Name: xenograft skin model to manipulate human immune responses in vivo
Uploaded: 2022-06-29T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo at JoVE.com

Bu çalışma kısmen TRex Bio'nun sponsorlu araştırma anlaşmaları ve NIH'den (1R01AR075864-01A1) gelen hibelerle finanse edilmiştir. JMM, Kanser Araştırma Derneği tarafından desteklenmektedir (hibe 26005). Parnassus Flow Cytometry Core'un kısmen NIH P30 DK063720, S10 1S10OD021822-01 ve S10 1S10OD018040-01 hibeleriyle desteklendiğini kabul ediyoruz.

Bu çalışma UCSF IACUC (AN191105-01H) ve IRB (13-11307) protokollerine uygun olarak onaylanmış ve gerçekleştirilmiştir. Bu araştırma için fıtık onarımı gibi rutin elektif cerrahi prosedürlerin bir parçası olarak atılan deri örnekleri kullanılmıştır. Cilt örnekleri ya İnsan Denekler Araştırması Değil olarak tanımlanmamış ve sertifikalandırılmıştır ya da aşağı akış analizleri için klinik olarak tanımlayıcı bilgiler gerekiyorsa, hastalar IRB protokolü 13-11307 kapsamında yazı...

<ol>
	<li>Zomer, H. D., Trentin, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+wound+healing+in+humans+and+mice:+Challenges+in+translational+research.">Skin wound healing in humans and mice: Challenges in translational research.</a> Journal of Dermatological Science. 90 (1), 3-12 (2018).</li><li>Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+approaches+to+create+murine+models+of+human+wound+healing.">Surgical approaches to create murine models of human wound healing.</a> Journal of Biomedicine &amp; Biotechnology. 2011, 969618 (2011).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> The Journal of Immunology. 172 (5), 2731-2738 (2004).</li><li>Pasparakis, M., Haase, I., Nestle, F. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+skin+immunity+and+inflammation.">Mechanisms regulating skin immunity and inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 14 (5), 289-301 (2014).</li><li>Sun, H., Zhang, Y. -. X., Li, Y. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+skin+organoids:+potential+opportunities+and+challenges.">Generation of skin organoids: potential opportunities and challenges.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 3176 (2021).</li><li>Crist&#243;bal, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+human+skin+transplantation:+a+systematic+review.">Mouse models for human skin transplantation: a systematic review.</a> Cells Tissues Organs. 210 (4), 250-259 (2021).</li><li>Rossi, G., Manfrin, A., Lutolf, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+potential+in+organoid+research.">Progress and potential in organoid research.</a> Nature Reviews Genetics. 19 (11), 671-687 (2018).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/&#947;cnull+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/&#947;cnull mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Meraz, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+patient-derived+xenograft+humanized+mouse+model+for+evaluation+of+lung+cancer+immune+responses.">An improved patient-derived xenograft humanized mouse model for evaluation of lung cancer immune responses.</a> Cancer Immunology Research. 7 (8), 1267-1279 (2019).</li><li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgamma(null)+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection.">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li><li>Meehan, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+a+xenograft+model+of+human+vasculature+in+the+mouse+ear+pinna.">Developing a xenograft model of human vasculature in the mouse ear pinna.</a> Scientific Reports. 10 (1), 2058 (2020).</li><li>Gokkaya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+graft+storage+in+platelet+rich+plasma+(PRP).">Skin graft storage in platelet rich plasma (PRP).</a> Dermatologic Therapy. 33 (1), 13178 (2020).</li><li>. The Humeca D42 and D80 battery operated cordless dermatomes Available from: <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=YCRowX-TdA">https://www.youtube.com/watch?v=YCRowX-TdA</a> (2021)</li><li>Rodriguez, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+regulatory+T+cells+reside+in+human+skin.">Memory regulatory T cells reside in human skin.</a> The Journal of Clinical Investigation. 124 (3), 1027-1036 (2014).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+rodent+aseptic+surgery.">Techniques in rodent aseptic surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82 (1), 12-14 (2008).</li><li>Karim, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+ischemia+and+neovascularization+in+a+murine+model+of+full+thickness+human+wound+healing.">Evolution of ischemia and neovascularization in a murine model of full thickness human wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 28 (6), 812-822 (2020).</li><li>Ali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenogeneic+graft-versus-host-disease+in+NOD-scid+IL-2R&#947;null+mice+display+a+T-effector+memory+phenotype.">Xenogeneic graft-versus-host-disease in NOD-scid IL-2R&#947;null mice display a T-effector memory phenotype.</a> PloS One. 7 (8), 44219 (2012).</li><li>Souci, L., Denesvre, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+skin+models+in+domestic+animals.">3D skin models in domestic animals.</a> Veterinary Research. 52 (1), 21 (2021).</li><li>Holtkamp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+clocks+guide+dendritic+cells+into+skin+lymphatics.">Circadian clocks guide dendritic cells into skin lymphatics.</a> Nature Immunology. 22 (11), 1375-1381 (2021).</li></ol>

