Name: mouse heterotopic cervical cardiac transplantation utilizing vascular cuffs
Uploaded: 2022-06-23T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs at JoVE.com

DK поддерживается грантами Национальных институтов здравоохранения 1P01AI116501, R01HL094601, R01HL151078, грантом Veterans Administration Merit Review 1I01BX002730 и Фондом для Barnes-Jewish Hospital.

Все процедуры обращения с животными были проведены в соответствии с руководящими принципами NIH по уходу и использованию лабораторных животных и одобрены Комитетом по изучению животных в Медицинской школе Вашингтонского университета. Сердца мышей C57BL/6 (B6) и BALB/c (весом 20-25 г) пересаживал?...

<ol>
	<li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> The Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 733-735 (1973).</li><li>Heron, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+accessory+cervical+heart+transplantation+in+rabbits+and+rats.">A technique for accessory cervical heart transplantation in rabbits and rats.</a> Acta Pathologica Microbiologica Scandinavica Section A Pathology. 79 (4), 366-372 (1971).</li><li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+of+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).</li><li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).</li><li>Yu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cuff+anastomosis+of+both+renal+artery+and+vein+to+minimize+thrombosis:+a+novel+method+of+kidney+transplantation+in+mice.">Cuff anastomosis of both renal artery and vein to minimize thrombosis: a novel method of kidney transplantation in mice.</a> Journal of Investigative Surgery. 35 (1), 56-60 (2022).</li><li>Tomita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heterotopic+cervical+heart+transplantation+in+mice.">Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 64 (11), 1598-1601 (1997).</li><li>Wang, Q., Liu, Y., Li, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+technique+for+heterotopic+vascularized+cervical+heart+transplantation+in+mice.">Simplified technique for heterotopic vascularized cervical heart transplantation in mice.</a> Microsurgery. 25 (1), 76-79 (2005).</li><li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique.">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).</li><li>Ratschiller, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+cervical+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic cervical heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52907 (2015).</li><li>Mao, X., Xian, P., You, H., Huang, G., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+cuff+technique+for+mouse+cervical+heterotopic+heart+transplantation+model.">A modified cuff technique for mouse cervical heterotopic heart transplantation model.</a> Journal of Visualized Experiments. (180), e63504 (2022).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+2-photon+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+beating+heart.">Intravital 2-photon imaging of leukocyte trafficking in beating heart.</a> Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2499-2508 (2012).</li><li>Kreisel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+two-photon+imaging+reveals+monocyte-dependent+neutrophil+extravasation+during+pulmonary+inflammation.">In vivo two-photon imaging reveals monocyte-dependent neutrophil extravasation during pulmonary inflammation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (42), 18073-18078 (2010).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+monocytic+cells+in+regressing+atherosclerotic+plaques+by+intravital+2-photon+and+positron+emission+tomography-based+imaging-brief+report.">Visualization of monocytic cells in regressing atherosclerotic plaques by intravital 2-photon and positron emission tomography-based imaging-brief report.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 38 (5), 1030-1036 (2018).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+transplant+acceptance+is+facilitated+by+early+events+in+the+graft+and+is+associated+with+lymphoid+neogenesis.">Lung transplant acceptance is facilitated by early events in the graft and is associated with lymphoid neogenesis.</a> Mucosal Immunology. 5 (5), 544-554 (2012).</li><li>Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insertion+of+enhanced+green+fluorescent+protein+into+the+lysozyme+gene+creates+mice+with+green+fluorescent+granulocytes+and+macrophages.">Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages.</a> Blood. 96 (2), 719-726 (2000).</li><li>Krupnick, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+mouse+lung+transplantation+as+experimental+methodology+to+study+transplant+and+tumor+biology.">Orthotopic mouse lung transplantation as experimental methodology to study transplant and tumor biology.</a> Nature Protocols. 4 (1), 86-93 (2009).</li><li>Westhofen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heterotopic+heart+transplantation+in+mice+as+a+small+animal+model+to+study+mechanical+unloading+-+Establishment+of+the+procedure,+perioperative+management+and+postoperative+scoring.">The heterotopic heart transplantation in mice as a small animal model to study mechanical unloading - Establishment of the procedure, perioperative management and postoperative scoring.</a> PLoS One. 14 (4), 0214513 (2019).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+cuff+technique+for+murine+heart+transplantation.">Optimization of the cuff technique for murine heart transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (160), e61103 (2020).</li><li>Latchana, N., Peck, J. R., Whitson, B., Black, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+solutions+for+cardiac+and+pulmonary+donor+grafts:+a+review+of+the+current+literature.">Preservation solutions for cardiac and pulmonary donor grafts: a review of the current literature.</a> Journal of Thoracic Disease. 6 (8), 1143-1149 (2014).</li><li>Hartley, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doppler+velocity+measurements+from+large+and+small+arteries+of+mice.">Doppler velocity measurements from large and small arteries of mice.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), 269-278 (2011).</li><li>Bovenkamp, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Velocity+mapping+of+the+aortic+flow+at+9.4+T+in+healthy+mice+and+mice+with+induced+heart+failure+using+time-resolved+three-dimensional+phase-contrast+MRI+(4D+PC+MRI).">Velocity mapping of the aortic flow at 9.4 T in healthy mice and mice with induced heart failure using time-resolved three-dimensional phase-contrast MRI (4D PC MRI).</a> MAGMA. 28 (4), 315-327 (2015).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+models+of+xenotransplantation.">Small animal models of xenotransplantation.</a> Methods in Molecular Biology. 885, 125-153 (2012).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+graft+function+in+rodent+models+of+heart+transplantation.">Assessment of graft function in rodent models of heart transplantation.</a> Microsurgery. 28 (7), 565-570 (2008).</li></ol>

