Name: procurement and decellularization of rat hindlimbs using an ex vivo perfusion-based bioreactor for vascularized composite allotransplantation
Uploaded: 2022-06-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation at JoVE.com

Şekil 3A, BioRender.com yılında oluşturulmuştur.

Toronto Genel Hastanesi Araştırma Enstitüsü'nden elde edilen kadavra erkek Lewis sıçanları (300-430 g) tüm deneyler için kullanıldı. Tüm cerrahi prosedürler için, aseptik tekniği sürdürmek için steril aletler ve malzemeler kullanıldı ( bakınız Malzeme Tablosu). Tüm prosedürler, Toronto Genel Hastanesi Araştırma Enstitüsü, Üniversite Sağlık Ağı'ndaki (Toronto, ON, Kanada) Hayvan Bakım Komitesi'nin yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Toplam dört arka baca...

<ol>
	<li>Kueckelhaus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascularized+composite+allotransplantation:+Current+standards+and+novel+approaches+to+prevent+acute+rejection+and+chronic+allograft+deterioration.">Vascularized composite allotransplantation: Current standards and novel approaches to prevent acute rejection and chronic allograft deterioration.</a> Transplant International. 29 (6), 655-662 (2016).</li><li>Duisit, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+a+human+face+graft:+The+matrix+of+identity.">Bioengineering a human face graft: The matrix of identity.</a> Annals of Surgery. 266 (5), 754-764 (2017).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+skin/adipose+tissue+flap+matrix+for+engineering+vascularized+composite+soft+tissue+flaps.">Decellularized skin/adipose tissue flap matrix for engineering vascularized composite soft tissue flaps.</a> Acta Biomaterialia. 35, 166-184 (2016).</li><li>Londono, R., Gorantla, V. S., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+implications+for+extracellular+matrix-based+technologies+in+vascularized+composite+allotransplantation.">Emerging implications for extracellular matrix-based technologies in vascularized composite allotransplantation.</a> Stem Cells International. 2016 (10), 1-16 (2016).</li><li>Fleissig, Y. Y., Beare, J. E., LeBlanc, A. J., Kaufman, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+rat+hind+limb+transplant+as+an+experimental+model+of+vascularized+composite+allotransplantation:+Approaches+and+advantages.">Evolution of the rat hind limb transplant as an experimental model of vascularized composite allotransplantation: Approaches and advantages.</a> SAGE Open Medicine. 8, 205031212096871 (2020).</li><li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterilization+and+disinfection+methods+for+decellularized+matrix+materials:+Review,+consideration+and+proposal.">Sterilization and disinfection methods for decellularized matrix materials: Review, consideration and proposal.</a> Bioactive Materials. 6 (9), 2927-2945 (2021).</li><li>Chen, Y., Geerts, S., Jaramillo, M., Uygun, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+decellularized+liver+scaffolds+and+recellularized+liver+grafts.">Preparation of decellularized liver scaffolds and recellularized liver grafts.</a> Methods in Molecular Biology. 1577, 255-270 (2018).</li><li>Ahmed, S., Chauhan, V. M., Ghaemmaghami, A. M., Aylott, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+generation+of+bioreactors+that+advance+extracellular+matrix+modelling+and+tissue+engineering.">New generation of bioreactors that advance extracellular matrix modelling and tissue engineering.</a> Biotechnology Letters. 41 (1), 1-25 (2019).</li><li>Cohen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+vascular+chimerism+within+donor+organs.">Generation of vascular chimerism within donor organs.</a> Scientific Reports. 11 (1), 13437 (2021).</li><li>Lupon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+vascularized+composite+allografts+using+natural+scaffolds:+A+systematic+review.">Engineering vascularized composite allografts using natural scaffolds: A systematic review.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. , (2021).</li><li>Urciuolo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularised+skeletal+muscles+allow+functional+muscle+regeneration+by+promoting+host+cell+migration.">Decellularised skeletal muscles allow functional muscle regeneration by promoting host cell migration.</a> Scientific Reports. 8 (1), 8398 (2018).</li><li>Jank, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+composite+tissue+as+a+bioartificial+limb+graft.">Engineered composite tissue as a bioartificial limb graft.</a> Biomaterials. 61, 246-256 (2015).</li></ol>

Sıçan arka bacakları VCA 5'te deneysel modeller olarakkullanışlıdır. Asellüler iskelelerin doku mühendisliği, VCA ile ilişkili uzun süreli immünsüpresyon rejimlerinin eksikliklerini ele almada ilk adımı temsil eder. Kompozit greftlerin kullanımı, her biri benzersiz fonksiyonel, immünojenik ve yapısal özelliklere sahip çoklu dokuların varlığı göz önüne alındığında ek bir zorluk oluşturmaktadır. Mevcut protokol, asellüler kompozit sıçan arka bacaklarının elde ...

