Name: procurement and decellularization of rat hindlimbs using an ex vivo perfusion-based bioreactor for vascularized composite allotransplantation
Uploaded: 2022-06-09T15:00:00
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टोरंटो जनरल हॉस्पिटल रिसर्च इंस्टीट्यूट से प्राप्त कैडवेरिक नर लुईस चूहों (300-430 ग्राम) का उपयोग सभी प्रयोगों के लिए किया गया था। सभी शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं के लिए, बाँझ उपकरणों और आपूर्ति का उपयोग स?...

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	<li>Kueckelhaus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascularized+composite+allotransplantation:+Current+standards+and+novel+approaches+to+prevent+acute+rejection+and+chronic+allograft+deterioration.">Vascularized composite allotransplantation: Current standards and novel approaches to prevent acute rejection and chronic allograft deterioration.</a> Transplant International. 29 (6), 655-662 (2016).</li><li>Duisit, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+a+human+face+graft:+The+matrix+of+identity.">Bioengineering a human face graft: The matrix of identity.</a> Annals of Surgery. 266 (5), 754-764 (2017).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+skin/adipose+tissue+flap+matrix+for+engineering+vascularized+composite+soft+tissue+flaps.">Decellularized skin/adipose tissue flap matrix for engineering vascularized composite soft tissue flaps.</a> Acta Biomaterialia. 35, 166-184 (2016).</li><li>Londono, R., Gorantla, V. S., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+implications+for+extracellular+matrix-based+technologies+in+vascularized+composite+allotransplantation.">Emerging implications for extracellular matrix-based technologies in vascularized composite allotransplantation.</a> Stem Cells International. 2016 (10), 1-16 (2016).</li><li>Fleissig, Y. Y., Beare, J. E., LeBlanc, A. J., Kaufman, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+rat+hind+limb+transplant+as+an+experimental+model+of+vascularized+composite+allotransplantation:+Approaches+and+advantages.">Evolution of the rat hind limb transplant as an experimental model of vascularized composite allotransplantation: Approaches and advantages.</a> SAGE Open Medicine. 8, 205031212096871 (2020).</li><li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterilization+and+disinfection+methods+for+decellularized+matrix+materials:+Review,+consideration+and+proposal.">Sterilization and disinfection methods for decellularized matrix materials: Review, consideration and proposal.</a> Bioactive Materials. 6 (9), 2927-2945 (2021).</li><li>Chen, Y., Geerts, S., Jaramillo, M., Uygun, B. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+composite+tissue+as+a+bioartificial+limb+graft.">Engineered composite tissue as a bioartificial limb graft.</a> Biomaterials. 61, 246-256 (2015).</li></ol>

वीसीए 5 में प्रायोगिक मॉडल के रूप में चूहे के हिंदलिम्बउपयोगी हैं। एककोशिकीय मचानों की ऊतक इंजीनियरिंग वीसीए से जुड़े दीर्घकालिक इम्यूनोसप्रेशन रेजिमेन की कमियों को संबोधित करने में पहला क...

