Name: implementation of minimally invasive brain tumor resection in rodents for high viability tissue collection
Uploaded: 2022-05-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implementation of Minimally Invasive Brain Tumor Resection in Rodents for High Viability Tissue Collection at JoVE.com

Все исследования на животных были одобрены Университетом Мэриленда и Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию Университета Джона Хопкинса. Для настоящего исследования использовались самки мышей C57BL/6 в возрасте 6-8 недель. Мыши были получены из коммерчески...

<ol>
	<li>Mineo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognosis+factors+of+survival+time+in+patients+with+glioblastoma+multiforme:+a+multivariate+analysis+of+340+patients.">Prognosis factors of survival time in patients with glioblastoma multiforme: a multivariate analysis of 340 patients.</a> Acta Neurochirurgica. 149 (3), 245-252 (2007).</li><li>Miyai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+trends+in+mouse+models+of+glioblastoma.">Current trends in mouse models of glioblastoma.</a> Journal of Neuro-Oncology. 135 (3), 423-432 (2017).</li><li>Raj, D., Agrawal, P., Gaitsch, H., Wicks, E., Tyler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+strategies+for+improving+the+prognosis+of+glioblastoma.">Pharmacological strategies for improving the prognosis of glioblastoma.</a> Expert Opinion on Pharmacotherapy. 22 (15), 2019-2031 (2021).</li><li>Alomari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+repurposing+for+Glioblastoma+and+current+advances+in+drug+delivery-a+comprehensive+review+of+the+literature.">Drug repurposing for Glioblastoma and current advances in drug delivery-a comprehensive review of the literature.</a> Biomolecules. 11 (12), 1870 (2021).</li><li>Serra, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+intracranial+Acriflavine,+temozolomide+and+radiation+extends+survival+in+a+rat+glioma+model.">Combined intracranial Acriflavine, temozolomide and radiation extends survival in a rat glioma model.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics : Official Journal of Arbeitsgemeinschaft fur Pharmazeutische Verfahrenstechnik eV. 170, 179-186 (2022).</li><li>Tang, B., Foss, K., Lichtor, T., Phillips, H., Roy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resection+of+orthotopic+murine+brain+glioma.">Resection of orthotopic murine brain glioma.</a> Neuroimmunology and Neuroinflammation. 8 (1), 64-69 (2021).</li><li>Ozawa, T., James, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+intracranial+brain+tumor+xenografts+with+subsequent+analysis+of+tumor+growth+and+response+to+therapy+using+bioluminescence+imaging.">Establishing intracranial brain tumor xenografts with subsequent analysis of tumor growth and response to therapy using bioluminescence imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (41), e1986 (2010).</li><li>Poussard, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+systems+(IVIS)+detection+of+a+neuro-invasive+encephalitic+virus.">In vivo imaging systems (IVIS) detection of a neuro-invasive encephalitic virus.</a> Journal of Visualized Experiments. (70), e4429 (2012).</li><li>Lachin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonparametric+statistical+analysis.">Nonparametric statistical analysis.</a> JAMA. 323 (20), 2080-2081 (2020).</li><li>Louis, K. S., Siegel, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+viability+analysis+using+trypan+blue:+manual+and+automated+methods.">Cell viability analysis using trypan blue: manual and automated methods.</a> Methods in Molecular Biology. 740, 7-12 (2011).</li><li>Spina, R., Voss, D. M., Asnaghi, L., Sloan, A., Bar, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry-based+drug+screening+system+for+the+identification+of+small+molecules+that+promote+cellular+differentiation+of+Glioblastoma+stem+cells.">Flow cytometry-based drug screening system for the identification of small molecules that promote cellular differentiation of Glioblastoma stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (131), e56176 (2018).</li><li>Rodgers, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virtual+histology+of+an+entire+mouse+brain+from+formalin+fixation+to+paraffin+embedding.+Part+2:+Volumetric+strain+fields+and+local+contrast+changes.">Virtual histology of an entire mouse brain from formalin fixation to paraffin embedding. Part 2: Volumetric strain fields and local contrast changes.</a> Journal of Neuroscience Methods. 365, 109385 (2022).</li><li>Connolly, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+fibroblast+growth+factor-inducible+14+expression+transforms+proneural-like+gliomas+into+more+aggressive+and+lethal+brain+cancer.">Elevated fibroblast growth factor-inducible 14 expression transforms proneural-like gliomas into more aggressive and lethal brain cancer.</a> GLIA. 69 (9), 2199-2214 (2021).</li><li>Stall, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+T2+and+FLAIR+imaging+for+target+delineation+in+high+grade+gliomas.">Comparison of T2 and FLAIR imaging for target delineation in high grade gliomas.</a> Radiation Oncology. 5, 5 (2010).</li><li>Das, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+a+standardized+method+for+the+effective+intraoperative+collection+and+biological+preservation+of+brain+tumor+tissue+samples+using+a+novel+tissue+preservation+system:+a+pilot+study.">Establishing a standardized method for the effective intraoperative collection and biological preservation of brain tumor tissue samples using a novel tissue preservation system: a pilot study.</a> World Neurosurgery. , (2022).</li><li>Zusman, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissues+harvested+using+an+automated+surgical+approach+confirm+molecular+heterogeneity+of+Glioblastoma+and+enhance+specimen's+translational+research+value.">Tissues harvested using an automated surgical approach confirm molecular heterogeneity of Glioblastoma and enhance specimen's translational research value.</a> Frontiers in Oncology. 9, (2019).</li><li>McLaughlin, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Side-cutting+aspiration+device+for+endoscopic+and+microscopic+tumor+removal.">Side-cutting aspiration device for endoscopic and microscopic tumor removal.</a> Journal of Neurological Surgery Part B. 73 (1), 11-20 (2012).</li></ol>

