Name: procurement and decellularization of rat hindlimbs using an ex vivo perfusion-based bioreactor for vascularized composite allotransplantation
Uploaded: 2022-06-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation at JoVE.com

Figuur 3A is gemaakt in BioRender.com.

Cadaverische mannelijke Lewisratten (300-430 g) verkregen van het Toronto General Hospital Research Institute werden gebruikt voor alle experimenten. Voor alle chirurgische ingrepen werden steriele instrumenten en benodigdheden gebruikt om de aseptische techniek te behouden (zie de Tabel van Materialen). Alle procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen van het Animal Care Committee van het Toronto General Hospital Research Institute, University Health Network (Toronto, ON, Canada)....

<ol>
	<li>Kueckelhaus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascularized+composite+allotransplantation:+Current+standards+and+novel+approaches+to+prevent+acute+rejection+and+chronic+allograft+deterioration.">Vascularized composite allotransplantation: Current standards and novel approaches to prevent acute rejection and chronic allograft deterioration.</a> Transplant International. 29 (6), 655-662 (2016).</li><li>Duisit, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+a+human+face+graft:+The+matrix+of+identity.">Bioengineering a human face graft: The matrix of identity.</a> Annals of Surgery. 266 (5), 754-764 (2017).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+skin/adipose+tissue+flap+matrix+for+engineering+vascularized+composite+soft+tissue+flaps.">Decellularized skin/adipose tissue flap matrix for engineering vascularized composite soft tissue flaps.</a> Acta Biomaterialia. 35, 166-184 (2016).</li><li>Londono, R., Gorantla, V. S., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+implications+for+extracellular+matrix-based+technologies+in+vascularized+composite+allotransplantation.">Emerging implications for extracellular matrix-based technologies in vascularized composite allotransplantation.</a> Stem Cells International. 2016 (10), 1-16 (2016).</li><li>Fleissig, Y. Y., Beare, J. E., LeBlanc, A. J., Kaufman, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+rat+hind+limb+transplant+as+an+experimental+model+of+vascularized+composite+allotransplantation:+Approaches+and+advantages.">Evolution of the rat hind limb transplant as an experimental model of vascularized composite allotransplantation: Approaches and advantages.</a> SAGE Open Medicine. 8, 205031212096871 (2020).</li><li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterilization+and+disinfection+methods+for+decellularized+matrix+materials:+Review,+consideration+and+proposal.">Sterilization and disinfection methods for decellularized matrix materials: Review, consideration and proposal.</a> Bioactive Materials. 6 (9), 2927-2945 (2021).</li><li>Chen, Y., Geerts, S., Jaramillo, M., Uygun, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+decellularized+liver+scaffolds+and+recellularized+liver+grafts.">Preparation of decellularized liver scaffolds and recellularized liver grafts.</a> Methods in Molecular Biology. 1577, 255-270 (2018).</li><li>Ahmed, S., Chauhan, V. M., Ghaemmaghami, A. M., Aylott, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+generation+of+bioreactors+that+advance+extracellular+matrix+modelling+and+tissue+engineering.">New generation of bioreactors that advance extracellular matrix modelling and tissue engineering.</a> Biotechnology Letters. 41 (1), 1-25 (2019).</li><li>Cohen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+vascular+chimerism+within+donor+organs.">Generation of vascular chimerism within donor organs.</a> Scientific Reports. 11 (1), 13437 (2021).</li><li>Lupon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+vascularized+composite+allografts+using+natural+scaffolds:+A+systematic+review.">Engineering vascularized composite allografts using natural scaffolds: A systematic review.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. , (2021).</li><li>Urciuolo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularised+skeletal+muscles+allow+functional+muscle+regeneration+by+promoting+host+cell+migration.">Decellularised skeletal muscles allow functional muscle regeneration by promoting host cell migration.</a> Scientific Reports. 8 (1), 8398 (2018).</li><li>Jank, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+composite+tissue+as+a+bioartificial+limb+graft.">Engineered composite tissue as a bioartificial limb graft.</a> Biomaterials. 61, 246-256 (2015).</li></ol>

Rattenachterpoten zijn nuttig als experimentele modellen in VCA5. Tissue engineering van acellulaire steigers is de eerste stap in het aanpakken van de tekortkomingen van langdurige immunosuppressieregimes geassocieerd met VCA. Het gebruik van composiettransplantaten vormt een extra uitdaging gezien de aanwezigheid van meerdere weefsels, elk met unieke functionele, immunogene en structurele eigenschappen. Het huidige protocol toont een succesvolle methode voor het verkrijgen van acellulaire compos...

