Name: millisecond hydrogen/deuterium-exchange mass spectrometry for the study of alpha-synuclein structural dynamics under physiological conditions
Uploaded: 2022-06-23T14:30:00
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NSは、大学評議会ダイヤモンドジュビリー奨学金によって資金提供されています。JJPはUKRIフューチャー・リーダーズ・フェローシップ[助成金番号:MR/T02223X/1]の支援を受けています。

1. aSynのタンパク質発現と精製
<ol><li>以前に公開されたレポートに従ってaSynを準備します 9.</li>
	<li>安全な貯蔵緩衝液(例えば、トリス、pH7.2)に透析する。</li>
	<li>必要に応じて、サンプルを濃縮します(例えば、スピンフィルター微量遠心チューブは、3kDaMWCO、14,000 x g を約10〜30分間使用し、 材料表を参照)。 注:過度に集中しないことをお?...

本稿では、(1)単量体aSynのペプチドマッピング実験を実行して最高の配列カバレッジを得ること、(2)生理学的条件下で単量体aSynに関するミリ秒間のHDX-MSデータを取得すること、および(3)得られたHDX-MSデータのデータ分析および解釈を実行する手順について説明します。提供される手順は一般的に実行が簡単で、各ラベリング実験は通常、3回の反復と8つのタイムポイントに対して約8時間しか?...