Fare ksenograft cilt nakli modeli, insan derisi bağışıklık tepkilerini in vivo bir ortamda mekanik olarak incelemek için anahtar bir tekniktir14. Başarılı deri ksenogreft nakilleri, farelerin ve cilt örneklerinin ve farelerin uygun şekilde hazırlanmasına ve aseptik kemirgen cerrahisi yöntemlerine uyulmasına bağlıdır15. Hızlı soğutma ve cilt örneklerinin soğuk sıcaklıklarda (steril salin gibi) uygun şekilde depolanması, nakil öncesi doku ...

Fare modelleri, kısmen deneysel tekrarlanabilirlikleri ve genetik manipülasyon kapasiteleri nedeniyle, insan biyolojisi ve hastalığı hakkında çıkarımlar yapmak için sıklıkla kullanılır. Bununla birlikte, fare fizyolojisi insan organ sistemlerini, özellikle cildi tamamen özetlemez ve bu nedenle ilaç geliştirmede klinik öncesi bir model olarak kullanım sınırlamaları vardır1. Fare ve insan derisi arasındaki anatomik farklılıklar arasında epitel kalınlıkları ve mimarisindeki farklılıklar, murin ekrin ter bezlerinin eksikliği ve saç döngüsündeki farklılıklarbulunur 2. Ayrıca, bağışıklık sisteminin hem doğuştan gelen hem de adaptif kolları iki tür arasında farklıdır3. Fare derisi, dendritik epidermal T hücrelerinin (DETC'ler) benzersiz bir bağışıklık popülasyonunu içerir, daha yüksek miktarda dermal γδ T hücresine sahiptir ve insan dokusuna kıyasla bağışıklık hücresi alt kümesi lokalizasyonunda değişir4. Bu nedenle, insan derisi biyolojisi ve inflamasyonu ile ilgili deneysel bulgular, insan dokusu ile doğrulamadan yararlanmaktadır. İn vitro ve organoid kültür sistemleri insan dokusunu incelemek için yaygın olarak kullanılan araçlar olsa da, bu sistemler eksik veya eksik immün rekonstrüksiyon ve periferik vaskülatür5 ile bağlantı eksikliği ile sınırlıdır. İnsanlaştırılmış ksenograft deri nakli modeli, insan dokularındaki immün ve immün olmayan yolakların in vivo olarak terapötik veya biyolojik manipülasyonuna izin vermeyi amaçlamaktadır.
İnsan derisi ksenograft modeli, cilt fizyolojisi ve farmakolojisini incelemek, bağışıklık reddini ve yanıtlarını analiz etmek, insan derisi kanseri mekanizmalarını incelemek ve cilt hastalıklarını ve yara iyileşmesini anlamak için kullanılmıştır6. Cilt araştırmasının birden fazla alanına uygulanabilir olsa da, ksenogreft modeli, in vitro çalışmalardan daha düşük verime sahiptir ve fare modellerinde kullanılan genetik manipülasyon kolaylığından yoksundur. Bu modeldeki zaman noktaları haftalardan aylara kadar değişebilir ve başarılı aşılama, bu ameliyatları gerçekleştirmek için uygun tesis ve ekipman gerektirir. Bununla birlikte, ksenograft modeli deneylere biyolojik ve fizyolojik bağlam sağlarken, doku eksplantları gibi organoid kültür sistemleri genellikle belirli zaman aralıklarında eksojen sinyaller gibi sayısız hareketli parçanın çoğaltılmasını gerektirir7. Bu nedenle, bu model en iyi şekilde in vitro ve fare modellerinde gözlemlenen bulguları daha da doğrulamak veya biyolojik olarak mümkün olmayan işler için kullanılır. Ksenograft modelinin uygun kullanımı, bozulmamış insan dokusunu in vivo olarak incelemek ve manipüle etmek için eşsiz bir fırsat sağlar.
Ksenograft cilt nakli modelinin optimizasyonu, zaman içinde greft bütünlüğünü korumak için onlarca yıllık araştırmalara dayanmaktadır. Bu süreç için kritik olan, B ve T adaptif bağışıklık hücrelerinden, fonksiyonel NK hücrelerinden yoksun olan ve makrofaj ve dendritik hücrelerde eksiklikleri olan obez olmayan diyabetik (NOD)-scid interlökin-2 gama zinciri reseptörü (NSG) faresini kullanmaktır8. Bu NSG konakçılarının immün yetmezlikli doğası, insan hematopoetik hücrelerinin, hasta kaynaklı kanserlerin ve cildin 8,9,10 transplantasyonuna izin verir. Bu immünsüpresif konakçı ortama rağmen, anti-GR1 uygulaması ile fare nötrofilik immün yanıtlarının daha fazla baskılanması greft başarısı için gereklidir10. Sağlam doku naklinde başlıca engeller enfeksiyon, reddetme ve greftten kan akışını yeniden kurmada zorluktur, bazen dermal ve epidermal bütünlüğün kaybına yol açar11. Anti-FR1 uygulaması ve uygun greft derinliğinin kullanımını içeren teknikler greft sağkalımını iyileştirir10. Titiz optimizasyon, NSG fareleri üzerinde% 90 ila% 100 arasında değişen yüksek verimlilik ve hayatta kalma oranları ile insan ksenograft cilt nakillerinin gerçekleştirilmesini mümkün kılar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>SF100-20</td>
			<td>Fixative for histology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3M Vetbond Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>1469SB</td>
			<td>surgical glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 700 CD45 monoclonal antibody (Clone 30F11)</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>56-0451-82</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GR1 clone RB6-8C5</td>
			<td>BioXcell</td>
			<td>BE0075</td>
			<td>Anti-rejection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC mouse anti-human CD25&#160; (Clone 2A3)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>340939</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-eFluor 780 anti-human HLA-DR (Clone LN3)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>47-9956-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave pouches</td>
			<td>VWR&#160;</td>
			<td>89140-800</td>
			<td>For autoclaving tools and paper towels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 60 anti-human CD4 antibody (Clone OKT4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317438</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 65 anti-human CD8a antibody (Clone RPA-T8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>301042</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Violet 711 anti-human CD3 antibody (Clone OKT3)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317328</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex 0.3 mg/mL</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>059122</td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen 50 mg/mL</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>NADA # 141-199</td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>4188</td>
