Name: isolation of monocyte-macrophage lineage cells from rat bones by secondary adherence method
Uploaded: 2022-07-13T15:00:00
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Ce travail a été soutenu par la Fondation des sciences naturelles de la province du Zhejiang (subvention no. LY19H060001) et le projet de plan scientifique et technologique de la médecine traditionnelle chinoise du Zhejiang (n° 2022ZB093).

Toutes les expériences de cette étude ont été menées conformément aux directives d’expérimentation animale du Centre de recherche sur les animaux de laboratoire de l’Université médicale chinoise du Zhejiang (numéro d’approbation: IACUC-20181029-11).
1. Extraction cellulaire
<ol><li>Placez les rats Sprague-Dawley (rats SD, âgés de 1 à 10 jours, mâles ou femelles) dans les cages d’euthanasie remplies de CO2 à un taux équilibré de 30% à 70% ...

<ol>
	<li>Jakubzick, C. V., Randolph, G. J., Henson, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+differentiation+and+antigen-presenting+functions.">Monocyte differentiation and antigen-presenting functions.</a> Nature Reviews. Immunology. 17 (6), 349-362 (2017).</li><li>Locati, M., Curtale, G., Mantovani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity,+mechanisms,+and+significance+of+macrophage+plasticity.">Diversity, mechanisms, and significance of macrophage plasticity.</a> Annual Review of Pathology. 15 (1), 123-147 (2020).</li><li>Boyle, W. J., Simonet, W. S., Lacey, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclast+differentiation+and+activation.">Osteoclast differentiation and activation.</a> Nature. 423 (6937), 337-342 (2003).</li><li>Ono, T., Nakashima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+osteoclast+biology.">Recent advances in osteoclast biology.</a> Histochemistry and Cell Biology. 149 (4), 325-341 (2018).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/&#223;-catenin-mediated+p53+suppression+is+indispensable+for+osteogenesis+of+mesenchymal+progenitor+cells.">Wnt/&#223;-catenin-mediated p53 suppression is indispensable for osteogenesis of mesenchymal progenitor cells.</a> Cell Death &amp; Disease. 12 (6), 521-534 (2021).</li><li>Yu, Q., Zhao, B., He, Q., Zhang, Y., Peng, X. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=microRNA-206+is+required+for+osteoarthritis+development+through+its+effect+on+apoptosis+and+autophagy+of+articular+chondrocytes+via+modulating+the+phosphoinositide+3-kinase/protein+kinase+B-mTOR+pathway+by+targeting+insulin-like+growth+factor-1.">microRNA-206 is required for osteoarthritis development through its effect on apoptosis and autophagy of articular chondrocytes via modulating the phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B-mTOR pathway by targeting insulin-like growth factor-1.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 120 (4), 5287-5303 (2019).</li><li>Li, Z., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+for+investigating+how+bone+marrow+adipocytes+influence+bone+and+hematopoietic+cellularity.">Preclinical models for investigating how bone marrow adipocytes influence bone and hematopoietic cellularity.</a> Best Practice &amp; Research. Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 35 (4), 101547-101560 (2021).</li><li>Horowitz, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=marrow+adipocytes.">marrow adipocytes.</a> Adipocyte. 6 (3), 193-204 (2017).</li><li>Maridas, D. E., Rendina-Ruedy, E., Le, P. T., Rosen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture,+and+differentiation+of+bone+marrow+stromal+cells+and+osteoclast+progenitors+frommice.">Isolation, culture, and differentiation of bone marrow stromal cells and osteoclast progenitors frommice.</a> Journal of Visualized Experiments. (131), e56750 (2018).</li><li>Schyns, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-classical+tissue+monocytes+and+two+functionally+distinct+populations+of+interstitial+macrophages+populate+the+mouse+lung.">Non-classical tissue monocytes and two functionally distinct populations of interstitial macrophages populate the mouse lung.