Name: a novel high-throughput ex vivo ovine skin wound model for testing emerging antibiotics
Uploaded: 2022-09-16T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics at JoVE.com

Die Autoren danken EPSRC (EP/R513313/1) für die Förderung. Die Autoren danken auch R.B. Elliot und Son Abattoir in Calow, Chesterfield, für die Bereitstellung von Lämmerköpfen und für ihr Entgegenkommen in den frühen Phasen des Projekts, Kasia Emery für ihre Unterstützung bei der Entwicklung dieses Protokolls und Fiona Wright von der Abteilung für Infektion, Immunität und Herz-Kreislauf-Erkrankungen an der Universität Sheffield für die Verarbeitung der histologischen Proben und ihre unglaubliche Hilfe während dieses Projekts.

Lämmerköpfe aus dem Schlachthof R.B. Elliott und Son wurden in diesem Projekt als Quelle für Hautproben verwendet. Alle Lämmer wurden für den Verzehr als Lebensmittel geschlachtet. Anstatt die Köpfe wegzuwerfen, wurden diese für die Forschung wiederverwendet. Eine ethische Genehmigung war nicht erforderlich, da das Gewebe aus Abfällen stammte, die von Schlachthöfen weggeworfen wurden.
1. Sterilisation
<ol><li>Desinfizieren Sie die Pinzette vor dem Sammeln der Köpfe...

<ol>
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Die Entwicklung antimikrobieller Mittel ist ein wichtiges, aber teures Unterfangen, das schätzungsweise rund 1 Milliarde US-Dollar kostet und etwa 15 Jahre in Anspruch nimmt. Über 90 % der antimikrobiellen Wirkstoffforschung und präklinischen Studien zur Wirksamkeit antimikrobieller Arzneimittel werden von akademischen Forschern und kleinen und mittleren Unternehmen mit typischerweise weniger als 50 Mitarbeitern durchgeführt22. Diese Teams sind finanziell sehr eingeschränkt, was das Versagen ...

