Name: procurement and decellularization of rat hindlimbs using an ex vivo perfusion-based bioreactor for vascularized composite allotransplantation
Uploaded: 2022-06-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation at JoVE.com

تم إنشاء الشكل 3A في عام BioRender.com.

تم استخدام ذكور جثة لويس الفئران (300-430 جم) التي تم الحصول عليها من معهد أبحاث مستشفى تورنتو العام لجميع التجارب. بالنسبة لجميع العمليات الجراحية ، تم استخدام أدوات ومستلزمات معقمة للحفاظ على تقنية التعقيم (انظر جدول المواد). تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية الصادرة ?...

<ol>
	<li>Kueckelhaus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascularized+composite+allotransplantation:+Current+standards+and+novel+approaches+to+prevent+acute+rejection+and+chronic+allograft+deterioration.">Vascularized composite allotransplantation: Current standards and novel approaches to prevent acute rejection and chronic allograft deterioration.</a> Transplant International. 29 (6), 655-662 (2016).</li><li>Duisit, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+a+human+face+graft:+The+matrix+of+identity.">Bioengineering a human face graft: The matrix of identity.</a> Annals of Surgery. 266 (5), 754-764 (2017).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+skin/adipose+tissue+flap+matrix+for+engineering+vascularized+composite+soft+tissue+flaps.">Decellularized skin/adipose tissue flap matrix for engineering vascularized composite soft tissue flaps.</a> Acta Biomaterialia. 35, 166-184 (2016).</li><li>Londono, R., Gorantla, V. S., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+implications+for+extracellular+matrix-based+technologies+in+vascularized+composite+allotransplantation.">Emerging implications for extracellular matrix-based technologies in vascularized composite allotransplantation.</a> Stem Cells International. 2016 (10), 1-16 (2016).</li><li>Fleissig, Y. Y., Beare, J. E., LeBlanc, A. J., Kaufman, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+rat+hind+limb+transplant+as+an+experimental+model+of+vascularized+composite+allotransplantation:+Approaches+and+advantages.">Evolution of the rat hind limb transplant as an experimental model of vascularized composite allotransplantation: Approaches and advantages.</a> SAGE Open Medicine. 8, 205031212096871 (2020).</li><li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterilization+and+disinfection+methods+for+decellularized+matrix+materials:+Review,+consideration+and+proposal.">Sterilization and disinfection methods for decellularized matrix materials: Review, consideration and proposal.</a> Bioactive Materials. 6 (9), 2927-2945 (2021).</li><li>Chen, Y., Geerts, S., Jaramillo, M., Uygun, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+decellularized+liver+scaffolds+and+recellularized+liver+grafts.">Preparation of decellularized liver scaffolds and recellularized liver grafts.</a> Methods in Molecular Biology. 1577, 255-270 (2018).</li><li>Ahmed, S., Chauhan, V. M., Ghaemmaghami, A. M., Aylott, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+generation+of+bioreactors+that+advance+extracellular+matrix+modelling+and+tissue+engineering.">New generation of bioreactors that advance extracellular matrix modelling and tissue engineering.</a> Biotechnology Letters. 41 (1), 1-25 (2019).</li><li>Cohen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+vascular+chimerism+within+donor+organs.">Generation of vascular chimerism within donor organs.</a> Scientific Reports. 11 (1), 13437 (2021).</li><li>Lupon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+vascularized+composite+allografts+using+natural+scaffolds:+A+systematic+review.">Engineering vascularized composite allografts using natural scaffolds: A systematic review.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. , (2021).</li><li>Urciuolo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularised+skeletal+muscles+allow+functional+muscle+regeneration+by+promoting+host+cell+migration.">Decellularised skeletal muscles allow functional muscle regeneration by promoting host cell migration.</a> Scientific Reports. 8 (1), 8398 (2018).</li><li>Jank, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+composite+tissue+as+a+bioartificial+limb+graft.">Engineered composite tissue as a bioartificial limb graft.</a> Biomaterials. 61, 246-256 (2015).</li></ol>

الأطراف الخلفية للفئران مفيدة كنماذج تجريبية في VCA5. تمثل هندسة الأنسجة للسقالات اللاخلوية الخطوة الأولى في معالجة أوجه القصور في أنظمة كبت المناعة طويلة الأجل المرتبطة ب VCA. يشكل استخدام الطعوم المركبة تحديا إضافيا نظرا لوجود أنسجة متعددة ، لكل منها خصائص وظيفية ومناعية وهي?...

