Name: xenograft skin model to manipulate human immune responses in vivo
Uploaded: 2022-06-29T13:30:00
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Este trabajo fue financiado en parte por acuerdos de investigación patrocinados por TRex Bio y subvenciones de los NIH (1R01AR075864-01A1). JMM cuenta con el apoyo de la Sociedad de Investigación del Cáncer (subvención 26005). Reconocemos el Parnassus Flow Cytometry Core apoyado en parte por las subvenciones NIH P30 DK063720, S10 1S10OD021822-01 y S10 1S10OD018040-01.

El presente estudio fue aprobado y realizado de acuerdo con los protocolos UCSF IACUC (AN191105-01H) e IRB (13-11307). Para la presente investigación se utilizaron muestras de piel, descartadas como parte de procedimientos quirúrgicos electivos de rutina, como la reparación de hernias. Las muestras de piel se desidentifican y se certifican como Investigación con sujetos no humanos o, si se requiere información de identificación clínica para los análisis posteriores, los pacientes proporcionaron un consentimiento ...

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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+regulatory+T+cells+reside+in+human+skin.">Memory regulatory T cells reside in human skin.</a> The Journal of Clinical Investigation. 124 (3), 1027-1036 (2014).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+rodent+aseptic+surgery.">Techniques in rodent aseptic surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82 (1), 12-14 (2008).</li><li>Karim, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+ischemia+and+neovascularization+in+a+murine+model+of+full+thickness+human+wound+healing.">Evolution of ischemia and neovascularization in a murine model of full thickness human wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 28 (6), 812-822 (2020).</li><li>Ali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenogeneic+graft-versus-host-disease+in+NOD-scid+IL-2R&#947;null+mice+display+a+T-effector+memory+phenotype.">Xenogeneic graft-versus-host-disease in NOD-scid IL-2R&#947;null mice display a T-effector memory phenotype.</a> PloS One. 7 (8), 44219 (2012).</li><li>Souci, L., Denesvre, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+skin+models+in+domestic+animals.">3D skin models in domestic animals.</a> Veterinary Research. 52 (1), 21 (2021).</li><li>Holtkamp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+clocks+guide+dendritic+cells+into+skin+lymphatics.">Circadian clocks guide dendritic cells into skin lymphatics.</a> Nature Immunology. 22 (11), 1375-1381 (2021).</li></ol>

El modelo de trasplante de piel de xenoinjerto de ratón es una técnica clave para diseccionar mecánicamente las respuestas inmunes de la piel humana en un entorno in vivo 14. El éxito de los trasplantes de xenoinjerto de piel se basa en la preparación adecuada de ratones y muestras de piel y ratones y en la adherencia a los métodos de cirugía aséptica con roedores15. El enfriamiento rápido y el almacenamiento adecuado de muestras de piel a temperaturas fr?...