Hautinfektionen sind ein wichtiges globales Problem mit hohen wirtschaftlichen Kosten für Gesundheitsdienstleister auf der ganzen Welt. Die Entwicklung von Multidrug-Resistenzen und Biofilmbildung durch Krankheitserreger spielt eine Schlüsselrolle bei der Prävalenz nicht heilender Wunden 1,2,3,4. Infolgedessen sind Haut- und Weichteilinfektionen einer der häufigsten Gründe für einen längeren Krankenhausaufenthalt und eine anschließende Wiederaufnahme5. Verzögerungen bei der Wundheilung sind sowohl für den Patienten als auch für die Gesundheitsdienstleister kostspielig, wobei einige Schätzungen darauf hindeuten, dass in den USA jährlich rund 6,5 Millionen Patienten betroffen sind. In Großbritannien führen Hautinfektionen und damit verbundene Komplikationen jährlich zu etwa 75.000 Todesfällen 2,4,6.
Staphylococcus aureus (S. aureus) ist ein gewaltiger Wunderreger, der häufig aus Patientenwunden isoliertwird 2,7. Die Rate der Entstehung von Multidrug-Resistenzen stieg in den 2000er Jahren drastisch an. Während dieser Zeit waren etwa 60% der akuten bakteriellen Haut- und Hautstrukturinfektionen kulturpositiv für Methicillin-resistente S. aureus1. Die zunehmende Anzahl multiresistenter Stämme unter Staphylokokken und anderen Krankheitserregern in den letzten 2 Jahrzehnten weist auf einen dringenden Bedarf an der schnellen Entwicklung von Antibiotika mit neuen Wirkmechanismen hin, die Resistenzen überwinden können.
Seit Anfang der 2000er Jahre werden Antibiotika-Forschungsprogramme jedoch von längeren Entwicklungszeiten und niedrigen Erfolgsraten dominiert, wobei nur 17% der neuartigen Antibiotika in klinischen Studien in den USA dieMarktzulassung erhalten 8. Dies deutet auf eine Diskrepanz zwischen den Ergebnissen von In-vitro-Tests neuer Antibiotika und ihren klinischen Ergebnissen hin. Es kann argumentiert werden, dass diese Diskrepanz weitgehend auf Unterschiede in der bakteriellen Physiologie während Infektionen in vivo und während konventioneller mikrobiologischer Methoden bei der Prüfung der Wirksamkeit von Antibiotika in den präklinischen In-vitro-Stadien zurückzuführen ist. Daher sind neuartige Labormethoden erforderlich, die repräsentativer für die bakterielle Physiologie während der Infektion sind, um die Erfolgsraten in Antibiotika-Forschungsprogrammen zu verbessern.
Aktuelle Methoden zur Untersuchung von Hautinfektionen umfassen Studien an lebenden Tieren (z. B. Mäuse), Ex-vivo-Hautmodelle (z. B. Schweine) und 3D-Tissue-Engineering-Hautmodelle (z. B. Mensch)9,10,11,12. Studien an lebenden Tieren sind streng reguliert und haben einen relativ geringen Durchsatz. In Tiermodellen verursachen Verletzungen und Infektionen erhebliche Belastungen für die Tiere und werfen ethische Bedenken auf. Menschliche Hautmodelle, ex vivo oder Tissue-Engineering, erfordern eine ethische Genehmigung, die Einhaltung lokaler und globaler Gesetze (das Human Tissue Act, die Deklaration von Helsinki), und es gibt Schwierigkeiten beim Erwerb von Geweben, wobei einige Anfragen Jahre dauern, um13,14 zu erfüllen. Beide Modelltypen sind arbeitsintensiv und erfordern erhebliches Fachwissen, um den experimentellen Erfolg zu gewährleisten. Einige aktuelle Ex-vivo-Hautinfektionsmodelle erfordern vorgeimpfte Bandscheiben und Zusatzstoffe für das Wundbett, um eine Infektion zu ermöglichen. Obwohl diese Modelle unglaublich nützlich sind, gibt es Einschränkungen im Infektionsprozess, da Zusatzstoffe die Nutzung des Wundbettes als Nährstoffquelle einschränken10,15,16,17. Das in dieser Studie beschriebene Modell verwendet keine Zusatzstoffe für das Wundbett, was sicherstellt, dass die Pathologie der Infektion und die Anzahl der lebensfähigen Zellen das Ergebnis der direkten Nutzung des Wundbetts als einzige Nährstoffquelle sind.
Angesichts des Bedarfs an neuen Labormethoden wurde ein neuartiges Ex-vivo-Modell von Hautinfektionen mit hohem Durchsatz entwickelt, das zur Bewertung der Wirksamkeit neuer Antibiotika verwendet werden soll. Hautinfektionsstudien stehen vor vielen Herausforderungen - hohe Kosten, ethische Bedenken und Modelle, die kein vollständiges Bild zeigen20,21. Ex-vivo-Modelle und 3D-Explantatmodelle ermöglichen eine bessere Visualisierung des Krankheitsprozesses und der Auswirkungen, die Behandlungen von einem klinisch relevanteren Modell haben können. Hier wird der Aufbau eines neuartigen Schafhautmodells beschrieben, das einfach, reproduzierbar und klinisch relevant ist und einen hohen Durchsatz aufweist. Schafhaut wurde ausgewählt, da Schafe eines der großen Säugetiere sind, die üblicherweise verwendet werden, um Reaktionen auf Infektionen in vivo zu modellieren. Darüber hinaus sind sie in Schlachthöfen leicht erhältlich, um eine stetige Versorgung mit Haut für die Forschung zu gewährleisten, und ihre Kadaver werden nicht verbrüht, was eine gute Gewebequalität gewährleistet. Diese Studie verwendete S. aureus als exemplarischen Erreger; Das Modell funktioniert jedoch gut mit anderen Mikroorganismen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 Well Companion Plate</td>
			<td>SLS&#160;</td>
			<td>353504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm Biopsy Punch</td>
			<td>Williams Medical</td>
			<td>D7484</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>10788561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8 mm Biopsy Punch</td>
			<td>Williams Medical</td>
			<td>D7488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B solution, sterile</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>A2942</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colour Pro Style Cordless Hair Clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9639-2117X</td>
			<td>Hair Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual Oven Incubator</td>
			<td>SLS</td>
			<td>OVe1020</td>
			<td>Sterilising oven</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal growth factor&#160;</td>
			<td>SLS</td>
			<td>E5036-200UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>458600-2.5L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F12 HAM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N4888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal bovine serum&#160;</td>
			<td>Labtech International</td>
			<td>CA-115/500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15307805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Removal Cream</td>
			<td>Veet</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heracell VIOS 160i</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>15373212&#160;</td>
			<td>Tissue culture incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraeus Megafuge 16R</td>
			<td>VWR</td>
			<td>521-2242</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer 220, Handheld</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15575809</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer 220, plastic blending cones</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>15585819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insert Individual 24 well 0.4um membrane</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>353095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin, recombinant Human</td>
			<td>SLS</td>
			<td>91077C-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199 (MK media)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M0393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate, cell culture Costar 96 well</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10687551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multitron</td>
			<td>Infors</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>Bacterial incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS tablets</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>P4417-100TAB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>SLS&#160;</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate seals</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>ESI-B-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe 2020</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1284804</td>
			<td>Class II microbiology safety cabinet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade number 15</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>O305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Swann Morton</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11849002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed Allis Tissue Forceps</td>
			<td>Rocialle</td>
			<td>RSPU500-322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Agar</td>
			<td>Merck Life Science UK Limited</td>
			<td>14432-500G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Broth</td>
			<td>Merck Life Science UK Limited</td>
			<td>41298-500G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimoba Tablets</td>
			<td>Quip Labs</td>
			<td>VMTAB75BX</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel high-throughput ex vivo ovine skin wound model for testing emerging antibiotics