			<td>Skin digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D42 Dermatome blade</td>
			<td>Humeca</td>
			<td>5.D42BL10</td>
			<td>dermatome (1 blade per sample)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dermatome D42</td>
			<td>Humeca</td>
			<td>4.D42</td>
			<td>dermatome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpel</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>371610</td>
			<td>skin preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting T-Pins; 1-1/2 inch, 1000/CS 1.5</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-10915-03</td>
			<td>To pin skin specimen for dermatome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors</td>
			<td>medicon</td>
			<td>02.04.10</td>
			<td>sample preparation and mouse dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DN25-1G</td>
			<td>Skin digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eBioscience Foxp3 / Transcription Factor Fixation/Permeabilization Concentrate and Diluent</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-5521-00</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Cell Fixation and Permeabilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eFluor-450 FOXP3 monoclonal antibody (Clone PCH101)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-4776-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td>Kent</td>
			<td>CL8787-KIT</td>
			<td>hair removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia&#160;Shandon Instant Eosin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6765040</td>
			<td>H&#38;E</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia&#160;Shandon Instant Hematoxylin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6765015</td>
			<td>H&#38;E</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD45 (Clone HI30)</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>35-0459-T100</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps&#160;</td>
			<td>medicon</td>
			<td>07.60.07</td>
			<td>sample preparation and mouse dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td>Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating lamp</td>
			<td>Morganville Scientific</td>
			<td>HL0100</td>
			<td>Post-surgical care</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pads 4&#34; x 10&#34;</td>
			<td>Pristech</td>
			<td>20415</td>
			<td>Surgical heat supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin 1cc 12.7 mm syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329410</td>
			<td>drug administration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>United States Pharmacopeia (USP)&#160;</td>
			<td>NDC 66794-013-25</td>
			<td>Anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane machine</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>911103</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair for Men</td>
			<td>Nair</td>
			<td>&#8206; 10022600588556</td>
			<td>hair removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin and Polymyxin Bisulfates and Bacitracin Zinc Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>&#160;NDC 17478-235-35</td>
			<td>eye ointment to prevent drying</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>005557</td>
			<td>Mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Kleenex</td>
			<td>100848</td>
			<td>May be autoclaved for sterile surfaces</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>Semitransparent sealing film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE mouse anti-human CD127 (Clone HIL-7R-M21)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557938</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Surface protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy-7 mouse anti-Ki-67 (Clone B56)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561283</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-eFluor-710 CD152 (CTLA-4) monoclonal antibody (Clone 14D3)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>46-1529-42</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permeabilization Buffer 10x</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-8333-56</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Intracellular protein staining buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish 150 mm</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430597</td>
			<td>Sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Wrap</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-305-654</td>
			<td>Site preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Providone-Iodine Swab stick</td>
			<td>PDI</td>
			<td>S41350</td>
			<td>Site sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft-Feed and Oral Hydration (Napa Nectar)</td>
			<td>Se Lab Group Inc</td>
			<td>NC9066511&#160;</td>
			<td>For supplementing poorly recovering mice post-surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen Collection Cups</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-150-266</td>
			<td>sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile alcohol prep pad</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td>skin preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Media for sample storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-4888-02</td>
			<td>For drug dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film 4&#8221; x 43/4&#8221;&#160;</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626</td>
			<td>transparent film wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline Petrolatum Gauze 3&#8221; x 8&#8221;&#160;</td>
			<td>Kendall</td>
			<td>414600</td>
			<td>wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Violet 510 Ghost Dye&#160;</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>13-0870-T100</td>
			<td>Flow cytometry analysis: Viability dye</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

