Name: isolation of monocyte-macrophage lineage cells from rat bones by secondary adherence method
Uploaded: 2022-07-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Monocyte-Macrophage Lineage Cells from Rat Bones by Secondary Adherence Method at JoVE.com

Bu çalışma Zhejiang Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı tarafından desteklenmiştir (hibe no. LY19H060001) ve Zhejiang Geleneksel Çin Tıbbı Bilim ve Teknoloji Planı Projesi (no. 2022ZB093).

Bu çalışmadaki tüm deneyler, Zhejiang Çin Tıp Üniversitesi Laboratuvar Hayvanları Araştırma Merkezi'nin hayvan deneyi kılavuzlarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir (Onay No: IACUC-20181029-11).
1. Hücre ekstraksiyonu
<ol><li>Sprague-Dawley sıçanlarını (SD sıçanları, 1-10 günlük, erkek veya dişi) CO2 ile dolu ötenazi kafeslerine% 30-70 konteyner hacmi / dakika arasında dengeli bir oranda koyun. Sıçanlar bilincini kaybettikten sonra (...

<ol>
	<li>Jakubzick, C. V., Randolph, G. J., Henson, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+differentiation+and+antigen-presenting+functions.">Monocyte differentiation and antigen-presenting functions.</a> Nature Reviews. Immunology. 17 (6), 349-362 (2017).</li><li>Locati, M., Curtale, G., Mantovani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity,+mechanisms,+and+significance+of+macrophage+plasticity.">Diversity, mechanisms, and significance of macrophage plasticity.</a> Annual Review of Pathology. 15 (1), 123-147 (2020).</li><li>Boyle, W. J., Simonet, W. S., Lacey, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclast+differentiation+and+activation.">Osteoclast differentiation and activation.</a> Nature. 423 (6937), 337-342 (2003).</li><li>Ono, T., Nakashima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+osteoclast+biology.">Recent advances in osteoclast biology.</a> Histochemistry and Cell Biology. 149 (4), 325-341 (2018).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/&#223;-catenin-mediated+p53+suppression+is+indispensable+for+osteogenesis+of+mesenchymal+progenitor+cells.">Wnt/&#223;-catenin-mediated p53 suppression is indispensable for osteogenesis of mesenchymal progenitor cells.</a> Cell Death &amp; Disease. 12 (6), 521-534 (2021).</li><li>Yu, Q., Zhao, B., He, Q., Zhang, Y., Peng, X. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=microRNA-206+is+required+for+osteoarthritis+development+through+its+effect+on+apoptosis+and+autophagy+of+articular+chondrocytes+via+modulating+the+phosphoinositide+3-kinase/protein+kinase+B-mTOR+pathway+by+targeting+insulin-like+growth+factor-1.">microRNA-206 is required for osteoarthritis development through its effect on apoptosis and autophagy of articular chondrocytes via modulating the phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B-mTOR pathway by targeting insulin-like growth factor-1.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 120 (4), 5287-5303 (2019).</li><li>Li, Z., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+for+investigating+how+bone+marrow+adipocytes+influence+bone+and+hematopoietic+cellularity.">Preclinical models for investigating how bone marrow adipocytes influence bone and hematopoietic cellularity.</a> Best Practice &amp; Research. Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 35 (4), 101547-101560 (2021).</li><li>Horowitz, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=marrow+adipocytes.">marrow adipocytes.</a> Adipocyte. 6 (3), 193-204 (2017).</li><li>Maridas, D. E., Rendina-Ruedy, E., Le, P. T., Rosen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture,+and+differentiation+of+bone+marrow+stromal+cells+and+osteoclast+progenitors+frommice.">Isolation, culture, and differentiation of bone marrow stromal cells and osteoclast progenitors frommice.</a> Journal of Visualized Experiments. (131), e56750 (2018).</li><li>Schyns, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-classical+tissue+monocytes+and+two+functionally+distinct+populations+of+interstitial+macrophages+populate+the+mouse+lung.">Non-classical tissue monocytes and two functionally distinct populations of interstitial macrophages populate the mouse lung.</a> Nature Communications. 10 (1), 3964-3980 (2019).