Name: mouse heterotopic cervical cardiac transplantation utilizing vascular cuffs
Uploaded: 2022-06-23T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs at JoVE.com

يتم دعم DK من قبل منح المعاهد الوطنية للصحة 1P01AI116501 و R01HL094601 و R01HL151078 ومنحة مراجعة استحقاق إدارة المحاربين القدامى 1I01BX002730 ومؤسسة مستشفى بارنز اليهودي.

تم إجراء جميع إجراءات التعامل مع الحيوانات وفقا لإرشادات رعاية واستخدام المختبر الصادرة عن المعاهد الوطنية للصحة ووافقت عليها لجنة الدراسات الحيوانية في كلية الطب بجامعة واشنطن. تم زرع قلوب من الفئران C57BL / 6 (B6) و BALB / c (التي تزن 20-25 جم) في متلقي B6 المتطابقين بين الجنسين (6-8 أسابيع من العمر). ت?...

<ol>
	<li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> The Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 733-735 (1973).</li><li>Heron, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+accessory+cervical+heart+transplantation+in+rabbits+and+rats.">A technique for accessory cervical heart transplantation in rabbits and rats.</a> Acta Pathologica Microbiologica Scandinavica Section A Pathology. 79 (4), 366-372 (1971).</li><li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+of+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).</li><li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).</li><li>Yu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cuff+anastomosis+of+both+renal+artery+and+vein+to+minimize+thrombosis:+a+novel+method+of+kidney+transplantation+in+mice.">Cuff anastomosis of both renal artery and vein to minimize thrombosis: a novel method of kidney transplantation in mice.</a> Journal of Investigative Surgery. 35 (1), 56-60 (2022).</li><li>Tomita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heterotopic+cervical+heart+transplantation+in+mice.">Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 64 (11), 1598-1601 (1997).</li><li>Wang, Q., Liu, Y., Li, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+technique+for+heterotopic+vascularized+cervical+heart+transplantation+in+mice.">Simplified technique for heterotopic vascularized cervical heart transplantation in mice.</a> Microsurgery. 25 (1), 76-79 (2005).</li><li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique.">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).</li><li>Ratschiller, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+cervical+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic cervical heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52907 (2015).</li><li>Mao, X., Xian, P., You, H., Huang, G., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+cuff+technique+for+mouse+cervical+heterotopic+heart+transplantation+model.">A modified cuff technique for mouse cervical heterotopic heart transplantation model.</a> Journal of Visualized Experiments. (180), e63504 (2022).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+2-photon+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+beating+heart.">Intravital 2-photon imaging of leukocyte trafficking in beating heart.</a> Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2499-2508 (2012).</li><li>Kreisel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+two-photon+imaging+reveals+monocyte-dependent+neutrophil+extravasation+during+pulmonary+inflammation.">In vivo two-photon imaging reveals monocyte-dependent neutrophil extravasation during pulmonary inflammation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (42), 18073-18078 (2010).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+monocytic+cells+in+regressing+atherosclerotic+plaques+by+intravital+2-photon+and+positron+emission+tomography-based+imaging-brief+report.">Visualization of monocytic cells in regressing atherosclerotic plaques by intravital 2-photon and positron emission tomography-based imaging-brief report.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 38 (5), 1030-1036 (2018).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+transplant+acceptance+is+facilitated+by+early+events+in+the+graft+and+is+associated+with+lymphoid+neogenesis.">Lung transplant acceptance is facilitated by early events in the graft and is associated with lymphoid neogenesis.</a> Mucosal Immunology. 5 (5), 544-554 (2012).</li><li>Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insertion+of+enhanced+green+fluorescent+protein+into+the+lysozyme+gene+creates+mice+with+green+fluorescent+granulocytes+and+macrophages.">Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages.</a> Blood. 96 (2), 719-726 (2000).</li><li>Krupnick, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+mouse+lung+transplantation+as+experimental+methodology+to+study+transplant+and+tumor+biology.">Orthotopic mouse lung transplantation as experimental methodology to study transplant and tumor biology.</a> Nature Protocols. 4 (1), 86-93 (2009).</li><li>Westhofen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heterotopic+heart+transplantation+in+mice+as+a+small+animal+model+to+study+mechanical+unloading+-+Establishment+of+the+procedure,+perioperative+management+and+postoperative+scoring.">The heterotopic heart transplantation in mice as a small animal model to study mechanical unloading - Establishment of the procedure, perioperative management and postoperative scoring.</a> PLoS One. 14 (4), 0214513 (2019).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+cuff+technique+for+murine+heart+transplantation.">Optimization of the cuff technique for murine heart transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (160), e61103 (2020).</li><li>Latchana, N., Peck, J. R., Whitson, B., Black, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+solutions+for+cardiac+and+pulmonary+donor+grafts:+a+review+of+the+current+literature.">Preservation solutions for cardiac and pulmonary donor grafts: a review of the current literature.</a> Journal of Thoracic Disease. 6 (8), 1143-1149 (2014).</li><li>Hartley, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doppler+velocity+measurements+from+large+and+small+arteries+of+mice.">Doppler velocity measurements from large and small arteries of mice.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), 269-278 (2011).</li><li>Bovenkamp, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Velocity+mapping+of+the+aortic+flow+at+9.4+T+in+healthy+mice+and+mice+with+induced+heart+failure+using+time-resolved+three-dimensional+phase-contrast+MRI+(4D+PC+MRI).">Velocity mapping of the aortic flow at 9.4 T in healthy mice and mice with induced heart failure using time-resolved three-dimensional phase-contrast MRI (4D PC MRI).</a> MAGMA. 28 (4), 315-327 (2015).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+models+of+xenotransplantation.">Small animal models of xenotransplantation.</a> Methods in Molecular Biology. 885, 125-153 (2012).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+graft+function+in+rodent+models+of+heart+transplantation.">Assessment of graft function in rodent models of heart transplantation.</a> Microsurgery. 28 (7), 565-570 (2008).</li></ol>