xenograft skin model to manipulate human immune responses in vivo

İnsan donör derisinin immün yetmezlikli bir fare konağına nakledildiği insan derisi ksenograft modeli, cilt immünolojisinde translasyonel araştırmalar için önemli bir seçenektir. Murin ve insan derisi anatomi ve bağışıklık hücresi kompozisyonunda önemli ölçüde farklılık gösterir. Bu nedenle, geleneksel fare modellerinin dermatolojik araştırma ve ilaç keşfi için sınırlamaları vardır. Bununla birlikte, başarılı ksenotransplantasyonlar teknik olarak zordur ve greft ve konakçı sağkalımı için optimal numune ve fare greft bölgesi hazırlığı gerektirir. Mevcut protokol, insan derisinin farelere nakli için optimize edilmiş bir teknik sağlar ve aşağı akış deneysel amaçları için gerekli hususları tartışır. Bu rapor, bir insan donör cilt örneğinin uygun şekilde hazırlanmasını, cerrahi bir kurulumun montajını, fare ve cerrahi alan hazırlığını, cilt naklini ve cerrahi sonrası izlemeyi açıklamaktadır. Bu yöntemlere bağlılık, ksenogreftlerin ameliyat sonrası 6 haftadan fazla bir süre boyunca sürdürülmesini sağlar. Aşağıda özetlenen teknikler, mühendislik kontrollerinin, steril tekniğin ve ameliyat öncesi ve sonrası şartlandırmanın geliştirilmesi nedeniyle maksimum aşılama verimliliğine izin vermektedir. Ksenograft modelinin uygun performansı, insan derisinin deneysel karakterizasyonu ve bileşiklerin in vivo klinik öncesi testleri için uzun ömürlü insan derisi greft örnekleri ile sonuçlanır.

İnsan derisi ksenogreftleri, süper bariyerli bir hayvan tesisinde NSG fareleri üzerinde gerçekleştirildi. Başarı, nakil sonrası farelerin uzun süreli greft ve fare sağkalımı ve davranışsal sağlığı ile tanımlanmıştır. Ameliyatı takip eden hafta boyunca zayıf sağkalım başlangıçta deneysel başarının önündeki en büyük engel olarak gözlendi ve farelerin% 50'sine kadarı ötenazi gerektiriyordu. Steril tekniğin iyileştirilmesi ve ameliyat sırasında ve hemen sonrasında fare vücut ısı...

Watch this Scientific Journal Video about Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo at JoVE.com

Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo

Mevcut protokol, insan derisinin obez olmayan diyabetik (NOD)-scid interlökin-2 gama zinciri reseptörü (NSG) farelere nasıl aşılanacağını açıklamaktadır. Nakil için insan derisinin hazırlanması, nakil için farelerin hazırlanması, bölünmüş kalınlıkta insan derisinin nakli ve nakil sonrası iyileşme prosedürünün ayrıntılı bir açıklaması raporda yer almaktadır.

