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•
07:59 min
August 17th, 2022
DOI :
10.3791/64061-v
Chapters
0:04
Introduction
0:58
Preparation of NCP-DNA Repair Factor Complex
2:31
Freezing Nucleosomal Complex
4:25
Screen Grids
6:02
Results: Preparation of Nucleosomal Complexes Using Frozen TEM Grids
7:20
Conclusion
Transcript
关于碱基切除修复酶如何在染色质背景下去除DNA病变的结构信息一直很少。这构成了我们对人类疾病病因学机制的理解的重大差距。我们方案的主要优点是,我们使用标准实验室设备优化了样品制备。
这将使该领域的其他生物化学家能够通过技术上可行的冷冻电镜研究来补充他们的生化工作。我们的协议还可用于研究其他因子(包括先驱转录因子)如何参与核小体。这是一个结构信息有限的领域。
在进入冷冻条件之前优化样品制备是推进我们项目的关键,而这最好通过底物设计、结合和交联条件下的标准生化分析来完成
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Summary
该协议详细概述了使用两种用于冷冻TEM网格的样品制备方法制备核小体复合物。
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