باستخدام هذه التقنية ، يمكن إجراء زراعة قلب عنق الرحم غير المتجانسة للفأر في أقل من 40 دقيقة بواسطة جراح دقيق متمرس وفي حوالي 60 دقيقة بواسطة جراح مجهري مبتدئ. بينما تمت دراسة زرع قلب عنق الرحم في العديد من النماذج الحيوانية ، يظل نموذج الفأر هو المعيار الذهبي بسبب السلالات الجينية المتعددة ...

نشر أبوت وآخرون1 أول وصف لزراعة قلب البطن غير المتجانس في الفئران في عام 1964. تم تنقيح هذه التقنيات الجراحية وتبسيطها بواسطة Ono et al. في عام 19692. وصف كوري وآخرون لأول مرة طريقة لزراعة قلب البطن غير المتجانس في الفئران في عام 1973. على غرار نماذج الفئران التي تم الإبلاغ عنها سابقا ، تضمن ذلك النقش في بطن المضيف مع إعادة التوعي عن طريق مفاغرة من طرف إلى جانب للشريان الرئوي للمتبرع والشريان الأورطي الصاعد إلى الوريد الأجوف السفلي للمتلقي والشريان الأورطي البطني ، على التوالي3. تم وصف زرع قلب عنق الرحم غير المتجانس في الفئران بواسطة Heron في عام 1971 باستخدام أصفاد تفلون مصنوعة من 16 جم (1.6 مم قطر خارجي) قسطرة في الوريد4. أبلغ Chen5 و Matsuura et al.6 لاحقا عن زرع قلب عنق الرحم غير المتجانس في الفئران في عام 1991 ، والتي اختلفت تقنياتها في المقام الأول في طريقة إعادة المفاغرة. تضمن نهج تشن مفاغرة خياطة الشريان الأورطي الصاعد للمتبرع إلى الشريان السباتي للمتلقي والشريان الرئوي للمتبرع إلى الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي5. نظرا للمهارة التقنية المتقدمة المطلوبة لهذه المفاغرة الجراحية المجهرية ، كان هناك حاجة إلى قدر كبير من الوقت والخبرة لتحقيق معدل نجاح مرتفع. وصف ماتسورا وآخرون طريقة تستخدم تقنية الكفة غير المخيطة ، على غرار تلك المستخدمة من قبل هيرون ، والتي تضمنت مفاغرة من طرف إلى طرف باستخدام وضع الأصفاد خارج اللمعة. قام بتصميم أصفاد تفلون من القسطرة الوريدية 22 جم (القطر الخارجي 0.8 مم) و 24 جم (القطر الخارجي 0.67 مم) ووضعها فوق الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي والشريان السباتي المشترك ، على التوالي6. ثم تم وضع هذه الأصفاد داخل الشريان الرئوي والشريان الأورطي للمتبرع وتأمينها عن طريق ربط رباط خياطة حول الوصلة. ترجم هذا النهج إلى معدل نجاح محسن. الأهم من ذلك ، أنه أدى إلى تقصير الوقت اللازم لإكمال كل من مفاغرة عنق الرحم ، وبالتالي تقليل الوقت الإقفاري الدافئ للكسب غير المشروع إلى أقل من ثلث ذلك باستخدام طريقة خياطة البطن. علاوة على ذلك ، نظرا لوضع الأصفاد حول السطح الخارجي للسفينة ، لا يوجد جسم غريب يتعرض لتجويف الوعاء ، مما يقلل إلى حد كبير من احتمال تجلط الدم بعد الجراحة7. وفي الوقت نفسه ، يوفر استخدام تقنية الكفة الدعم حول الأوعية في موقع المفاغرة دون الحاجة إلى أي خياطة ، مما يقلل من خطر النزيف بعد إعادة التوعي6.
تم اقتراح العديد من التنقيحات لهذه التقنية. لاستيعاب الطول القصير للشريان السباتي المشترك للفأر (حوالي 5 مم) ، طور Tomita et al.8 تعديلا لهذه التقنية مع صفعة شريانية أصغر (قطر خارجي 0.6 مم) مع حذف عقد الغرز وسحب الشريان مباشرة من خلال الكفة باستخدام ملقط دقيق بدلا من ذلك. قام وانغ وآخرون بتبسيط هذا النهج عن طريق وضع أصفاد 22 G و 24 G على الشريان الرئوي الأيمن للمتبرع والشريان السباتي المشترك الأيمن للمتلقي ، على التوالي9. وصفت تقارير مختلفة تعديلات على هذه الأساليب ، بما في ذلك استخدام الأصفاد المتخصصة ، والمشابك المجهرية ، وموسعات الأوعية الدموية ، وشلل القلب10،11،12. والجدير بالذكر أن كل هذه الطرق تنطوي على الدورة الدموية الرجعية عبر القلب ، حيث يتدفق الدم من الشريان السباتي المشترك المتلقي إلى الشريان الأورطي المتبرع ، والشرايين التاجية ، والجيب التاجي ، ثم يفرغ في الأذين الأيمن ويخرج من الشريان الرئوي إلى الوريد الوداجي الخارجي المتلقي.
بالمقارنة مع النقش في البطن ، فإن زراعة قلب عنق الرحم توفر مزايا متعددة. كما ذكرنا سابقا ، يسمح التعرض لعنق الرحم بإعادة التوعي بشكل أسرع وأوقات نقص تروية دافئة أقصر6. طريقة عنق الرحم هي أيضا أقل توغلا وترتبط بأوقات تعافي أقصر بعد العملية الجراحية لأنها تتجنب بضع البطن6. الأهم من ذلك ، يمكن إجراء مفاغرة من طرف إلى طرف مع الأصفاد بدلا من مفاغرة من طرف إلى آخر ، مما يقلل من خطر حدوث مضاعفات مثل نزيف مفاغرة. يشكل نهج البطن أيضا خطرا متزايدا للإصابة بمضاعفات خثارية في الشريان الأورطي البطني أو الوريد الأجوف السفلي، مما يؤدي إلى إقفار الحبل الشوكي وشلل الأطراف الخلفية. يسمح موقع عنق الرحم السطحي لعملية الزرع بالوصول السهل إلى تقييم جدوى الكسب غير المشروع عن طريق الجس وتخطيط القلب الكهربائي والتصوير الغازي أو غير الجراحي. على الرغم من أن الطعوم العنقية تستأنف نشاط القلب التلقائي بعد إعادة التروية ، إلا أنها لا تؤثر بشكل كبير على المعلمات الانقباضية والانبساطية للمتلقي. يوفر هذا النموذج رؤية قيمة لدراسة الاستجابات الخلوية بعد الزرع ، مثل إصابة نقص التروية ورفض الكسب غير المشروع. علاوة على ذلك ، يقدم هذا النموذج نهجا مثاليا للسماح بالتصوير بعد الزرع ، مثل الفحص المجهري ثنائي الفوتون داخل الجسم أو التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (PET). تحقيقا لهذه الغاية ، أبلغ مختبرنا سابقا عن طرق لتصوير الأنسجة والأعضاء المتحركة في الفأر ، بما في ذلك ضربات قلوب الفئران وترقيع قوس الأبهر بعد زرع عنق الرحم غير المتجانس لتصور الاتجار بالكريات البيض أثناء إصابة نقص التروية وداخل لويحات تصلب الشرايين ، على التوالي13،14،15 . بالإضافة إلى ذلك ، نظرا لموقعه السطحي وسهولة التعرض ، فإن هذا النموذج مناسب لإعادة زرع القلب16.