İnsan Bağışıklık Tepkilerini In Vivo'da Manipüle Etmek için Ksenograft Cilt Modeli

The human skin xenograft model, in which human donor skin is transplanted onto an immunodeficient mouse host, is an important option for translational ...

İnsan dokularında immün ve immün olmayan yolakların in vivo manipülasyonu için önemli bir araç olan insan ksenograft deri nakli modeli için gerekli teknikleri ana hatlarıyla belirtiyoruz. Bu teknik, insan derisi fizyolojisini in vitro yöntemlerden daha iyi özetler ve in vivo klinik öncesi deneysel manipülasyona izin verir. Ksenograft deri nakilleri, in vivo insan derisi iltihabını hedef alan bileşiklerin klinik öncesi testleri için kullanılabilir.Bandaj fareleri özellikle zor olabilir, bu nedenle ameliyatları gerçekleştirmeden önce bandaj işlemini sağlıklı anestezi uygulanan farelerde uygulamanızı tavsiye ederiz. Başlamak için, insan derisi örneğini sterilize edilmiş bir diseksiyon tahtası üzerinde sterilize edilmiş bir negatif basınçlı doku kültürü davlumbazında dermatome hazırlayın. Cilt örneğini epidermis tarafı yukarı bakacak şekilde diseksiyon tahtasına yerleştirin ve epidermisi steril bir alkol hazırlama pedi ve ardından PBS ile silin.Şimdi cildin daha yakın kenarını sabitlemek için 1,5 inçlik bir diseksiyon T pimi kullanın. Daha sonra cilt örneğini 400 mikrometre kalınlığında dermatom yapın ve 30 ila 45 derecelik bir açıyla ileri doğru keserken sabit basınç uygulayın. Petri kabının altına steril PBS'ye batırılmış steril bir gazlı bez yerleştirin ve epidermis tarafı yukarı doğru olan cildi ıslak gazlı bezin üzerine yerleştirin.Numunenin kirlenmediğinden emin olmak için plaka kenarlarını yarı şeffaf bir sızdırmazlık filmi ile kapatın ve örtün ve aşılamadan önce numuneyi dört santigrat derecede saklayın. Steril aletleri ve cerrahi istasyonu aşılama için hazırlayın ve otoklavlanmış kağıt havluları alet ve fare yerleştirme için steril yüzeyler olarak kullanın. Anestezi indüksiyonundan sonra, fareyi bir ısıtma yastığına veya başka bir ısı kaynağına aktarın ve eldivenli bir parmakla göze küçük bir damla merhem sürerek oftalmik merhemi uygulayın.Cildi sıkıştırın ve deri altından analjezikleri vücuda paralel bir açıyla enjekte edin. Fareyi kuyruğundan kaldırdıktan sonra, karnı açığa çıkarın ve bir mililitrelik insülin şırıngası kullanarak intraperitoneal olarak 100 mikrolitre anti-Gr1 başına 100 mikrogram enjekte edin. Ardından, farenin sırt tarafının orta ve üst kısımlarını tıraş etmek için hayvan için güvenli elektrikli makaslar kullanın.Tüm tüyleri temizledikten sonra, tıraş olmuş cilde bol miktarda epilasyon merhemi uygulayın. 30 saniye ila bir dakika bekleyin, ardından epilasyon merhemini bir kağıt havlu ve PBS ile tamamen silin. Fareyi cerrahi istasyona aktardıktan sonra, ameliyat alanını sterilize edin ve farenin üzerine steril bir plastik sargı yerleştirin.Plastiğin içindeki pencereyi, aşılanacak alanın boyutundan biraz daha büyük olarak kesin. Forseps arka tarafı ile donör derisini sıkıca yerinde tutun ve forsepslerin yanına neşterle aşılanmak üzere donör derisinin 10 x 10 milimetre boyutunda dikdörtgen şeklinde bir kısmını kesin. Fasyanın derinliklerini kesmemek için cildi vücuttan uzaklaştırın.Bir greft yatağı oluşturmak için, donör cilt parçasının boyutuna uyan dikdörtgen bir fare derisi alanını kesin. Daha sonra donör deri parçasını epidermis tarafı yukarı doğru hazırlanan greft yatağına yerleştirin. Forsepslerin arkasını kullanarak, donör cilt greft yatağına karşı tamamen düz durana kadar ileri geri kayan cildi manipüle edin.Donör cildinin fare derisiyle buluştuğu yere cerrahi tutkal dokusu yapışkan damlaları ekleyin ve fare ve donör cildini forseps ile bir ila iki saniye boyunca tutun, böylece yapıştırıcı dokulara yapışır. Greftin kenarını tamamen kapatın ve yapıştırıcının iyice kurumasını bekleyin. Daha sonra, greft bölgesini tamamen kaplayacak kadar büyük petrolatum gazlı bezi kesin.Grefti petrolatum gazlı bezle örtün ve forseps kullanarak gazlı bezi cilde hafifçe bastırın. Şeffaf bir film pansuman şeridini uzunlamasına kesin, böylece genişlik farenin yarasını örtecek kadar büyük olur. Şeffaf film pansumanı, yapışkan tarafı aşağı bakacak şekilde gazlı bezin üzerine sıkıca bastırın.Pansumanı gövdenin etrafına tamamen sarmak için fareyi hızlı bir şekilde yuvarlayın, solunumu engellemeden sıkıca oturduğundan ve tüm uzuvların hareket için serbest olduğundan emin olun. Fareyi bir kurtarma kafesine yerleştirdikten sonra, uyanık olana ve hareket edene kadar izleyin. İyileşmeyi takiben en az 15 dakika boyunca kafesin bir kısmında bir ısı kaynağı sağlayın.Transplantasyondan 10 ila 21 gün sonra greftlerin analizi, greftin donörün cildinin farenin derisiyle buluştuğu kenarların etrafında yapışkan kaldığını ve greftin sağlıklı insan derisinden daha kalın ve daha iltihaplı kaldığını göstermiştir. Akış sitometrisi ile yapılan analiz, çoğu greftte insan bağışıklık hücrelerinin sürekli varlığını ortaya koydu, ancak sayımlar ksenogreftler arasında değişiyordu. Başarılı greft, insan bağışıklık hücrelerini korudu.Bununla birlikte, donör dokunun devam eden bağlılığına ve sağkalımına rağmen, insan bağışıklık hücrelerini koruyamayan greftler başarısız kabul edilir. 35 gün sonra greftin hematoksilin ve eozin boyalı bölümlerinin analizinde sağlam epidermis saptandı ve dermis, soluk sinsityal sitoplazma ve dağınık lenfositlere sahip dolgun oval fibroblastlardan oluşan orta derecede hücreseldir. 50 gün sonra greftin analizi, sağlam epidermis ve oval fibroblastlar içeren dermis ve biraz artmış hücre dışı matriks birikimi ile benzer sonuçlar göstermiştir.Başarılı deri ksenogreftleri, deri örneklerinin uygun şekilde hazırlanmasına, anti-Gr1 uygulaması ile fare nötrofilik immün yanıtlarının baskılanmasına, aseptik kemirgen cerrahisi yöntemlerine uyulmasına ve farelerin güvenli bandajına dayanır. İnsan ksenograft cilt nakli modeli, araştırmacıların bozulmamış organdaki insan bağışıklık tepkilerini in vivo olarak incelemelerine izin vererek translasyonel araştırmalar için yeni bir yol sağlar.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses In Vivo