Los modelos de ratón se utilizan con frecuencia para hacer inferencias sobre la biología humana y la enfermedad, en parte debido a su reproducibilidad experimental y capacidad de manipulación genética. Sin embargo, la fisiología del ratón no recapitula completamente los sistemas de órganos humanos, particularmente la piel, y por lo tanto tiene limitaciones para su uso como modelo preclínico en el desarrollo de fármacos1. Las diferencias anatómicas entre la piel del ratón y la humana incluyen diferencias en el grosor epitelial y la arquitectura, la falta de glándulas sudoríparas ecrinas murinas y las variaciones en el ciclo del cabello2. Además, tanto el brazo innato como el adaptativo del sistema inmune son divergentes entre las dos especies3. La piel de ratón contiene una población inmune única de células T epidérmicas dendríticas (DETC), tiene una mayor abundancia de células T γδ dérmicas y varía en la localización de subconjuntos de células inmunes en comparación con el tejido humano4. Por lo tanto, los hallazgos experimentales sobre la biología de la piel humana y la inflamación se benefician de la validación con tejido humano. Mientras que los sistemas de cultivo in vitro y organoides son herramientas ampliamente utilizadas para estudiar el tejido humano, estos sistemas están limitados por la reconstitución inmune ausente o incompleta y la falta de conexión con la vasculatura periférica5. El modelo humanizado de trasplante de piel de xenoinjerto tiene como objetivo permitir la manipulación terapéutica o biológica de las vías inmunes y no inmunes en tejidos humanos in vivo.
El modelo de xenoinjerto de piel humana se ha utilizado para estudiar la fisiología y farmacología de la piel, analizar el rechazo inmune y las respuestas, diseccionar los mecanismos del cáncer de piel humano y comprender las enfermedades de la piel y la cicatrización de heridas6. Si bien es aplicable a múltiples campos de investigación de la piel, el modelo de xenoinjerto tiene un rendimiento menor que los estudios in vitro y carece de la facilidad de manipulación genética empleada en modelos de ratón. Los puntos de tiempo dentro de este modelo pueden variar de semanas a meses, y el injerto exitoso requiere instalaciones y equipos adecuados para realizar estas cirugías. Sin embargo, el modelo de xenoinjerto proporciona contexto biológico y fisiológico a los experimentos, mientras que los sistemas de cultivo de organoides, como los explantes de tejidos, a menudo requieren replicar una miríada de partes móviles, como señales exógenas, a intervalos de tiempo específicos7. Por lo tanto, este modelo se utiliza mejor para validar aún más los hallazgos observados in vitro y dentro de modelos de ratón, o para trabajos que no son biológicamente factibles. El uso apropiado del modelo de xenoinjerto ofrece una oportunidad única para estudiar y manipular tejido humano intacto in vivo.
La optimización del modelo de trasplante de piel de xenoinjerto se ha basado en décadas de investigación para preservar la integridad del injerto a lo largo del tiempo. Fundamental para este proceso es utilizar el ratón receptor de cadena gamma (NSG) diabético no obeso (NOD)-scid interleucina-2, que carece de células inmunes adaptativas B y T, células NK funcionales y tiene deficiencias en macrófagos y células dendríticas8. La naturaleza inmunodeficiente de estos huéspedes NSG permite el trasplante de células hematopoyéticas humanas, cánceres derivados de pacientes y piel 8,9,10. A pesar de este ambiente inmunosupresor del huésped, la supresión adicional de las respuestas inmunes neutrofílicas del ratón mediante la administración anti-GR1 es necesaria para el éxito del injerto10. Los principales obstáculos en el trasplante de tejido intacto son la infección, el rechazo y la dificultad para restablecer el flujo sanguíneo al injerto, lo que a veces conduce a la pérdida de integridad dérmica y epidérmica11. Las técnicas que incluyen la administración de anti-FR1 y el uso de una profundidad de injerto adecuada mejoran la supervivencia del injerto10. La optimización meticulosa permite realizar trasplantes de piel de xenoinjerto humano en ratones NSG con altas tasas de eficiencia y supervivencia, que oscilan entre el 90% y el 100%.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>SF100-20</td>
			<td>Fixative for histology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M Vetbond Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>surgical glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 700 CD45 monoclonal antibody (Clone 30F11)</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>56-0451-82</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GR1 clone RB6-8C5</td>
			<td>BioXcell</td>
			<td>BE0075</td>
			<td>Anti-rejection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC mouse anti-human CD25&#160; (Clone 2A3)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>340939</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-eFluor 780 anti-human HLA-DR (Clone LN3)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>47-9956-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave pouches</td>
			<td>VWR&#160;</td>
			<td>89140-800</td>
			<td>For autoclaving tools and paper towels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 60 anti-human CD4 antibody (Clone OKT4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317438</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 65 anti-human CD8a antibody (Clone RPA-T8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>301042</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 711 anti-human CD3 antibody (Clone OKT3)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317328</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex 0.3 mg/mL</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>059122</td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen 50 mg/mL</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>NADA # 141-199</td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>4188</td>