パーキンソン病(PD)は、世界中の何百万人もの人々が罹患している神経変性疾患です1。これは、脳の黒質パースコンパクタ領域におけるレビー小体およびレビー神経突起として知られている細胞質封入物の形成によって特徴付けられる。これらの細胞質封入体は、本質的に障害のあるタンパク質aSyn2の凝集体を含有することが見出されている。PDおよび他のシヌクレイノパシーにおいて、aSynは可溶性障害状態から不溶性で高度に構造化された罹患状態に変化する。その天然形態において、単量体aSynは、そのN末端およびC末端間の長距離静電相互作用およびそのC末端および非アミロイドベータ成分(NAC)領域との間の疎水性相互作用によって安定化される広範囲の立体構造を採用する3,4,5,6。突然変異、翻訳後修飾、および局所環境の変化など、それらの安定化相互作用の中断は、モノマーのミスフォールディングにつながり、したがって凝集のプロセスを引き起こす可能性がある7。
aSyn 8,9,10,11のオリゴマー型およびフィブリル型に関する膨大な量の研究が存在するが、タンパク質のモノマー型を研究し、どのコンフォーマーが機能的であり(そしてどのように)、どのコンフォーマーが凝集しやすいかをよりよく理解することが極めて重要である8,9,10,11.本質的に無秩序であり、サイズがわずか14kDaであり、結晶化が困難なaSynモノマーは、ほとんどの構造生物学的技術に順応性がない。しかし、単量体aSynの立体構造ダイナミクスを測定できる技術の1つはミリ秒HDX-MSであり、これは最近、そうでなければ得ることが困難または不可能であろう重要な構造観察を生成している12,13,14。ミリ秒のHDX-MSは、アミド水素での同位体交換を監視することによってタンパク質立体構造アンサンブルの平均を敏感に測定し、ミリ秒の時間スケールでの特定のタンパク質領域の溶媒アクセス性と水素結合ネットワークの関与を示します。HDX-MSのミリ秒の側面を強調する必要があるのは、そのネイティブに展開された準安定な性質のために、aSynは従来のHDX-MSシステムの下限をはるかに下回る非常に高速な水素交換動力学を示すためです。例えば、aSyn分子の大部分は、細胞内条件下で1秒未満で水素を重水素と完全に交換した。現在、いくつかの研究所が高速混合計装を構築しています。この場合、デッドタイム50ms、時間分解能1msのHDX-MSを実行できる高速混合クエンチフロー装置のプロトタイプを使用します15。ミリ秒のHDX-MSは最近、aSynの研究において非常に重要になっていますが、本質的に障害のあるタンパク質/領域をより広く研究し、ループ/領域が弱くしか安定していない多数のタンパク質を研究する上で価値があります。例えば、ペプチド薬(例えば、インスリン;GLP-1/グルカゴン;チルゼパチド)およびペプチド融合タンパク質(例えば、HIV阻害剤FN3-L35-T1144)は、溶液相の構造および安定性情報が医薬品開発の決定に重要な入力となり得る主要な薬物フォーマットであり、それでも、ペプチド部分は、しばしば、HDX-MSによって秒単位のタイムスケール16、17、18、19、20で弱く安定で難治性である。.秒/分ドメインに標識を有する創発的なHDX-MS法は、DNA G-四重鎖の構造情報を導出することが示されているが、ミリ秒のHDX-MS21の適用によって、これをより多様なオリゴヌクレオチド構造に拡張することが可能であるはずである。
HDX-MS実験は、(1)ボトムアップ(標識タンパク質がタンパク質分解的に消化される)、(2)ミドルダウン(標識タンパク質がタンパク質分解的に消化され、得られたペプチドがソフトフラグメンテーション技術によってさらにフラグメント化される)、および(3)トップダウン(ソフトフラグメンテーション技術によって標識タンパク質を直接フラグメント化する)の3つの異なるレベルで行うことができる22。.したがって、サブ分子HDX-MSデータにより、タンパク質の特定の領域に交換挙動を局在化することができ、そのような実験に適切な配列カバレッジを持つことが不可欠です。HDX-MS実験の構造分解能は、消化時またはソフトフラグメンテーション時にタンパク質に由来するタンパク質分解ペプチドまたはフラグメントの数にそれぞれ依存します。上記で概説した3つの実験タイプのそれぞれにおいて、各ペプチド/断片におけるアミド交換の変化は、タンパク質の一次構造にマッピングされ、タンパク質の局在領域の挙動を示す。最高の構造分解能はソフトフラグメンテーションによって達成されますが、これらの実験の説明は、aSynモノマー立体配座の測定に焦点を当てた現在の研究の範囲外です。ここで説明する一般的に適用される「ボトムアップ」ワークフローを使用すると、優れた結果を得ることができます。
ここでは、(1)aSynサンプルおよびHDX-MSバッファーを調製および処理する方法、(2)ボトムアップHDX-MS実験のためのペプチドマッピングを実行する方法、(3)生理学的条件下で、具体的にはミリ秒の時間領域で単量体aSynに関するHDX-MSデータを取得する方法(カスタムビルドの機器を使用して;ミリ秒標識のための代替機器も記載されている)、 (4)HDX-MSデータの処理方法と分析方法ここでは、2つの溶液条件下で生理学的pH(7.40)で単量体aSynを使用する方法が例示される。aSynの研究において極めて有用であるが、これらの手順は、任意のタンパク質に適用することができ、本質的に障害のあるタンパク質に限定されない。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 &#215; 100 mm ACQUITY BEH 1.7 &#956;m C18 column&#160;</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186002346</td>
			<td>Analytical column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile HPLC grade &#62;99.9% HiPerSolv</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20060.420</td>
			<td>For LC mobile phases</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C5670</td>
			<td>Salt for HDX buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chronos</td>
			<td>Axel Semrau (Purchased from Waters Corporation)</td>
			<td>667006090</td>
			<td>Scheduling software to enable multiple HDX-MS sample injections automatically. Alternative software is available from other vendors e.g. HDXDirector or LEAP Shell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deuterium chloride</td>
			<td>Goss Scientific (Cambridge Isotope Laboratories)</td>
			<td>DLM-2-50</td>
			<td>For HDX labelling buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deuterium oxide (99.9% D2O)</td>
			<td>Goss Scientific (Cambridge Isotope Laboratories)</td>
			<td>DLM-4</td>
			<td>Deuterated water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DynamX 3.0</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>176016027</td>
			<td>Isotopic assignment and deuterium incorporation calculation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzymate BEH Pepsin Column</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186007233</td>
			<td>Pepsin digestion column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic Acid, 99.0% LC/MS Grade</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10596814</td>