Используя эту технику, гетеротопическая трансплантация шейного отдела сердца мыши может быть выполнена менее чем за 40 минут опытным микрохирургом и примерно за 60 минут микрохирургом начального уровня. В то время как трансплантация шейного сердца была изучена на многочисленных животн...

Abbott et al. опубликовали1 первое описание гетеротопной трансплантации брюшного сердца у крыс в 1964 году. Эти хирургические методы были усовершенствованы и упрощены Оно и др. в 1969 году2. Corry et al. впервые описали метод гетеротопной абдоминальной трансплантации сердца у мышей в 1973 году; подобно ранее сообщенным моделям крыс, это включало приживление в брюшную полость хозяина с реваскуляризацией путем сквозных анастомозов легочной артерии донора и восходящей аорты к нижней полой вене реципиента и брюшной аорте, соответственно3. Гетеротопическая трансплантация шейного сердца у крыс была описана Хероном в 1971 году с использованием тефлоновых манжет, изготовленных из 16 г (наружный диаметр 1,6 мм) внутривенных катетеров4. Chen5 и Matsuura et al.6 позже сообщили о гетеротопической трансплантации шейного сердца у мышей в 1991 году, чьи методы отличались главным образом методом повторного анастомоза. Подход Чэня включал ушённые анастомозы восходящей аорты донора к сонной артерии реципиента и легочной артерии донора к наружной яремной вене реципиента5. Благодаря передовым техническим навыкам, необходимым для этих микрохирургических ушибленных анастомозов, для достижения высокого уровня успеха потребовалось значительное количество времени и опыта. Matsuura et al. описали метод, использующий технику без шовной манжеты, аналогичную той, которая использовалась Heron, которая включала сквозные анастомозы с использованием внесветного размещения манжет. Он изготовил тефлоновые манжеты из 22 G (наружный диаметр 0,8 мм) и 24 G (наружный диаметр 0,67 мм) внутривенных катетеров и поместил их над наружной яремной веной реципиента и общей сонной артерией, соответственно6. Затем эти манжеты были помещены внутрь легочной артерии и аорты донора и закреплены путем связывания шовной лигатуры вокруг соединения. Такой подход привел к повышению показателей успеха. Самое главное, это привело к сокращению времени, необходимого для завершения обоих шейных анастомозов, тем самым сократив теплое ишемическое время трансплантата до менее чем одной трети от того, что используется метод брюшного шва. Кроме того, поскольку манжеты размещены вокруг наружной поверхности сосуда, нет инородного тела, подвергающегося воздействию просвета сосуда, что в значительной степени снижает возможность тромбоза после операции7. Между тем, использование манжеты обеспечивает поддержку вокруг сосудов в месте анастомоза, не требуя каких-либо швов, что снижает риск кровотечения после реваскуляризации6.
Были предложены многочисленные пересмотры этого метода. Чтобы приспособиться к короткой длине общей сонной артерии мыши (приблизительно 5 мм), Tomita et al.8 разработали модификацию этой техники с меньшей артериальной манжетой (наружный диаметр 0,6 мм), при этом не удерживая швы и протягивая артерию непосредственно через манжету тонкими щипцами. Wang et al. еще больше упростили этот подход, поместив манжеты 22 G и 24 G на правую легочную артерию донора и правую общую сонную артерию реципиента, соответственно9. В различных докладах описываются модификации этих подходов, включая использование специализированных манжет, микрохирургических зажимов, расширителей сосудов и кардиоплегии 10,11,12. Примечательно, что все эти методы включают ретроградную циркуляцию крови через сердце, при этом кровь течет от общей сонной артерии реципиента к донорской аорте, коронарным артериям, коронарной пазухе, затем опорожняется в правое предсердие и выходит из легочной артерии в наружную яремную вену реципиента.
По сравнению с приживлением в брюшной полости, трансплантация шейного сердца предлагает множество преимуществ. Как упоминалось ранее, цервикальное воздействие позволяет быстрее реваскуляризации и сократить теплые ишемические времена6. Шейный метод также менее инвазивный и связан с более коротким послеоперационным временем восстановления, поскольку он позволяет избежать лапаротомии6. Важно отметить, что сквозные анастомозы с манжетами могут быть выполнены вместо сквозных анастомозов, что снижает риск осложнений, таких как анастомотическое кровотечение. Абдоминальный подход также представляет повышенный риск развития тромботических осложнений в брюшной аорте или нижней полой вене, что приводит к ишемии спинного мозга и параличу задних конечностей. Поверхностное расположение цервикального отдела трансплантата обеспечивает легкий доступ к оценке жизнеспособности трансплантата с помощью пальпации, электрокардиографии и инвазивной или неинвазивной визуализации. Хотя шейные трансплантаты возобновляют спонтанную сердечную деятельность после реперфузии, они существенно не влияют на систолические и диастолические параметры реципиента. Эта модель дает ценную информацию для изучения клеточных реакций после трансплантации, таких как ишемия-реперфузионное повреждение и отторжение трансплантата. Кроме того, эта модель предлагает идеальный подход, позволяющий проводить посттрансплантационную визуализацию, такую как прижизненная двухфотонная микроскопия или позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ). С этой целью наша лаборатория ранее сообщала о методах визуализации движущихся тканей и органов у мышей, включая бьющиеся мышиные сердца и трансплантаты дуги аорты после гетеротопической трансплантации шейки матки для визуализации трафика лейкоцитов во время ишемическо-реперфузионного повреждения и в атеросклеротических бляшках, соответственно 13,14,15 . Кроме того, благодаря своему поверхностному расположению и простоте воздействия, эта модель подходит для повторной трансплантации сердца16.
