Name: a novel high-throughput ex vivo ovine skin wound model for testing emerging antibiotics
Uploaded: 2022-09-16T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics at JoVE.com

המחברים רוצים להודות ל-EPSRC (EP/R513313/1) על המימון. המחברים רוצים להודות גם לר.ב. אליוט וסון אבטויר בקאלואו, צ'סטרפילד, על כך שסיפקו את ראשיהם של הטלאים ועל כך שהיו כל כך נעימים בשלבים המוקדמים של הפרויקט, לקסיה אמרי על תמיכתה לאורך כל פיתוח הפרוטוקול הזה, ולפיונה רייט מהמחלקה לזיהום, חסינות ומחלות לב וכלי דם באוניברסיטת שפילד על עיבוד דגימות ההיסטולוגיה ועל היותם כל כך מועילים להפליא לאורך כל הפרויקט הזה.

ראשיהם של כבשים מ-R.B אליוט וסון אבטויר שימשו כמקור לדגימות עור בפרויקט זה. כל הטלאים נשחטו לצריכה כמזון. במקום להשליך את הראשים, אלה שימשו מחדש למחקר. לא היה צורך באישור אתיקה מכיוון שהרקמה מקורה בפסולת שהושלכה מאבטוארים.
1. עיקור
<ol><li>יש לחטא מלקחיים לפני איסוף הראש...