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo</emTümör Bağışıklık Yanıtları> Tümör Görüntüleme ve İzleme

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Seven Steps to Stellate Cells

Hücreler stellat Yedi Adımda

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Ile Enfekte Fare Bakteriyel Yük ve Bağışıklık Yanıtları Ölçüm Listeria monocytogenes</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Farelerde allojenik CD4 + T hücre Cevapları Eğitim için Kuyruk Cilt Nakli

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Fenotipik Analizi ve İnsan Cilt lenfosit izolasyonu<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Hücre Kültürü

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

Bir<em&gt; İn Vitro</em&gt; HIV Co-enfeksiyon Bağlamında Sıtma için Bağışıklık Yanıtları Ölçüm Modeli

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

Using Zebrafish Models of Human Influenza A Virus Infections to Screen Antiviral Drugs and Characterize Host Immune Cell Responses

İnsan İnfluenza A Virüs Enfeksiyonları Zebra balığı Modeller Kullanılarak Antiviral İlaçlar Ekran ve Host Bağışıklık Hücre Yanıtları karakterize etmek

Each year, seasonal influenza outbreaks profoundly affect societies worldwide. In spite of global efforts, influenza remains an intractable healthcare ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Salmonella typhimuriumyalıtım-makrofajlar üzerinden Phagosomes içeren

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

İnsan T-hücre hatırlama yanıt Vivo içinde çalışmaya emme Blister iletişim kuralı

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...