VCA, karmaşık cerrahi rekonstrüksiyon gerektiren hastalar için yeni ortaya çıkan bir seçenektir. Travmatik yaralanmalar veya tümör rezeksiyonları, rekonstrüksiyonu zor olabilen hacimsel doku kaybına neden olur. VCA, deri, kemik, kas, sinirler ve damarlar gibi çoklu dokuların bir donörden bir alıcıya kompozit greft olarak nakledilmesini sağlar1. Umut verici doğasına rağmen, VCA uzun süreli immünosüpresif rejimler nedeniyle sınırlıdır. Bu tür ilaçların yaşam boyu kullanımı, fırsatçı enfeksiyonlar, maligniteler ve son organ toksisitesi için artmış riske neden olur 1,2,3. İmmünsüpresyon ihtiyacını azaltmaya ve / veya ortadan kaldırmaya yardımcı olmak için, VCA için desellülarizasyon yaklaşımlarını kullanan doku mühendisliği iskeleleri büyük umut vaat etmektedir.
Doku desellülarizasyonu, hücresel ve nükleer içeriği uzaklaştırırken hücre dışı matriks yapısının korunmasını gerektirir. Bu desellülarize iskele, hastaya özgü hücrelerle yeniden doldurulabilir4. Bununla birlikte, ECM kompozit doku ağının korunması ek bir zorluktur. Bunun nedeni, bir iskele içinde değişen doku yoğunluklarına, mimarilerine ve anatomik konumlarına sahip çoklu doku tiplerinin varlığıdır. Mevcut protokol, bir sıçan arka bacağı için cerrahi bir teknik ve bir desellülarizasyon yöntemi sunmaktadır. Bu, bu doku mühendisliği tekniğini kompozit dokulara uygulamak için bir kavram kanıtı modelidir. Bu aynı zamanda reselülilarizasyon yoluyla kompozit dokuları yeniden oluşturmak için sonraki çabaları da tetikleyebilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride Injection USP 50 mL</td>
			<td>Baxter Corporation</td>
			<td>JB1308M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Disposable Serological Pipets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>75816-102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cc Disposable Syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way Stopcock</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5cc Disposable Syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Isopropyl Alcohol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrodisc Syringe Filter 0.2 &#181;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CA28143-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps, Straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11006-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiocatheter 24 G 19 mm (&#190;&#8221;)&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>38112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic Solution (100x) 100 mL</td>
			<td>Multicell</td>
			<td>450-115-EL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Cutter</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12029-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connectors for&#160; 1/16&#34; to 1/8&#34; Tubes</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>5117K52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Female Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8&#34; ID</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>51525K328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps with Micro-Blunted Tips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11253-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injection 10,000 IU/10 mL</td>
			<td>LEO Pharma Inc.</td>
			<td>006174-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8&#34; ID</td>
			<td>McMasterCarr</td>
			<td>51525K322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Needle Holder</td>
			<td>WLorenz</td>
			<td>04-4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscissors</td>
			<td>WLorenz</td>
			<td>SP-4506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peracetic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>269336-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump, 3-Channel</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-78001-68</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline 1x 500 mL</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>311-425-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Surgical Scrub Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Obtained from Research Institution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, 3-Stop, Tygon E-LFL</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-96450-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump Tubing, Platinum-Cured Silicone</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>RK-96410-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade - #10</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle - #3&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate Reagent Grade: Purity: &#62;99%, 1 kg</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>SDS003.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Suture #6-0</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>VS889</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

procurement and decellularization of rat hindlimbs using an ex vivo perfusion-based bioreactor for vascularized composite allotransplantation