			<td>For LC mobile phases</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanidinium hydrochloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>RDD001-500G</td>
			<td>Chaotrope/Denaturant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HDfleX</td>
			<td>University of Exeter</td>
			<td>N/A</td>
			<td>https://ore.exeter.ac.uk/repository/handle/10871/127982</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td>Salt for HDX buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEAP HDX-2 CTC PAL sampling robot</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>725000637</td>
			<td>Autosampler robot</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leucine enkephalin</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186006013</td>
			<td>For mass spectrometry lockspray calibration.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MassLynx</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>667004007</td>
			<td>Software controlling inlet methods and mass spectrometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maximum recovery vials</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>600000670CV</td>
			<td>100 pack including caps - used for quench tray in LEAP HDX-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td>Salt for HDX buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millipore 0.22 &#181;m syringe filters</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>N9CA7069B</td>
			<td>Syringe filters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ms2min</td>
			<td>Applied Photophysics Ltd</td>
			<td>N/A</td>
			<td>fast-mix quench-flow millisecond hdx instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>Salt for HDX buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peltier temperature controller</td>
			<td>LEAP Technologies Inc.</td>
			<td>HP115-COOL/D</td>
			<td>Peltier controller to set precise temperature of chambers in the LEAP robot.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProteinLynx Global Server 3.0</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>715001030</td>
			<td>Peptide identification software. Alternative software is available from other vendors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent pot caps</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186004632</td>
			<td>100 pack</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent pots for LEAP HDX-2</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186001420</td>
			<td>100 pack excluding caps - used for buffers in LEAP HDX-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium deuteroxide (99.5% in D2O)</td>
			<td>Goss Scientific (Cambridge Isotope Laboratories)</td>
			<td>DLM-57</td>
			<td>For HDX labelling buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin filter microcentrifuge tubes (3 kDa MWCO)</td>
			<td>Amicon (Merck Sigma Aldrich)</td>
			<td>UFC5003</td>
			<td>Micro centrifuge tubes to concentrate protein. This facilitates buffer exchange and accurate sample loading for HDX-MS experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synapt G2-Si mass spectrometer</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>176850035</td>
			<td>Mass spectrometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Total recovery vials</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>600000671CV</td>
			<td>100 pack including caps - used for labelling tray in LEAP HDX-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T3253-250G</td>
			<td>Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma base</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T60040-B2005</td>
			<td>Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urea</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>U5378-1KG</td>
			<td>Chaotrope/Denaturant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VanGuard 2.1 x 5 mm ACQUITY BEH C18 column&#160;</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186004623</td>
			<td>Trap desalting column</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