Резекция опухоли является краеугольным камнем планов лечения нейрохирургической онкологии как для низкосортных, так и для высокосортных опухолей головного мозга. Циторедукция и дебулкция опухоли коррелируют с улучшением неврологической функции и общей выживаемостью у пациентов с о...

Глиобластома (ГБМ) является наиболее распространенной и агрессивной первичной опухолью головного мозга у взрослых. Несмотря на недавние достижения в области нейрохирургии, разработки целевых лекарств и лучевой терапии, 5-летняя выживаемость пациентов с ГБМ составляет менее 5%, статистика, которая существенно не улучшилась за последние три десятилетия1. Следовательно, существует потребность в более эффективных стратегиях лечения.
Для разработки новых методов лечения становится все более очевидным, что протоколы исследований должны (1) использовать переводимые доклинические модели, которые точно повторяют гетерогенность опухоли и микроокружение, (2) отражать стандартный терапевтический режим, используемый у пациентов с ГБМ, который в настоящее время включает хирургию, лучевую терапию и химиотерапию, и (3) учитывать разницу между резецированным ядром и остатком, инвазивные опухолевые ткани 2,3,4,5. Тем не менее, большинство доступных в настоящее время доклинических моделей опухолей головного мозга либо не реализуют хирургическую резекцию, либо используют модели хирургической резекции, которые занимают относительно много времени, что приводит к значительной кровопотере или отсутствию стандартизации. Кроме того, выполнение резекции опухолей головного мозга грызунов может быть сложной задачей из-за отсутствия клинически сопоставимых хирургических инструментов или протоколов и отсутствия установленной платформы6 для систематического сбора тканей (таблица 1).
Настоящий протокол направлен на описание стандартизированной парадигмы резекции опухоли головного мозга грызунов и сохранения тканей с использованием многофункциональной неаблятивной минимально инвазивной резекционной системы (MIRS) и интегрированной системы сохранения тканей (TPS) (рисунок 1). Ожидается, что этот уникальный метод обеспечит стандартизированную платформу, которая может быть использована в различных исследованиях доклинических исследований для GBM и других типов моделей опухолей головного мозга. Исследователи, изучающие терапевтические или диагностические методы для опухолей головного мозга, могут реализовать этот протокол для достижения стандартизированной резекции в своих исследованиях.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>309628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 proof ethanol</td>
			<td>PharmCo</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL pipettes</td>
			<td>CoStar</td>
			<td>4487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 micron filter</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-771-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>SIG-SCR005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anased (Xylazine injection, 100 mg/mL)</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>33198</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia System</td>
			<td>Patterson Scientific</td>
			<td>78935903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesic Gas Waste Container</td>
			<td>Patterson Scientific</td>
			<td>78909457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bench protector underpad</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>10328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6, 6-8 week old mice</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>Strain Code 027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ChroMini Pro</td>
			<td>Moser</td>
			<td>Type 1591-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase-Dispase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>#10269638001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II FL Hemacytometer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A25750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Debris Removal Solution</td>
			<td>Miltenyi Biotech</td>
			<td>#130-109-398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM F12 media</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-090-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM media</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse I</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tubes</td>
			<td>Posi-Click</td>
			<td>1149K01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Euthanasia solution</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>71073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>F4135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>INV-28906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>101-4336</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hEGF</td>
			<td>PeproTech EC</td>
			<td>100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H-3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hFGF-b</td>
			<td>PeproTech EC</td>
			<td>1001-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Induction Chamber</td>
			<td>Patterson Scientific</td>
			<td>78933388</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>11695-6777-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane Vaporizer</td>
			<td>Patterson Scientific</td>
			<td>78916954</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>11695-0703-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kopf Stereotactic frame</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lightfield Microscope</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Cytation 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection Unit</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromotor drill</td>
			<td>Foredom</td>
			<td>F210418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRI system</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>7T Biospec Avance III MRI Scanner</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NICO Myriad System</td>
			<td>NICO Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment</td>
			<td>Puralube vet ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>#P4762</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>#14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PenStrep</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>N1638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>&#160;#P4937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette controller</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>A07260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine solution</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>52380-1905-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-8783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Putrescine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-5780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Media</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>INV-72400120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>7319</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin marker</td>
			<td>Time Out</td>
			<td>D538,851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staple remover</td>
			<td>MikRon</td>
			<td>ACR9MM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stapler</td>
			<td>MikRon</td>
			<td>ACA9MM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staples</td>
			<td>Clay Adams</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotactic Frame</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture, vicryl 4-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J494H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 culture flask</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83-3911-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TheraPEAKTM ACK Lysing Buffer (1x)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BP10-548E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MDT-25-053-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implementation of minimally invasive brain tumor resection in rodents for high viability tissue collection