Die Entwicklung antimikrobieller Mittel ist ein teurer Prozess mit immer niedrigeren Erfolgsraten, was weitere Investitionen in die Erforschung antimikrobieller Wirkstoffe weniger attraktiv macht. Die Entdeckung antimikrobieller Wirkstoffe und die anschließende Kommerzialisierung können lukrativer gestaltet werden, wenn ein Fail-Fast-and-Fail-Cheap-Ansatz innerhalb der Lead-Optimierungsphasen implementiert werden kann, in denen Forscher eine größere Kontrolle über das Design und die Formulierung von Arzneimitteln haben. In diesem Artikel wird der Aufbau eines ex vivo mit Staphylococcus aureus infizierten Modells für verwundete Schafe beschrieben, das einfach, kostengünstig, durchsatzfähig und reproduzierbar ist. Die bakterielle Physiologie im Modell ahmt nach, dass während der Infektion die bakterielle Proliferation von der Fähigkeit des Erregers abhängt, das Gewebe zu schädigen. Die Etablierung einer Wundinfektion wird durch eine Erhöhung der lebensfähigen Bakterienzahlen im Vergleich zum Inokulum verifiziert. Dieses Modell kann als Plattform verwendet werden, um die Wirksamkeit neuer antimikrobieller Mittel in der Phase der Leitoptimierung zu testen. Es kann behauptet werden, dass die Verfügbarkeit dieses Modells Forschern, die antimikrobielle Mittel entwickeln, ein Fail-Fast-and-Fail-Cheap-Modell bieten wird, das dazu beitragen wird, die Erfolgsraten in nachfolgenden Tierversuchen zu erhöhen. Das Modell wird auch die Reduzierung und Verfeinerung der Verwendung von Tieren für die Forschung erleichtern und letztendlich eine schnellere und kostengünstigere Übertragung neuartiger antimikrobieller Mittel für Haut- und Weichteilinfektionen in die Klinik ermöglichen.

Die Identifizierung eines Weges zur Sterilisation der Haut vor der Einrichtung des Wundinfektionsmodells war eine Herausforderung. Die Herausforderung bestand darin, die Haut zu sterilisieren, ohne die verschiedenen Hautschichten zu beschädigen, was dann unbeabsichtigte Folgen für den Ausgang einer Infektion haben kann. Um ein geeignetes Sterilisationsregime zu identifizieren, wurden verschiedene Behandlungen über unterschiedliche Zeiträume ausprobiert, wie in Tabelle 1 dargestellt. Die Kontamination...