millisecond hydrogen/deuterium-exchange mass spectrometry for the study of alpha-synuclein structural dynamics under physiological conditions

α-シヌクレイン(aSyn)は、パーキンソン病の特徴であるレビー小体および神経突起に線維凝集体が豊富に存在する本質的に障害のあるタンパク質である。しかし、その生物学的活性の多くは、その凝集と同様に、タンパク質の可溶性モノマー形態を中心的に含む。aSyn生物学や病態生理学の分子機構の解明には、構造的に高度に解像された方法が必要であり、生物学的条件に敏感である。そのネイティブに展開された準安定構造は、単量体aSynを多くの構造生物学技術にとって扱いにくくする。ここでは、そのようなアプローチの1つの適用が説明されています:aSynのような低い熱力学的安定性と弱い保護因子を有するタンパク質の研究のためのミリ秒時間スケールでの水素/重水素交換質量分析(HDX-MS)。ミリ秒の時間スケールでは、HDX-MSデータにはaSynの溶媒アクセス性と水素結合構造に関する情報が含まれており、これらはより長い標識時間で失われ、最終的にアミノ酸レベルまでの構造分解能が得られます。したがって、HDX-MSは、立体構造ダイナミクスと熱力学、分子内および分子間相互作用、および環境条件に対する突然変異または変化の構造的影響に関する情報を高い構造的および時間的分解能で提供することができます。広く適用可能ですが、単量体aSynでミリ秒のHDX-MS測定値を取得、分析、および解釈する方法が示されています。