يصف هذا التقرير تقنية تسمح بتدفق الدم الصفحي مع الوضع الخارجي للأصفاد الوعائية على الأوعية التي ينشأ منها تدفق الدم. هذا يسمح بالانتقال السلس لتدفق الدم من وعاء إلى آخر ، وتجنب تعرض حافة الوعاء البعيد في تجويف الأوعية الدموية. بالإضافة إلى ذلك ، تستخدم هذه التقنية صفعة أكبر 20 جراما ، بدلا من أصفاد 22 جراما المستخدمة سابقا ، للشريان الرئوي للمتبرع لضمان عودة تدفق الدم إلى المتلقي.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-0 braided silk ties</td>
			<td>Henry Schein Inc</td>
			<td>7718729</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.75% Providone iosine scrub</td>
			<td>Priority Care Inc</td>
			<td>NDC 57319-327-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 nylon suture</td>
			<td>Surgical Specialties Corporation</td>
			<td>AK-0106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>655-nm nontargeted Q-dots</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q21021MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Pharmco Products Inc</td>
			<td>111000140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 braided silk ties</td>
			<td>Henry Schein Inc</td>
			<td>1005597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson forceps</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>91127-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c and C57BL/6 mice (6-8 weeks)</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar coagulator</td>
			<td>Valleylab Inc</td>
			<td>SurgII-20, E6008/E6008B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen (Rimadyl) injection</td>
			<td>Transpharm</td>
			<td>35844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen (Rimadyl) oral chewable tablet</td>
			<td>Transpharm</td>
			<td>38995/37919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Custom-built 2P microscope running ImageWarp acquisition software</td>
			<td>A&#38;B Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont no. 5 forceps</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine vannas style spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 5.0</td>
			<td>Sun Microsystems Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey needle holder</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>91201-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-Mosquito clamp curved tip</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>91309-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harvard Apparatus mouse ventilator model 687</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>MA1 55-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin solution (100 U/mL)</td>
			<td>Abraxis Pharmaceutical Products</td>
			<td>504031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (50 mg/kg)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>206205-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope&#8212;Leica Wild M651 &#215; 6&#8211;40 magnification</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria extra fine spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>15396-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ohio isoflurane vaporizer</td>
			<td>Parkland Scientific</td>
			<td>V3000i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qdots</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>1604036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T SuperGrip Forceps angled tip</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>00649-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T SuperGrip Forceps straight tip</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>00632-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile normal saline (0.9% (wt/vol) sodium chloride</td>
			<td>Hospira Inc</td>
			<td>NDC 0409-4888-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Q-tips (tapered mini cotton tipped 3-inch applicators)</td>
			<td>Puritan Medical Company LLC</td>
			<td>823-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surflow 20 gauge 1/4-inch Teflon angiocatheter</td>
			<td>Terumo Medical Corporation</td>
			<td>SR-OX2032CA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surflow 24 gauge 3/4-inch Teflon angiocatheter</td>
			<td>Terumo Medical Corporation</td>
			<td>R-OX2419CA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoCare Small Animal ICU System (recovery settings 3 L/min O2, 80 &#176;C, 40% humidity)</td>
			<td>Thermocare Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VetBond</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology SC361931</td>
			<td>NC0846393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (10 mg/kg)</td>
			<td>Lloyd Laboratories</td>
			<td>139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse heterotopic cervical cardiac transplantation utilizing vascular cuffs