<ol>
	<li>Claeys, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+application+of+published+risk+factors+for+methicillin-resistant+S.+aureus+in+acute+bacterial+skin+and+skin+structure+infections.">Novel application of published risk factors for methicillin-resistant S. aureus in acute bacterial skin and skin structure infections.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 51 (1), 43-46 (2018).</li><li>Rahim, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contribution+in+chronicity+of+wounds.">Bacterial contribution in chronicity of wounds.</a> Microbial Ecology. 73 (3), 710-721 (2017).</li><li>Guest, J. F., Fuller, G. W., Vowden, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Costs+and+outcomes+in+evaluating+management+of+unhealed+surgical+wounds+in+the+community+in+clinical+practice+in+the+UK:+A+cohort+study.">Costs and outcomes in evaluating management of unhealed surgical wounds in the community in clinical practice in the UK: A cohort study.</a> BMJ Open. 8 (12), 022591 (2018).</li><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+A+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: A major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair and Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li><li>Wilcox, M. H., Dryden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+the+epidemiology+of+healthcare-acquired+bacterial+infections:+Focus+on+complicated+skin+and+skin+structure+infections.">Update on the epidemiology of healthcare-acquired bacterial infections: Focus on complicated skin and skin structure infections.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 76, (2021).</li><li>Han, G., Ceilley, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+wound+healing:+A+review+of+current+management+and+treatments.">Chronic wound healing: A review of current management and treatments.</a> Advances in Therapy. 34 (3), 599-610 (2017).</li><li>Percival, S. L., Hill, K. E., Malic, S., Thomas, D. W., Williams, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+tolerance+and+the+significance+of+persister+cells+in+recalcitrant+chronic+wound+biofilms.">Antimicrobial tolerance and the significance of persister cells in recalcitrant chronic wound biofilms.</a> Wound Repair and Regeneration. 19 (1), 1-9 (2011).</li><li>Dheman, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+antibacterial+drug+development+trends+in+the+United+States,+1980-2019.">An analysis of antibacterial drug development trends in the United States, 1980-2019.</a> Clinical Infectious Diseases. 73 (11), 4444-4450 (2021).</li><li>MacNeil, S., Shepherd, J., Smith, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+tissue-engineered+skin+and+oral+mucosa+for+clinical+and+experimental+use.">Production of tissue-engineered skin and oral mucosa for clinical and experimental use.</a> Methods in Molecular Biology. 695, 129-153 (2011).</li><li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+ex+vivo+porcine+skin+explant+model+for+the+assessment+of+mature+bacterial+biofilms.">Development of a novel ex vivo porcine skin explant model for the assessment of mature bacterial biofilms.</a> Wound Repair and Regeneration. 21 (5), 704-714 (2013).</li><li>Malachowa, N., Kobayashi, S. D., Lovaglio, J., Deleo, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+skin+infection.">Mouse model of Staphylococcus aureus skin infection.</a> Methods in Molecular Biology. 1031, 109-116 (2013).</li><li>Brandenburg, K. S., Calderon, D. F., Kierski, P. R., Czuprynski, C. J., Mcanulty, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+murine+model+for+delayed+wound+healing+using+a+biological+wound+dressing+with+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms.">Novel murine model for delayed wound healing using a biological wound dressing with Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Microbial Pathogenesis. 122, 30-38 (2018).</li><li>Bledsoe, M. J., Grizzle, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+human+tissues+for+research:+What+investigators+need+to+know.">The use of human tissues for research: What investigators need to know.</a> Alternatives to Laboratory Animals. , (2022).</li><li>Danso, M. O., Berkers, T., Mieremet, A., Hausil, F., Bouwstra, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+human+skin+model+for+studying+skin+barrier+repair.">An ex vivo human skin model for studying skin barrier repair.</a> Experimental Dermatology. 24 (1), 48-54 (2015).</li><li>Torres, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+murine+skin+model+for+B.+burgdorferi+biofilm.">Ex vivo murine skin model for B. burgdorferi biofilm.</a> Antibiotics. 9 (9), 1-18 (2020).</li><li>Zhao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+wound+healing+in+diabetic+(db/db)+mice+with+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+challenge:+A+model+for+the+study+of+chronic+wounds.">Delayed wound healing in diabetic (db/db) mice with Pseudomonas aeruginosa biofilm challenge: A model for the study of chronic wounds.</a> Wound Repair and Regeneration. 18 (5), 467-477 (2010).</li><li>Schierle, C. F., Dela Garza, M., Mustoe, T. A., Galiano, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcal+biofilms+impair+wound+healing+by+delaying+reepithelialization+in+a+murine+cutaneous+wound+model.">Staphylococcal biofilms impair wound healing by delaying reepithelialization in a murine cutaneous wound model.</a> Wound Repair and Regeneration. 17 (3), 354-359 (2009).</li><li>Tr&#248;strup, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+aggravates+skin+inflammatory+response+in+BALB/c+mice+in+a+novel+chronic+wound+model.">Pseudomonas aeruginosa biofilm aggravates skin inflammatory response in BALB/c mice in a novel chronic wound model.</a> Wound Repair and Regeneration. 21 (2), 292-299 (2013).</li><li>Thompson, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+gallium+citrate+formulations+against+a+multidrug-resistant+strain+of+Klebsiella+pneumoniae+in+a+murine+wound+model+of+infection.">Evaluation of gallium citrate formulations against a multidrug-resistant strain of Klebsiella pneumoniae in a murine wound model of infection.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (10), 6484-6493 (2015).</li><li>Maboni, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+3D+skin+explant+model+to+study+anaerobic+bacterial+infection.">A novel 3D skin explant model to study anaerobic bacterial infection.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 404 (2017).