VCA is een opkomende optie voor patiënten die een complexe chirurgische reconstructie nodig hebben. Traumatische verwondingen of tumorresecties resulteren in volumetrisch weefselverlies dat moeilijk te reconstrueren kan zijn. VCA biedt de transplantatie van meerdere weefsels zoals de huid, bot, spier, zenuwen en bloedvaten als een samengesteld transplantaat van een donor naar een ontvanger1. Ondanks het veelbelovende karakter is VCA beperkt vanwege langdurige immunosuppressieve regimes. Levenslang gebruik van dergelijke geneesmiddelen resulteert in een verhoogd risico op opportunistische infecties, maligniteiten en eindorgaantoxiciteit 1,2,3. Om de behoefte aan immunosuppressie te verminderen en / of te elimineren, zijn weefsel-gemanipuleerde steigers met behulp van decellularisatiebenaderingen voor VCA veelbelovend.
Weefseldecellularisatie houdt in dat de extracellulaire matrixstructuur behouden blijft terwijl de cellulaire en nucleaire inhoud wordt verwijderd. Deze gedecellulariseerde steiger kan opnieuw worden bevolkt met patiëntspecifieke cellen4. Het behoud van het ECM-netwerk van samengestelde weefsels is echter een extra uitdaging. Dit komt door de aanwezigheid van meerdere weefseltypen met verschillende weefseldichtheden, architecturen en anatomische locaties binnen een steiger. Het huidige protocol biedt een chirurgische techniek en een decellularisatiemethode voor een rat hindlimb. Dit is een proof-of-concept model voor het toepassen van deze tissue engineering techniek op composiet weefsels. Dit kan ook leiden tot latere inspanningen om samengestelde weefsels te regenereren door middel van recellularisatie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride Injection USP 50 mL</td>
			<td>Baxter Corporation</td>
			<td>JB1308M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Disposable Serological Pipets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>75816-102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cc Disposable Syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way Stopcock</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5cc Disposable Syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Isopropyl Alcohol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrodisc Syringe Filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA28143-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps, Straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11006-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiocatheter 24 G 19 mm (&#190;&#8221;)&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>38112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic Solution (100x) 100 mL</td>
			<td>Multicell</td>
			<td>450-115-EL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Cutter</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12029-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connectors for&#160; 1/16&#34; to 1/8&#34; Tubes</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>5117K52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Female Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8&#34; ID</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>51525K328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps with Micro-Blunted Tips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11253-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injection 10,000 IU/10 mL</td>
			<td>LEO Pharma Inc.</td>
			<td>006174-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8&#34; ID</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>51525K322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle Holder</td>
			<td>WLorenz</td>
			<td>04-4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscissors</td>
			<td>WLorenz</td>
			<td>SP-4506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peracetic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>269336-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump, 3-Channel</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-78001-68</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline 1x 500 mL</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>311-425-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Surgical Scrub Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, 3-Stop, Tygon E-LFL</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-96450-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, Platinum-Cured Silicone</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-96410-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade - #10</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle - #3&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate Reagent Grade: Purity: &#62;99%, 1 kg</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>SDS003.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Suture #6-0</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>VS889</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

procurement and decellularization of rat hindlimbs using an ex vivo perfusion-based bioreactor for vascularized composite allotransplantation