			<td>Skin digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D42 Dermatome blade</td>
			<td>Humeca</td>
			<td>5.D42BL10</td>
			<td>dermatome (1 blade per sample)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermatome D42</td>
			<td>Humeca</td>
			<td>4.D42</td>
			<td>dermatome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpel</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td>skin preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting T-Pins; 1-1/2 inch, 1000/CS 1.5</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-10915-03</td>
			<td>To pin skin specimen for dermatome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors</td>
			<td>medicon</td>
			<td>02.04.10</td>
			<td>sample preparation and mouse dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DN25-1G</td>
			<td>Skin digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience Foxp3 / Transcription Factor Fixation/Permeabilization Concentrate and Diluent</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-5521-00</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Cell Fixation and Permeabilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eFluor-450 FOXP3 monoclonal antibody (Clone PCH101)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-4776-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td>Kent</td>
			<td>CL8787-KIT</td>
			<td>hair removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia&#160;Shandon Instant Eosin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6765040</td>
			<td>H&#38;E</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia&#160;Shandon Instant Hematoxylin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6765015</td>
			<td>H&#38;E</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD45 (Clone HI30)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>35-0459-T100</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps&#160;</td>
			<td>medicon</td>
			<td>07.60.07</td>
			<td>sample preparation and mouse dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td>Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating lamp</td>
			<td>Morganville Scientific</td>
			<td>HL0100</td>
			<td>Post-surgical care</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pads 4&#34; x 10&#34;</td>
			<td>Pristech</td>
			<td>20415</td>
			<td>Surgical heat supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin 1cc 12.7 mm syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329410</td>
			<td>drug administration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>United States Pharmacopeia (USP)&#160;</td>
			<td>NDC 66794-013-25</td>
			<td>Anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane machine</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>911103</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair for Men</td>
			<td>Nair</td>
			<td>&#8206; 10022600588556</td>
			<td>hair removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin and Polymyxin Bisulfates and Bacitracin Zinc Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>&#160;NDC 17478-235-35</td>
			<td>eye ointment to prevent drying</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>005557</td>
			<td>Mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Kleenex</td>
			<td>100848</td>
			<td>May be autoclaved for sterile surfaces</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>Semitransparent sealing film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE mouse anti-human CD127 (Clone HIL-7R-M21)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557938</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy-7 mouse anti-Ki-67 (Clone B56)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561283</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-eFluor-710 CD152 (CTLA-4) monoclonal antibody (Clone 14D3)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>46-1529-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permeabilization Buffer 10x</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-8333-56</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish 150 mm</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430597</td>
			<td>Sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Wrap</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-305-654</td>
			<td>Site preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Providone-Iodine Swab stick</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41350</td>
			<td>Site sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft-Feed and Oral Hydration (Napa Nectar)</td>
			<td>Se Lab Group Inc</td>
			<td>NC9066511&#160;</td>
			<td>For supplementing poorly recovering mice post-surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen Collection Cups</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-150-266</td>
			<td>sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pad</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td>skin preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Media for sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-02</td>
			<td>For drug dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film 4&#8221; x 43/4&#8221;&#160;</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626</td>
			<td>transparent film wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline Petrolatum Gauze 3&#8221; x 8&#8221;&#160;</td>
			<td>Kendall</td>
			<td>414600</td>
			<td>wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Violet 510 Ghost Dye&#160;</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>13-0870-T100</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Viability dye</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