वीसीए जटिल शल्य चिकित्सा पुनर्निर्माण की आवश्यकता वाले रोगियों के लिए एक उभरता हुआ विकल्प है। दर्दनाक चोटों या ट्यूमर के शोधन के परिणामस्वरूप वॉल्यूमेट्रिक ऊतक हानि होती है जिसे पुनर्निर्माण करना मुश्किल हो सकता है। वीसीए त्वचा, हड्डी, मांसपेशियों, नसों और वाहिकाओं जैसे कई ऊतकों का प्रत्यारोपण एक दातासे प्राप्तकर्ता को समग्र ग्राफ्ट के रूप में प्रदान करता है। इसकी आशाजनक प्रकृति के बावजूद, वीसीए दीर्घकालिक इम्यूनोसप्रेसिव रेजिमेन के कारण सीमित है। ऐसी दवाओं के आजीवन उपयोग से अवसरवादी संक्रमण, दुर्भावनाओं और अंत-अंग विषाक्तता 1,2,3 के लिए जोखिम बढ़ जाता है। इम्यूनोसप्रेशन की आवश्यकता को कम करने और / या समाप्त करने में मदद करने के लिए, वीसीए के लिए डीसेलुलराइजेशन दृष्टिकोण का उपयोग करके ऊतक-इंजीनियर मचान महान वादा दिखाते हैं।
ऊतक विकोशिकीयकरण सेलुलर और परमाणु सामग्री को हटाते हुए बाह्य मैट्रिक्स संरचना को बनाए रखने पर जोर देता है। इस विकोशिकीय पाड़ को रोगी-विशिष्ट कोशिकाओं के साथ फिर से आबाद किया जा सकताहै। हालांकि, समग्र ऊतकों के ईसीएम नेटवर्क को संरक्षित करना एक अतिरिक्त चुनौती है। यह एक मचान के भीतर अलग-अलग ऊतक घनत्व, आर्किटेक्चर और शारीरिक स्थानों के साथ कई ऊतक प्रकारों की उपस्थिति के कारण है। वर्तमान प्रोटोकॉल एक सर्जिकल तकनीक और एक चूहे हिंदलिम्ब के लिए एक डीसेल्युलराइजेशन विधि प्रदान करता है। यह समग्र ऊतकों के लिए इस ऊतक इंजीनियरिंग तकनीक को लागू करने के लिए एक प्रूफ-ऑफ-कॉन्सेप्ट मॉडल है। यह पुनर्कोशिकीयकरण के माध्यम से समग्र ऊतकों को पुनर्जीवित करने के बाद के प्रयासों को भी प्रेरित कर सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride Injection USP 50 mL</td>
			<td>Baxter Corporation</td>
			<td>JB1308M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Disposable Serological Pipets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>75816-102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cc Disposable Syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way Stopcock</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5cc Disposable Syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Isopropyl Alcohol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrodisc Syringe Filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA28143-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps, Straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11006-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiocatheter 24 G 19 mm (&#190;&#8221;)&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>38112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic Solution (100x) 100 mL</td>
			<td>Multicell</td>
			<td>450-115-EL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Cutter</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12029-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connectors for&#160; 1/16&#34; to 1/8&#34; Tubes</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>5117K52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Female Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8&#34; ID</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>51525K328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps with Micro-Blunted Tips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11253-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injection 10,000 IU/10 mL</td>
			<td>LEO Pharma Inc.</td>
			<td>006174-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8&#34; ID</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>51525K322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle Holder</td>
			<td>WLorenz</td>
			<td>04-4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscissors</td>
			<td>WLorenz</td>
			<td>SP-4506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peracetic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>269336-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump, 3-Channel</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-78001-68</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline 1x 500 mL</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>311-425-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Surgical Scrub Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, 3-Stop, Tygon E-LFL</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-96450-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, Platinum-Cured Silicone</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-96410-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade - #10</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle - #3&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate Reagent Grade: Purity: &#62;99%, 1 kg</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>SDS003.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Suture #6-0</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>VS889</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

procurement and decellularization of rat hindlimbs using an ex vivo perfusion-based bioreactor for vascularized composite allotransplantation