Настоящий протокол описывает стандартизированную парадигму резекции опухоли головного мозга грызунов и сохранения тканей. В клинической практике максимальная резекция опухоли является стандартом лечения большинства опухолей головного мозга. Однако большинство доступных в настоящее время доклинических моделей опухолей головного мозга либо не включают резекцию, либо используют хирургические модели резекции, которые отнимают много времени и приводят к значительной послеоперационной заболеваемости, смертности или экспериментальной вариабельности. Кроме того, выполнение резекции у грызунов может быть сложным по нескольким причинам, включая отсутствие клинически сопоставимых хирургических инструментов или протоколов и отсутствие установленной платформы для стандартизированного сбора тканей. Этот протокол подчеркивает использование многофункционального, неаблятивного резекционного устройства и интегрированной системы сохранения тканей, адаптированной из клинической версии устройства. Устройство, примененное в настоящем исследовании, сочетает в себе перестраиваемое всасывание и цилиндрическое лезвие в отверстии для точного зондирования, разрезания и всасывания ткани. Минимально инвазивное резекционное устройство выполняет свои функции через то же отверстие заусенца, которое использовалось для первоначальной имплантации опухоли. Такой подход сводит к минимуму изменения в региональной анатомии во время биопсии или резекционных операций и снижает риск значительной кровопотери. Эти факторы значительно сократили время операции (<2 мин / животное), улучшили послеоперационную выживаемость животных, снизили вариабельность в экспериментальных группах и привели к высокой жизнеспособности резецированных тканей и клеток для будущих анализов. Этому процессу способствует скорость лезвия ~ 1 400 циклов / мин, что позволяет собирать ткани в стерильную замкнутую систему, которая может быть заполнена физиологическим раствором по выбору. Учитывая растущую важность изучения и точного моделирования воздействия хирургии, сохранения и строгого сравнительного анализа регионализированных образцов резекции опухоли и внутриполостных терапевтических средств, этот уникальный протокол расширит возможности для изучения оставшихся без ответа вопросов о периоперационном лечении и терапевтическом открытии для пациентов с опухолями головного мозга.

Хирургическая резекция с использованием MIRS приводит к значительному снижению опухолевой нагрузки В группе с меньшей опухолевой нагрузкой средний исходный биолюминесцентный сигнал составлял 5,5e+006 фотонов/с ± 0,2e+006 в подгруппе, подвергшейся резекции. После резекции средний б...

Watch this Scientific Journal Video about Implementation of Minimally Invasive Brain Tumor Resection in Rodents for High Viability Tissue Collection at JoVE.com

Implementation of Minimally Invasive Brain Tumor Resection in Rodents for High Viability Tissue Collection

Настоящий протокол описывает стандартизированную резекцию опухолей головного мозга у грызунов с помощью минимально инвазивного подхода с интегрированной системой сохранения тканей. Этот метод имеет значение для точного отражения стандарта ухода за грызунами и другими моделями животных.