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A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics

Das Protokoll beschreibt eine Schritt-für-Schritt-Methode zum Aufbau eines Ex-vivo-Modells für verwundete Haut von Schafen, die mit Staphylococcus aureus infiziert sind. Dieses Hochdurchsatzmodell simuliert Infektionen in vivo im Vergleich zu herkömmlichen mikrobiologischen Techniken besser und bietet Forschern eine physiologisch relevante Plattform, um die Wirksamkeit neuer antimikrobieller Mittel zu testen.

Ein neuartiges Ex-vivo-Modell für Schafhaut mit hohem Durchsatz zum Testen neuer Antibiotika

The development of antimicrobials is an expensive process with increasingly low success rates, which makes further investment in antimicrobial discovery ...

Dieses Modell wird es den Forschern in den kritischen präklinischen Stadien ermöglichen, die antimikrobielle Wirksamkeit neuartiger Formulierungen genauer zu bestimmen, und gibt den Forschern eine größere Kontrolle über das Design und die Formulierung von Arzneimitteln. Dieses Modell ermöglicht schnell reproduzierbare Ergebnisse in einer repräsentativen Wundumgebung. Es reduziert den Bedarf an speziell gezüchteten Tieren und erleichtert die schnellere Translation von topischen antimikrobiellen Mitteln für Wundinfektionen in die Klinik.Die größten Herausforderungen sind Verunreinigung und Geschicklichkeit. Eine strenge aseptische Technik und Geduld bei der Gewebeaufbereitung sind unerlässlich; für den Erfolg dieser Methode ist eine präzise und zielgerichtete Lappenentfernung erforderlich. Beginnen Sie mit der Desinfektion der Pinzetten, indem Sie sie eine Stunde lang einer trockenen Hitzesterilisation bei 200 Grad Celsius aussetzen.Autoklavieren Sie alle Glaswaren vor Gebrauch 15 Minuten lang bei 121 Grad Celsius. Desinfizieren Sie den Stirnteil der Lampe, indem Sie ca. 100 Milliliter 200 PPM Chlordioxidlösung auf die Probenfläche gießen. Rasieren Sie den Stirnteil mit elektrischen Haarschneidern, gefolgt von einer Wäsche mit 200 Milliliter 200 PPM Chlordioxidlösung.Wischen Sie den Bereich mit Ethanol und einer blauen Rolle ab und bedecken Sie den Probenbereich mit einer Haarentfernungscreme. Nach 35 Minuten die Haarentfernungscreme mit einem Schabenwerkzeug vorsichtig abkratzen und den Probenbereich beurteilen. Wiederholen Sie den Haarentfernungsvorgang, wenn eine signifikante Menge an Haaren übrig bleibt.Spülen Sie den sauberen Probenbereich mit 200 Milliliter Chlordioxidlösung, gefolgt von Ethanol und einer blauen Rolle. Verwenden Sie einen sterilen Acht-Millimeter-Biopsiestempel, um eine acht Millimeter große Hautprobe aus dem vorbereiteten Bereich herauszuschneiden. Entfernen Sie dann die Probe mit einer sterilen Pinzette und dem Klingenskalpell Nr. 15, um sicherzustellen, dass das gesamte Hautfett entfernt wird.Legen Sie die Proben in ein steriles 0,5-Liter-Glas, das mit sterilem PBS gefüllt ist. Dann werden sie in sterile 50-Milliliter-Röhrchen überführt, die mit 50 Milliliter 200 PPM Chlordioxidlösung gefüllt sind. Drehen Sie das Röhrchen zweimal um und lassen Sie es 30 Minuten sterilisieren.Die Proben werden in ein 50-Milliliter-Röhrchen überführt, das mit 40 Milliliter sterilem PBS gefüllt ist. Nach dem PBS-Waschen legen Sie jede Hautprobe in eine separate Vertiefung einer 24-Well-Platte. Fügen Sie 350 Mikroliter des vorgewärmten Mediums in eine Vertiefung hinzu, während die Probe an der Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche gehalten wird.Versiegeln Sie die 24-Well-Platten mit einer gasdurchlässigen Plattendichtung, bevor Sie die Platte zur Inkubation in einen befeuchteten Gewebeinkubator bei 5% Kohlendioxid und 37 Grad Celsius für 24 Stunden legen. Entfernen Sie nach der Inkubation das Kulturmedium und spülen Sie die Proben in 500 Mikrolitern sterilem PBS aus. Entfernen Sie die restlichen Antibiotika aus der Probe, indem Sie sie 24 Stunden lang mit antibiotikafreien Medien bei 5% Kohlendioxid und 37 Grad Celsius behandeln.Wenn sich Trübung oder Pilzinfektion im antibiotikafreien Medium entwickelt, verwerfen Sie die Probe. Als nächstes bereiten Sie ein 50-Milliliter-Röhrchen mit 10 Milliliter steriler Tryptose-Sojabrühe vor. Dann mehrere Staphylococcus aureus-Kolonien von einer frischen Agarplatte S.aureus in die Brühe geben und das Röhrchen bei 37 Grad Celsius und 150 U/min für 18 Stunden