كثيرا ما تستخدم نماذج الفئران لزراعة القلب لدراسة إصابة نقص التروية ، والاستجابات المناعية الفطرية والتكيفية بعد الزرع ، وتأثير العلاجات المناعية على رفض الكسب غير المشروع. تم وصف زراعة قلب عنق الرحم غير المتجانس في الفئران لأول مرة في عام 1991 باستخدام مفاغرة مخيطة وتم تعديلها لاحقا لتشمل تقنيات الكفة. سمح هذا التعديل بتحسين معدلات النجاح ، ومنذ ذلك الحين ، كانت هناك تقارير متعددة اقترحت المزيد من التحسينات التقنية. ومع ذلك ، لا تزال الترجمة إلى استخدام أكثر انتشارا محدودة بسبب الصعوبة الفنية المرتبطة بمفاغرة الكسب غير المشروع ، والتي تتطلب الدقة لتحقيق الطول والعيار المناسبين للأصفاد لتجنب التواء مفاغرة الأوعية الدموية أو التوتر المفرط ، مما قد يؤدي إلى تلف الكسب غير المشروع. يصف البروتوكول الحالي تقنية معدلة لإجراء زرع قلب عنق الرحم غير المتجانس في الفئران والتي تنطوي على وضع الكفة على الشريان السباتي المشترك للمتلقي والشريان الرئوي للمتبرع بما يتماشى مع اتجاه تدفق الدم.