</li><li>Atif, S. M., Gibbings, S. L., Jakubzick, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+identification+of+interstitial+macrophages+from+the+lungs+using+different+digestion+enzymes+and+staining+strategies.">Isolation and identification of interstitial macrophages from the lungs using different digestion enzymes and staining strategies.</a> Methods in Molecular Biology. 1784, 69-76 (2018).</li><li>Scheven, B. A., Milne, J. S., Robins, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sequential+culture+approach+to+study+osteoclast+differentiation+from+nonadherent+porcine+bone+marrow+cells.">A sequential culture approach to study osteoclast differentiation from nonadherent porcine bone marrow cells.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology. Animal. 34 (7), 568-577 (1998).</li><li>Bradley, E. W., Oursler, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclast+culture+and+resorption+assays.">Osteoclast culture and resorption assays.</a> Methods in Molecular Biology. , 19-35 (2008).</li><li>Yu, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+myeloid+cells+in+human+blood,+bronchoalveolar+lavage,+and+lung+tissues.">Flow cytometric analysis of myeloid cells in human blood, bronchoalveolar lavage, and lung tissues.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 54 (1), 13-24 (2016).</li><li>Gibbings, S. L., Jakubzick, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+consistent+method+to+identify+and+isolate+mononuclear+phagocytes+from+human+lung+and+lymph+nodes.">A consistent method to identify and isolate mononuclear phagocytes from human lung and lymph nodes.</a> Methods in Molecular Biology. 1799, 381-395 (2018).</li><li>Jacquin, C., Gran, D. E., Lee, S. K., Lorenzo, J. A., Aguila, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+multiple+osteoclast+precursor+populations+in+murine+bone+marrow.">Identification of multiple osteoclast precursor populations in murine bone marrow.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 21 (1), 67-77 (2006).</li><li>Gibbings, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+unique+interstitial+macrophages+in+the+murine+lung+at+steady+state.">Three unique interstitial macrophages in the murine lung at steady state.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (1), 66-76 (2017).</li><li>Higashi, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-high-speed+western+blot+using+immunoreaction+enhancing+technology.">Ultra-high-speed western blot using immunoreaction enhancing technology.</a> Journal of Visualized Experiments. (163), e61657 (2020).</li><li>Gallagher, S., Chakavarti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoblot+analysis.">Immunoblot analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. 20 (16), 759 (2008).</li><li>Yin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycyrrhizic+acid+suppresses+osteoclast+differentiation+and+postmenopausal+osteoporosis+by+modulating+the+NF-&#954;B,+ERK,+and+JNK+signaling+pathways.">Glycyrrhizic acid suppresses osteoclast differentiation and postmenopausal osteoporosis by modulating the NF-&#954;B, ERK, and JNK signaling pathways.</a> European Journal of Pharmocology. 859, 172550 (2019).</li><li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LRRc17+controls+BMSC+senescence+via+mitophagy+and+inhibits+the+therapeutic+effect+of+BMSCs+on+ovariectomy-induced+bone+loss.">LRRc17 controls BMSC senescence via mitophagy and inhibits the therapeutic effect of BMSCs on ovariectomy-induced bone loss.</a> Redox Biology. , (2021).</li><li>Jin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thioacetamide+promotes+osteoclast+transformation+of+bone+marrow+macrophages+by+influencing+PI3K/AKT+pathways.">Thioacetamide promotes osteoclast transformation of bone marrow macrophages by influencing PI3K/AKT pathways.</a> Journal of Orthopedic Surgery and Research. 17 (1), 53-63 (2022).</li></ol>

Osteoklastlar, kemik hastalıklarının ortaya çıkmasında ve gelişmesinde rol oynayan en önemli hücre tiplerinden biridir ve kemik hastalığı araştırmalarının birincil hedeflerinden biridir20. Monosit / makrofajlar osteoklastlara farklılaşabilir. Mononükleer makrofajlar (RAW264.7 hücreleri) satın almak için çok pahalı olduğundan ve kültür sırasında kolayca aktive edildiğinden, bu hücre hattını kullanarak in vitro farklılaşma deneyleri yapmak zordur. Kemik il...

