Name: procurement and decellularization of rat hindlimbs using an ex vivo perfusion-based bioreactor for vascularized composite allotransplantation
Uploaded: 2022-06-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation at JoVE.com

איור 3A נוצר בשנת BioRender.com.

חולדות לואיס זכרים קדבריים (300-430 גרם) שהתקבלו ממכון המחקר של בית החולים הכללי בטורונטו שימשו לכל הניסויים. עבור כל ההליכים הכירורגיים, מכשירים סטריליים ואספקה שימשו לשמירה על טכניקה אספטית (ראה טבלת החומרים). כל ההליכים בוצעו בהתאם להנחיות הוועדה לטיפול בבעלי חיים במכון המחקר של ?...

<ol>
	<li>Kueckelhaus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascularized+composite+allotransplantation:+Current+standards+and+novel+approaches+to+prevent+acute+rejection+and+chronic+allograft+deterioration.">Vascularized composite allotransplantation: Current standards and novel approaches to prevent acute rejection and chronic allograft deterioration.</a> Transplant International. 29 (6), 655-662 (2016).</li><li>Duisit, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+a+human+face+graft:+The+matrix+of+identity.">Bioengineering a human face graft: The matrix of identity.</a> Annals of Surgery. 266 (5), 754-764 (2017).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+skin/adipose+tissue+flap+matrix+for+engineering+vascularized+composite+soft+tissue+flaps.">Decellularized skin/adipose tissue flap matrix for engineering vascularized composite soft tissue flaps.</a> Acta Biomaterialia. 35, 166-184 (2016).</li><li>Londono, R., Gorantla, V. S., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+implications+for+extracellular+matrix-based+technologies+in+vascularized+composite+allotransplantation.">Emerging implications for extracellular matrix-based technologies in vascularized composite allotransplantation.</a> Stem Cells International. 2016 (10), 1-16 (2016).</li><li>Fleissig, Y. Y., Beare, J. E., LeBlanc, A. J., Kaufman, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+rat+hind+limb+transplant+as+an+experimental+model+of+vascularized+composite+allotransplantation:+Approaches+and+advantages.">Evolution of the rat hind limb transplant as an experimental model of vascularized composite allotransplantation: Approaches and advantages.</a> SAGE Open Medicine. 8, 205031212096871 (2020).</li><li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterilization+and+disinfection+methods+for+decellularized+matrix+materials:+Review,+consideration+and+proposal.">Sterilization and disinfection methods for decellularized matrix materials: Review, consideration and proposal.</a> Bioactive Materials. 6 (9), 2927-2945 (2021).</li><li>Chen, Y., Geerts, S., Jaramillo, M., Uygun, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+decellularized+liver+scaffolds+and+recellularized+liver+grafts.">Preparation of decellularized liver scaffolds and recellularized liver grafts.</a> Methods in Molecular Biology. 1577, 255-270 (2018).</li><li>Ahmed, S., Chauhan, V. M., Ghaemmaghami, A. M., Aylott, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+generation+of+bioreactors+that+advance+extracellular+matrix+modelling+and+tissue+engineering.">New generation of bioreactors that advance extracellular matrix modelling and tissue engineering.</a> Biotechnology Letters. 41 (1), 1-25 (2019).</li><li>Cohen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+vascular+chimerism+within+donor+organs.">Generation of vascular chimerism within donor organs.</a> Scientific Reports. 11 (1), 13437 (2021).</li><li>Lupon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+vascularized+composite+allografts+using+natural+scaffolds:+A+systematic+review.">Engineering vascularized composite allografts using natural scaffolds: A systematic review.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. , (2021).</li><li>Urciuolo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularised+skeletal+muscles+allow+functional+muscle+regeneration+by+promoting+host+cell+migration.">Decellularised skeletal muscles allow functional muscle regeneration by promoting host cell migration.</a> Scientific Reports. 8 (1), 8398 (2018).</li><li>Jank, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+composite+tissue+as+a+bioartificial+limb+graft.">Engineered composite tissue as a bioartificial limb graft.</a> Biomaterials. 61, 246-256 (2015).</li></ol>

עכברושים אחוריים שימושיים כמודלים ניסיוניים ב-VCA5. הנדסת רקמות של פיגומים תאיים מייצגת את הצעד הראשון בטיפול בחסרונות של משטרי דיכוי חיסוני ארוכי טווח הקשורים ל-VCA. השימוש בשתלים מרוכבים מהווה אתגר נוסף בהתחשב בנוכחותן של רקמות מרובות, שלכל אחת מהן תכונות תפקודיות, אימונוגניו...