गंभीर दर्दनाक चोटों और ऊतक हानि वाले रोगियों को जटिल शल्य चिकित्सा पुनर्निर्माण की आवश्यकता होती है। संवहनी समग्र एलोट्रांसप्लांटेशन (वीसीए) एक समग्र सबयूनिट के रूप में कई ऊतकों को स्थानांतरित करने के लिए एक विकसित पुनर्निर्माण एवेन्यू है। वीसीए की आशाजनक प्रकृति के बावजूद, दीर्घकालिक इम्यूनोसप्रेसिव आवश्यकताएं घातकता, अंत-अंग विषाक्तता और अवसरवादी संक्रमण के बढ़ते जोखिम के कारण एक महत्वपूर्ण सीमा हैं। इम्यूनोसप्रेशन की आवश्यकता को कम करने में एककोशिकीय मिश्रित मचानों की ऊतक इंजीनियरिंग एक संभावित विकल्प है। इसमें, एक चूहे हिंदलिम्ब की खरीद और सोडियम डोडेसिल सल्फेट (एसडीएस) का उपयोग करके इसके बाद के डीसेलुलराइजेशन का वर्णन किया गया है। प्रस्तुत खरीद रणनीति आम ऊरु धमनी पर आधारित है। एक मशीन छिड़काव-आधारित बायोरिएक्टर सिस्टम का निर्माण किया गया था और हिंदलिम्ब के पूर्व विवो डीसेल्यूलराइजेशन के लिए उपयोग किया गया था। सफल छिड़काव डीसेल्यूलराइजेशन किया गया था, जिसके परिणामस्वरूप हिंदलिम्ब की सफेद पारभासी जैसी उपस्थिति हुई। पूरे हिंदलिम्ब में एक बरकरार, अपरिवर्तनीय, संवहनी नेटवर्क देखा गया था। हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण ने परमाणु सामग्री को हटाने और सभी ऊतक डिब्बों में ऊतक वास्तुकला के संरक्षण को दिखाया।

खरीद प्रोटोकॉल बाद के छिड़काव चरणों के लिए आम ऊरु धमनियों को अलग करने और कैनुला करने में सफल रहा। चित्रा 1 ए, बी में प्रतिनिधि विच्छेदन छवियां द्विभाजन बिंदुओं से पर्याप्त दूरी के साथ ?...

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Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

हम समग्र चूहे के हिंदलिम्ब्स के लिए सर्जिकल तकनीक और डीसेल्यूलराइजेशन प्रक्रिया का वर्णन करते हैं। डीसेलुलराइजेशन एक पूर्व विवो मशीन छिड़काव प्रणाली के माध्यम से कम सांद्रता सोडियम डोडेसिल सल्फेट का उपयोग करके आयोजित किया जाता है।

संवहनी समग्र एलोट्रांसप्लांटेशन के लिए एक पूर्व विवो छिड़काव-आधारित बायोरिएक्टर का उपयोग करके चूहे हिंदलिम्ब्स की खरीद और डीसेल्युलराइजेशन

Patients with severe traumatic injuries and tissue loss require complex surgical reconstruction. Vascularized composite allotransplantation (VCA) is an ...