В этом отчете описывается методика, позволяющая осуществлять ламинарный кровоток с наружным размещением сосудистых манжет на сосудах, из которых происходит кровоток. Это позволяет плавно переходить кровотока из одного сосуда в другой, избегая воздействия края дистального сосуда на сосудистый просвет. Кроме того, метод использует большую манжету 20 Г вместо ранее использовавшихся манжет 22 Г для легочной артерии донора, чтобы обеспечить достаточный возврат кровотока к реципиенту.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-0 braided silk ties</td>
			<td>Henry Schein Inc</td>
			<td>7718729</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.75% Providone iosine scrub</td>
			<td>Priority Care Inc</td>
			<td>NDC 57319-327-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 nylon suture</td>
			<td>Surgical Specialties Corporation</td>
			<td>AK-0106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>655-nm nontargeted Q-dots</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q21021MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Pharmco Products Inc</td>
			<td>111000140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 braided silk ties</td>
			<td>Henry Schein Inc</td>
			<td>1005597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson forceps</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>91127-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c and C57BL/6 mice (6-8 weeks)</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar coagulator</td>
			<td>Valleylab Inc</td>
			<td>SurgII-20, E6008/E6008B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen (Rimadyl) injection</td>
			<td>Transpharm</td>
			<td>35844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen (Rimadyl) oral chewable tablet</td>
			<td>Transpharm</td>
			<td>38995/37919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Custom-built 2P microscope running ImageWarp acquisition software</td>
			<td>A&#38;B Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont no. 5 forceps</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine vannas style spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 5.0</td>
			<td>Sun Microsystems Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey needle holder</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>91201-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-Mosquito clamp curved tip</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>91309-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harvard Apparatus mouse ventilator model 687</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>MA1 55-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin solution (100 U/mL)</td>
			<td>Abraxis Pharmaceutical Products</td>
			<td>504031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (50 mg/kg)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>206205-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope&#8212;Leica Wild M651 &#215; 6&#8211;40 magnification</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria extra fine spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>15396-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ohio isoflurane vaporizer</td>
			<td>Parkland Scientific</td>
			<td>V3000i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qdots</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>1604036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T SuperGrip Forceps angled tip</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>00649-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T SuperGrip Forceps straight tip</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>00632-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile normal saline (0.9% (wt/vol) sodium chloride</td>
			<td>Hospira Inc</td>
			<td>NDC 0409-4888-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Q-tips (tapered mini cotton tipped 3-inch applicators)</td>
			<td>Puritan Medical Company LLC</td>
			<td>823-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surflow 20 gauge 1/4-inch Teflon angiocatheter</td>
			<td>Terumo Medical Corporation</td>
			<td>SR-OX2032CA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surflow 24 gauge 3/4-inch Teflon angiocatheter</td>
			<td>Terumo Medical Corporation</td>
			<td>R-OX2419CA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoCare Small Animal ICU System (recovery settings 3 L/min O2, 80 &#176;C, 40% humidity)</td>
			<td>Thermocare Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VetBond</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology SC361931</td>
			<td>NC0846393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (10 mg/kg)</td>
			<td>Lloyd Laboratories</td>
			<td>139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse heterotopic cervical cardiac transplantation utilizing vascular cuffs