تم استخدام نموذج زراعة القلب غير المتجانس لعنق الرحم لإجراء أكثر من 1000 عملية زرع في مختبرنا ، بمعدل بقاء يبلغ حوالي 97٪. معدل النجاح أعلى قليلا من التقارير السابقة باستخدام تقنيات زرع القلب غير المتجانسة عنق الرحم الأخرى في الفئران 10،11،20. ...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs at JoVE.com

Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs

تمثل نماذج زراعة قلب الفئران أدوات بحثية قيمة لدراسة مناعة الزرع. يفصل البروتوكول الحالي زراعة قلب عنق الرحم غير المتجانسة للفأر والتي تتضمن وضع أصفاد على الشريان السباتي المشترك للمتلقي وجذع الشريان الرئوي للمتبرع للسماح بتدفق الدم الصفحي.

زرع قلب عنق الرحم غير المتجانس للفأر باستخدام الأصفاد الوعائية

Murine models of cardiac transplantation are frequently utilized to study ischemia-reperfusion injury, innate and adaptive immune responses after ...

يسمح وضع الكفة الوعائية لدينا بتدفق الدم الصفحي ونستخدم صفعة أكبر للشريان الرئوي للمتبرع لضمان عودة الدم بشكل وفير إلى المتلقين. تقلل هذه التعديلات المستخدمة في هذا البروتوكول من احتمالية تدفق الدم المضطرب وتكوين الجلطة وتؤدي إلى تحسين معدلات البقاء على قيد الحياة. توفر هذه الطريقة رؤية قيمة لدراسة الاستجابات المناعية بعد الزرع مثل إصابة نقص التروية ورفض الكسب غير المشروع.بالإضافة إلى ذلك ، تسمح تقنيتنا بمراقبة أسهل بعد الزرع أو إعادة الزرع. سيوضح هذا الإجراء الدكتور ون جون لي ، جراح مجهري خبير في مختبرنا طور هذه التقنية. تحضير المنطقة الجراحية عن طريق حلق الشعر من الصدر والبطن باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية.تطبيق 100 وحدة من الهيبارين عن طريق الوريد في الوريد القضيبي للذكور أو الوريد الوداجي الخارجي للذكور والإناث. ضع الفئران في وضع ضعيف مع الأطراف الأمامية فوقها. تأمين الأطراف الأمامية والخلفية بشريط جراحي وتطهير الجلد بنسبة 0.75٪ من اليود و 70٪ من الإيثانول.قم بإجراء شق لبضع البطن المتوسط من السرة إلى الزاوية القصية ، متبوعا ببضع الصدر الثنائي على طول كل هامش ضلعي. قم بطي جدار الصدر الأمامي فوق الرقبة للتعرض الكامل للمنصف. استئصال الغدة الصعترية وفضح الوريد الأجوف السفلي داخل الصدر.للتروية المرتجعة ، قم بحقن 1.5 ملليلتر من محلول ملحي بأربع درجات مئوية في الوريد الأجوف السفلي داخل الصدر مع توجيه الإبرة بشكل متفوق نحو الكسب غير المشروع. ربط الوريد الأجوف العلوي باستخدام 8-0 خياطة الحرير وتقسيمها بعيدا. كرر التروية الرجعية عن طريق حقن 1.5 ملليلتر أخرى من المحلول الملحي بأربع درجات مئوية عبر الوريد الأجوف السفلي.ربط الوريد الأجوف السفلي باستخدام 8-0 خياطة الحرير وتقسيمها بعيدا. تشريح قوس الأبهر وجذع الشريان الرئوي لحصاد الكسب غير المشروع وعرضهما بعيدا. ربط الأوردة الرئوية على السطح الخلفي للقلب باستخدام خياطة الحرير 6-0 وتقسيمها بعيدا.قم بإعداد الكسب غير المشروع عن طريق إزالة قلب المتبرع من تجويف الصدر. ضع القلب المستأصل في وعاء بلاستيكي مملوء بأربع درجات مئوية من محلول ملحي هيبارين لمدة دقيقة إلى دقيقتين. انقل الكسب غير المشروع إلى قارورة بلاستيكية معقمة مملوءة بالثلج لوضع الكفة.ضع صفعة قسطرة بطول ملليمتر واحد قياس 20 على الشريان الرئوي لسوار المتبرع. باستخدام ملقط ناعم ، قم بطي حواف الشريان برفق فوق الكفة. قم بتأمين الوعاء المطوي في الكفة باستخدام ربطة عنق من النايلون 10-0.قم بتخزين قلب المتبرع في محلول ملحي هيبارين أو محلول حفظ آخر عند أربع درجات مئوية. تحضير المنطقة الجراحية عن طريق حلق الشعر من منطقة عنق الرحم باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية. ضع مرهم عيون معقم غير طبي على العينين لمنع جفاف القرنية.