हमने एक अंग के विकोशिकीयकरण के लिए एक छोटा पशु मॉडल स्थापित किया है। यह संवहनी समग्र ऊतकों के डी और पुनर्कोशिकीयकरण पर अवधारणा अनुसंधान के प्रमाण की सुविधा के लिए उपयोगी है। इम्यूनोसप्रेशन रेजिमेन संवहनी समग्र एलोट्रांसप्लांटेशन में मुख्य सीमाओं में से एक हैं।ऊतक इम्युनोजेनेसिटी को डीसेलुलराइजेशन का उपयोग करके कम किया जा सकता है। शुरू करने के लिए, इंगुइनल लिगामेंट के साथ नंबर 10 सर्जिकल ब्लेड का उपयोग करके त्वचा का चीरा लगाएं, एक पार्श्व से एक औसत दिशा में जाएं, जबकि आसपास की त्वचा को एडसन फोर्सप्स के साथ पकड़ें। जब अंतर्निहित वसा उजागर हो जाती है, तो वसा के माध्यम से सावधानीपूर्वक विच्छेदन करने के लिए कुंद विच्छेदन का उपयोग करें, और बेहतर एपिगैस्ट्रिक वाहिकाओं का पता लगाएं।माइक्रो कैंची का उपयोग करके, समीपस्थ रूप से विच्छेदन करें, और अंतर्निहित ऊरु तंत्रिका, धमनी और नस को इंगुइनल लिगामेंट स्तर पर उजागर करें। एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, ऊरु वाहिकाओं की पहचान करें, और धमनी नेटवर्क के विभाजन बिंदुओं से पर्याप्त लंबाई प्राप्त करने के लिए ठीक बल का उपयोग करके धमनी और नस को समीपस्थ रूप से विच्छेदित करें। फिर, 6-0 सीवन का उपयोग करके ऊरु नस और धमनी को अलग-अलग करें।इसके बाद, लिगेटेड फेमोरल वाहिकाओं को बाधित किए बिना हिंदलिम्ब के शेष भाग के चारों ओर परिधीय विच्छेदन करें, और हड्डी कटर का उपयोग करके ऊरु हड्डी को मध्य लंबाई में सही करें। हिंदलिम्ब को पूरी तरह से अलग करने के लिए, माइक्रो कैंची का उपयोग करके लिगेटेड फेमोरल वाहिकाओं को लिगेचर से बाहर निकालें, और विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत 24 गेज एंजियोकैथेटर का उपयोग करके ऊरु धमनी को नष्ट कर दें। फिर, हेपरिनाइज्ड खारा के साथ फ्लश करें जब तक कि ऊरु नस से स्पष्ट बहिर्वाह नहीं देखा जाता है।कैनुला के चारों ओर एक सीवन को दूसरे सीवन में बांधकर कैनुला को सुरक्षित करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि द्विभाजन बिंदुओं को अवरुद्ध करने से रोकने के लिए कैनुला को समीपस्थ रूप से रखा गया है। बाद में, खरीदे गए हिंदलिम्ब्स और पीबीएस को डीसेल्युलराइजेशन तक डुबोएं। बायोरिएक्टर का निर्माण करने के लिए, निष्फल कक्ष रखें, और इनलेट, आउटलेट और फिर से भरने वाली लाइनों पर तीन-तरफ़ा स्टॉपकॉक का उपयोग करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि रिसाव को रोकने के लिए पुनःपूर्ति बंदरगाह के लिए स्टॉपकॉक को इसके शेष दो बंदरगाहों पर कवर किया गया है।पहले से बने सिलिकॉन ट्यूबों को इनलेट और आउटलेट लाइनों पर स्टॉपकॉक से संलग्न करें। फिर, सिलिकॉन ट्यूबों से पेरिस्टालिक ट्यूबिंग कनेक्ट करें। पेरिस्टालिक टयूबिंग पर कैसेट को सुरक्षित करने के बाद, इसे पेरिस्टालिक पंप पर रखें।इसके बाद, सिलिकॉन ट्यूबों में से एक को ऊपर दिए गए चरण से आउटलेट लाइन के पेरिस्टालिक टयूबिंग के अंत में कनेक्ट करें। दूसरे छोर पर, एक मिलीलीटर सीरोलॉजिकल पिपेट को कनेक्ट करें, और अपशिष्ट जलाशय फ्लास्क में सीरोलॉजिकल पिपेट के साथ जुड़े छोर को फिर से निलंबित करें। इसके बाद, डिटर्जेंट जलाशय में सीरोलॉजिकल पिपेट से जुड़ी ट्यूब के अंत को निलंबित करें, और तुरंत पैराफिल्म के साथ डिटर्जेंट जलाशय फ्लास्क के उद्घाटन को सील कर दिया।