</li><li>Macneil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+opportunities+for+tissue-engineered+skin.">Progress and opportunities for tissue-engineered skin.</a> Nature. 445 (7130), 874-880 (2007).</li><li>Theuretzbacher, U., Outterson, K., Engel, A., Karl&#233;n, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+preclinical+antibacterial+pipeline.">The global preclinical antibacterial pipeline.</a> Nature Reviews Microbiology. 18 (5), 275-285 (2019).</li><li>Miethke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+the+sustainable+discovery+and+development+of+new+antibiotics.">Towards the sustainable discovery and development of new antibiotics.</a> Nature Reviews Chemistry. 5 (10), 726-749 (2021).</li><li>Guedes, G. M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+situ+model+of+biofilm-associated+wounds:+Providing+a+host-like+environment+for+the+study+of+Staphylococcus+aureus+and+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms.">Ex situ model of biofilm-associated wounds: Providing a host-like environment for the study of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Journal of Applied Microbiology. 131 (3), 1487-1497 (2021).</li><li>Johnson, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmenting+the+activity+of+chlorhexidine+for+decolonization+of+Candida+auris+from+porcine+skin.">Augmenting the activity of chlorhexidine for decolonization of Candida auris from porcine skin.</a> Journal of Fungi. 7 (10), 804 (2021).</li><li>Horton, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+auris+Forms+High-Burden+Biofilms+in+Skin+Niche+Conditions+and+on+Porcine+Skin.">Candida auris Forms High-Burden Biofilms in Skin Niche Conditions and on Porcine Skin.</a> mSphere. 5 (1), 00910-00919 (2020).</li><li>Ashrafi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+biofilm+formation+on+human+skin+wound+models+and+demonstration+of+clinically+translatable+bacteria-specific+volatile+signatures.">Validation of biofilm formation on human skin wound models and demonstration of clinically translatable bacteria-specific volatile signatures.</a> Scientific Reports. 8, 1-16 (2018).</li><li>Brackman, G., Coenye, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+biofilm+wound+models+and+their+application.">In vitro and in vivo biofilm wound models and their application.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 897, 15-32 (2016).</li><li>Rumbaugh, K. P., Carty, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Models+of+Biofilm+Infection.">In Vivo Models of Biofilm Infection.</a> Biofilm Infections. , 267-290 (2011).</li><li>Boase, S., Valentine, R., Singhal, D., Tan, L. W., Wormald, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sheep+model+to+investigate+the+role+of+fungal+biofilms+in+sinusitis:+Fungal+and+bacterial+synergy.">A sheep model to investigate the role of fungal biofilms in sinusitis: Fungal and bacterial synergy.</a> International Forum of Allergy &amp; Rhinology. 1 (5), 340-347 (2011).</li><li>Williams, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+model+of+biofilm+implant-related+osteomyelitis+to+test+combination+biomaterials+using+biofilms+as+initial+inocula.">Experimental model of biofilm implant-related osteomyelitis to test combination biomaterials using biofilms as initial inocula.</a> Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 100 (7), 1888-1900 (2012).</li><li>Scheerlinck, J. P. Y., Snibson, K. J., Bowles, V. M., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomedical+applications+of+sheep+models:+From+asthma+to+vaccines.">Biomedical applications of sheep models: From asthma to vaccines.</a> Trends in Biotechnology. 26 (5), 259-266 (2008).</li><li>Metcalfe, A. D., Ferguson, M. W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering+of+replacement+skin:+The+crossroads+of+biomaterials,+wound+healing,+embryonic+development,+stem+cells+and+regeneration.">Tissue engineering of replacement skin: The crossroads of biomaterials, wound healing, embryonic development, stem cells and regeneration.</a> Journal of the Royal Society Interface. 4 (14), 413-417 (2007).</li><li>Kazemi-Darabadi, S., Sarrafzadeh-Rezaei, F., Farshid, A. A., Dalir-Naghadeh, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allogenous+skin+fibroblast+transplantation+enhances+excisional+wound+healing+following+alloxan+diabetes+in+sheep,+a+randomized+controlled+trial.">Allogenous skin fibroblast transplantation enhances excisional wound healing following alloxan diabetes in sheep, a randomized controlled trial.</a> International Journal of Surgery. 12 (8), 751-756 (2014).</li><li>Martinello, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allogeneic+mesenchymal+stem+cells+improve+the+wound+healing+process+of+sheep+skin.">Allogeneic mesenchymal stem cells improve the wound healing process of sheep skin.</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 1-9 (2018).</li><li>Roberts, C. D., Windsor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovative+pain+management+solutions+in+animals+may+provide+improved+wound+pain+reduction+during+debridement+in+humans:+An+opinion+informed+by+veterinary+literature.">Innovative pain management solutions in animals may provide improved wound pain reduction during debridement in humans: An opinion informed by veterinary literature.</a> International Wound Journal. 16 (4), 968 (2019).</li><li>Mazzone, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+and+in+utero+transplantation+of+fetal+skin+in+the+sheep+model:+A+crucial+step+towards+clinical+application+in+human+fetal+spina+bifida+repair.">Bioengineering and in utero transplantation of fetal skin in the sheep model: A crucial step towards clinical application in human fetal spina bifida repair.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 14 (1), 58-65 (2020).</li><li>Olkowska, E., Gr&#382;ini&#263;, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+models+for+dermal+exposure+assessment+of+phthalates.">Skin models for dermal exposure assessment of phthalates.</a> Chemosphere. 295, 133909 (2022).</li><li>Couto, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+quantitative+proteomics+and+substrate-based+mass+spectrometry+imaging+of+xenobiotic+metabolizing+enzymes+in+ex+vivo+human+skin+and+a+human+living+skin+equivalent+model.">Label-free quantitative proteomics and substrate-based mass spectrometry imaging of xenobiotic metabolizing enzymes in ex vivo human skin and a human living skin equivalent model.</a> Drug Metabolism and Disposition. 49 (1), 39-52 (2021).</li></ol>