VCA هو خيار ناشئ للمرضى الذين يحتاجون إلى إعادة بناء جراحية معقدة. تؤدي الإصابات الرضحية أو استئصال الورم إلى فقدان الأنسجة الحجمية التي قد يكون من الصعب إعادة بنائها. تقدم VCA زرع أنسجة متعددة مثل الجلد والعظام والعضلات والأعصاب والأوعية كطعم مركب من متبرع إلى متلقي1. على الرغم من طبيعتها الواعدة ، فإن VCA محدودة بسبب الأنظمة المثبطة للمناعة طويلة الأجل. يؤدي استخدام هذه الأدوية مدى الحياة إلى زيادة خطر الإصابة بالعدوى الانتهازية والأورام الخبيثة وسمية الأعضاء النهائية1،2،3. للمساعدة في تقليل و / أو القضاء على الحاجة إلى كبت المناعة ، تظهر السقالات المهندسة للأنسجة باستخدام أساليب إزالة الخلايا ل VCA وعدا كبيرا.
يستلزم نزع الخلايا من الأنسجة الاحتفاظ بهيكل المصفوفة خارج الخلية مع إزالة المحتويات الخلوية والنووية. يمكن إعادة ملء هذه السقالة منزوعة الخلايا بخلايا خاصة بالمريض4. ومع ذلك ، فإن الحفاظ على شبكة ECM للأنسجة المركبة يمثل تحديا إضافيا. ويرجع ذلك إلى وجود أنواع متعددة من الأنسجة ذات كثافات الأنسجة المختلفة ، والبنى ، والمواقع التشريحية داخل السقالة. يقدم البروتوكول الحالي تقنية جراحية وطريقة إزالة الخلايا للطرف الخلفي للفئران. هذا نموذج إثبات المفهوم لتطبيق تقنية هندسة الأنسجة هذه على الأنسجة المركبة. يمكن أن يؤدي ذلك أيضا إلى بذل جهود لاحقة لتجديد الأنسجة المركبة من خلال إعادة الخلوية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride Injection USP 50 mL</td>
			<td>Baxter Corporation</td>
			<td>JB1308M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Disposable Serological Pipets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>75816-102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cc Disposable Syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way Stopcock</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5cc Disposable Syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Isopropyl Alcohol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrodisc Syringe Filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA28143-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps, Straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11006-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiocatheter 24 G 19 mm (&#190;&#8221;)&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>38112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic Solution (100x) 100 mL</td>
			<td>Multicell</td>
			<td>450-115-EL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Cutter</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12029-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connectors for&#160; 1/16&#34; to 1/8&#34; Tubes</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>5117K52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Female Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8&#34; ID</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>51525K328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps with Micro-Blunted Tips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11253-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injection 10,000 IU/10 mL</td>
			<td>LEO Pharma Inc.</td>
			<td>006174-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8&#34; ID</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>51525K322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle Holder</td>
			<td>WLorenz</td>
			<td>04-4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscissors</td>
			<td>WLorenz</td>
			<td>SP-4506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peracetic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>269336-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump, 3-Channel</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-78001-68</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline 1x 500 mL</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>311-425-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Surgical Scrub Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, 3-Stop, Tygon E-LFL</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-96450-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, Platinum-Cured Silicone</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-96410-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade - #10</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle - #3&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate Reagent Grade: Purity: &#62;99%, 1 kg</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>SDS003.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Suture #6-0</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>VS889</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

procurement and decellularization of rat hindlimbs using an ex vivo perfusion-based bioreactor for vascularized composite allotransplantation

يحتاج المرضى الذين يعانون من إصابات رضحية شديدة وفقدان الأنسجة إلى إعادة بناء جراحية معقدة. زرع الأوعية الدموية المركب (VCA) هو وسيلة ترميمية متطورة لنقل أنسجة متعددة كوحدة فرعية مركبة. على الرغم من الطبيعة الواعدة ل VCA ، فإن متطلبات مثبطات المناعة طويلة الأجل تمثل قيدا كبيرا بسبب زيادة خطر الإصابة بالأورام الخبيثة وسمية الأعضاء النهائية والالتهابات الانتهازية. تعد هندسة الأنسجة للسقالات المركبة اللاخلوية بديلا محتملا في تقليل الحاجة إلى كبت المناعة. هنا ، يتم وصف شراء الطرف الخلفي للفئران وإزالة الخلايا اللاحقة باستخدام كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS). تعتمد استراتيجية الشراء المقدمة على الشريان الفخذي المشترك. تم بناء نظام مفاعل حيوي قائم على التروية الآلية واستخدامه لإزالة الخلايا خارج الجسم الحي من الطرف الخلفي. تم إجراء عملية إزالة الخلايا بالتروية بنجاح ، مما أدى إلى ظهور أبيض شفاف يشبه الطرف الخلفي. لوحظت شبكة وعائية سليمة وقابلة للتنفيذ في جميع أنحاء الطرف الخلفي. أظهرت التحليلات النسيجية إزالة المحتويات النووية والحفاظ على بنية الأنسجة عبر جميع حجرات الأنسجة.