आधे स्तर पर बायोरिएक्टर कक्ष में एक लीटर ग्लास जार से 0.25% एसडीएस जोड़ें। फिर, एडसन फोर्सप्स का उपयोग करके खरीदे गए हिंदलिम्ब को लें, और इसे बायोरिएक्टर कक्ष में सावधानीपूर्वक निलंबित करें। एडसन फोर्सप्स के दो जोड़े का उपयोग करके, हिंदलिम्ब के कैनुलेटेड हिस्से को इनलेट लाइन में निर्देशित करें, जबकि कैनुला को एक जोड़ी फोर्सप्स के साथ पकड़ें।कैनुला में इनलेट लाइन को मोड़ने और सुरक्षित करने के लिए फोर्स की दूसरी जोड़ी का उपयोग करें। एक बार सुरक्षित होने के बाद, आवश्यकतानुसार अंग को पूरी तरह से जलमग्न करने के लिए एक लीटर ग्लास जार से अधिक 0.25% एसडीएस जोड़ें, यह सुनिश्चित करते हुए कि आउटलेट पोर्ट भी बायोरिएक्टर जलाशय में डूबा हुआ है, और लगातार बहिर्वाह बनाए रखा गया है। फिर, बायोरिएक्टर चैंबर के ढक्कन पर वेंटिलेशन पोर्ट पर एक एकल-उपयोग सिरिंज फ़िल्टर संलग्न करें, और बायोरिएक्टर पर ढक्कन को सुरक्षित करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि कक्ष सभी तरफ से सील है।ट्यूबिंग से हवा निकालने और छिड़काव सर्किट को प्राइम करने के लिए, इनलेट लाइन पर तीन-तरफा स्टॉपकॉक का उपयोग करके डिटर्जेंट जलाशय से डिटर्जेंट खींचने के लिए एक नए एकल उपयोग 10 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करें। एक बार खींचने के बाद, आउटलेट लाइन पर तीन-तरफ़ा स्टॉपकॉक में डालने के लिए उसी तरल पदार्थ का उपयोग करें। इसके बाद, नीचे दबाएं और ट्यूबिंग के साथ कैसेट को पेरिस्टाल्टिक पंप में सुरक्षित करें।फिर, पावर बटन का उपयोग करके पेरिस्टालिक पंप चालू करें। पेरिस्टालिक पंप स्क्रीन पर, डिलीवरी के मोड के रूप में इनपुट प्रवाह दर के साथ पहले चैनल के लिए छिड़काव दर सेट करने के लिए तीर कुंजी का उपयोग करके दूसरे टैब पर आगे बढ़ें, और छिड़काव दर को एक मिलीलीटर प्रति मिनट पर सेट करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि उपकरण सेटअप के अनुसार प्रवाह की दिशा सही है। इनलेट लाइन के माध्यम से वितरित तरल पदार्थ की मात्रा सुनिश्चित करने के लिए पेरिस्टालिक पंप को कैलिब्रेट करें, और / या आउटलेट लाइन से लिया गया दोनों के बीच लगातार बहता है, यह सुनिश्चित करते हुए कि ट्यूबिंग आईडी 1.85 मिलीमीटर पर सेट है।कीपैड पर पावर बटन दबाकर इनलेट और आउटलेट लाइनों दोनों के लिए एक मिलीलीटर प्रति मिनट पर मशीन छिड़काव के माध्यम से डीसेल्युलराइजेशन शुरू करें। मॉनिटर करें और सुनिश्चित करें कि प्रवाह इनलेट और आउटलेट लाइनों दोनों पर चल रहा है। 0.25% एसटीएस के 1 लीटर का उपयोग करके, आवश्यकतानुसार भरने वाले बंदरगाह के माध्यम से बायोरिएक्टर जलाशय को फिर से भरें।फिर, ऊतक की एक सफेद पारभासी उपस्थिति की तलाश करें, जो पांच वें दिन तक दिखाई देगा, जो चूहे के हिंदलिम्ब्स के विकोशिकीयकरण का संकेत देता है। डीसेल्युलराइजेशन की पुष्टि के बाद, डिटर्जेंट जलाशय को पीबीएस और 1% एंटीबायोटिक-एंटीमाइकोटिक जलाशय के साथ बदलें, और पैराफिल्म के साथ फ्लास्क के उद्घाटन को सील करें। पीबीएस और 1% एंटीबायोटिक-एंटीमाइकोटिक छिड़काव एक मिलीलीटर प्रति मिनट पर शुरू करें, और दो दिनों तक जारी रखें।