פיתוח מיקרוביאלים הוא מיזם חשוב אך יקר, שעלותו מוערכת בכמיליארד דולר ונמשכת כ-15 שנה. מעל 90% מגילוי תרופות אנטי-מיקרוביאליות ומחקרים פרה-קליניים של יעילות תרופות אנטי-מיקרוביאליות מתבצעים על ידי חוקרים אקדמיים וחברות קטנות עד בינוניות עם בדרך כלל פחות מ-50 עובדים22. צוותים אלה מ?...

זיהומי עור הם נושא עולמי חשוב, עם עלויות כלכליות גדולות לספקי שירותי בריאות ברחבי העולם. הפיתוח של עמידות רב-תכליתית ויצירת ביופילם על ידי פתוגנים ממלא תפקיד מפתח בשכיחות של פצעים שאינם מחלימים 1,2,3,4. כתוצאה מכך, זיהומים בעור וברקמות רכות הם אחת הסיבות השכיחות יותר לאשפוז ממושך ולאחר מכן לאשפוז חוזר5. עיכובים בריפוי פצעים עולים ביוקר הן למטופלים והן לספקי שירותי הבריאות, כאשר חלק מההערכות גורסות כי כ-6.5 מיליון מטופלים נפגעים מדי שנה בארה"ב. בבריטניה, זיהומי עור וסיבוכים נלווים גורמים לכ-75,000 מקרי מוות בשנה 2,4,6.
סטפילוקוקוס אאורוס (S. aureus) הוא פתוגן פצע אימתני המבודד לעתים קרובות מפצעי מטופלים 2,7. קצב הופעתה של עמידות multidrug גדל באופן דרסטי בשנות ה -2000. במהלך תקופה זו, כ-60% מהזיהומים החריפים בעור ובמבנה העור היו חיוביים לתרבית עבור S. aureus1 העמיד למתיצילין. המספר ההולך וגדל של זנים עמידים למולטי-דרוג בקרב סטפילוקוקים, ואכן פתוגנים אחרים, במהלך 2 העשורים האחרונים מצביע על צורך דחוף בפיתוח מהיר של אנטיביוטיקה עם דרכי פעולה חדשות שיכולות להתגבר על עמידות.
עם זאת, מאז תחילת שנות ה-2000, תוכניות גילוי אנטיביוטיקה נשלטו על ידי זמני התפתחות ארוכים יותר ושיעורי הצלחה נמוכים, כאשר רק 17% מהאנטיביוטיקה החדשנית שנכנסה לניסויים קליניים בארה"ב השיגה אישור שוק8. זה מצביע על פער בין התוצאות של בדיקות חוץ גופיות של אנטיביוטיקה מתפתחת לבין התוצאות הקליניות שלהן. ניתן לטעון כי פער זה נובע במידה רבה מהבדלים בפיזיולוגיה של חיידקים במהלך זיהומים in vivo ובמהלך שיטות מיקרוביולוגיות קונבנציונליות בעת בדיקת היעילות של אנטיביוטיקה בשלבים הפרה-קליניים במבחנה . לכן, יש צורך בשיטות מעבדה חדשניות המייצגות יותר את הפיזיולוגיה של חיידקים במהלך ההדבקה כדי לשפר את שיעורי ההצלחה בתוכניות גילוי אנטיביוטיקה.
השיטות הנוכחיות לחקר זיהומי עור כוללות מחקרים בחיות חיות (למשל, עכברים), מודלים של עור ex vivo (למשל, חזיר), ומודלים תלת-ממדיים של עור מהונדסים על ידי רקמות (למשל, בני אדם)9,10,11,12. מחקרים בבעלי חיים חיים מוסדרים בקפדנות ובעלי תפוקה נמוכה יחסית. במודלים של בעלי חיים, פציעות וזיהומים גורמים למצוקה משמעותית לבעלי החיים ומעוררים חששות אתיים. מודלים של עור אנושי, ex vivo או מהונדסים רקמות, דורשים אישור אתי, עמידה בחקיקה מקומית ועולמית (חוק הרקמות האנושיות, הצהרת הלסינקי), ויש קושי ברכישת רקמות, כאשר חלק מהבקשות לוקחות שנים כדי למלא13,14. שני סוגי המודלים הם עתירי עבודה ודורשים מומחיות משמעותית כדי להבטיח הצלחה ניסיונית. חלק מהמודלים הנוכחיים של זיהום עור ex vivo דורשים דיסקים ותוספים מחוסנים מראש למיטת הפצע כדי לאפשר זיהום; למרות שמודלים אלה שימושיים להפליא, ישנן מגבלות בתהליך ההדבקה שכן תוספים מגבילים את השימוש במיטת הפצע כמקור תזונתי10,15,16,17. המודל המתואר במחקר זה אינו משתמש בתוספים למיטת הפצע, מה שמבטיח כי הפתולוגיה של זיהום וספירת תאים בת קיימא הם תוצאה של ניצול ישיר של מיטת הפצע כמקור ההזנה היחיד.
לאור הצורך בשיטות מעבדה חדשות, פותח מודל ex vivo ovine חדשני בעל תפוקה גבוהה של זיהומי עור לשימוש בהערכת היעילות של אנטיביוטיקה מתפתחת. מחקרים על דלקות עור מתמודדים עם אתגרים רבים - עלויות גבוהות, חששות אתיים ומודלים שאינם מראים תמונה מלאה20,21. מודלים של Ex vivo ומודלים תלת-ממדיים מאפשרים הדמיה טובה יותר של תהליך המחלה וההשפעה שיכולה להיות לטיפולים ממודל רלוונטי יותר מבחינה קלינית. כאן מתוארת ההגדרה של מודל עור שחלות חדשני, שהוא פשוט, ניתן לשחזור, ורלוונטי מבחינה קלינית ובעל תפוקה גבוהה. עור הביצית נבחר מכיוון שכבשים הן אחד היונקים הגדולים המשמשים בדרך כלל למודלים של תגובות לזיהומים in vivo. יתר על כן, הם זמינים בקלות מ abattoirs, הבטחת אספקה קבועה של העור למחקר, ואת הפגרים שלהם הם לא צרוב, מה שמבטיח איכות רקמות טובה. מחקר זה השתמש ב- S. aureus כפתוגן המופתי; עם זאת, המודל עובד היטב עם מיקרואורגניזמים אחרים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 Well Companion Plate</td>
			<td>SLS&#160;</td>
			<td>353504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm Biopsy Punch</td>
			<td>Williams Medical</td>
			<td>D7484</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>10788561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8 mm Biopsy Punch</td>
			<td>Williams Medical</td>
			<td>D7488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B solution, sterile</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>A2942</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colour Pro Style Cordless Hair Clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9639-2117X</td>
			<td>Hair Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual Oven Incubator</td>
			<td>SLS</td>
			<td>OVe1020</td>
			<td>Sterilising oven</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal growth factor&#160;</td>
			<td>SLS</td>
			<td>E5036-200UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>458600-2.5L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F12 HAM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N4888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal bovine serum&#160;</td>
			<td>Labtech International</td>
			<td>CA-115/500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15307805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Removal Cream</td>
			<td>Veet</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heracell VIOS 160i</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>15373212&#160;</td>
			<td>Tissue culture incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraeus Megafuge 16R</td>
			<td>VWR</td>
			<td>521-2242</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer 220, Handheld</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15575809</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer 220, plastic blending cones</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>15585819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insert Individual 24 well 0.4um membrane</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>353095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin, recombinant Human</td>
			<td>SLS</td>
			<td>91077C-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199 (MK media)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M0393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate, cell culture Costar 96 well</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10687551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multitron</td>
			<td>Infors</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>Bacterial incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS tablets</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>P4417-100TAB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>SLS&#160;</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate seals</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>ESI-B-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe 2020</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1284804</td>
			<td>Class II microbiology safety cabinet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade number 15</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>O305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Swann Morton</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11849002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed Allis Tissue Forceps</td>
			<td>Rocialle</td>
			<td>RSPU500-322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Agar</td>
			<td>Merck Life Science UK Limited</td>
			<td>14432-500G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Broth</td>
			<td>Merck Life Science UK Limited</td>
			<td>41298-500G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimoba Tablets</td>
			<td>Quip Labs</td>
			<td>VMTAB75BX</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel high-throughput ex vivo ovine skin wound model for testing emerging antibiotics