كان بروتوكول الشراء ناجحا في عزل الشرايين الفخذية المشتركة وتفريغها لخطوات التروية اللاحقة. تظهر صور التشريح التمثيلية في الشكل 1 أ ، ب موقع الشق وتعرض الأوعية الفخذية بمسافة كافية من نقاط التشعب. يوضح الشكل 2 الجهاز المطلوب لإعداد المفاعل الحيوي ...

Watch this Scientific Journal Video about Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation at JoVE.com

Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

وصفنا التقنية الجراحية وعملية إزالة الخلايا للأطراف الخلفية للفئران المركبة. يتم إجراء عملية إزالة الخلايا باستخدام كبريتات دوديسيل الصوديوم منخفضة التركيز من خلال نظام تروية آلة خارج الجسم الحي .

شراء وإزالة الخلايا من الأطراف الخلفية للفئران باستخدام مفاعل حيوي قائم على التروية خارج الجسم الحي لزراعة الخيول المركبة الوعائية

Patients with severe traumatic injuries and tissue loss require complex surgical reconstruction. Vascularized composite allotransplantation (VCA) is an ...

لقد أنشأنا نموذجا حيوانيا صغيرا لإزالة الخلايا من أحد الأطراف. هذا مفيد لتسهيل إثبات مفهوم البحث عن de وإعادة الخلايا من الأنسجة المركبة الوعائية. نظم كبت المناعة هي واحدة من القيود الرئيسية في زرع الأوعية الدموية المركبة.يمكن تقليل مناعة الأنسجة باستخدام إزالة الخلايا. للبدء ، قم بعمل شق جلدي باستخدام شفرة جراحية رقم 10 على طول الرباط الإربي ، والانتقال من الاتجاه الجانبي إلى الاتجاه الإنسي ، مع إمساك الجلد المحيط باستخدام Adson Forceps. عندما تتعرض الدهون الكامنة ، استخدم تشريح حاد لتشريح الدهون بعناية ، وتحديد موقع الأوعية الشرسوفية العلوية.باستخدام المقص الدقيق ، تشريح بالقرب ، وكشف العصب الفخذي الأساسي والشريان والوريد على مستوى الرباط الإربي. تحت مجهر التشريح ، حدد الأوعية الفخذية ، وقم بتشريح الشريان والوريد عن قرب باستخدام ملقط دقيق للحصول على طول كاف من نقاط التشعب في الشبكة الشريانية. ثم ، ربط الوريد الفخذي والشريان بشكل منفصل باستخدام 6-0 الغرز.بعد ذلك ، قم بإجراء تشريح محيطي حول ما تبقى من الطرف الخلفي دون تعطيل الأوعية الفخذية المربوطة ، وعبور عظم الفخذ في منتصف الطول باستخدام قاطع العظام. لعزل الطرف الخلفي بالكامل ، انقل الأوعية الفخذية المربوطة البعيدة إلى الأربطة باستخدام مقص دقيق ، وقم بقنية الشريان الفخذي باستخدام قسطرة وعائية قياس 24 تحت مجهر التشريح. ثم ، اغسل بمحلول ملحي هيبارين حتى يلاحظ تدفق واضح من الوريد الفخذي.قم بتأمين القنية عن طريق ربط خياطة واحدة حول الوعاء المقنن في خياطة أخرى بعيدة حول القنية نفسها ، مما يضمن وضع القنية بالقرب من منع انسداد نقاط التشعب. بعد ذلك ، قم بغمر الأطراف الخلفية المشتراة و PBS حتى إزالة الخلايا. لبناء المفاعل الحيوي ، ضع الغرفة المعقمة ، وقم بربط ثلاثة محبس ثلاثية الاتجاهات للاستخدام مرة واحدة عند خطوط المدخل والمخرج والتجديد ، مما يضمن تغطية محبس منفذ التجديد في المنفذين المتبقيين لمنع التسرب.قم بتوصيل أنابيب السيليكون المصنوعة مسبقا بالسدادات عند خطوط المدخل والمخرج. ثم قم بتوصيل الأنابيب التمعجية بأنابيب السيليكون. بعد تثبيت الكاسيت على الأنبوب التمعجي ، ضعه على المضخة التمعجية.بعد ذلك ، قم بتوصيل أحد أنابيب السيليكون بنهاية الأنبوب التمعجي لخط المخرج من الخطوة أعلاه. على الطرف الآخر ، قم بتوصيل ماصة مصلية سعة ملليلتر واحد ، وأعد تعليق الطرف المرفق بماصة مصلية في قارورة خزان النفايات. بعد ذلك ، قم بتعليق نهاية الأنبوب المتصل بالماصة المصلية في خزان المنظفات ، وأغلق على الفور فتحة دورق خزان المنظفات باستخدام بارافيلم.أضف 0.25٪ SDS من الجرة الزجاجية سعة لتر واحد إلى غرفة المفاعل الحيوي عند مستوى منتصف الطريق. بعد ذلك ، خذ الطرف الخلفي الذي تم شراؤه باستخدام Adson Filess ، وقم بتعليقه في غرفة المفاعل الحيوي بعناية. باستخدام زوجين من ملقط Adson ، قم بتوجيه الجزء المقني من الطرف الخلفي إلى خط المدخل أثناء إمساك القنية بزوج واحد من الملقط.