inkubieren.Nach dem Zentrifugieren der Röhrchen bei 4.000 G für drei Minuten den Überstand entfernen und das Zellpellet in 10 Milliliter sterilem PBS resuspendieren. Wiederholen Sie die PBS-Wäsche zweimal, bevor Sie das Inokulum mit sterilem PBS auf 0,6 optische Dichte bei 600 Nanometerwellenlängen einstellen. Bestätigen Sie die Inokulumbelastung durch eine manuelle realisierbare Keimzahl.Um die Hautprobe zu infizieren, bereiten Sie eine frische 24-Well-Platte mit 400 Mikrolitern vorgewärmtem antibiotikafreiem Medium vor und fügen Sie die 24 Well-Einsätze mit sterilen Pinzetten hinzu. Entfernen Sie die Medien von den Hautproben. Waschen Sie sie mit 500 Mikrolitern sterilem PBS und entfernen Sie die Wäsche.Verwenden Sie eine sterile Pinzette, um die Probe vorsichtig am Boden der Vertiefung zu halten. Verwenden Sie eine Vier-Millimeter-Stanzbiopsie, um die Hautprobe bis zu einer rauen Tiefe von ein bis zwei Millimetern zu durchdringen und einen zentralen Wundlappen zu machen. Verwenden Sie dann ein Klingenskalpell Nummer 15 und steril gezahnte Allis-Gewebezangen, um die oberste Schicht des Wundlappens zu entfernen.Sobald alle Proben verwundet sind, werden sie mit einer sterilen Pinzette in die 24 Brunneneinsätze überführt. Pipettieren Sie 15 Mikroliter des bakteriellen Inokulums in das Wundbett, bevor sie 24 Stunden bei 37 Grad Celsius in einem befeuchteten Gewebeinkubator inkubiert werden. Für längere Inkubationszeiten entfernen Sie das Medium, ersetzen Sie es alle 24 Stunden durch frisches Medium und inkubieren Sie die Platten unter den gleichen Bedingungen.Um die Bakterienbelastung zu bestimmen, entfernen Sie das Medium vom Boden der Vertiefungen. Und mit sterilen Pinzetten wird jede Probe in ein separates 50-Milliliter-Röhrchen überführt, das mit einem Milliliter sterilem PBS gefüllt ist. Lösen Sie dann die Bakterien von der Oberfläche des Wundbettes, indem Sie die Probenoberfläche mit einem feinspitzen Homogenisator homogenisieren.Stellen Sie sicher, dass das Wundbett in direktem Kontakt mit der Spitze des Homogenisators steht. Sobald alle Proben verarbeitet sind, wird jede Probe durchgewirbelt, bevor 20 Mikroliter Homogenat in die entsprechende Vertiefung einer 96-Well-Platte mit 180 Mikrolitern sterilem PBS überführt werden. Jedes Probenhomogenat wird nacheinander auf 1 mal 10 bis negativ 7 verdünnt und 10 Mikroliter des verdünnten Homogenats auf eine Tryptose-Soja-Agar-Platte in dreifacher Ausfertigung pipettiert.Inkubieren Sie die Tryptose-Soja-Agar-Platte bei 37 Grad Celsius und zählen Sie nach 18 Stunden die Anzahl der Kolonien, um die koloniebildenden Einheiten oder KBE für jede Probe zu bestimmen. Ein geeignetes Hautsterilisationsregime wurde mit verschiedenen Behandlungen für unterschiedliche Zeiträume identifiziert. Die Gewebeintegrität wurde histologisch überwacht, gefolgt von einer Färbung mit Hämatoxylin und Eosin unmittelbar nach der Behandlung.Eine 30-minütige Behandlung mit Chlordioxid war die effektivste Behandlung, bei der das Hautgewebe reproduzierbar sterilisiert und gleichzeitig die Integrität des Gewebes erhalten bleibt. Ein weißer Film im Wundbett war 48 Stunden nach der Infektion auf dem Gewebe zu sehen. Obwohl das Kratzermodell nach 24 Stunden eine höhere durchschnittliche Anzahl von CFUs aufwies, führte die Klappenentfernungsverwundungstechnik zu konsistenteren Ergebnissen.Nach 48 Stunden wurden im Vergleich zum Inokulum etwa 100-mal mehr bakterielle KBE aus dem verwundeten Gewebe gewonnen, was auf eine erfolgreiche Infektion hindeutet. Gram-gefärbte histologische Schnitte des infizierten Gewebes zeigten das Vorhandensein von S.aureus-Zellen im Wundbett an, die in den Abschnitten des nicht infizierten Gewebes fehlten. Nach diesem Verfahren kann man Immunhistochemie durchführen, um die Gewebereaktion zu untersuchen, modifizierte Grammfärbung, um die bakterielle Lokalisation zu visualisieren, und lebensfähige Plattenzahlen nach antimikrobieller Exposition, um die antimikrobielle Wirksamkeit zu testen.Für die Forscher, die neuartige antimikrobielle Mittel entwickeln, wird dieses Modell eine bessere Kontrolle der Bleioptimierung ermöglichen, die Abhängigkeit von teuren und streng regulierten Tierversuchen verringern und die schnelle Übertragung antimikrobieller Mittel in die Klinik ermöglichen.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