その本質的に無秩序な性質のために、生理学的pHでaSynの複雑な構造変化を捕捉することは困難である。HDX-MSは、骨格アミド水素での同位体交換を監視し、タンパク質の立体構造ダイナミクスと相互作用をプローブします。この情報を高い構造的・時間的分解能で取得する数少ない手法の1つです。このプロトコルは、広範囲のタンパク質および緩衝液条件に広く適用可能であり、これは、ステ...

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Millisecond Hydrogen/Deuterium-Exchange Mass Spectrometry for the Study of Alpha-Synuclein Structural Dynamics Under Physiological Conditions

単量体α-シヌクレインの構造アンサンブルは、その生理学的機能および物理化学的特性に影響を及ぼす。本プロトコルは、ミリ秒の水素/重水素交換質量分析およびその後のデータ分析を実行して、生理学的条件下でこの本質的に無秩序なタンパク質のモノマー上の立体構造情報を決定する方法を記載する。

生理学的条件下でのα-シヌクレイン構造ダイナミクスの研究のためのミリ秒水素/重水素交換質量分析

Alpha-synuclein (aSyn) is an intrinsically disordered protein whose fibrillar aggregates are abundant in Lewy bodies and neurites, which are the hallmarks ...

すべての生物はプロテオームに障害があり、最大33%と推定され、これらの領域は水素/重水素交換質量分析によって観察可能ですが、ミリ秒の時間範囲でのみ観察できます。私たちのプロトコルは、これを正常に行う方法を紹介します。これは完全に自動化された分析技術です。あなたはすべてを設定し、希望の時間測定をプログラムし、ゴーとウォークアウトを打つだけです。この技術は、α-シヌクレインなどの本質的に無秩序なタンパク質の特異的な確認を安定化させる化合物をスクリーニングするエキサイティングな機会を開く。ペプチドマッピングのためのサンプル調製を開始するには、まず、マイナス80°Cの冷凍庫から保存されたα-シヌクレインタンパク質ストックのバイアルを取ります。そして解凍したら、0.22マイクロメートルのシリンジフィルターを使用してろ過します。次に、溶液の吸光度を218ナノメートルで測定し、Beer-Lambertの法則を用いてタンパク質濃度を決定し、平衡緩衝液でタンパク質を最終濃度5マイクロモルに希釈する。次に、オートサンプラーロボットをセットアップするには、5マイクロモルのタンパク質溶液を50マイクロリットルの合計回収バイアルに追加し、質量分析計に沿って水素/重水素交換(HDX)ロボットの右側のチャンバーのサンプル位置にバイアルを置きます。次に、左チャンバーの試薬位置1、4、5に平衡バッファーのバイアル1本とペプシン洗浄バッファーのバイアル2本を入れ、HDX右チャンバーの試薬位置1にクエンチバッファーのバイアル1本を入れ、ペルチェ温度コントローラーを使用して温度を摂氏20度に設定した。次いで、HDX左チャンバーおよびHDX右チャンバーの同じ反応位置にそれぞれ等しい数の総回収バイアルおよび最大回収バイアルを追加する。次に、スケジューリングソフトウェアで適切なLCおよびMSメソッドでサンプルリストを設定し、スケジュールを開始します。最終的なペプチドカバレッジマップを取得するには、DynamX HDXデータ分析ソフトウェアで同位体割り当てを手動でキュレーションします。Fast HDXプロトタイプ計測器をクリーニングした後、互換性のあるHDXソフトウェアのグラフィカルユーザーインターフェイスを開き、システムを初期化します。サンプルチャンバーとクエンチチャンバーの温度としてそれぞれ20°Cと0.5°Cを入力し、次に「設定」をクリックして新しい温度を適用します。装置を洗浄して準備するには、すべての入口にLC / MSグレードの水を入れた遠心分離管をセットアップし、滴定器配管供給タブで左右のシリンジの両方を確認し、チューブ内のすべての潜在気泡がなくなるまでプライムをクリックし続けます。シリンジのすべてのボックスをチェックするには、まずマクロタブに移動し、キャリブレーションシリンジホームポジションをクリックし、次に最初にシリンジロードループの洗浄をクリックし、続いてすべての混合ループボリュームを洗浄します。バッファーシリンジに気泡がある場合は、シリンジを取り外し、垂直に気泡を噴出させて脱気します。ゼロ位置に再較正する前に、シリンジを交換してください。HDX実験用のFast HDXプロトタイプ機器をセットアップするには、まず左の滴定入口チューブをトータルリカバリバイアルに挿入します。温度によるオリゴマー化と凝集を防ぐために、チューブを卓上冷蔵庫に入れます。次に、50ミリリットルの平衡、標識、急冷、およびペプシン洗浄バッファーを、装置の左右チャンバー内のそれぞれのバッファー入口に加え、続いて、50ミリリットルのカラム洗浄バッファーをペプシン洗浄入口に加えます。タンパク質とカラム洗浄ラインをプライミングするには、滴定器配管デリバリータブで左右のシリンジを確認し、プライムを1回クリックします。前述のようにシリンジのすべてのボックスをチェックしたら、手動急冷フロータブに移動して必要な設定を入力します。タイムコースの実験では、記号ドットボタンを使用してミリ秒単位で時間を入力します。次に、トラップ時間を 3 に設定し、HPLC がトラップ時間プラス実行時間 + 1.5 分になるまで待機します。サンプル実行の間に空白の実験を実行する場合は、各サンプル実行後に取得ソフトウェアに空白の実行のエントリを確認してから、[実行]空白ボックスをクリックします。サンプルリストの準備が整い、適切なエントリが強調表示されたら、ソフトウェアで[再生と高速HDX]をクリックして実行を開始します。データ処理の場合は、ペプチドマッピング実験からスペクトル的に割り当てられたペプチドのファイルのファイルメニューを開き、DynamXソフトウェアで開くをクリックしてから、生ファイルをDynamXソフトウェアにインポートします。データメニューを開いたら、[MSファイル]をクリックします。研究中の各タンパク質状態の状態を作成するには、新しい状態をクリックします。各HDXタイムポイントを追加するには、新しい露出をクリックしてから、[新しい生]をクリックします。raw ファイルをインポートするには、各ファイルを正しい位置にドラッグし、完了したら「OK」をクリックします。同位体を自動的に割り当てた後、高いデータ品質を確保するために、同位体割り当てを手動でキュレーションします。クラスタデータをcsvファイルにエクスポートし、原稿に記載されているように列順に記述します。質量測定ソフトウェアでデータメニューを開き、クラスタデータのエクスポートをクリックします。データ分析の場合は、まずエクスポートしたクラスター化データをHDX分析ソフトウェアHDfleXにロードします。すべての実験と状態の実験データを適合させるには、適切な逆交換補正方法を選択して、HDX反応の観測された速度定数を取得します。次に、HDfleX の推奨方法を使用してグローバル有意性しきい値を計算し、ハイブリッド有意性検定を実行して、比較された状態間の有意差を決定します。α-シヌクレインのマッピング実験では、タンパク質配列の100%を平均冗長性3.79でカバーするペプチドカバレッジマップが生成されました。さらに、このプロトコルは、α-シヌクレインの異なるペプチドの重水素取り込み曲線の生成を可能にし、それを適合および逆交換補正グラフとして表現した。α-シヌクレインにおけるほとんどの水素/重水素交換が1秒で行われたことは明らかであった。α-シヌクレインの状態Aと状態Bの間の立体構造の違いは、ペプチドおよびアミノ酸レベルの両方で状態Bによるより高い重水素取り込みからも明らかであった。このような高感度の手法では、データを比較するときに堅牢な統計的有意性検定を使用することが重要です。ここでは、ソフトウェアHDfleXを使用しました。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