Реализация минимально инвазивной резекции опухоли головного мозга у грызунов для сбора тканей высокой жизнеспособности

The present protocol describes a standardized paradigm for rodent brain tumor resection and tissue preservation. In clinical practice, maximal tumor ...

Это парадигма резекции опухоли головного мозга, которая крайне необходима в доклинических исследованиях по терапии опухолей головного мозга. Он позволяет стандартизированную резекцию с помощью минимально инвазивного подхода, в то же время он также связан с автоматизированной системой сохранения тканей. Этот протокол позволяет животному выжить после операции и, таким образом, помогает понять изменения в болезненном состоянии после терапии у того же животного.Это помогает в последовательных и покадровых терапевтических применениях. Используя эту методику, мы можем оценить биологию заболевания и спланировать возможное последующее лечение. Это имеет значительные последствия и возможности в открытии лекарств и новых терапевтических средствах.Концепции стандартизированной резекции, минимально инвазивного подхода и автоматизированного сохранения тканей могут быть распространены на другие типы опухолей в различных системах органов, такие как опухоли печени и рак головы и шеи. Протокол прост, а система удобна для пользователя. Лучше всего ознакомиться с опубликованным протоколом, который содержит все необходимые шаги и устранение неполадок.Начните эксперимент, оценив мышь на седацию, зажав палец ноги. Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы избежать сухости роговицы. Затем поместите мышь на стереотаксическую рамку.Удалите основной продукт из предыдущей операции и продезинфицируйте кожу чередующимися циклами скраба на основе хлоргексидина или бетаина и спирта. Затем создайте сантиметровый продольный разрез средней линии вдоль предыдущего хирургического рубца с помощью стерильного скальпеля. Прикрепите наконечник MIRS к стереотаксическому кронштейну через адаптер сцены.Чтобы настроить устройство MIRS, вставьте кабель питания, установленный на задней панели, в розетку шнура питания. Включите или выключите питание системы, переключаясь между нулем и единицей. Вставьте один конец азотного шланга в штекерный фитинг на задней панели консоли.Поверните соединительную гайку по часовой стрелке, чтобы затянуть ее. Убедитесь, что давление подачи не превышает 100 PSIG, и прикрепите шланг к подаче азота. Закройте крышку вакуумного порта, чтобы избежать утечки.Убедитесь, что ручка аспирации на передней панели консоли установлена на 100, что в системе аспирации нет утечки и что давление подачи азота на входе правильное. Вставьте серый разъем ножной педали в его серую розетку, пока он не щелкнет. Таким же образом вставьте синий разъем наконечника в его синюю розетку.Загрунтуйте каждый наконечник, аспирируя стерильную жидкость в отверстие через трубку и наконечник, а затем в канистру, чтобы обеспечить смазку внутренней части трубки и наконечника. Выберите режим аспирации на передней панели консоли и инициируйте с помощью ножной педали. Вставьте канюлю 23-G MIRS в отверстие заусенца на глубину 2,5 миллиметра.Инициируйте процесс резекции, нажимая на ножную педаль, соединенную с канюлей. Выполняйте полные циклы резекции с помощью ручки управления в наконечнике. После процесса резекции извлеките канюлю MIRS 23-го калибра и добавьте пять миллилитров 1X PBS, чтобы промыть трубку и выбить любой остаточный мусор.Затем закройте рану степлером и извлеките мышь из стереотаксической рамки. Верните мышь на грелку, чтобы восстановиться после анестезии, прежде чем поместить ее обратно в клетку. После эксперимента очистите канюлю охлажденной средой и воздухом, чтобы вытолкнуть всю резецированную ткань обратно в канистру для сбора.Извлеките из системы канистру для сбора и поместите колпачок. Затем поместите дистальный наконечник канюли в 3% перекись водорода и примените всасывание, чтобы заполнить линию всасывания обратно в канистру для всасывания. Дайте ему постоять от 60 до 90 секунд и периодически пульсируйте воздухом и средой, чтобы промыть его.Поместите образец опухоли в чашку для культуры тканей, содержащую среду лизиса эритроцитов, на пять минут при комнатной температуре. Затем поместите 70-микронный фильтр на 50-миллилитровую коническую трубку и используйте шприцевой плунжер, чтобы пропустить образец опухоли через фильтр. С помощью переносной пипетки используйте среду RPMI 1640 для пропускания клеток и любой тканевой массы через фильтр.Центрифуга в 428 раз G в течение пяти минут при четырех градусах Цельсия. Отбросьте супернатант и повторно суспендируйте каждый образец в пяти миллилитрах подготовленной среды RPMI 1640. Поместите образцы в шейкер-инкубатор на 20 минут при 200 об/мин при 37 градусах Цельсия.После инкубации центрифугируют образцы в 428 раз G в течение пяти минут при четырех градусах Цельсия и выбрасывают супернатант. Фильтруйте отдельные ячейки через 70-микронный клеточный сетчатый фильтр и центрифугу в 274 раза больше G в течение трех минут при четырех градусах Цельсия. Проведите анализ жизнеспособности клеток с помощью трипанового синего и гемоцитометра.Хирургическая резекция у мышей с использованием MIRS вызвала значительное снижение опухолевой нагрузки, о чем свидетельствует снижение среднего исходного биолюминесцентного сигнала для групп с большой и малой опухолевой нагрузкой. По сравнению с предрезекционными МРТ-изображениями опухолей, резекционная полость может быть идентифицирована на пострезекционных сканированиях как большая, круглая область hypointense в месте посева опухоли. В окрашенных H&E участках наблюдалась четкая круговая резекционная полость с ободком продуктов крови, воспалением и остаточными опухолевыми клетками.Объем резекции значительно увеличивался при выполнении двух вращений режущего отверстия, что позволило оптимизировать объем резекции в соответствии с опухолевой нагрузкой. Сравнение выживаемости у мышей с необработанными опухолями и мышей, перенесших резекцию опухолей с помощью MIRS, показало увеличение выживаемости с 16 до 22 дней в небольшой опухолевой группе. Аналогичным образом, в группе с большей опухолевой нагрузкой медиана выживаемости увеличилась с 12 до 19 дней.Изображения световой микроскопии образцов, взятых из системы сохранения тканей, выглядели как одиночные клетки с присутствием нескольких небольших кусков ткани на нулевой день. Через семь дней клетки, собранные с помощью MIRS, показали формирование невросферы в культурах суспензии, что указывало на их потенциал инициации опухоли. Важно продуть и промыть систему труб сразу после процедуры, чтобы избежать засорения системы.После этой процедуры исследования эффективности терапии и исследования диагностических и прогностических маркеров могут быть использованы на выживших животных после хирургической резекции с помощью минимально-инвазивной резекционной системы.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