</a> Nature Communications. 10 (1), 3964-3980 (2019).</li><li>Atif, S. M., Gibbings, S. L., Jakubzick, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+identification+of+interstitial+macrophages+from+the+lungs+using+different+digestion+enzymes+and+staining+strategies.">Isolation and identification of interstitial macrophages from the lungs using different digestion enzymes and staining strategies.</a> Methods in Molecular Biology. 1784, 69-76 (2018).</li><li>Scheven, B. A., Milne, J. S., Robins, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sequential+culture+approach+to+study+osteoclast+differentiation+from+nonadherent+porcine+bone+marrow+cells.">A sequential culture approach to study osteoclast differentiation from nonadherent porcine bone marrow cells.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology. Animal. 34 (7), 568-577 (1998).</li><li>Bradley, E. W., Oursler, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclast+culture+and+resorption+assays.">Osteoclast culture and resorption assays.</a> Methods in Molecular Biology. , 19-35 (2008).</li><li>Yu, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+myeloid+cells+in+human+blood,+bronchoalveolar+lavage,+and+lung+tissues.">Flow cytometric analysis of myeloid cells in human blood, bronchoalveolar lavage, and lung tissues.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 54 (1), 13-24 (2016).</li><li>Gibbings, S. L., Jakubzick, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+consistent+method+to+identify+and+isolate+mononuclear+phagocytes+from+human+lung+and+lymph+nodes.">A consistent method to identify and isolate mononuclear phagocytes from human lung and lymph nodes.</a> Methods in Molecular Biology. 1799, 381-395 (2018).</li><li>Jacquin, C., Gran, D. E., Lee, S. K., Lorenzo, J. A., Aguila, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+multiple+osteoclast+precursor+populations+in+murine+bone+marrow.">Identification of multiple osteoclast precursor populations in murine bone marrow.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 21 (1), 67-77 (2006).</li><li>Gibbings, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+unique+interstitial+macrophages+in+the+murine+lung+at+steady+state.">Three unique interstitial macrophages in the murine lung at steady state.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (1), 66-76 (2017).</li><li>Higashi, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-high-speed+western+blot+using+immunoreaction+enhancing+technology.">Ultra-high-speed western blot using immunoreaction enhancing technology.</a> Journal of Visualized Experiments. (163), e61657 (2020).</li><li>Gallagher, S., Chakavarti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoblot+analysis.">Immunoblot analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. 20 (16), 759 (2008).</li><li>Yin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycyrrhizic+acid+suppresses+osteoclast+differentiation+and+postmenopausal+osteoporosis+by+modulating+the+NF-&#954;B,+ERK,+and+JNK+signaling+pathways.">Glycyrrhizic acid suppresses osteoclast differentiation and postmenopausal osteoporosis by modulating the NF-&#954;B, ERK, and JNK signaling pathways.</a> European Journal of Pharmocology. 859, 172550 (2019).</li><li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LRRc17+controls+BMSC+senescence+via+mitophagy+and+inhibits+the+therapeutic+effect+of+BMSCs+on+ovariectomy-induced+bone+loss.">LRRc17 controls BMSC senescence via mitophagy and inhibits the therapeutic effect of BMSCs on ovariectomy-induced bone loss.</a> Redox Biology. , (2021).</li><li>Jin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thioacetamide+promotes+osteoclast+transformation+of+bone+marrow+macrophages+by+influencing+PI3K/AKT+pathways.">Thioacetamide promotes osteoclast transformation of bone marrow macrophages by influencing PI3K/AKT pathways.</a> Journal of Orthopedic Surgery and Research. 17 (1), 53-63 (2022).</li></ol>