पीबीएस और 1% एंटीबायोटिक-एंटीमाइकोटिक जलाशय को 0.1% परजीवी एसिड, 4% इथेनॉल जलाशय के 200 मिलीलीटर के साथ बदलें, और दो घंटे के लिए एक मिलीलीटर प्रति मिनट पर छिड़काव शुरू करें। एक जैव सुरक्षा कैबिनेट के तहत, इनलेट लाइन को मोड़ने के लिए बाँझ एडसन फोर्सप्स के दो जोड़े का उपयोग करके इनलेट लाइन से हिंदलिम्ब को डिस्कनेक्ट करें, और दूसरे को कैनुला को पकड़ते हुए, यह सुनिश्चित करते हुए कि कैनुला को डिकैनुलेशन को रोकने के लिए खींचा नहीं गया है। अंग को पीबीएस युक्त 500 मिलीलीटर ग्लास जार में स्टोर करें, और आगे के उपयोग तक 4 डिग्री सेल्सियस पर 1% एंटीबायोटिक-एंटीमाइकोटिक।डीसेल्यूलराइज्ड फेमोरल धमनी और नस दोनों ने सभी परतों और आसपास के संयोजी ऊतक में परमाणु सामग्री का नुकसान दिखाया, क्योंकि देशी वाहिकाओं में अन्यथा मौजूद नीले दाग वाले नाभिक की कमी थी। ऊरु शिरा और धमनियों दोनों के ट्यूनिका इंटिमा मीडिया और एडवेंटिटिया को डीसेलुलर वाहिकाओं में बनाए रखा गया था। ऊरु तंत्रिका ने एंडोन्यूरियम सहित ऊतक संरचना का संरक्षण दिखाया।हड्डी ने ओस्टियोसाइट्स के दाग वाले नाभिक के नुकसान के साथ समग्र संरचनात्मक प्रतिधारण दिखाया, और आसपास के एंडोस्टेम और पेरीओस्टेम परतों से डीसेलुलराइजेशन के बाद। त्वचा ने एपिडर्मिस और डर्मिस से कोशिकाओं का नुकसान दिखाया। डर्मिस ने देशी त्वचा ऊतक के समान कोलेजन फाइबर को बरकरार रखा।अंत में, कंकाल की मांसपेशियों के अनुप्रस्थ दृश्य ने नाभिक के नुकसान को दिखाया जो अन्यथा एंडोमिसियम की परिधि में स्थित था। मायोफिब्रिल सामग्री को डीसेलुलराइजेशन के बाद संबंधित फैसिकल्स के भीतर बनाए रखा गया। पिकोग्रीन का उपयोग करके डीएनए परिमाणीकरण भी किया गया था, जहां ऊरु वाहिकाओं, तंत्रिका, त्वचा, मांसपेशियों और हड्डी में डीएनए सामग्री काफी कम हो गई थी।इस प्रोटोकॉल के बाद, डीसेल्यूलराइज्ड अंग को आगे की विशेषता दी जा सकती है। इसमें हिस्टोलॉजिकल और जैव रासायनिक दोनों तरीकों का उपयोग करके बाह्य मैट्रिक्स की जांच करना और इमेजिंग का उपयोग करने में संवहनी का आकलन करना शामिल है। ऊतक-विशिष्ट कोशिकाओं का उपयोग करके डीसेल्यूलराइज्ड स्टेम को भी पुन: कोशिकीय किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

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Fermentation systems are used to provide an optimal growth environment for many different types of cell cultures. The ability afforded by fermentors to ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device

एक oscillating दबाव छिड़काव डिवाइस में चूहे यकृत की Decellularization के लिए प्रक्रिया

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

ऊतकों और Organoids इंजीनियरिंग के लिए Microfluidic Bioprinting Vascularized

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

मानव Saphenous नसों के लिए Decellularization और Recellularization पद्धति

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

एक उपंयास सर्जिकल में Vivo आंशिक जिगर इंजीनियरिंग के लिए एक नींव के रूप में शल्य चिकित्सा तकनीक

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver ...

A Reliable Porcine Fascio-Cutaneous Flap Model for Vascularized Composite Allografts Bioengineering Studies

संवहनी समग्र एलोग्राफ्ट्स बायोइंजीनियरिंग अध्ययन के लिए एक विश्वसनीय पोर्सिन फेसियो-क्यूटेनियस फ्लैप मॉडल

Vascularized Composite Allografts (VCA) such as hand, face, or penile transplant represents the cutting-edge treatment for devastating skin defects, ...