Ciddi travmatik yaralanmaları ve doku kaybı olan hastalar karmaşık cerrahi rekonstrüksiyon gerektirir. Vaskülarize kompozit allotransplantasyon (VCA), kompozit bir alt birim olarak birden fazla dokunun transferi için gelişen bir rekonstrüktif yoldur. VCA'nın umut verici doğasına rağmen, uzun süreli immünsüpresif gereksinimler, maligniteler, son organ toksisitesi ve fırsatçı enfeksiyonlar riskinin artması nedeniyle önemli bir sınırlamadır. Asellüler kompozit iskelelerin doku mühendisliği, immünsüpresyon ihtiyacını azaltmada potansiyel bir alternatiftir. Burada, bir sıçan arka bacağının tedariki ve ardından sodyum dodesil sülfat (SDS) kullanılarak desellülarizasyonu açıklanmaktadır. Sunulan tedarik stratejisi ortak femoral artere dayanmaktadır. Bir makine perfüzyon bazlı biyoreaktör sistemi inşa edildi ve arka bacağın ex vivo desellülarizasyonu için kullanıldı. Başarılı perfüzyon desellülarizasyonu gerçekleştirildi ve arka bacak beyaz yarı saydam benzeri bir görünüm elde edildi. Arka bacak boyunca sağlam, perfüzyona uğramış, vasküler bir ağ gözlendi. Histolojik analizler, nükleer içeriğin çıkarıldığını ve tüm doku bölmelerinde doku mimarisinin korunduğunu gösterdi.

Tedarik protokolü, sonraki perfüzyon adımları için ortak femoral arterlerin izole edilmesi ve kanülasyonunda başarılı olmuştur. Şekil 1A,B'deki temsili diseksiyon görüntüleri, bifurkasyon noktalarından yeterli mesafede femur damarlarının insizyon yerini ve maruziyetini göstermektedir. Şekil 2, biyoreaktör ve perfüzyon devresini hazırlamak için gerekli olan aparatı göstermektedir. Desellülarizasyonun bitiş noktası, do...

Watch this Scientific Journal Video about Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation at JoVE.com

Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

Bu yazıda kompozit sıçan arka bacakları için cerrahi teknik ve desellülarizasyon süreci anlatılmaktadır. Desellülarizasyon, bir ex vivo makine perfüzyon sistemi aracılığıyla düşük konsantrasyonlu sodyum dodesil sülfat kullanılarak gerçekleştirilir.

Vaskülarize Kompozit Allotransplantasyon için Ex Vivo Perfüzyon Bazlı Biyoreaktör Kullanılarak Sıçan Arka Bacaklarının Tedariği ve Desellülarizasyonu

Patients with severe traumatic injuries and tissue loss require complex surgical reconstruction. Vascularized composite allotransplantation (VCA) is an ...