פיתוח של מיקרוביאלים הוא תהליך יקר עם שיעורי הצלחה נמוכים יותר ויותר, מה שהופך את ההשקעה הנוספת במחקר גילוי מיקרוביאלי לפחות אטרקטיבית. גילוי תרופות אנטי-מיקרוביאליות והמסחור שלאחר מכן יכולים להיות משתלמים יותר אם ניתן ליישם גישה של כישלון מהיר ונכשל בזול בשלבי אופטימיזציה של עופרת שבהם לחוקרים יש שליטה רבה יותר על תכנון וניסוח תרופות. במאמר זה, ההגדרה של מודל עור פצוע ex vivo ovine נגוע Staphylococcus aureus מתואר, שהוא פשוט, חסכוני, תפוקה גבוהה, וניתן לשחזור. הפיזיולוגיה החיידקית במודל מחקה שבזמן ההדבקה התפשטות חיידקית תלויה ביכולתו של הפתוגן לפגוע ברקמה. הקמת זיהום הפצע מאומתת על ידי עלייה בספירת חיידקים קיימא בהשוואה לאינוקולום. מודל זה יכול לשמש כפלטפורמה לבדיקת היעילות של מיקרוביאלים מתפתחים בשלב אופטימיזציה של עופרת. ניתן לטעון כי זמינותו של מודל זה תספק לחוקרים המפתחים חומרים אנטי-מיקרוביאליים מודל של כישלון-מהיר-וכישלון-זול, אשר יסייע להגדיל את שיעורי ההצלחה בניסויים הבאים בבעלי חיים. המודל גם יאפשר הפחתה ועידון של השימוש בבעלי חיים למחקר ובסופו של דבר יאפשר תרגום מהיר וחסכוני יותר של חומרים אנטי-מיקרוביאליים חדשים לזיהומים בעור וברקמות רכות למרפאה.