ضع الحيوان في وضع ضعيف مع الأطراف الأمامية المجاورة للجسم وتحول الرأس قليلا إلى اليسار. تأمين الأطراف الأمامية والخلفية بشريط جراحي. تطهير الجلد مع 0.75 ٪ من اليود و 70 ٪ من الإيثانول.بعد إجراء شق عنق الرحم في خط الوسط من الفك السفلي إلى القص ، قم بنقل العضلة القصية الترقوية الخشائية اليمنى. استئصال الفص الأيمن من الغدة تحت الفك السفلي لخلق مساحة لزرع الكسب غير المشروع. اربط عقدة منزلقة فوق الوريد الوداجي الخارجي القريب باستخدام خياطة حريرية 6-0.ربط الوريد الوداجي الخارجي البعيد والفروع المجاورة باستخدام 8-0 خياطة الحرير. خياطة تحت الوريد وتغطي مع الشاش. قم بعمل شق عرضي عبر الجدار الأمامي للوريد الوداجي الخارجي.ضع خياطة نايلون 10-0 عبر حافة الوريد الوداجي الخارجي القريب والأنسجة الكامنة لتأمين الوريد أثناء إدخال الكفة. ربط الشريان السباتي المشترك الأيمن البعيد باستخدام 8-0 خياطة الحرير فقط أدنى من تشعب السباتي. اربط عقدة منزلقة فوق الشريان السباتي المشترك القريب باستخدام خياطة حريرية 6-0.اقطع الشريان بعيدا بين الغرز. ثم ضع كفة قسطرة بطول 24 ملليلتر على الشريان السباتي المشترك الأيمن للمتلقي. باستخدام ملقط ناعم ، قم بطي حواف الشريان برفق فوق الكفة.قم بتأمين الوعاء المطوي في الكفة باستخدام ربطة عنق من النايلون 10-0. ضع قلب المتبرع أعلى من منطقة عنق الرحم اليمنى. قم بتقطير محلول ملحي بارد على طعم القلب كل بضع دقائق أثناء الزرع.ضع خياطة نايلون 10-0 عبر حافة الشريان الأورطي للمتبرع ومن خلال لدغة سطحية من الأنسجة الكامنة لتثبيت الطعم في مكانه. اغسل الشريان الأورطي المتبرع ب 0.5 ملليلتر من محلول ملحي بالهيبارين بنسبة 0.9٪. أدخل صفعة الشريان السباتي المشتركة للمتلقي في الشريان الأورطي للمتبرع.تأمين مفاغرة مع 8-0 ربطة عنق من الحرير. قم بإزالة خياطة مرساة الأبهر. قم بإزالة الهواء من الوريد الوداجي الخارجي عن طريق شطف الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي ب 0.5 ملليلتر من محلول ملحي بنسبة 0.9٪ هيبارين.إجراء مفاغرة الشريان الرئوي عن طريق إدخال صفعة الشريان الرئوي للمتبرع في الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي وتأمينها ب 8-0 ربطة عنق من الحرير. قم بإزالة خياطة مرساة الوريد الوداجي الخارجي وعبر الجدار الخلفي المتبقي من الوريد الوداجي الخارجي لتحرير الكسب غير المشروع من الأنسجة الكامنة. تأكد من توجيه الكسب غير المشروع بشكل صحيح دون التواء أو التواء مفاغرة.حرر العقد المنزلقة على الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي ، متبوعا بالشريان السباتي المشترك لبدء إعادة تروية الكسب غير المشروع للقلب. أظهرت التقنية الموضحة في هذا البروتوكول معدل بقاء يبلغ حوالي 97٪ ويمكن أن يعزى ذلك إلى الكفة الأكبر 20 التي تم وضعها على الشريان الرئوي للمتبرع لضمان عودة تدفق الدم إلى المتلقي. بالإضافة إلى ذلك ، فإن محاذاة تدفق الدم مع وضع الكفة في التقنية الحالية تقلل من خطر تجلط الدم والاضطراب المفاغرة.كان متوسط وقت عملية المتلقي حوالي 37 دقيقة بمتوسط وقت نقص تروية بارد يبلغ 20 دقيقة. بالنسبة لدراسات البقاء على قيد الحياة ، تم تقييم الطعوم القلبية يوميا عن طريق التصور المباشر والجس الرقمي لنبضات القلب. تم إجراء التصوير ثنائي الفوتون داخل الجسم في وقت مبكر بعد الزرع لتقييم الاتجار بالكريات البيض.من المهم التحقق من وضع الكسب غير المشروع وتوجيهه بشكل صحيح قبل إغلاق الجلد لمنع الالتواء. يمكن استخدام هذه الطريقة في نماذج إعادة الزرع لتحديد الخلايا المناعية المقيمة في الطعوم المزروعة التي تتوسط في الاستجابات المناعية الخيفية.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