Bir uzvun hücresellikten arındırılması için küçük bir hayvan modeli oluşturduk. Bu, vaskülarize kompozit dokuların de ve resellülarizasyonu üzerine kavram kanıtı araştırmalarını kolaylaştırmak için yararlıdır. İmmünsüpresyon rejimleri vaskülarize kompozit allotransplantasyonda başlıca sınırlamalardan biridir.Doku immünojenisitesi, desellülarizasyon kullanılarak azaltılabilir. Başlamak için, kasık bağı boyunca 10 numaralı cerrahi bıçak kullanarak, yanal bir yönden medial bir yöne doğru hareket ederken, çevredeki cildi Adson Forseps ile tutarken bir cilt kesisi yapın. Altta yatan yağ açığa çıktığında, yağdan dikkatlice diseksiyon yapmak ve üstün epigastrik damarları bulmak için künt diseksiyon kullanın.Mikro makas kullanarak, proksimal olarak diseksiyon yapın ve altta yatan femoral siniri, arteri ve veni inguinal ligament seviyesinde açığa çıkarın. Bir diseksiyon mikroskobu altında, femoral damarları tanımlayın ve arteriyel ağın bifurkasyon noktalarından yeterli uzunluk elde etmek için ince forseps kullanarak arteri ve veni proksimal olarak diseke edin. Daha sonra, femoral veni ve arteri 6-0 dikiş kullanarak ayrı ayrı bağlayın.Daha sonra, bağlı femur damarlarını bozmadan arka bacağın geri kalanı etrafında çevresel diseksiyon yapın ve bir kemik kesici kullanarak femur kemiğini orta uzunlukta transekte edin. Arka bacağı tamamen izole etmek için, mikro makas kullanarak ligatürlere distal bağlanmış femur damarlarını transekte edin ve diseksiyon mikroskobu altında 24 gauge anjiyokateter kullanarak femoral arteri kanüle edin. Daha sonra, femoral venden net bir çıkış gözlenene kadar heparinize salin ile yıkayın.Kanülün etrafındaki bir dikişi, kanülün etrafındaki başka bir dikişe distal olarak bağlayarak, çatallanma noktalarının tıkanmasını önlemek için kanülün yakınına yerleştirilmesini sağlayarak kanülü sabitleyin. Daha sonra, tedarik edilen arka bacakları ve PBS'yi desellülarizasyona kadar batırın. Biyoreaktörü inşa etmek için, sterilize edilmiş odayı yerleştirin ve giriş, çıkış ve ikmal hatlarındaki üç tek kullanımlık üç yönlü stopcock'a vidalayın, böylece ikmal portunun stopcock'unun sızıntıyı önlemek için kalan iki portunda kapatılmasını sağlayın.Daha önce yapılmış silikon tüpleri giriş ve çıkış hatlarındaki stopcocklara takın. Ardından, peristaltik boruları silikon tüplere bağlayın. Kaseti peristaltik boru üzerine sabitledikten sonra, peristaltik pompaya yerleştirin.Ardından, silikon tüplerden birini, yukarıdaki adımdan çıkış hattının peristaltik borusunun sonuna bağlayın. Diğer tarafta, bir mililitrelik serolojik pipet bağlayın ve atık haznesi şişesinde serolojik bir pipetle tutturulmuş ucu yeniden askıya alın. Daha sonra, serolojik pipete bağlı tüpün ucunu deterjan rezervuarına askıya alın ve deterjan haznesi şişesinin açıklığını hemen parafilm ile kapatın.Bir litrelik cam kavanozdan% 0.25 SDS'yi yarı yolda biyoreaktör odasına ekleyin. Ardından, Adson Forseps kullanarak tedarik edilen arka bacağı alın ve biyoreaktör odasına dikkatlice askıya alın. İki çift Adson Forseps kullanarak, kanülü bir çift forseps ile tutarken arka bacağın kanüllenmiş kısmını giriş çizgisine yönlendirin.Giriş hattını kanüle bükmek ve sabitlemek için diğer forseps çiftini kullanın. Sabitlendikten sonra, uzuvları gerektiği gibi tamamen batırmak için bir litrelik cam kavanozdan% 0.25 daha fazla% SDS ekleyin, çıkış portunun da biyoreaktör rezervuarına batırılmasını ve tutarlı çıkışın korunmasını sağlayın. Ardından, biyoreaktör odasının kapağındaki havalandırma portuna tek kullanımlık bir şırınga filtresi takın ve kapağı biyoreaktör üzerine sabitleyerek odanın her taraftan kapatılmasını sağlayın.Havayı borudan çıkarmak ve perfüzyon devresini hazırlamak için, giriş hattında üç yönlü bir stopcock kullanarak deterjanı deterjan haznesinden çekmek için yeni bir tek kullanımlık 10 mililitre şırınga kullanın. Çekildikten sonra, çıkış hattındaki üç yönlü stopcock'a yerleştirmek için aynı sıvıyı kullanın. Ardından, kasetleri aşağı bastırın ve borulu peristaltik pompaya sabitleyin.Ardından, güç düğmesini kullanarak peristaltik pompayı açın. Peristaltik pompa ekranında, giriş akış hızı ile ilk kanalın perfüzyon hızını teslimat şekli olarak ayarlamak için ok tuşunu kullanarak ikinci sekmeye geçin ve perfüzyon hızını dakikada bir mililitre olarak ayarlayarak akış yönünün cihaz kurulumuna göre doğru olmasını sağlayın. Giriş hattından iletilen ve/veya çıkış hattından alınan sıvı miktarının ikisi arasında tutarlı bir şekilde aktığından emin olmak için peristaltik pompayı kalibre edin ve boru kimliğinin 1,85 milimetreye ayarlanmasını sağlayın.Tuş takımındaki güç düğmesine basarak hem giriş hem de çıkış hatları için dakikada bir mililitrede makine perfüzyonu yoluyla hücre desellülarizasyonuna başlayın. Akışın hem giriş hem de çıkış hatlarında olup olmadığını ve devam ettiğini izleyin ve emin olun. 1 litre% 0.25 STS kullanarak, biyoreaktör rezervuarını gerektiğinde yenileme portundan doldurun.Daha sonra, beşinci güne kadar ortaya çıkacak olan ve sıçan arka bacaklarının hücresellikten arındırıldığını gösteren dokunun beyaz yarı saydam bir görünümünü arayın. Desellülarizasyonun onaylanmasını takiben, deterjan haznesini PBS ve% 1 Antibiyotik-Antimikotik rezervuar ile değiştirin ve şişenin açıklığını parafilm ile kapatın. PBS ve% 1 Antibiyotik-Antimikotik perfüzyona dakikada bir mililitrede başlayın ve iki gün boyunca devam edin.PBS ve% 1 Antibiyotik-Antimikotik rezervuarı 200 mililitre% 0.1 paraziter asit,% 4 etanol rezervuarı ile değiştirin ve iki saat boyunca dakikada bir mililitrede perfüzyona başlayın. Bir biyogüvenlik kabini altında, giriş hattını bükmek için bir çift forseps ile iki çift steril Adson Forseps kullanarak arka bacağı giriş hattından ayırın ve diğeri kanülü tutarak, kanülün silinmeyi önlemek için çekilmemesini sağlayın. Uzuvları PBS içeren 500 mililitrelik bir cam kavanozda ve% 1 Antibiyotik-Antimikotik'i daha fazla kullanana kadar 4 santigrat derecede saklayın.Hem desellülarize femoral arter hem de ven, doğal damarlarda aksi takdirde mevcut olan mavi lekeli çekirdeklerin eksikliği göz önüne alındığında, tüm katmanlarda ve çevreleyen bağ dokusunda nükleer içerik kaybı gösterdi. Tunika intima media ve hem femoral ven hem de arterlerin adventitisi desellülarize damarlarda tutuldu. Femoral sinir, endoneurium da dahil olmak üzere doku yapısının korunduğunu gösterdi.Kemik, osteositlerin lekeli çekirdeklerinin kaybı ve desellülarizasyon sonrası çevredeki endosteum ve periost tabakalarından genel yapısal retansiyon gösterdi. Deri, epidermis ve dermisten hücre kaybı gösterdi. Dermis, doğal cilt dokusuna benzer şekilde tutulan kollajen lifleri gösterdi.Son olarak, iskelet kasının enine görünümü, endomisyumun çevrelerinde bulunan çekirdek kaybını gösterdi. Miyofibril içeriği, desellülarizasyon sonrası ilgili fasiküller içinde tutulmaya devam etti. PicoGreen kullanılarak DNA nicelleştirmesi de gerçekleştirildi, burada DNA içeriği femur damarları, sinir, cilt, kas ve kemik boyunca önemli ölçüde azaldı.Bu protokolü takiben, desellülarize uzuv daha da karakterize edilebilir. Bu, hücre dışı matriksin hem histolojik hem de biyokimyasal yöntemler kullanılarak incelenmesini ve görüntülemede vaskülerin değerlendirilmesini içerir. Desellülarize gövde, dokuya özgü hücreler kullanılarak yeniden hücreselleştirilebilir.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