Ein 96-well Mikrotiterplatte-basierten Methode zur Überwachung der Formation und antimykotische Empfindlichkeitsprüfung von Candida albicans Biofilme

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Forschung

Immunologie und Infektion

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

High-Throughput Nachweisverfahren für Influenza-Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolierung von menschlicher Haut für phänotypische Analyse und<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Zellkultur

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

High Throughput, Real-time, Dual-readout Testing of Intracellular Antimicrobial Activity and Eukaryotic Cell Cytotoxicity

Hoher Durchsatz, Echtzeit, Doppel-Ausleseprüfung intrazellulärer antimikrobieller Aktivität und eukaryotischen Zelle Zytotoxizität

Traditional measures of intracellular antimicrobial activity and eukaryotic cell cytotoxicity rely on endpoint assays. Such endpoint assays require ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

Eine neuartige In-vitro- Wunde heilende Assay Zellwanderung bewerten

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Eine High-Throughput-Plattform für das Screening von Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

In Vivo Bildgebung von reaktiven Sauerstoffspezies in einem Murine Wunde Modell

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Ein High-Throughput- Shigella-spezifischen bakterizide Assay

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing ...

Assessment of Acute Wound Healing using the Dorsal Subcutaneous Polyvinyl Alcohol Sponge Implantation and Excisional Tail Skin Wound Models.

Bewertung der akuten Wundheilung mit den dorsalen subkutanen Polyvinylalkoholschwammimplantation und Exzisional Tail Skin Wound Models.

Wound healing is a complex process that requires the orderly progression of inflammation, granulation tissue formation, fibrosis, and resolution. Murine ...

Establishing a Porcine Ex Vivo Cornea Model for Studying Drug Treatments against Bacterial Keratitis

Etablierung eines Porcine Ex Vivo Cornea Modells zur Untersuchung von medikamentösen Behandlungen gegen bakterielle Keratitis

When developing novel antimicrobials, the success of animal trials is dependent on accurate extrapolation of antimicrobial efficacy from in vitro tests to ...