VCA הוא אופציה מתפתחת עבור חולים הזקוקים לשחזור כירורגי מורכב. פציעות טראומטיות או כריתות גידול גורמות לאובדן רקמה נפחית שקשה לשחזר. VCA מציע השתלה של רקמות מרובות כגון העור, העצם, השרירים, העצבים וכלי הדם כשתל מורכב מתורם למקבל1. למרות אופיו המבטיח, VCA מוגבל בשל משטרים מדכאי חיסון ארוכי טווח. שימוש בתרופות כאלה לכל החיים גורם לסיכון מוגבר לזיהומים אופורטוניסטיים, ממאירויות ורעילות איברים סופית 1,2,3. כדי לעזור להפחית ו/או לבטל את הצורך בדיכוי חיסוני, פיגומים מהונדסים רקמות המשתמשים בגישות דה-סלוליזציה עבור VCA מראים הבטחה גדולה.
דה-סלוליזציה של רקמות כרוכה בשמירה על מבנה המטריצה החוץ-תאית תוך הסרת התכולה התאית והגרעינית. פיגום מתכלה זה יכול להיות מאוכלס מחדש עם תאים ספציפיים לחולה4. עם זאת, שימור רשת ECM של רקמות מרוכבות הוא אתגר נוסף. זאת בשל נוכחותם של סוגי רקמות מרובים עם צפיפויות רקמה שונות, ארכיטקטורות ומיקומים אנטומיים בתוך פיגום. הפרוטוקול הנוכחי מציע טכניקה כירורגית ושיטת דה-סלוליזציה עבור חולדה אחורית. זהו מודל הוכחת היתכנות ליישום טכניקה זו של הנדסת רקמות על רקמות מרוכבות. זה יכול גם להניע את המאמצים הבאים לחדש רקמות מרוכבות באמצעות recellularization.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride Injection USP 50 mL</td>
			<td>Baxter Corporation</td>
			<td>JB1308M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Disposable Serological Pipets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>75816-102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cc Disposable Syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way Stopcock</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5cc Disposable Syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Isopropyl Alcohol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrodisc Syringe Filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA28143-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps, Straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11006-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiocatheter 24 G 19 mm (&#190;&#8221;)&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>38112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic Solution (100x) 100 mL</td>
			<td>Multicell</td>
			<td>450-115-EL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Cutter</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12029-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connectors for&#160; 1/16&#34; to 1/8&#34; Tubes</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>5117K52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Female Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8&#34; ID</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>51525K328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps with Micro-Blunted Tips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11253-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injection 10,000 IU/10 mL</td>
			<td>LEO Pharma Inc.</td>
			<td>006174-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8&#34; ID</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>51525K322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle Holder</td>
			<td>WLorenz</td>
			<td>04-4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscissors</td>
			<td>WLorenz</td>
			<td>SP-4506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peracetic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>269336-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump, 3-Channel</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-78001-68</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline 1x 500 mL</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>311-425-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Surgical Scrub Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, 3-Stop, Tygon E-LFL</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-96450-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, Platinum-Cured Silicone</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-96410-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade - #10</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle - #3&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate Reagent Grade: Purity: &#62;99%, 1 kg</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>SDS003.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Suture #6-0</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>VS889</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

procurement and decellularization of rat hindlimbs using an ex vivo perfusion-based bioreactor for vascularized composite allotransplantation

חולים עם פציעות טראומטיות קשות ואובדן רקמות זקוקים לשחזור כירורגי מורכב. אלוטרנספלנטציה מרוכבת וסקולרית (VCA) היא דרך שחזור מתפתחת להעברת רקמות מרובות כתת-יחידה מרוכבת. למרות האופי המבטיח של VCA, הדרישות ארוכות הטווח של דיכוי חיסוני הן מגבלה משמעותית בשל הסיכון המוגבר לממאירויות, רעילות איברי קצה וזיהומים אופורטוניסטיים. הנדסת רקמות של פיגומים מרוכבים תאיים היא חלופה פוטנציאלית בהפחתת הצורך בדיכוי חיסוני. כאן מתוארת ההצטיידות של חולדה אחורית ודה-צלולריזציה שלה לאחר מכן באמצעות נתרן דודציל סולפט (SDS). אסטרטגיית הרכש המוצגת מבוססת על עורק הירך המשותף. נבנתה מערכת ביו-ריאקטור מבוססת זלוף מכונה ושימשה לדה-סלוליזציה של ה-ex vivo של ה-hindlimb. בוצעה דה-סלוליזציה מוצלחת של הזליפה, וכתוצאה מכך נוצר מראה לבן שקוף דמוי האחורי. נצפתה רשת כלי דם שלמה, ניתנת להעברה, לאורך כל החלק האחורי. ניתוחים היסטולוגיים הראו את הסרת התכולה הגרעינית ואת שימור ארכיטקטורת הרקמות בכל תאי הרקמות.