Tüm karaciğerleri Decellularization ve Recellularization

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to ...

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Devirli Basınç Biyoreaktör Tasarım Ex vivo</emAort Kalp Vanalar> Eğitim

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model

Plasenta karşısında Ksenobiyotik ve Nanomalzemelerin Ulaştırma Hızı belirlenmesi kullanarak<em&gt; Ex vivo</em&gt; İnsan Plasental Perfüzyon Modeli

Decades ago the human placenta was thought to be an impenetrable barrier between mother and unborn child. However, the discovery of thalidomide-induced ...

Operation of a Benchtop Bioreactor

Bir Benchtop Biyoreaktör Operasyonu

Fermentation systems are used to provide an optimal growth environment for many different types of cell cultures. The ability afforded by fermentors to ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device

Bir Salınım basınçlı perfüzyon Aygıt Sıçan karaciğerinin decellularization Prosedürü

Decellularization and recellularization of parenchymal organs may enable the generation of functional organs in vitro, and several protocols for rodent ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

Mikrosıvısal Bioprinting mühendisliği için doku ve Organoids skarların

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

Decellularization ve Recellularization metodoloji insan safen damarlar için

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

Sıçan Vivo içinde kısmi karaciğer Dairesi'nde için bir temel olarak yeni bir cerrahi teknik

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver ...

A Reliable Porcine Fascio-Cutaneous Flap Model for Vascularized Composite Allografts Bioengineering Studies

Vaskülarize Kompozit Allogreftler Biyomühendislik Çalışmaları için Güvenilir Bir Domuz Fasyo-Kutanöz Flap Modeli

Vascularized Composite Allografts (VCA) such as hand, face, or penile transplant represents the cutting-edge treatment for devastating skin defects, ...