<em&gt; Drosophila</em&gt; Имаджинальное Disc Опухоль Модель: Визуализация и Количественная экспрессии генов и опухолевой инвазии с использованием генетических Мозаики

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

Поколение высокопроизводительных трехмерных опухоли сфероидов для скрининга наркотиков

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Assays клеток опухоли стволовых клеток глиобластомы мозга исследования миграции и вторжения

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Assay цифровой полимеразной цепной реакции для генетической вариации в спорадических семейное аденоматозное Polyposis пациента, используя формат чип в трубе

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

The Clinical Application of Tumor Treating Fields Therapy in Glioblastoma

Клиническое применение лечения глиобластома поля терапии опухоли

Glioblastoma is the most common and lethal form of brain cancer, with a median survival of 15 months after diagnosis and a 5 year survival rate of only 5% ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

Продольная интравитальная визуализация поведения опухолевых клеток головного мозга в ответ на инвазивную хирургическую биопсию

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Assessing Cell Viability and Death in 3D Spheroid Cultures of Cancer Cells

Оценка жизнеспособности и смерти клеток в 3D сфероидных культурах раковых клеток

Three-dimensional spheroids of cancer cells are important tools for both cancer drug screens and for gaining mechanistic insight into cancer cell biology. ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

Создание и характеристика малого кишечника нейроэндокринных опухолевых сфероидов

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Analyzing Tumor and Tissue Distribution of Target Antigen Specific Therapeutic Antibody

Анализ опухоли и распределения тканей целевого антигена специфических терапевтических антител

Monoclonal antibodies are high affinity multifunctional drugs that work by variable independent mechanisms to eliminate cancer cells. Over the last few ...

Measuring Real-time Drug Response in Organotypic Tumor Tissue Slices

Измерение в режиме реального времени ответ на наркотики в органотипической опухоли ткани фрагменты

Tumor tissues are composed of cancerous cells, infiltrated immune cells, endothelial cells, fibroblasts, and extracellular matrix. This complex milieu ...