다양했습니다. 성공적인 이식편은 인간 면역 세포를 유지시켰다.그러나 기증자 조직의 지속적인 부착 및 생존에도 불구하고 인간 면역 세포를 유지하지 못한 이식편은 실패한 것으로 간주됩니다. 35일 후 이식편의 헤마톡실린 및 에오신 염색 부분을 분석한 결과, 표피는 손상되지 않았으며 진피는 창백한 세포융합 세포질과 흩어진 림프구가 있는 통통한 타원형 섬유아세포로 구성된 중간 정도의 세포질로 나타났습니다. 50일 후 이식편의 분석은 온전한 표피 및 타원형 섬유아세포를 포함하는 진피와 약간 강화된 세포외 기질 침착과 유사한 결과를 나타내었다.성공적인 피부 이종 이식은 피부 표본의 적절한 준비, 항 -Gr1 투여에 의한 마우스 호중구 면역 반응 억제, 무균 설치류 수술 방법 준수 및 마우스의 안전한 붕대에 의존합니다. 인간 이종이식 피부 이식 모델을 통해 연구자들은 생체 내 온전한 장기에서 인간 면역 반응을 연구할 수 있어 중개 연구를 위한 새로운 길을 제공합니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

에 대한 면역 적격 마우스에 묽은 난소암의 Orthotopic 모델 생체내에</em종양 면역 응답> 종양 이미징 및 모니터링

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

연구

면역학 및 감염병학

Seven Steps to Stellate Cells

셀을 별 모양으로 일곱 단계

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

감염된 마우스에 세균 하중과 면역 응답 측정 리스테리아 monocytogenes</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

마우스에 동종 CD4 T 세포 반응을 연구하기 위해 테일 피부 이식

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

표현형 분석 및 대한 인간의 피부에서 림프구 분리<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 세포 배양

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

<em&gt; 체외</em&gt; HIV 공동 감염의 맥락에서 말라리아에 면역 반응을 측정하기위한 모델

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

Using Zebrafish Models of Human Influenza A Virus Infections to Screen Antiviral Drugs and Characterize Host Immune Cell Responses

인간 인플루엔자 바이러스 감염의 Zebrafish의 모델을 사용하여 항 바이러스 약품을 화면 및 호스트 면역 세포 반응의 특성을

Each year, seasonal influenza outbreaks profoundly affect societies worldwide. In spite of global efforts, influenza remains an intractable healthcare ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

살 모 넬 라 typhimurium의 절연-대 식 세포에서 Phagosomes를 포함 하

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

인간 T 세포 회수 응답에서 Vivo에서 공부 하는 흡입 물집 프로토콜

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...