Kemik iliğinde bulunan monosit-makrofaj soy hücrelerinin kan monositlerine ve doku makrofajlarına farklılaşabileceği bildirilmiştir 1,2. Kemik büyümesini ve gelişimini dengelemek için osteoklastlara farklılaşabilen yukarıdaki hücreler, in vivo 3,4 osteoklastlarını indüklemek için yaygın olarak bir hücre modeli olarak kullanılır. Kemik iliği, kemik iliği mezenkimal kök hücreleri, kemik iliği monosit-makrofaj hücreleri (BMM'ler), hematopoetik kök hücreler, endotel hücreleri ve bağışıklık hücrelerini içeren ancak bunlarla sınırlı olmayan birkaç farklı hücre türü içeren özel bir dokudur. Aslında, önceki birkaç çalışma, uzun kemiğin kemik iliği boşluğundan dışarı fırlayan yapışkan hücrelerin osteoblastlara, osteoklastlara, kondrositlere veya adipositlere 5,6,7,8 olarak farklılaşabileceğini öne sürdü. Farklı homojen hücre popülasyonları üretmek için farklı izolasyon ve kültür yöntemleri kullanılmış olsa da, BMM'leri çeşitli farklı hücre tiplerinden izole etmek ve kültürlemek için hala büyük zorluklar vardır.
Kemik iliği mononükleer makrofajlarını (BMSC'ler) çıkarmak için çeşitli yöntemler geliştirilmiştir. Bununla birlikte, bu yöntemlerin çoğunluğu karmaşıktır 9,10,11. Örneğin, yoğunluk gradyanı santrifüjleme özel bir kit gerektirir ve işlem zaman alıcı ve hantaldır. Bu yöntem, BMM'lerin yüksek hacimli kan örneklerinden izole edilmesi için uygundur, ancak kemik iliği örneklerinden 9,12,13 için uygun değildir. Ek olarak, kollajenaz sindirimi kullanarak doku örneklerinin çıkarılması karmaşık ve zaman alıcı bir prosedürdür; BMM'lerin kemik iliği örneklerinden izolasyonu için bu yöntem önerilmez14,15. Ek olarak, akış ayrımı yüksek oranda saflaştırılmış monosit/makrofaj popülasyonlarına neden olabilse de, çok büyük numune boyutları ve yüksek cihaz ve ekipman gereksinimleri gerektirir10,16. Ek olarak, mikroboncuk zenginleştirme yöntemi son derece pahalıdır ve genel bir laboratuvarda uygulanabilir değildir17.
Bu nedenle, mevcut çalışmada, mononükleer makrofajların kemik iliğinden izole edilmesi için uygun, hızlı ve ucuz bir yöntem önerilmiştir. Farklı zaman noktaları için yapıştırılan kemik iliği hücreleri, ikincil bir aderans yöntemi kullanılarak BMM'leri izole etmek için kullanıldı. Yukarıdaki yöntemle ekstrakte edilen BMM'ler, in vitro osteoklastların oluşumunu indükleyebilir, böylece in vitro osteoporozun gelecekteki çalışması için basit ve kullanışlı bir hücre modeli sağlayabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>35 mm2 cell climbing slices</td>
			<td>NEST Biotechnology</td>
			<td>80102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-cathepsin K</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab19027</td>
			<td>1:1,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD11 isotype control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab172730</td>
			<td>1 &#956;g/test,1.675 mg/Ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD11b/c</td>
			<td>Absin</td>
			<td>abs124232</td>
			<td>&#160;1&#956;g/test, 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-TRAP</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab191406</td>
			<td>1:1,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#946;-actin</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>&#160;AF5003</td>
			<td>1:1,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell climbing slices</td>
			<td>NEST Biotechnology</td>
			<td>80102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture dish</td>
			<td>corning</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask</td>
			<td>corning</td>
			<td>430168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11995500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit IgG</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab150077</td>
			<td>for IF, 1:2,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat anti-rabbit IgG</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6721</td>
			<td>for WB, 1:2,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Pepro tech</td>
			<td>400-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL302A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Pepro tech</td>
			<td>400-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SD rat</td>
			<td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd</td>
			<td></td>
			<td>1-10 days old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE gel preparation kit</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRAP/ALP Staining Kit</td>
			<td>Wako</td>
			<td>294-67001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA solution</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL512A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wright-Giemsa solution</td>
			<td>Keygen Biotech</td>
			<td>KGA225-1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of monocyte-macrophage lineage cells from rat bones by secondary adherence method