Patiënten met ernstige traumatische verwondingen en weefselverlies vereisen een complexe chirurgische reconstructie. Vascularized composite allotransplantation (VCA) is een evoluerende reconstructieve weg voor het overbrengen van meerdere weefsels als een samengestelde subeenheid. Ondanks het veelbelovende karakter van VCA, zijn de immunosuppressieve vereisten op lange termijn een significante beperking vanwege het verhoogde risico op maligniteiten, eindorgaantoxiciteit en opportunistische infecties. Tissue engineering van acellulaire composietsteigers is een potentieel alternatief om de behoefte aan immunosuppressie te verminderen. Hierin wordt de verkrijging van een rat hindlimb en de daaropvolgende decellularisatie met behulp van natriumdodecylsulfaat (SDS) beschreven. De gepresenteerde inkoopstrategie is gebaseerd op de gemeenschappelijke dijbeenslagader. Een machinaal perfusie-gebaseerd bioreactorsysteem werd gebouwd en gebruikt voor ex vivo decellularisatie van de achterste. Succesvolle perfusie decellularisatie werd uitgevoerd, resulterend in een wit doorschijnend-achtig uiterlijk van de achterste. Een intact, doorlaatbaar, vasculair netwerk in de hele achtervel werd waargenomen. Histologische analyses toonden de verwijdering van nucleaire inhoud en het behoud van weefselarchitectuur in alle weefselcompartimenten.

Het inkoopprotocol was succesvol in het isoleren en cannuleren van de gemeenschappelijke femorale slagaders voor volgende perfusiestappen. De representatieve dissectiebeelden in figuur 1A,B tonen de incisielocatie en belichting van de femorale vaten met voldoende afstand tot de bifurcatiepunten. Figuur 2 toont de apparatuur die nodig is voor de voorbereiding van de bioreactor en het perfusiecircuit. Het eindpunt van decellularisatie werd bepaal...

Watch this Scientific Journal Video about Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation at JoVE.com

Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

We beschrijven de chirurgische techniek en het decellularisatieproces voor samengestelde rattenachterpoten. Decellularisatie wordt uitgevoerd met behulp van natriumdodecylsulfaat met een lage concentratie via een ex vivo machineperfusiesysteem.

Verkrijging en decellularisatie van Rat Hindlimbs met behulp van een ex vivo perfusie-gebaseerde bioreactor voor gevasculariseerde composiet allotransplantatie

Patients with severe traumatic injuries and tissue loss require complex surgical reconstruction. Vascularized composite allotransplantation (VCA) is an ...