腸神経系ではα-シヌクレインの介在物の強制経口および画像解析を用いたロテノンの経口投与

In Parkinson's disease (PD) patients, the associated pathology follows a characteristic pattern involving inter alia the enteric nervous system (ENS) 1,2, ...

Lineage-reprogramming of Pericyte-derived Cells of the Adult Human Brain into Induced Neurons

誘導された神経細胞への成人の脳の周皮細胞由来細胞の系統の再プログラミング

Direct lineage-reprogramming of non-neuronal cells into induced neurons (iNs) may provide insights into the molecular mechanisms underlying neurogenesis ...

Implantation of Miniosmotic Pumps and Delivery of Tract Tracers to Study Brain Reorganization in Pathophysiological Conditions

ミニ浸透圧の移植は、病態生理学的状態で脳の再編成を検討するためにポンプ冊子トレーサーの配達

Pharmacological treatment in animal models of cerebral disease imposes the problem of repeated injection protocols that may induce stress in animals and ...

Sequential Extraction of Soluble and Insoluble Alpha-Synuclein from Parkinsonian Brains

パーキンソン脳からの可溶性および不溶性のα-シヌクレインの逐次抽出

Alpha-synuclein (&#945;-syn) protein is abundantly expressed mainly within neurons, and exists in a number of different forms - monomers, tetramers, ...

In-depth Physiological Analysis of Defined Cell Populations in Acute Tissue Slices of the Mouse Vomeronasal Organ

マウス鋤鼻器官の急性組織スライスで定義された細胞集団の中で、深さ生理学的解析

In most mammals, the vomeronasal organ (VNO) is a chemosensory structure that detects both hetero- and conspecific social cues. Vomeronasal sensory ...

Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

反応性アストロ サイトと増殖の in Vitro虚血のような条件下での監視

Ischemic stroke is a complex brain injury caused by a thrombus or embolus obstructing blood flow to parts of the brain. This leads to deprivation of ...

Sublimation of DAN Matrix for the Detection and Visualization of Gangliosides in Rat Brain Tissue for MALDI Imaging Mass Spectrometry

MALDIイメージングマススペクトロメトリーのためのラット脳組織におけるガングリオシドの検出と可視化のためのDANマトリックスの昇華

Sample preparation is key for optimal detection and visualization of analytes in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI) Imaging Mass ...

Bioluminescence Imaging of Neuroinflammation in Transgenic Mice After Peripheral Inoculation of Alpha-Synuclein Fibrils

α-シヌクレイン線維の末梢接種後のトランスジェニックマウスにおける神経炎症の生物発光イメージング

To study the prion-like behavior of misfolded alpha-synuclein, mouse models are needed that allow fast and simple transmission of alpha-synuclein ...

Time-dependent Increase in the Network Response to the Stimulation of Neuronal Cell Cultures on Micro-electrode Arrays

マイクロ電極アレイにおけるニューロン細胞培養の刺激に対するネットワーク応答の時間依存的増加

Micro-electrode arrays (MEAs) can be used to investigate drug toxicity, design paradigms for next-generation personalized medicine, and study network ...

Levator Auris Longus Preparation for Examination of Mammalian Neuromuscular Transmission Under Voltage Clamp Conditions

Levator Auris Longus Preparation for Examination of Mammalian Neuromuscular Transmission Under Voltage Clamp Conditions

オーリスの挙筋哺乳類の神経筋伝達電圧クランプ条件下での試験のための準備

This protocol describes a technique to record synaptic transmission from the neuromuscular junction under current-clamp and voltage-clamp conditions. An ...