Kemik mineral yoğunluğunun azalmasıyla, kemiklerin kırılma olasılığı daha yüksektir, bu nedenle hastanın yaşam kalitesini olumsuz yönde etkiler. Kemiklerin büyümesi ve gelişmesi esas olarak osteoblastlar ve osteoklastlar tarafından düzenlenir. Osteoklastların kemik iliği monosit-makrofaj hücrelerinden (BMM'ler) türetildiği yaygın olarak kabul edilmektedir. BMM'ler ve diğer hematopoetik kök hücreler kemik iliği boşluğunda bulunur. Bu nedenle, tek kararlı BMM'leri farklı ve heterojen hücre popülasyonlarından izole etmek büyük bir zorluktur. Burada, BMM'lerin SD sıçanlardan izolasyonu için ikincil aderans yöntemi olarak adlandırılan bir protokol sunuyoruz. Primer kültürde 24-48 saat kültüre alınan yapışık hücreler toplandı. Akım sitometrik analiz, hücrelerin yaklaşık% 37.94'ünün CD11b / c + (monosit-makrofaj yüzey antijeni) olduğunu göstermiştir. Tartarat dirençli asit fosfataz (TRAP) boyama ve batı leke analizi, BMM'lerin in vitro osteoklastlara farklılaşabileceğini göstermiştir. Yukarıdaki bulgular, sekonder aderans hücrelerinin osteoklast farklılaşma araştırması için uygun bir hücresel model olarak düşünülebileceğini düşündürmektedir.

İkincil aderans hücre popülasyonu stabil ve tekdüzeydi. Sürekli hücre proliferasyonu ile hücrelerin çoğunluğu düzensiz şekilli olarak daha büyük hale geldi ve radyal yapışkan bir diske dönüştü (Şekil 2C, D). Akım sitometrisi, monosit-makrofaj soy hücrelerinin yüzeyinde moleküler bir belirteç olan CD11b/c'yi eksprese eden hücrelerin yüzdesinin yaklaşık %37.94 olduğunu göstermiştir (Şekil 2...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Monocyte-Macrophage Lineage Cells from Rat Bones by Secondary Adherence Method at JoVE.com

Isolation of Monocyte-Macrophage Lineage Cells from Rat Bones by Secondary Adherence Method

Burada, BMM'lerin SD sıçanlardan izolasyonu için ikincil aderans yöntemi olarak adlandırılan bir protokol sunuyoruz.

Monosit-Makrofaj Soy Hücrelerinin Sıçan Kemiklerinden İkincil Aderans Yöntemi ile İzolasyonu

With a decrease of bone mineral density, bones are more likely to fracture, thus negatively affecting a patient's quality of life. The growth and ...