مثلي هند زرع الأطراف الاصطناعية في الفئران

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel ...

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

عزل خلايا المناعة وظيفية القلب

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

الفئران كامل سماكة الجلد زراعة

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

في المختبر و في فيفو التقييم تي وب وخلايا النقوي النشاط القمعية واستجابات خلطيه من المتلقين زرع

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

تقييم للسآمة للخلايا وإيمونومودولاتوري آثار المواد في شرائح البشرية دقة قطع الرئة

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

نموذج مناعي لزرع خلايا القلب الهيترولوجي وخلايا عضلة القلب في الفئران

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

تحسين تقنية الكفة لزراعة القلب مورين

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

تصور سارس-CoV-2 باستخدام الحمض النووي الريبي المناعي-فلورسينس في التهجين في الموقع

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Purification and Expansion of Mouse Invariant Natural Killer T Cells for in vitro and in vivo Studies

تنقية وتوسيع الخلايا T القاتل الطبيعي الثابت الماوس في المختبر وفي دراسات في الجسم الحي

Invariant Natural Killer T (iNKT) cells are innate-like T Lymphocytes expressing a conserved semi-invariant T cell receptor (TCR) specific for self or ...

Partial Heterotopic Hindlimb Transplantation Model in Rats

نموذج زرع الخلايا الهنترونظيرية الجزئية في الفئران

Vascularized composite allotransplantations (VCA) represent the most advanced reconstruction option for patients without autologous surgical possibilities ...