We hebben een klein diermodel opgesteld voor decellularisatie van een ledemaat. Dit is nuttig voor het faciliteren van proof of concept onderzoek naar de en recellularisatie van gevasculariseerde composietweefsels. Immunosuppressieregimes zijn een van de belangrijkste beperkingen bij gevasculariseerde composiet allotransplantatie.Weefselimmunogeniteit kan worden verminderd met behulp van decellularisatie. Maak om te beginnen een huidincisie met behulp van een nummer 10 chirurgisch mes langs het liesband, bewegend van een laterale naar een mediale richting, terwijl de omliggende huid wordt vastgehouden met Adson-tang. Wanneer het onderliggende vet wordt blootgesteld, gebruik dan stompe dissectie om zorgvuldig door het vet te ontleden en de superieure epigastrische vaten te lokaliseren.Gebruik een microschaar, dissecteer proximaal en leg de onderliggende femorale zenuw, slagader en ader bloot op het niveau van het inguinale ligament. Identificeer onder een dissectiemicroscoop de femorale vaten en ontleed de slagader en ader proximaal met behulp van een fijne tang om voldoende lengte te verkrijgen van de bifurcatiepunten van het arteriële netwerk. Ligaat vervolgens de femorale ader en slagader afzonderlijk met behulp van 6-0 hechtingen.Voer vervolgens circumferentiële dissectie uit rond de rest van de achterste zonder de ligatievatoren te verstoren en transect het femorale bot halverwege de lengte met behulp van een botsnijder. Om de achtervel volledig te isoleren, transeceert u de geligeerde femorale vaten distale naar de ligaturen met behulp van een microschaar en kan u de femorale slagader transecteren met behulp van een 24 gauge angiocatheter onder de dissectiemicroscoop. Spoel vervolgens met gehepariniseerde zoutoplossing totdat een duidelijke uitstroom uit de femorale ader wordt waargenomen.Beveilig de canule door één hechting rond het gecannuleerde vat in een andere hechting distaal rond de canule zelf te binden, zodat de canule proximaal wordt geplaatst om te voorkomen dat de bifurcatiepunten worden geblokkeerd. Dompel daarna de verkregen achterpoten en PBS onder tot decellularisatie. Om de bioreactor te bouwen, plaatst u de gesteriliseerde kamer en schroeft u drie wegstopkranen voor eenmalig gebruik op de inlaat-, uitlaat- en aanvullingsleidingen, zodat de stopkraan voor de vulpoort wordt afgedekt bij de resterende twee poorten om lekkage te voorkomen.Bevestig de eerder gemaakte siliconen buisjes aan de stopkranen bij de inlaat- en uitlaatlijnen. Sluit vervolgens peristaltische slangen aan op de siliconenbuizen. Nadat u de cassette op de peristaltische buis hebt bevestigd, plaatst u deze op de peristaltische pomp.Sluit vervolgens een van de siliconenbuizen aan op het einde van de peristaltische buis van de uitlaatlijn vanaf de bovenstaande stap. Sluit aan het andere uiteinde een serologische pipet van één milliliter aan en resuspenseer het uiteinde dat met een serologische pipet in de kolf van het afvalreservoir is bevestigd. Hang vervolgens het uiteinde van de buis die aan de serologische pipet is bevestigd in het reinigingsmiddelreservoir en verzegel de opening van de detergentreservoirkolf onmiddellijk met parafilm.Voeg halverwege 0,25% SDS uit de glazen pot van één liter toe aan de bioreactorkamer. Neem vervolgens de verkregen hindlimb met behulp van Adson-tang en hang deze voorzichtig in de bioreactorkamer. Gebruik twee paar Adson-tangen om het gecannuleerde deel van de achterste naar de inlaatlijn te leiden terwijl u de canule met één tang vasthoudt.Gebruik de andere tang om de inlaatlijn aan de canule te draaien en vast te zetten. Eenmaal beveiligd, voegt u meer 0,25% SDS toe uit de glazen pot van één liter om de ledemaat indien nodig volledig onder te dompelen, zodat de uitlaatpoort ook wordt ondergedompeld in het bioreactorreservoir en een consistente uitstroom wordt gehandhaafd. Bevestig vervolgens een spuitfilter voor eenmalig gebruik op de ventilatiepoort op het deksel van de bioreactorkamer en bevestig het deksel op de bioreactor, zodat de kamer van alle kanten is afgesloten.Om lucht uit de slang te verwijderen en het perfusiecircuit te primen, gebruikt u een nieuwe spuit voor eenmalig gebruik van 10 milliliter om reinigingsmiddel uit het reinigingsmiddelreservoir te halen met behulp van een driewegstopkraan bij de inlaatlijn. Eenmaal getrokken, gebruik dezelfde vloeistof om in de drieweg stopkraan aan de uitlaatlijn te steken. Druk vervolgens de cassettes met de slang in de peristaltische pomp en bevestig deze vast.Schakel vervolgens de peristaltische pomp in met behulp van de aan / uit-knop. Ga op het peristaltische pompscherm naar het tweede tabblad met behulp van de pijltoets om de perfusiesnelheid voor het eerste kanaal in te stellen met het ingangsdebiet als de leveringswijze en stel de perfusiesnelheid in op één milliliter per minuut, zodat de stroomrichting correct is volgens de apparaatconfiguratie. Kalibreer de peristaltische pomp om ervoor te zorgen dat de hoeveelheid vloeistof die door de inlaatleiding wordt afgegeven en/of uit de uitlaatleiding wordt gehaald, consistent tussen de twee stroomt, zodat de slang-ID is ingesteld op 1,85 millimeter.Begin met decellularisatie via machineperfusie met één milliliter per minuut voor zowel de inlaat- als de uitlaatlijnen door op de aan /uit-knop op het toetsenbord te drukken. Controleer en zorg ervoor dat de stroom continu is bij zowel de inlaat- als de uitlaatleidingen. Gebruik 1 liter 0,25% STS om het bioreactorreservoir indien nodig aan te vullen via de vulpoort.Zoek vervolgens naar een wit doorschijnend uiterlijk van het weefsel, dat op dag vijf zal verschijnen, wat wijst op decellularisatie van de achterpoten van de rat. Vervang na de bevestiging van decellularisatie het reinigingsmiddelreservoir door het PBS- en 1% antibioticum-antimycotisch reservoir en sluit de opening van de kolf af met parafilm. Begin met PBS en 1% Antibioticum-Antimycotische perfusie met één milliliter per minuut en ga twee dagen door.Vervang het PBS en 1% antibioticum-antimycotisch reservoir door 200 milliliter 0,1% parasitair zuur, 4% ethanolreservoir en begin met perfusie met één milliliter per minuut gedurende twee uur. Koppel onder een bioveiligheidskast de achterklep los van de inlaatlijn met behulp van twee paar steriele Adson-tangen met één tang om de inlaatlijn te draaien en de andere de canule vast te houden, zodat de canule niet wordt getrokken om decannulatie te voorkomen. Bewaar de ledemaat in een glazen pot van 500 milliliter met PBS en 1% antibioticum-antimycotisch bij 4 graden Celsius tot verder gebruik.Zowel gedecellulariseerde femorale slagader als ader vertoonden verlies van nucleaire inhoud over alle lagen en het omliggende bindweefsel, gezien het gebrek aan blauw gekleurde kernen die anders aanwezig zijn in de inheemse bloedvaten. De tunica intima media en adventitia van zowel de femorale ader als de slagaders werden in de gedecellulariseerde vaten gehandhaafd. De femorale zenuw vertoonde behoud van de weefselstructuur, inclusief het endoneurium.Het bot vertoonde algehele structurele retentie met verlies van gekleurde kernen van osteocyten en van omliggende endosteum- en periosteumlagen na decellularisatie. De huid vertoonde een verlies van cellen uit de opperhuid en dermis. De dermis vertoonde vastgehouden collageenvezels die vergelijkbaar zijn met inheems huidweefsel.Ten slotte toonde het transversale beeld van de skeletspieren verlies van kernen die zich anders in de periferie van het endomysium bevonden. Het myofibrilgehalte bleef na de decellularisatie behouden binnen de respectieve fascikels. DNA-kwantificering met behulp van PicoGreen werd ook uitgevoerd, waarbij het DNA-gehalte significant werd verlaagd over de femorale vaten, zenuw, huid, spier en bot.Volgens dit protocol kan de gedecellulariseerde ledemaat verder worden gekarakteriseerd. Dit omvat het onderzoeken van extracellulaire matrix met behulp van zowel histologische als biochemische methoden, en door vasculaire in te schatten met behulp van beeldvorming. De gedecellulariseerde stam kan ook worden gerecellulariseerd met behulp van weefselspecifieke cellen.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