استخدم الزوج الآخر من الملقط للف وتأمين خط المدخل إلى القنية. بمجرد تأمينه ، أضف المزيد من 0.25٪ SDS من الجرة الزجاجية سعة لتر واحد لغمر الطرف بالكامل حسب الحاجة ، مما يضمن غمر منفذ المخرج أيضا في خزان المفاعل الحيوي ، والحفاظ على التدفق الخارجي المتسق. بعد ذلك ، قم بتوصيل مرشح حقنة يستخدم مرة واحدة بمنفذ التهوية الموجود على غطاء غرفة المفاعل الحيوي ، وقم بتأمين الغطاء على المفاعل الحيوي ، مع التأكد من إغلاق الغرفة من جميع الجوانب.لإزالة الهواء من الأنبوب وتجهيز دائرة التروية ، استخدم حقنة جديدة سعة 10 ملليلتر تستخدم مرة واحدة لسحب المنظف من خزان المنظف باستخدام محبس ثلاثي الاتجاهات عند خط المدخل. بمجرد السحب ، استخدم نفس السائل لإدخاله في محبس ثلاثي الاتجاهات عند خط المخرج. بعد ذلك ، اضغط لأسفل وقم بتأمين الكاسيت بالأنبوب في المضخة التمعجية.بعد ذلك ، قم بتشغيل المضخة التمعجية باستخدام زر الطاقة. على شاشة المضخة التمعجية ، انتقل إلى علامة التبويب الثانية باستخدام مفتاح السهم لتعيين معدل الإرواء للقناة الأولى مع معدل تدفق الإدخال كطريقة التسليم ، واضبط معدل الإرواء على ملليلتر واحد في الدقيقة ، مما يضمن صحة اتجاه التدفق وفقا لإعداد الجهاز. قم بمعايرة المضخة التمعجية لضمان تدفق كمية السائل التي يتم توصيلها عبر خط المدخل ، و / أو المأخوذة من خط المخرج باستمرار بين الاثنين ، مما يضمن ضبط معرف الأنبوب على 1.85 ملم.ابدأ عملية إزالة الخلايا عن طريق التروية الآلية بمعدل ملليلتر واحد في الدقيقة لكل من خطوط المدخل والمخرج عن طريق الضغط على زر الطاقة على لوحة المفاتيح. مراقبة والتأكد من أن التدفق مستمر في كل من خطوط المدخل والمخرج. باستخدام 1 لتر من 0.25٪ STS ، قم بتجديد خزان المفاعل الحيوي من خلال منفذ التجديد حسب الحاجة.بعد ذلك ، ابحث عن مظهر أبيض شفاف للأنسجة ، والذي سيظهر بحلول اليوم الخامس ، مما يشير إلى إزالة الخلايا من الأطراف الخلفية للفئران. بعد تأكيد إزالة الخلايا ، استبدل خزان المنظفات بخزان PBS و 1٪ مضاد حيوي مضاد حيوي ، وأغلق فتحة القارورة بالبارافيلم. ابدأ برنامج تلفزيوني و 1٪ تروية مضاد حيوي مضاد للبكتيريا بمعدل ملليلتر واحد في الدقيقة ، واستمر لمدة يومين.استبدل خزان PBS و 1٪ مضاد حيوي مضاد للفطريات ب 200 ملليلتر من 0.1٪ حمض طفيلي ، وخزان إيثانول 4٪ ، وابدأ التروية عند ملليلتر واحد في الدقيقة لمدة ساعتين. تحت خزانة السلامة الحيوية ، افصل الطرف الخلفي عن خط المدخل باستخدام زوجين من ملقط Adson المعقم مع زوج واحد من الملقط للف خط المدخل ، والآخر يحمل القنية ، مما يضمن عدم سحب القنية لمنع التفكيك. قم بتخزين الطرف في وعاء زجاجي سعة 500 مل يحتوي على PBS ، و 1٪ مضاد حيوي مضاد حيوي عند 4 درجات مئوية حتى يتم استخدامه مرة أخرى.أظهر كل من الشريان الفخذي والوريد منزوع الخلايا فقدان المحتوى النووي عبر جميع الطبقات والأنسجة الضامة المحيطة ، نظرا لعدم وجود نوى زرقاء اللون موجودة في الأوعية الأصلية. تم الحفاظ على الغلالة الداخلية و adventitia لكل من الوريد الفخذي والشرايين في الأوعية منزوعة الخلايا. أظهر العصب الفخذي الحفاظ على بنية الأنسجة ، بما في ذلك باطن العصب.أظهر العظم احتفاظا هيكليا شاملا مع فقدان النوى الملطخة للخلايا العظمية ، ومن طبقات البطانة الداخلية والسمحاق المحيطة بعد إزالة الخلايا. أظهر الجلد فقدان الخلايا من البشرة والأدمة. أظهرت الأدمة ألياف كولاجين محتفظ بها تشبه أنسجة الجلد الأصلية.أخيرا ، أظهر المنظر المستعرض للعضلات الهيكلية فقدان النوى الموجودة في أطراف بطانة الرحم. ظل محتوى اللييفة العضلية محتفظا به داخل الحزم المعنية بعد إزالة الخلايا. كما تم إجراء قياس كمية الحمض النووي باستخدام PicoGreen ، حيث تم تقليل محتوى الحمض النووي بشكل كبير عبر الأوعية الفخذية والأعصاب والجلد والعضلات والعظام.بعد هذا البروتوكول ، يمكن توصيف الطرف منزوع الخلايا. يتضمن ذلك فحص المصفوفة خارج الخلية باستخدام كل من الطرق النسيجية والكيميائية الحيوية ، وتقييم الأوعية الدموية باستخدام التصوير. يمكن أيضا إعادة خلية الساق منزوعة الخلايا باستخدام خلايا خاصة بالأنسجة.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