Мышиные модели трансплантации сердца часто используются для изучения травмы ишемии-реперфузии, врожденных и адаптивных иммунных реакций после трансплантации и влияния иммуномодулирующей терапии на отторжение трансплантата. Гетеротопическая трансплантация шейного сердца у мышей была впервые описана в 1991 году с использованием ушных анастомозов и впоследствии модифицирована, чтобы включить методы манжеты. Это изменение позволило улучшить показатели успеха, и с тех пор было опубликовано несколько докладов, в которых предлагалось дальнейшее техническое усовершенствование. Тем не менее, перевод в более широкое использование остается ограниченным из-за технических трудностей, связанных с анастомозами трансплантата, которые требуют точности для достижения адекватной длины и калибра манжет, чтобы избежать сосудистого анастомотического скручивания или чрезмерного напряжения, что может привести к повреждению трансплантата. Настоящий протокол описывает модифицированный метод выполнения гетеротопной трансплантации шейного сердца у мышей, который включает размещение манжеты на общей сонной артерии реципиента и легочной артерии донора в соответствии с направлением кровотока.

Эта модель гетеротопной трансплантации шейки матки мыши была использована для выполнения более 1000 трансплантаций в нашей лаборатории с выживаемостью около 97%. Показатель успеха немного выше, чем в предыдущих отчетах с использованием других методов трансплантации сердца шейки матки у...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs at JoVE.com

Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs

Мышиные модели трансплантации сердца представляют собой ценные исследовательские инструменты для изучения трансплантационной иммунологии. Настоящий протокол детализирует гетеротопную трансплантацию шейного отдела сердца мыши, которая включает в себя размещение манжет на общей сонной артерии реципиента и стволе легочной артерии донора, чтобы обеспечить ламинарный кровоток.

Мышиная гетеротопическая трансплантация шейки матки с использованием сосудистых манжет

Murine models of cardiac transplantation are frequently utilized to study ischemia-reperfusion injury, innate and adaptive immune responses after ...