Decellularisatie en Recellularization van Whole Levers

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to ...

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Ontwerp van een Cyclic Pressure Bioreactor voor de Ex Vivo Studie van Aorta hartkleppen

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

Bepaling van de Transport Rate van xenobiotica en nanomaterialen via de placenta met de<em&gt; Ex vivo</em&gt; Human placentaperfusie Model

Decades ago the human placenta was thought to be an impenetrable barrier between mother and unborn child. However, the discovery of thalidomide-induced ...

Operation of a Benchtop Bioreactor

Exploitatie van een tafelmodel Bioreactor

Fermentation systems are used to provide an optimal growth environment for many different types of cell cultures. The ability afforded by fermentors to ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device

Procedure voor Decellularisatie van Rat Levers in een oscillerende druk perfusie Device

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

Microfluidic Bioprinting voor Engineering gevacuoliseerd weefsels en Organoids

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

Decellularization en Recellularization methodologie voor menselijke Saphenous aderen

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

Een nieuwe chirurgische techniek als een fundament voor In Vivo gedeeltelijke lever Engineering in Rat

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver ...

A Reliable Porcine Fascio-Cutaneous Flap Model for Vascularized Composite Allografts Bioengineering Studies

Een betrouwbaar porcine fascio-cutaan flapmodel voor gevasculariseerde composiet allografts bio-engineering studies

Vascularized Composite Allografts (VCA) such as hand, face, or penile transplant represents the cutting-edge treatment for devastating skin defects, ...