xenograft skin model to manipulate human immune responses in vivo

El modelo de xenoinjerto de piel humana, en el que la piel de un donante humano se trasplanta a un huésped de ratón inmunodeficiente, es una opción importante para la investigación traslacional en inmunología de la piel. La piel murina y humana difieren sustancialmente en anatomía y composición de células inmunes. Por lo tanto, los modelos tradicionales de ratón tienen limitaciones para la investigación dermatológica y el descubrimiento de fármacos. Sin embargo, los xenotrasplantes exitosos son técnicamente desafiantes y requieren una preparación óptima del sitio de injerto de muestra y ratón para la supervivencia del injerto y del huésped. El presente protocolo proporciona una técnica optimizada para trasplantar piel humana en ratones y discute las consideraciones necesarias para los objetivos experimentales posteriores. Este informe describe la preparación adecuada de una muestra de piel de donante humano, el ensamblaje de una configuración quirúrgica, la preparación del ratón y del sitio quirúrgico, el trasplante de piel y el monitoreo postquirúrgico. La adherencia a estos métodos permite el mantenimiento de los xenoinjertos durante más de 6 semanas después de la cirugía. Las técnicas descritas a continuación permiten la máxima eficiencia de injerto debido al desarrollo de controles de ingeniería, técnica estéril y acondicionamiento pre y postquirúrgico. El rendimiento adecuado del modelo de xenoinjerto da como resultado muestras de injerto de piel humana de larga vida para la caracterización experimental de la piel humana y las pruebas preclínicas de compuestos in vivo.