Наша установка сосудистой манжеты обеспечивает ламинарный кровоток, и мы используем большую манжету для легочной артерии донора, чтобы обеспечить достаточный возврат крови к реципиентам. Эти модификации, используемые в этом протоколе, уменьшают вероятность турбулентного кровотока и образования тромбов и приводят к улучшению показателей выживаемости. Этот метод дает ценную информацию для изучения иммунных реакций после трансплантации, таких как реперфузионное повреждение ишемии и отторжение трансплантата.Кроме того, наша методика позволяет упростить посттрансплантатный мониторинг или повторную трансплантацию. Продемонстрировать эту процедуру будет доктор Вэнь Цзюнь Ли, эксперт-микрохирург в нашей лаборатории, который разработал эту технику. Подготовьте хирургическую область, сбрив волосы с груди и живота с помощью электрической бритвы.Введите 100 единиц гепарина внутривенно в вену полового члена для мужчин или наружную яремную вену для мужчин и женщин. Поместите мышей в лежачее положение с передними конечностями над головой. Закрепите передние и задние конечности хирургическим скотчем и продезинфицируйте кожу 0,75% йода и 70% этанола.Выполняют разрез для срединной лапаростернотомии от пупка до грудинного угла с последующим двусторонней торакотомией вдоль каждого реберного края. Сложите переднюю грудную стенку над шеей для полного обнажения средостения. Иссечение тимуса и обнажение внутригрудной нижней полой вены.Для ретроградной перфузии вводят 1,5 миллилитра четырех градусов Цельсия в внутригрудную нижнюю полую вену с иглой, ориентированной преимущественно на трансплантат. Лигайте верхнюю полую вену со счетом 8-0 шелк накладывают шов и делят дистально. Повторите ретроградную перфузию, введя еще 1,5 миллилитра четырех градусов Цельсия через нижнюю полую вену.Лигат нижней полой вены с помощью 8-0 шелк накладывают шов и делят дистально. Рассекать дугу аорты и ствол легочной артерии для сбора трансплантата и транссектировать обе дистально. Разложите легочные вены на задней поверхности сердца с помощью шелкового шва 6-0 и разделите дистально.Выполните подготовку трансплантата, удалив донорское сердце из грудной полости. Поместите иссеченное сердце в пластиковый контейнер, наполненный гепаринизированным физиологическим раствором с четырьмя градусами Цельсия, на одну-две минуты. Переложите трансплантат на стерильную пластиковую колбу, наполненную льдом, для размещения манжеты.Поместите манжету ангиокатетера длиной один миллиметр 20 калибра над легочной артерией для манжеты донора. Используя тонкие щипцы, аккуратно сложите края артерии обратно над манжетой. Закрепите сложенный сосуд на манжете с помощью нейлоновой завязки 10-0.Храните донорское сердце в гепаринизированном физиологическом растворе или другом консервационном растворе при четырех градусах Цельсия. Подготовьте хирургическую область, сбрив волосы из шейной области с помощью электрической бритвы. Наносите стерильную немедикаментозную офтальмологическую мазь на глаза для предотвращения высыхания роговицы.Поместите животное в лежачее положение с передними конечностями, прилегающими к телу, и головой, слегка повернутой влево. Закрепите передние и задние конечности хирургическим скотчем. Дезинфицируйте кожу 0,75% йода и 70% этанола.Сделав узи средней линии шейки матки от нижней нижней челюсти к грудине, переремонтируйте правую грудино-ключично-сосцевидную мышцу. Иссечь правую долю подчелюстной железы, чтобы создать пространство для имплантации трансплантата. Завяжите скользящий узел над проксимальной наружной яремной веной с помощью шелкового шва 6-0.Лигировать дистальную наружную яремную вену и прилегающие ветви с помощью 8-0 шелковый шов. Зашить под вену и накрыть марлей. Сделайте поперечный разрез через переднюю стенку наружной яремной вены.Поместите нейлоновый шов 10-0 через край проксимальной наружной яремной вены и подлежащую ткань, чтобы закрепить вену во время введения манжеты. Лигат дистальной правой общей сонной артерии с помощью 8-0 шелковый шов просто уступает каротидному бифуркации. Завяжите скользящий узел над проксимальной общей сонной артерией с помощью шелкового шва 6-0.Трансекция артерии дистально между швами. Затем поместите манжету ангиокатетера длиной 0,6 миллилитра 24 калибра над правой общей сонной артерией реципиента. Используя тонкие щипцы, аккуратно сложите края артерии обратно над манжетой.