זיהוי מסלול לעיקור העור לפני הגדרת מודל זיהום הפצע היה מאתגר. האתגר היה לעקר את העור מבלי לפגוע בשכבות העור השונות, מה שעלול לגרום להשלכות לא מכוונות על תוצאות הזיהום. כדי לזהות משטר עיקור מתאים, נוסו טיפולים שונים לפרקי זמן משתנים, כמפורט בטבלה 1. זיהום נרשם כהתפתחות עכירות לאחר 48 ...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics at JoVE.com

A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics

הפרוטוקול מתאר שיטה שלב אחר שלב להגדרת מודל עור פצוע ex vivo ovine הנגוע בסטפילוקוקוס אאורוס. מודל תפוקה גבוהה זה מדמה טוב יותר זיהומים in vivo בהשוואה לטכניקות מיקרוביולוגיה קונבנציונליות ומציג לחוקרים פלטפורמה רלוונטית מבחינה פיזיולוגית לבדיקת היעילות של מיקרוביאלים מתפתחים.

מודל חדשני של פצעי עור Ex Vivo Ovine בתפוקה גבוהה לבדיקת אנטיביוטיקה מתפתחת

The development of antimicrobials is an expensive process with increasingly low success rates, which makes further investment in antimicrobial discovery ...