وDecellularization Recellularization الأكباد من الجامعة

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to ...

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

تصميم مفاعل حيوي لضغط الدوري السابقين فيفو دراسة صمامات القلب الأورطي

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

تحديد معدل النقل من الاكسيوبيوتك والمواد النانوية عبر المشيمة باستخدام<em&gt; خارج الحي</em&gt; الإنسان المشيمة الإرواء الموديل

Decades ago the human placenta was thought to be an impenetrable barrier between mother and unborn child. However, the discovery of thalidomide-induced ...

Operation of a Benchtop Bioreactor

تشغيل الفوق تفاعلات الاحيائية

Fermentation systems are used to provide an optimal growth environment for many different types of cell cultures. The ability afforded by fermentors to ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device

إجراءات Decellularization من الجرذ الأكباد في تتأرجح ضغط الإرواء الأجهزة

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

فاسكولاريزيد بيوبرينتينج موائع جزيئية لهندسة الأنسجة وأورجانويدس

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

ديسيلولاريزيشن ومنهجية ريسيلولاريزيشن للاوردة الصافن البشرية

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

رواية تقنية جراحية كأساس في فيفو جزئي الهندسة الكبد في الفئران

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver ...

A Reliable Porcine Fascio-Cutaneous Flap Model for Vascularized Composite Allografts Bioengineering Studies

نموذج رفرف لفافة جلدية خزفية موثوقة لدراسات الهندسة الحيوية المركبة الوعائية

Vascularized Composite Allografts (VCA) such as hand, face, or penile transplant represents the cutting-edge treatment for devastating skin defects, ...