פרוטוקול הרכש הצליח לבודד ולשמר את עורקי הירך המשותפים לשלבי הזלוף הבאים. תמונות הנתיחה המייצגות באיור 1A,B מראות את מיקום החתך והחשיפה של כלי הירך עם מרחק מספיק מנקודות הביפורקציה. איור 2 מראה את המנגנון הדרוש להכנת הביו-ריאקטור ומעגל הזליפה. נקוד?...

Watch this Scientific Journal Video about Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation at JoVE.com

Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

אנו מתארים את הטכניקה הכירורגית ואת תהליך הדה-סלוליזציה של חולדות מרוכבות. דה-סלוליזציה מתבצעת באמצעות נתרן דודציל סולפט בריכוז נמוך באמצעות מערכת פרפוזיה של מכונת ex vivo.

רכש ודה-סלוליזציה של חולדות אחוריות באמצעות ביוריאקטור מבוסס ex vivo perfusion עבור allotransplantation מרוכב וסקולרי

Patients with severe traumatic injuries and tissue loss require complex surgical reconstruction. Vascularized composite allotransplantation (VCA) is an ...

הקמנו מודל של בעלי חיים קטנים לדה-סלוליזציה של איבר. זה שימושי כדי להקל על הוכחת מחקר היתכנות על דה ו recellularization של רקמות מרוכבות כלי הדם. משטרי דיכוי חיסוני הם אחת המגבלות העיקריות באלוטרנספלנטציה מרוכבת וסקולרית.ניתן להפחית את האימונוגניות של הרקמות באמצעות דה-סלולריזציה. כדי להתחיל, לבצע חתך בעור באמצעות להב כירורגי מספר 10 לאורך הרצועה המפשעתית, נע מ לרוחב לכיוון מדיאלי, תוך החזקת העור שמסביב עם מלקחיים Adson. כאשר השומן הבסיסי נחשף, השתמש בדיסקציה קהה כדי לנתח בזהירות דרך השומן, ולאתר את כלי הדם האפיגסטריים העליונים.באמצעות מיקרו-מספריים, יש לנתח באופן פרוקסימלי ולחשוף את עצב הירך, העורק והווריד הבסיסיים ברמת הרצועה המפשעתית. תחת מיקרוסקופ דיסקציה, לזהות את כלי הירך, ולנתח את העורק ואת הווריד באופן פרוקסימלי באמצעות מלקחיים עדינים כדי לקבל אורך מספיק מנקודות bifurcation של רשת העורקים. לאחר מכן, ligate את וריד הירך ואת העורק בנפרד באמצעות 6-0 תפרים.לאחר מכן, יש לבצע דיסקציה היקפית סביב שארית העצם האחורית מבלי לשבש את כלי הירך הקשורים, ולהעביר את עצם הירך באורך בינוני באמצעות חותך עצם. כדי לבודד באופן מלא את החלק האחורי, יש להעביר את כלי הירך המחוברים באופן דיסטלי לליגטורות באמצעות מספריים זעירים, ולתעל את עורק הירך באמצעות אנגיוקטטר של 24 מדים מתחת למיקרוסקופ הדיסקציה. לאחר מכן, לשטוף עם מלוחים heparinized עד זרימה ברורה הוא ציין מן וריד הירך.אבטחו את הצינורית על ידי קשירת תפר אחד סביב כלי הצינורית בתפר אחר באופן דיסטלי סביב הצינורית עצמה, תוך הקפדה על מיקום הצינורית באופן פרוקסימלי כדי למנוע חסימה של נקודות הביפורקציה. לאחר מכן, הטביעו את ה-backlimbs הנרכשים ואת ה-PBS עד ל-decellularization. כדי לבנות את הביוריאקטור, מקם את התא המעוקר, והברג שלושה פקקי תלת-כיווניים חד-פעמיים בקווי הכניסה, היציאה והחידוש, כדי להבטיח שהפקק ליציאת החידוש ייסגר בשתי היציאות הנותרות שלו כדי למנוע דליפה.חבר את צינורות הסיליקון שנעשו בעבר לפקקים בקווי הכניסה והיציאה. לאחר מכן, חבר צינורות פריסטלטיים לצינורות הסיליקון. לאחר אבטחת הקלטת על צינורות פריסטלטיים, מניחים אותה על המשאבה הפריסטלטית.לאחר מכן, חבר את אחד מצינורות הסיליקון לקצה הצינורות הפריסטלטיים של קו היציאה מהשלב שמעל. בצד השני, מחברים פיפטה סרולוגית של מיליליטר אחד, ומשעים את הקצה המחובר עם פיפטה סרולוגית בבקבוק מאגר הפסולת. לאחר מכן, השהה את קצה הצינור המחובר לפיפטה הסרולוגית לתוך מאגר חומרי הניקוי, ומיד אטם את פתח בקבוק המאגר של חומרי הניקוי באמצעות פרפילם.הוסף 0.25% SDS מצנצנת הזכוכית של ליטר אחד לתוך תא הביוריאקטור בגובה מחצית הדרך. לאחר מכן, קח את החלק האחורי שנרכש באמצעות מלקחיים של אדסון, והשעה אותו לתוך תא הביוריאקטור בזהירות. באמצעות שני זוגות של מלקחי אדסון, הנחו את החלק המשומר של החלק האחורי אל קו הכניסה תוך החזקת הצינורית עם זוג מלקחיים אחד.