מודל זה יאפשר לחוקרים בשלבים הפרה-קליניים הקריטיים לקבוע בצורה מדויקת יותר את היעילות האנטי-מיקרוביאלית של פורמולציות חדשניות, ויעניק לחוקרים שליטה רבה יותר על תכנון וניסוח תרופות. מודל זה מאפשר שחזור מהיר של תוצאות בסביבת פצע מייצגת. זה מפחית את הצורך בבעלי חיים ייעודיים, ומקל על תרגום מהיר יותר של מיקרוביאלים מקומיים לזיהומים בפצעים למרפאה.האתגרים העיקריים הם זיהום ומיומנות. טכניקה אספטית קפדנית וסבלנות לעיבוד רקמות הם חיוניים;הסרת דש מדויקת ותכליתית נדרשת להצלחת שיטה זו. התחל עם חיטוי של מלקחיים על ידי חשיפתם לעיקור בחום יבש ב 200 מעלות צלזיוס במשך שעה אחת.יש לעטוף את כל כלי הזכוכית בטמפרטורה של 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות לפני השימוש. יש לחטא את חלק המצח של המנורה על ידי שפיכת כ-100 מיליליטר של תמיסת כלור דו-חמצני של 200 PPM על אזור הדגימה. לגלח את החלק המצח באמצעות קוצץ חשמלי, ולאחר מכן לשטוף עם 200 מיליליטר של 200 PPM כלור דו חמצני פתרון.נגבו את האזור באמצעות אתנול וגליל כחול, וכסו את אזור הדגימה בקרם להסרת שיער. לאחר 35 דקות, יש לגרד בעדינות את הקרם להסרת שיער באמצעות כלי גירוד ולהעריך את אזור הדגימה. חזור על תהליך הסרת השיער אם נותרה כמות משמעותית של שיער.שטפו את אזור הדגימה הנקי עם 200 מיליליטר של תמיסת כלור דו-חמצני ואחריו אתנול וגליל כחול. השתמש באגרוף ביופסיה סטרילי של שמונה מילימטרים כדי לחתוך דגימת עור של שמונה מילימטרים מהאזור המוכן. לאחר מכן הסר את הדגימה באמצעות מלקחיים סטריליים ואזמל להב מספר 15, תוך הקפדה על הסרת כל השומן העורי.מניחים את הדוגמאות בצנצנת סטרילית של 0.5 ליטר מלאה ב-PBS סטרילי. ואז להעביר אותם צינורות סטריליים 50 מיליליטר מלא 50 מיליליטר של 200 PPM כלור דו חמצני פתרון. הפוך את הצינור פעמיים והשאיר אותו לעקר במשך 30 דקות.מעבירים את הדגימות לצינור 50 מיליליטר מלא ב-40 מיליליטר PBS סטרילי. לאחר שטיפת PBS, הניחו כל דגימת עור בבאר נפרדת של צלחת בת 24 בארות. הוסף 350 מיקרוליטר של המדיום שחומם מראש בבאר, תוך שמירה על הדגימה בממשק האוויר-נוזל.אטמו את לוחות 24 הבארות עם אטם צלחת חדיר גז לפני הנחת הצלחת לדגירה באינקובטור רקמות לחות בטמפרטורה של 5% פחמן דו חמצני ו-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. לאחר הדגירה, להסיר את מדיום התרבית ולשטוף את הדגימות ב 500 microliters של PBS סטרילי. הסר את שאריות האנטיביוטיקה מהדגימה על ידי טיפול בהן במדיה נטולת אנטיביוטיקה ב-5% פחמן דו חמצני ו-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.אם מתפתחת עכירות או זיהום פטרייתי במדיה נטולת האנטיביוטיקה, יש להשליך את הדגימה. לאחר מכן, להכין צינור 50 מיליליטר עם 10 מיליליטר של מרק סויה טריפטי סטרילי. לאחר מכן מעבירים כמה מושבות סטפילוקוקוס אאורוס מצלחת אגר טרייה של S.aureus למרק, ודוגרים את הצינור ב-37 מעלות צלזיוס ו-150 סל"ד למשך 18 שעות.לאחר צנטריפוגה של צינורות ב 4, 000 G במשך שלוש דקות, להסיר את supernatant ו resuspend את כדור התא ב 10 מיליליטר של PBS סטרילי. חזור על שטיפת PBS פעמיים לפני התאמת האינוקולום לצפיפות אופטית של 0.6 באורכי גל של 600 ננומטר באמצעות PBS סטרילי. אשר את עומס האינוקולום על ידי ספירת צלחות ידנית.כדי להדביק את דגימת העור, הכינו צלחת טרייה של 24 בארות עם 400 מיקרוליטרים של מדיה נטולת אנטיביוטיקה שחוממה מראש, והוסיפו את 24 תוספות הבאר באמצעות מלקחיים סטריליים. הסר את המדיה מדגימות העור. לשטוף אותם עם 500 microliters של PBS סטרילי ולהסיר את לשטוף.השתמש מלקחיים סטריליים כדי להחזיק בעדינות את הדגימה בתחתית הבאר. השתמש בביופסיית אגרוף של ארבעה מילימטרים כדי לחדור דרך דגימת העור לעומק גס של מילימטר עד שניים וליצור דש פצע מרכזי. לאחר מכן השתמש באזמל להב מספר 15 ומלקחיים של רקמת Allis בעלת שיניים סטריליות כדי להסיר את השכבה העליונה של דש הפצע.לאחר שכל הדגימות נפצעו, העבירו אותן ל-24 הקידוחים באמצעות מלקחיים סטריליים. מזרימים 15 מיקרוליטרים של החיידק אינוקולום לתוך מיטת הפצע לפני דגירה במשך 24 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור רקמות לחות. לתקופות דגירה ארוכות יותר, מוציאים את המדיה, מחליפים אותה במדיה טרייה כל 24 שעות, ודוגרים את הצלחות באותם תנאים.כדי לקבוע את עומס החיידקים, הסר את המדיה מתחתית הבארות. ובאמצעות מלקחיים סטריליים, מעבירים כל דגימה לצינור נפרד של 50 מיליליטר מלא במיליליטר אחד של PBS סטרילי. לאחר מכן לנתק את החיידקים מפני השטח של מיטת הפצע על ידי הומוגניזציה של משטח הדגימה עם הומוגנייזר בעל קצה דק.ודא כי המיטה הפצע הוא במגע ישיר עם קצה של homogenizer. לאחר עיבוד כל הדגימות, מערבלים כל דגימה לפני העברת 20 מיקרוליטרים של הומוגנט לתוך הבאר המתאימה של צלחת 96 באר המכילה 180 מיקרוליטרים של PBS סטרילי. יש לדלל באופן סדרתי כל דגימה הומוגנית ל-1 כפול 10 ל-7 השלילי, ופיפטה 10 מיקרוליטרים של ההומוג'נט המדולל על צלחת אגר סויה טריפטית במשולש.דגירה של צלחת אגר סויה טריפטית ב 37 מעלות צלזיוס, ולאחר 18 שעות, לספור את מספר המושבות כדי לקבוע את המושבות יוצרות יחידות או CFU עבור כל דגימה. משטר עיקור עור מתאים זוהה באמצעות טיפולים שונים לפרקי זמן משתנים. שלמות הרקמות נוטרה על ידי היסטולוגיה, ולאחר מכן הכתמה עם המטוקסילין ואוזין מיד לאחר הטיפול.טיפול של 30 דקות בכלור דו-חמצני היה הטיפול היעיל ביותר, עם עיקור מחדש של רקמת העור תוך שמירה על שלמות הרקמה. סרט לבן במיטת הפצע ניכר על הרקמה 48 שעות לאחר ההדבקה. למרות שמודל השריטה הכיל מספר ממוצע גבוה יותר של יחידות יוצרות מושבה לאחר 24 שעות, טכניקת הסרת הדש הניבה תוצאות עקביות יותר.לאחר 48 שעות, בערך פי 100 יותר יחידות CFU חיידקיות התאוששו מהרקמה הפצועה בהשוואה לאינוקולום, מה שמעיד על זיהום מוצלח. קטעי היסטולוגיה מוכתמים בגרם של הרקמה הנגועה הצביעו על נוכחותם של תאי S.aureus במיטת הפצע, אשר נעדרה בקטעים של רקמה לא נגועה. לאחר הליך זה, ניתן לבצע אימונוהיסטוכימיה כדי לחקור את תגובת הרקמות, כתם גרם שונה כדי לדמיין את לוקליזציה של החיידקים, וספירת צלחות קיימא לאחר חשיפה מיקרוביאלית לבדיקת יעילות מיקרוביאלית.עבור החוקרים המפתחים תרופות אנטי-מיקרוביאליות חדשניות, מודל זה יספק שליטה רבה יותר על אופטימיזציה של עופרת, יפחית את ההסתמכות על ניסויים יקרים ומפוקחים היטב בבעלי חיים, ויאפשר תרגום מהיר של חומרים אנטי-מיקרוביאליים למרפאה.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