Закрепите сложенный сосуд на манжете с помощью нейлоновой завязки 10-0. Поместите донорское сердце выше правой шейной области. Капайте холодный физиологический раствор на сердечный трансплантат каждые несколько минут во время имплантации.Поместите нейлоновый шов 10-0 через край донорской аорты и через поверхностный прикус подлежащей ткани, чтобы закрепить трансплантат на месте. Промыть донорскую аорту 0,5 миллилитрами 0,9% гепаринизированного физиологического раствора. Вставьте общую манжету сонной артерии реципиента в донорскую аорту.Обезопасьте анастомоз со счетом 8-0 шелковый галстук. Снимите анкерный шов аорты. Обезвреживание наружной яремной вены путем промывки наружной яремной вены реципиента 0,5 миллилитрами 0,9% гепаринизированного физиологического раствора.Выполните анастомоз легочной артерии, вставив манжету легочной артерии донора в наружную яремную вену реципиента и закрепив 8-0 шелковый галстук. Снимите шов якоря наружной яремной вены и перерезайте оставшуюся заднюю стенку наружной яремной вены, чтобы освободить трансплантат от подлежащей ткани. Убедитесь, что трансплантат правильно ориентирован без изгиба или скручивания анастомоза.Отпустите скользящие узелки на внешней яремной вене реципиента, а затем на общей сонной артерии, чтобы инициировать реперфузию сердечного трансплантата. Метод, продемонстрированный в этом протоколе, показал выживаемость примерно 97% Это потенциально может быть связано с более крупной манжетой 20 калибра, размещенной на легочной артерии донора, чтобы обеспечить достаточный возврат кровотока к реципиенту. Кроме того, выравнивание кровотока с размещением манжет в настоящей технике сводит к минимуму риск тромбоза и анастомотической турбулентности.Среднее время работы реципиента составило примерно 37 минут при среднем времени холодовой ишемии 20 минут. Для исследований выживаемости сердечные трансплантаты оценивались ежедневно путем прямой визуализации и цифровой пальпации сердцебиения. Прижизненная двухфотонная визуализация была выполнена на ранней стадии после трансплантации для оценки трафика лейкоцитов.Важно проверить, что трансплантат правильно расположен и ориентирован перед закрытием кожи, чтобы предотвратить скручивание. Этот метод может быть использован в моделях повторной трансплантации для идентификации резидентных иммунных клеток в трансплантатированных трансплантатах, которые опосредуют аллоиммунные реакции.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Ортотопическая задних конечностей трансплантации у крыс

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel ...

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

Выделение функциональных сердечно иммунных клеток

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Мышиные Полная толщина кожи Трансплантация

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro и In Vivo Оценка T, B и миелоидных клеток подавляющих активность и гуморальные ответы от пересадки получателей

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Оценка цитотоксических и иммуномодулирующих эффектов веществ в легкое человека точности cut ломтики

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

Иммунологическая модель для гетеротопической трансплантации сердца и сердечной мышечной клетки у крыс

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Оптимизация техники манжет для трансплантации сердца Мурина

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

Визуализация ТОРС-КоВ-2 с использованием иммуноРНК-флуоресценции в гибридизации Ситус

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Purification and Expansion of Mouse Invariant Natural Killer T Cells for in vitro and in vivo Studies

Очистка и расширение мышечных инвариантных естественных Т-киллеров для исследований in vitro и in vivo

Invariant Natural Killer T (iNKT) cells are innate-like T Lymphocytes expressing a conserved semi-invariant T cell receptor (TCR) specific for self or ...

Partial Heterotopic Hindlimb Transplantation Model in Rats

Модель частичной гетеротопной трансплантации задних налимов у крыс

Vascularized composite allotransplantations (VCA) represent the most advanced reconstruction option for patients without autologous surgical possibilities ...