Se realizaron xenoinjertos de piel humana en ratones NSG dentro de una instalación de animales de súper barrera. El éxito se definió por la supervivencia prolongada del injerto y del ratón y la salud conductual de los ratones después del trasplante. La mala supervivencia durante la semana posterior a la cirugía se observó inicialmente como la mayor barrera para el éxito experimental, con hasta el 50% de los ratones que requieren eutanasia. La mejora de la técnica estéril y un mejor soporte de las temperaturas ...

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Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo

El presente protocolo describe cómo injertar piel humana en ratones diabéticos no obesos (NOD)-scid receptor de cadena gamma (NSG) con interleucina-2. En el informe se incluye una descripción detallada de la preparación de la piel humana para el trasplante, la preparación de ratones para el trasplante, el trasplante de piel humana de espesor dividido y el procedimiento de recuperación posterior al trasplante.

Modelo de piel de xenoinjerto para manipular las respuestas inmunes humanas in vivo

The human skin xenograft model, in which human donor skin is transplanted onto an immunodeficient mouse host, is an important option for translational ...

Describimos las técnicas necesarias para el modelo de trasplante de piel de xenoinjerto humano, una herramienta importante para la manipulación de vías inmunes y no inmunes en tejidos humanos in vivo. Esta técnica recapitula mejor la fisiología de la piel humana que los métodos in vitro, lo que permite la manipulación experimental preclínica in vivo. Los trasplantes de piel de xenoinjerto se pueden utilizar para pruebas preclínicas de compuestos dirigidos a la inflamación de la piel humana in vivo.Vendar ratones puede ser particularmente desafiante, por lo que aconsejamos practicar el proceso de vendaje en ratones sanos anestesiados antes de realizar cirugías. Para comenzar, prepárese para dermatomar la muestra de piel humana en una campana de cultivo de tejido de presión negativa esterilizada en una placa de disección esterilizada. Coloque la muestra de piel con la epidermis boca arriba en la tabla de disección y limpie la epidermis con una almohadilla estéril de preparación de alcohol seguida de PBS.Ahora use un pin en T de disección de 1.5 pulgadas para fijar el borde más cercano de la piel. Luego dermatomeme la muestra de piel a 400 micrómetros de espesor y aplique una presión constante mientras corta hacia adelante en un ángulo de 30 a 45 grados. Coloque una gasa estéril empapada en PBS estéril en el fondo de la placa de Petri y coloque la piel con el lado de la epidermis hacia arriba sobre la gasa húmeda.Selle y cubra los bordes de la placa con una película de sellado semitransparente para asegurarse de que la muestra no esté contaminada y almacene la muestra a cuatro grados centígrados antes del injerto. Prepare los instrumentos estériles y la estación quirúrgica para el injerto y use toallas de papel esterilizadas en autoclave como superficies estériles para la colocación de instrumentos y ratones. Después de la inducción de la anestesia, transfiera el ratón a una almohadilla térmica u otra fuente de calor y administre el ungüento oftálmico frotando una pequeña gota de ungüento en el ojo con un dedo enguantado.Pellizque la piel e inyecte analgésicos por vía subcutánea en un ángulo paralelo al cuerpo. Después de levantar el ratón por la cola, exponga el abdomen e inyecte 100 microgramos por 100 microlitros de anti-Gr1 por vía intraperitoneal en un ángulo de 30 grados con una jeringa de insulina de un mililitro. Luego use cortapelos eléctricos seguros para animales para afeitar las partes media y superior del lado dorsal del ratón.Después de limpiar todos los pelos, aplique una cantidad generosa de ungüento depilatorio sobre la piel afeitada. Espere de 30 segundos a un minuto, luego limpie el ungüento depilatorio completamente con una toalla de papel y PBS. Después de transferir el ratón a la estación quirúrgica, esterilice el área quirúrgica y coloque una envoltura de plástico estéril sobre el ratón.Corte una ventana en el plástico ligeramente más grande que el tamaño del área a injertar. Mantenga la piel del donante firmemente en su lugar con los fórceps en la parte posterior y corte una porción en forma de rectángulo de 10 por 10 milímetros de piel donante para injertarla junto con los fórceps con un bisturí. Retire la piel del cuerpo para evitar cortar profundamente la fascia.Para crear un lecho de injerto, corte un área rectangular de piel de ratón que coincida con el tamaño de la pieza de piel del donante. Luego coloque la pieza de piel del donante con el lado de la epidermis hacia arriba sobre el lecho de injerto preparado. Usando la parte posterior de los fórceps, manipule la piel deslizándose hacia adelante y hacia atrás hasta que la piel del donante quede completamente plana contra el lecho del injerto.Agregue gotas adhesivas de tejido de pegamento quirúrgico donde la piel del donante se encuentre con la piel del ratón y del donante y mantenga la piel del ratón y del donante junto con pinzas durante uno o dos segundos para que el pegamento se adhiera a los tejidos. Selle completamente el borde del injerto y deje que el pegamento se seque completamente. A continuación, corte la gasa de vaselina lo suficientemente grande como para cubrir completamente el área del injerto.Cubra el injerto con la gasa de vaselina y presione ligeramente la gasa contra la piel con fórceps. Corte una tira de un apósito de película transparente a lo largo para que el ancho sea lo suficientemente grande como para cubrir la herida del ratón. Presione firmemente el apósito de película transparente con el lado adhesivo hacia abajo sobre la gasa.Haga rodar rápidamente el ratón para envolver el apósito completamente alrededor del torso, asegurándose de que se ajuste bien sin impedir la respiración y que todas las extremidades estén libres para el movimiento. Después de colocar el ratón en una jaula de recuperación, monitoréelo hasta que esté alerta y se mueva. Proporcione una fuente de calor en la parte de la jaula durante al menos 15 minutos después de la recuperación.El análisis de los injertos de 10 a 21 días después del trasplante mostró que el injerto permaneció adherente alrededor de los bordes donde la piel del donante se encuentra con la piel del ratón y el injerto permaneció más grueso e inflamado que la piel humana sana. El análisis por citometría de flujo reveló la presencia sostenida de células inmunes humanas dentro de la mayoría de los injertos, pero los recuentos variaron entre los xenoinjertos. El injerto exitoso mantuvo las células inmunes humanas.Sin embargo, a pesar de la adherencia continua y la supervivencia del tejido del donante, los injertos que no lograron mantener las células inmunes humanas se consideran infructuosos. El análisis de las secciones teñidas con hematoxilina y eosina del injerto después de 35 días mostró epidermis intacta y la dermis es moderadamente celular compuesta de fibroblastos ovales regordetes con citoplasma sincitial pálido y linfocitos dispersos. El análisis del injerto después de 50 días mostró resultados similares con epidermis intacta y la dermis que contiene fibroblastos ovalados y deposición de matriz extracelular ligeramente mejorada.Los xenoinjertos de piel exitosos se basan en la preparación adecuada de muestras de piel, la supresión de las respuestas inmunes neutrofílicas del ratón mediante la administración de anti-Gr1, la adherencia a los métodos de cirugía aséptica de roedores y el vendaje seguro de ratones. El modelo de trasplante de piel de xenoinjerto humano permite a los investigadores estudiar las respuestas inmunes humanas en el órgano intacto in vivo, proporcionando una nueva vía para la investigación traslacional.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

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Un modelo ortotópico de cáncer de ovario seroso en ratones inmunocompetentes para In vivo Imágenes y seguimiento de tumores de las respuestas inmunitarias del tumor

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Investigación

Inmunología e Infección

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