96 microtiter ובכן פלייט מבוססי שיטה ליצירת ניטור ובדיקה של רגישות נגד פטריות קנדידה אלביקנס Biofilms

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

תפוקה גבוהה איתור שיטת וירוס השפעת

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

בידוד לימפוציטים מעור אדם עבור ניתוח פנוטיפי<em&gt; Ex Vivo</em&gt; תרבית תאים

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

High Throughput, Real-time, Dual-readout Testing of Intracellular Antimicrobial Activity and Eukaryotic Cell Cytotoxicity

תפוקה גבוהה, בזמן אמת, בדיקת Dual-readout של פעילות מיקרוביאלית תאיים Cytotoxicity Cell איקריוטיים

Traditional measures of intracellular antimicrobial activity and eukaryotic cell cytotoxicity rely on endpoint assays. Such endpoint assays require ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

הרומן במבחנה פצע ריפוי הנועד להעריך את נדידת תאים

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

פלטפורמה תפוקה גבוהה להקרנה של סלמונלה spp /שיגלה spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

אין ויוו הדמיה של מינים חמצן תגובתי ב מאתר פצע מודל

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

תפוקה גבוהה שיגלה-Assay אחרים ספציפיים

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing ...

Assessment of Acute Wound Healing using the Dorsal Subcutaneous Polyvinyl Alcohol Sponge Implantation and Excisional Tail Skin Wound Models.

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

Wound healing is a complex process that requires the orderly progression of inflammation, granulation tissue formation, fibrosis, and resolution. Murine ...

Establishing a Porcine Ex Vivo Cornea Model for Studying Drug Treatments against Bacterial Keratitis

הקמת דגם חזיר אקס ויוו קרנית לחקר טיפולים תרופתיים נגד קרטיטיס בקטריאלי

When developing novel antimicrobials, the success of animal trials is dependent on accurate extrapolation of antimicrobial efficacy from in vitro tests to ...