Les ostéoclastes sont l’un des types de cellules les plus importants impliqués dans l’apparition et le développement de maladies osseuses, ainsi que l’un des principaux objets de la recherche sur les maladiesosseuses 20. Les monocytes/macrophages peuvent se différencier en ostéoclastes. Étant donné que les macrophages mononucléaires (cellules RAW264.7) sont trop chers à l’achat et sont facilement activés pendant la culture, il est difficile d’effectuer des expériences de d...

Il a été rapporté que les cellules de la lignée monocyte-macrophage existant dans la moelle osseuse peuvent se différencier en monocytes sanguins et macrophages tissulaires 1,2. Les cellules ci-dessus, qui peuvent se différencier en ostéoclastes pour équilibrer la croissance et le développement osseux, sont couramment utilisées comme modèle cellulaire pour induire des ostéoclastes in vivo 3,4. La moelle osseuse est un tissu spécial contenant plusieurs types de cellules, qui comprennent, mais ne sont pas limités aux cellules souches mésenchymateuses de la moelle osseuse, aux cellules monocytaires-macrophages de la moelle osseuse (BMM), aux cellules souches hématopoïétiques, aux cellules endothéliales et aux cellules immunitaires. En fait, plusieurs études antérieures ont suggéré que les cellules adhérentes se précipitaient hors de la cavité de la moelle osseuse de l’os long pourraient se différencier en ostéoblastes, ostéoclastes, chondrocytes ou adipocytes 5,6,7,8. Bien que différentes méthodes d’isolement et de culture aient été utilisées pour produire différentes populations cellulaires homogènes, il existe encore de grands défis dans l’isolement et la culture de MGM à partir d’une variété de types cellulaires différents.
Plusieurs méthodes ont été mises au point pour extraire les macrophages mononucléaires de la moelle osseuse (BMSC). Cependant, la majorité de ces méthodes sont complexes 9,10,11. Par exemple, la centrifugation par gradient de densité nécessite un kit spécialisé et l’opération prend du temps et est lourde. Cette méthode convient à l’isolement des BMM à partir d’échantillons de sang à volume élevé, mais pas d’échantillons de moelle osseuse 9,12,13. En outre, l’extraction d’échantillons de tissus à l’aide de la digestion à la collagénase est une procédure complexe et longue; cette méthode n’est pas recommandée pour l’isolement des BMM à partir d’échantillons de moelle osseuse14,15. En outre, bien que la séparation des flux puisse entraîner des populations de monocytes/macrophages hautement purifiées, elle nécessite des échantillons de très grande taille et des exigences élevées en instruments et en équipement10,16. De plus, la méthode d’enrichissement des microbilles est extrêmement coûteuse et n’est pas réalisable dans un laboratoire général17.
Par conséquent, dans la présente étude, une méthode pratique, rapide et bon marché a été proposée pour isoler les macrophages mononucléaires de la moelle osseuse. Les cellules de la moelle osseuse adhérées à différents moments ont été utilisées pour isoler les MMO à l’aide d’une méthode d’adhérence secondaire. Les BMM extraits avec la méthode ci-dessus pourraient induire la formation d’ostéoclastes in vitro, fournissant ainsi un modèle cellulaire simple et pratique pour l’étude future de l’ostéoporose in vitro.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>35 mm2 cell climbing slices</td>
			<td>NEST Biotechnology</td>
			<td>80102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-cathepsin K</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab19027</td>
			<td>1:1,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD11 isotype control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab172730</td>
			<td>1 &#956;g/test,1.675 mg/Ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD11b/c</td>
			<td>Absin</td>
			<td>abs124232</td>
			<td>&#160;1&#956;g/test, 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-TRAP</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab191406</td>
			<td>1:1,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#946;-actin</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>&#160;AF5003</td>
			<td>1:1,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell climbing slices</td>
			<td>NEST Biotechnology</td>
			<td>80102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture dish</td>
			<td>corning</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask</td>
			<td>corning</td>
			<td>430168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11995500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit IgG</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab150077</td>
			<td>for IF, 1:2,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat anti-rabbit IgG</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6721</td>
			<td>for WB, 1:2,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Pepro tech</td>
			<td>400-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL302A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Pepro tech</td>
			<td>400-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SD rat</td>
			<td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd</td>
			<td></td>
			<td>1-10 days old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE gel preparation kit</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRAP/ALP Staining Kit</td>
			<td>Wako</td>
			<td>294-67001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA solution</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL512A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wright-Giemsa solution</td>
			<td>Keygen Biotech</td>
			<td>KGA225-1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of monocyte-macrophage lineage cells from rat bones by secondary adherence method

Avec une diminution de la densité minérale osseuse, les os sont plus susceptibles de se fracturer, affectant ainsi négativement la qualité de vie d’un patient. La croissance et le développement des os sont principalement régulés par les ostéoblastes et les ostéoclastes. Il a été largement admis que les ostéoclastes sont dérivés de cellules monoculo-macrophages (BMM) de la moelle osseuse. Les BMM et autres cellules souches hématopoïétiques sont situées dans la cavité de la moelle osseuse. Par conséquent, isoler des BMM stables uniques à partir de populations cellulaires différentes et hétérogènes est un énorme défi. Nous présentons ici un protocole pour l’isolement des BMM chez les rats SD, appelé méthode d’observance secondaire. Des cellules adhérentes cultivées pendant 24 à 48 h en culture primaire ont été collectées. L’analyse cytométrique en flux a montré qu’environ 37,94 % des cellules étaient CD11b/c+ (antigène de surface monocyte-macrophage). La coloration à la phosphatase acide résistante au tartrate (TRAP) et l’analyse par transfert western ont démontré que les MGM pouvaient se différencier en ostéoclastes in vitro. Les résultats ci-dessus suggèrent que les cellules d’adhérence secondaires pourraient être considérées comme un modèle cellulaire approprié pour la recherche sur la différenciation des ostéoclastes.

La population de cellules adhérentes secondaires était stable et uniforme. Avec la prolifération cellulaire continue, la majorité des cellules sont devenues plus grandes, de forme irrégulière et se sont développées en un disque adhérent radial (Figure 2C, D). La cytométrie en flux a montré que le pourcentage de cellules exprimant CD11b/c, un marqueur moléculaire à la surface des cellules de la lignée monocyte-macrophage, était ...