Bu protokolde kemik iliği monosit-makrofaj hücreleri sekonder aderans yöntemi ile ekstrakte edilir. Kemik iliği monosit-makrofaj hücreleri, osteoklastların in vitro çalışması için stabil bir hücre modeli sağlayan osteoklastlara başarılı bir şekilde farklılaşabilir. Bu yöntem küçük kemik iliği örnekleri için uygundur ve kemik iliği monosit-makrofaj hücrelerini kemik iliğinden yüksek teknoloji ürünü laboratuvar ekipmanı gerektirmeden basit ve hızlı bir şekilde çıkarabilir.Osteoklastların artması osteoporozun potansiyel patogenezi olabilir. Kemik iliği monosit-makrofaj hücreleri, osteoklast öncü hücreleri olarak belirli araştırma değerlerine sahiptir. Başlamak için, ötenazi sıçanları dezenfeksiyon için 10 dakika boyunca% 75 alkole batırın.Sıçanın tüm uzuvlarını makas ve forseps ile dikkatlice çıkardıktan sonra, bir pipet kullanarak PBS ile aspire edin ve uzuvlara yapışan kanı temizleyin. Daha sonra% 10 FBS DMEM'in iki mililitresinde beş mililitrelik bir tüpe dönüşür. Uzuv kemiklerini beş mililitrelik tüpe aktardıktan sonra, tüpteki uzuv kemiklerini küçük parçalara ayırmak için makas kullanın ve kemik iliği hücrelerini kültür ortamına geri püskürtmek için homojenatı karıştırın.Doku parçaları tüpün dibine yerleşene kadar beş dakika bekletin. Daha sonra, 100 milimetrelik bir kültür kabına 10 mililitre% 10 FBS DMEM ekleyin ve ardından süpernatantı kültür kabına aktarın. Yaklaşık 24 saat boyunca% 5 karbondioksitte 37 santigrat derecede inkübe edin.Bu kuluçka süresinden sonra, mezenkimal kök hücrelerin çoğunluğu kültür çanak duvarına yapışacak ve yavaş büyürken, çoğu kemik iliği monosit-makrofaj hücresi hala kültür ortamında asılı kalacaktır. 100 milimetrelik kültür kabındaki hücre süspansiyonunu yeni bir 25 santimetrekarelik şişeye aktarın ve hücreleri 24 saat daha% 5 karbondioksitte 37 santigrat derecede yetiştirmeye devam edin. Eski ortamı dikkatlice çıkardıktan sonra, kemik iliği monosit-makrofaj hücreleri şişe duvarına yapıştıktan sonra taze ortamla değiştirin.Akım sitometrisi, monosit-makrofaj soy hücrelerinin yüzeyinde moleküler bir belirteç olan CD11b ve c'yi eksprese eden hücrelerin yüzdesinin yaklaşık% 37.94 olduğunu gösterdi Sürekli hücre proliferasyonu ile, hücrelerin çoğunluğu düzensiz şekil içinde büyüdü ve radyal yapışkan bir diske dönüştü. TRAP boyama sonuçları, kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, nükleer faktör kappa B ligandı reseptör aktivatörü ve makrofaj kolonisi stimüle edici faktör ile indüklenen hücrelerde hücre içi mor kırmızı granül sayısının anlamlı olarak arttığını göstermiştir. Western blot analizi, osteoklast spesifik proteinleri TRAP ve kathepsin K'nın ekspresyon seviyelerinin, tedavi edilen hücrelerde kontrol grubuna kıyasla anlamlı derecede arttığını göstermiştir.Bu prosedürdeki en önemli şey, birincil kültürün 24 ila 48 saatinde sekonder yapışkan hücrelerin toplanma zamanıdır, kemik iliği monosit-makrofaj hücreleri tamamen yapışmaya başlar. Bu yöntemle izole edilen kemik iliği monosit-makrofaj hücreleri, in vitro osteoklastlara indüklenebilir ve osteoporozun incelenmesi için stabil bir hücre modeli sağlar.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

Kısmi ligasyon Fare Karotis Arter Disturbed Akış Kaynaklı Ateroskleroz ve Karotis Endotel RNA İzolasyonu Basit Bir Yöntem Bir Model

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Katı Örneklerinin From İlköğretim Yumurtalık Kanseri Hücreleri alma için yöntem

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

İzole Yöntemi<em&gt; Ex vivo</emBir Rat Modelinde&gt; Akciğer Perfüzyon: Sıçan EVLP Programı Geliştirme Öğrenilmiş Dersler

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

Çoklu-parametre floresans ile aktive edilen hücre sınıflandırma İnsan lenfatik endotel hücreleri İzolasyonu

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery

Kalp Damar Cerrahisi sonra serum Örnekleri etkilenerek Sağlıklı Gönüllüler ve Bunların Göçmen Potansiyelden Endotel Ata Hücreleri İzolasyon

Endothelial progenitor cells (EPCs) are recruited from the bone marrow under pathological conditions like hypoxia and are crucially involved in the ...

Isolation and Cultivation of Adult Rat Cardiomyocytes

Yalıtım ve yetişkin fare Cardiomyocytes tarımı

In an intact heart, adjacent cells influence adult cardiomyocytes. With the method of isolation and cultivation of adult cardiomyocytes, a precise ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

Dönem Placentae Fetal membranlar birincil insan Decidual hücre izolasyon

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...

Isolation of Atrial Cardiomyocytes from a Rat Model of Metabolic Syndrome-related Heart Failure with Preserved Ejection Fraction

Bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu atriyal Cardiomyocytes izolasyonu

In this article, we describe an optimized, Langendorff-based procedure for the isolation of single-cell atrial cardiomyocytes (ACMs) from a rat model of ...