השתמש בזוג המלקחיים האחרים כדי לסובב ולהדק את קו הכניסה לצינורית. לאחר האבטחה, הוסיפו עוד 0.25% SDS מצנצנת הזכוכית של ליטר אחד כדי להטביע את הגפה במלואה לפי הצורך, כדי להבטיח שגם יציאת היציאה תהיה שקועה במאגר הביוריאקטור, ותשמור על זרימה עקבית. לאחר מכן, חברו מסנן מזרק חד-פעמי ליציאת האוורור שעל מכסה תא הביוריאקטור, והדקו את המכסה על הביוריאקטור, כדי להבטיח שהתא אטום מכל הצדדים.כדי להוציא אוויר מהצינורות ולהתחיל את מעגל הזליפה, השתמש במזרק חד-פעמי חדש של 10 מיליליטר כדי לשאוב חומר ניקוי ממאגר חומרי הניקוי באמצעות פקק תלת-כיווני בקו הכניסה. לאחר המשיכה, השתמש באותו נוזל כדי להחדיר לתוך stopcock התלת-כיווני בקו היציאה. לאחר מכן, לחץ למטה ואבטח את הקסטות עם הצינורות לתוך המשאבה הפריסטלטית.לאחר מכן, הפעל את המשאבה הפריסטלטית באמצעות לחצן ההפעלה. במסך המשאבה הפריסטלטית, המשך לכרטיסייה השנייה באמצעות מקש החץ כדי להגדיר את קצב הזליפה עבור הערוץ הראשון עם קצב זרימת הקלט כמצב המסירה, וקבע את קצב הזלוף על מיליליטר אחד לדקה, תוך הבטחת כיוון הזרימה נכון בהתאם להגדרת המנגנון. כייל את המשאבה הפריסטלטית כדי להבטיח שכמות הנוזלים המועברת דרך קו הכניסה, ו/או נלקחת מקו היציאה זורמת באופן עקבי בין השניים, כדי להבטיח שמזהה הצינורות מוגדר ל-1.85 מילימטרים.התחל דה-סלוליזציה באמצעות זלוף מכונה במהירות של מיליליטר אחד לדקה עבור קווי הכניסה והיציאה על-ידי לחיצה על לחצן ההפעלה בלוח המקשים. נטר וודא שהזרימה מתבצעת ונמשכת הן בקווי הכניסה והן בקווי היציאה. באמצעות 1 ליטר של 0.25% STS, יש לחדש את מאגר הביוריאקטור דרך יציאת החידוש לפי הצורך.לאחר מכן, חפשו מראה לבן שקוף של הרקמה, אשר יופיע עד היום החמישי, המציין decellularization של החולדה האחורית. לאחר אישור הדה-סלולריזציה, החליפו את מאגר חומרי הניקוי במאגר PBS ו-1% אנטיביוטי-אנטי-מיקוטי, ואטמו את פתח הבקבוקון בפרפילם. יש להתחיל ב-PBS וב-1% הזלפה אנטיביוטית-אנטי-מיקוטית במיליליטר אחד לדקה, ולהמשיך יומיים.החלף את מאגר PBS ו- 1% אנטיביוטיקה-אנטימיקוטי ב- 200 מיליליטר של 0.1% חומצה טפילית, מאגר 4% אתנול, והתחל זלוף במיליליטר אחד לדקה למשך שעתיים. מתחת לארון בטיחות ביולוגית, נתקו את החלק האחורי מקו הכניסה באמצעות שני זוגות של מלקחיים אדסון סטריליים עם זוג מלקחיים אחד כדי לסובב את קו הכניסה, והשני מחזיק את הצינורית, כדי להבטיח שהצינורית לא תימשך כדי למנוע פירוק. יש לאחסן את האיבר בצנצנת זכוכית של 500 מיליליטר המכילה PBS, ו-1% אנטיביוטיקה-אנטי-מיקוטית בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש נוסף.הן עורק הירך והן הווריד הראו אובדן של תוכן גרעיני בכל השכבות ורקמת החיבור שמסביב, בהתחשב בהיעדר גרעינים מוכתמים כחולים שנמצאים אחרת בכלי הדם המקומיים. טוניקה אינטימה מדיה ואדוונטיטיה של וריד הירך והעורקים נשמרו בכלי הדם decellularized. עצב הירך הראה שימור של מבנה הרקמה, כולל האנדונוריום.העצם הראתה שימור מבני כולל עם אובדן גרעינים מוכתמים של אוסטאוציטים, ומשכבות אנדוסטאום ופריוסטאום שמסביב לאחר דה-סלולריזציה. העור הראה אובדן תאים מהאפידרמיס והדרמיס. הדרמיס הראה סיבי קולגן שמורים בדומה לרקמת עור טבעית.לבסוף, המבט הרוחבי של שרירי השלד הראה אובדן של גרעינים הממוקמים אחרת בשולי האנדומיסיום. תכולת המיופיבריל נותרה שמורה בתוך הפאסיקלים המתאימים לאחר הדה-סלולריזציה. כמו כן בוצע כימות דנ"א באמצעות PicoGreen, שבו תכולת הדנ"א הופחתה באופן משמעותי על פני כלי הירך, העצבים, העור, השרירים והעצמות.בעקבות פרוטוקול זה, ניתן לאפיין עוד יותר את האיבר הנטויאלי. זה כרוך בבחינת מטריצה חוץ-תאית באמצעות שיטות היסטולוגיות וביוכימיות, ועל ידי הערכת כלי דם בשימוש בהדמיה. הגזע הדה-תאי יכול גם לעבור תהליך של התא באמצעות תאים ספציפיים לרקמות.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