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Isolation of Monocyte-Macrophage Lineage Cells from Rat Bones by Secondary Adherence Method

Nous présentons ici un protocole pour l’isolement des BMM chez les rats SD, appelé méthode d’observance secondaire.

Isolement des cellules de la lignée monocyte-macrophage à partir d’os de rat par la méthode d’adhérence secondaire

With a decrease of bone mineral density, bones are more likely to fracture, thus negatively affecting a patient's quality of life. The growth and ...

Dans ce protocole, les cellules monocytes-macrophages de la moelle osseuse sont extraites par une méthode d’adhérence secondaire. Les cellules monoculo-macrophages de la moelle osseuse peuvent se différencier avec succès en ostéoclastes, ce qui fournit un modèle cellulaire stable pour l’étude des ostéoclastes in vitro. Cette méthode convient aux petits échantillons de moelle osseuse et peut extraire les cellules de monocytes-macrophages de la moelle osseuse simplement et rapidement sans nécessiter d’équipement de laboratoire de haute technologie.L’augmentation des ostéoclastes peut être la pathogenèse potentielle de l’ostéoporose. Les cellules monoculo-macrophages de la moelle osseuse ont une certaine valeur de recherche en tant que cellules précurseurs d’ostéoclastes. Pour commencer, immergez les rats euthanasiés dans de l’alcool à 75% pendant 10 minutes pour les désinfecter.Après avoir soigneusement retiré tous les membres du rat avec des ciseaux et des pinces, aspirez avec du PBS à l’aide d’une pipette et rincez le sang adhérant aux membres. Puis à deux millilitres du DMEM FBS à 10% dans un tube de cinq millilitres. Après avoir transféré les os des membres dans le tube de cinq millilitres, utilisez des ciseaux pour couper les os des membres dans le tube en petits morceaux et mélangez l’homogénat pour remettre en suspension les cellules de la moelle osseuse dans le milieu de culture.Rester debout pendant cinq minutes jusqu’à ce que les fragments de tissu se déposent au fond du tube. Ensuite, ajoutez 10 millilitres de 10% FBS DMEM dans une antenne de culture de 100 millimètres, puis transférez le surnageant dans la boîte de culture. Incuber à 37 degrés Celsius dans du dioxyde de carbone à 5% pendant environ 24 heures.Après ce temps d’incubation, la majorité des cellules souches mésenchymateuses adhéreront à la paroi de la boîte de culture et se développeront lentement, tandis que la plupart des cellules monocytaires-macrophages de la moelle osseuse seront toujours en suspension dans le milieu de culture. Transférer la suspension cellulaire dans la boîte de culture de 100 millimètres dans une nouvelle fiole carrée de 25 centimètres et continuer à cultiver les cellules à 37 degrés Celsius dans 5% de dioxyde de carbone pendant 24 heures supplémentaires. Après avoir retiré soigneusement l’ancien milieu, remplacez-le par un milieu frais après que les cellules monocytes-macrophages de la moelle osseuse ont adhéré à la paroi de la fiole.La cytométrie en flux a montré que le pourcentage de cellules exprimant CD11b et c, un marqueur moléculaire à la surface des cellules de la lignée monocyte-macrophage, était d’environ 37,94% Avec la prolifération cellulaire continue, la majorité des cellules sont devenues plus grandes dans une forme irrégulière et se sont développées en un disque adhérent radial. Les résultats de la coloration TRAP ont montré que par rapport au groupe témoin, le nombre de granules rouge violet intracellulaires était significativement augmenté dans les cellules induites par l’activateur du récepteur du ligand kappa B du facteur nucléaire et du facteur stimulant les colonies de macrophages. L’analyse par transfert western a démontré que les niveaux d’expression des protéines spécifiques des ostéoclastes TRAP et de la cathepsine K étaient significativement augmentés dans les cellules traitées par rapport au groupe témoin.La chose la plus importante dans cette procédure est le temps de collecter les cellules adhérentes secondaires dans 24 à 48 heures de culture primaire, les cellules monocytes-macrophages de la moelle osseuse commencent à adhérer complètement. Les cellules monocytaires-macrophages de la moelle osseuse isolées par cette méthode peuvent être induites en ostéoclastes in vitro, fournissant un modèle cellulaire stable pour l’étude de l’ostéoporose.

Research

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Medicine

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Un modèle de Disturbed flux athérosclérose induite chez la souris artère carotide par ligature partielle et une méthode simple d&#39;isolement d&#39;ARN de l&#39;endothélium carotidienne

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Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

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