Decellularization ו Recellularization של כבדים שלמים

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to ...

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

עיצוב של bioreactor לחץ על מחזורי Ex Vivo מחקר של מסתמי הלב אבי העורקים

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

קביעת תעריף הובלת xenobiotics ו ננו מעבר לשליה באמצעות<em&gt; לשעבר vivo</em&gt; דגם זלוף שליה אנושי

Decades ago the human placenta was thought to be an impenetrable barrier between mother and unborn child. However, the discovery of thalidomide-induced ...

Operation of a Benchtop Bioreactor

מבצע של Bioreactor Benchtop

Fermentation systems are used to provide an optimal growth environment for many different types of cell cultures. The ability afforded by fermentors to ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device

נוהל Decellularization של כבדי עכברוש בהתקן זלוף נדנוד לחץ

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

Vascularized Microfluidic Bioprinting עבור הנדסת רקמות, Organoids

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

Decellularization ומתודולוגיה Recellularization עבור האדם הורידים saphenous גדולות

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

טכניקה כירורגית הרומן כבסיס In Vivo חלקי הכבד הנדסה בעכברוש

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver ...

A Reliable Porcine Fascio-Cutaneous Flap Model for Vascularized Composite Allografts Bioengineering Studies

מודל אמין של דש פאסיו-עורי חזירי למחקרי ביו-הנדסה של אלוגרפטים מרוכבים מרוכבים בכלי דם

Vascularized Composite Allografts (VCA) such as hand, face, or penile transplant represents the cutting-edge treatment for devastating skin defects, ...