Name: mouse heterotopic cervical cardiac transplantation utilizing vascular cuffs
Uploaded: 2022-06-23T14:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs at JoVE.com

DK, Ulusal Sağlık Enstitüleri hibeleri 1P01AI116501, R01HL094601, R01HL151078, Gaziler İdaresi Liyakat İncelemesi hibesi 1I01BX002730 ve Barnes-Yahudi Hastanesi Vakfı tarafından desteklenmektedir.

Tüm hayvan taşıma prosedürleri, NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı kılavuzlarına uygun olarak yürütülmüş ve Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvan Çalışmaları Komitesi tarafından onaylanmıştır. C57BL / 6 (B6) ve BALB / c farelerinden (20-25 g ağırlığında) gelen kalpler, cinsiyete uygun B6 alıcılarına (6-8 haftalık) nakledildi. Fareler ticari kaynaklardan elde edilmiştir (bakınız Malzeme Tablosu). İskemi-reperfüzyon hasarına bağlı hücresel...

<ol>
	<li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> The Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 733-735 (1973).</li><li>Heron, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+accessory+cervical+heart+transplantation+in+rabbits+and+rats.">A technique for accessory cervical heart transplantation in rabbits and rats.</a> Acta Pathologica Microbiologica Scandinavica Section A Pathology. 79 (4), 366-372 (1971).</li><li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+of+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).</li><li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).</li><li>Yu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cuff+anastomosis+of+both+renal+artery+and+vein+to+minimize+thrombosis:+a+novel+method+of+kidney+transplantation+in+mice.">Cuff anastomosis of both renal artery and vein to minimize thrombosis: a novel method of kidney transplantation in mice.</a> Journal of Investigative Surgery. 35 (1), 56-60 (2022).</li><li>Tomita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heterotopic+cervical+heart+transplantation+in+mice.">Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 64 (11), 1598-1601 (1997).</li><li>Wang, Q., Liu, Y., Li, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+technique+for+heterotopic+vascularized+cervical+heart+transplantation+in+mice.">Simplified technique for heterotopic vascularized cervical heart transplantation in mice.</a> Microsurgery. 25 (1), 76-79 (2005).</li><li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique.">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).</li><li>Ratschiller, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+cervical+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic cervical heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52907 (2015).</li><li>Mao, X., Xian, P., You, H., Huang, G., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+cuff+technique+for+mouse+cervical+heterotopic+heart+transplantation+model.">A modified cuff technique for mouse cervical heterotopic heart transplantation model.</a> Journal of Visualized Experiments. (180), e63504 (2022).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+2-photon+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+beating+heart.">Intravital 2-photon imaging of leukocyte trafficking in beating heart.</a> Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2499-2508 (2012).</li><li>Kreisel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+two-photon+imaging+reveals+monocyte-dependent+neutrophil+extravasation+during+pulmonary+inflammation.">In vivo two-photon imaging reveals monocyte-dependent neutrophil extravasation during pulmonary inflammation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (42), 18073-18078 (2010).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+monocytic+cells+in+regressing+atherosclerotic+plaques+by+intravital+2-photon+and+positron+emission+tomography-based+imaging-brief+report.">Visualization of monocytic cells in regressing atherosclerotic plaques by intravital 2-photon and positron emission tomography-based imaging-brief report.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 38 (5), 1030-1036 (2018).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+transplant+acceptance+is+facilitated+by+early+events+in+the+graft+and+is+associated+with+lymphoid+neogenesis.">Lung transplant acceptance is facilitated by early events in the graft and is associated with lymphoid neogenesis.</a> Mucosal Immunology. 5 (5), 544-554 (2012).</li><li>Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insertion+of+enhanced+green+fluorescent+protein+into+the+lysozyme+gene+creates+mice+with+green+fluorescent+granulocytes+and+macrophages.">Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages.</a> Blood. 96 (2), 719-726 (2000).</li><li>Krupnick, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+mouse+lung+transplantation+as+experimental+methodology+to+study+transplant+and+tumor+biology.">Orthotopic mouse lung transplantation as experimental methodology to study transplant and tumor biology.</a> Nature Protocols. 4 (1), 86-93 (2009).</li><li>Westhofen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heterotopic+heart+transplantation+in+mice+as+a+small+animal+model+to+study+mechanical+unloading+-+Establishment+of+the+procedure,+perioperative+management+and+postoperative+scoring.">The heterotopic heart transplantation in mice as a small animal model to study mechanical unloading - Establishment of the procedure, perioperative management and postoperative scoring.</a> PLoS One. 14 (4), 0214513 (2019).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+cuff+technique+for+murine+heart+transplantation.">Optimization of the cuff technique for murine heart transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (160), e61103 (2020).</li><li>Latchana, N., Peck, J. R., Whitson, B., Black, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+solutions+for+cardiac+and+pulmonary+donor+grafts:+a+review+of+the+current+literature.">Preservation solutions for cardiac and pulmonary donor grafts: a review of the current literature.</a> Journal of Thoracic Disease. 6 (8), 1143-1149 (2014).</li><li>Hartley, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doppler+velocity+measurements+from+large+and+small+arteries+of+mice.">Doppler velocity measurements from large and small arteries of mice.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), 269-278 (2011).</li><li>Bovenkamp, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Velocity+mapping+of+the+aortic+flow+at+9.4+T+in+healthy+mice+and+mice+with+induced+heart+failure+using+time-resolved+three-dimensional+phase-contrast+MRI+(4D+PC+MRI).">Velocity mapping of the aortic flow at 9.4 T in healthy mice and mice with induced heart failure using time-resolved three-dimensional phase-contrast MRI (4D PC MRI).</a> MAGMA. 28 (4), 315-327 (2015).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+models+of+xenotransplantation.">Small animal models of xenotransplantation.</a> Methods in Molecular Biology. 885, 125-153 (2012).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+graft+function+in+rodent+models+of+heart+transplantation.">Assessment of graft function in rodent models of heart transplantation.</a> Microsurgery. 28 (7), 565-570 (2008).</li></ol>

Bu tekniği kullanarak, fare heterotopik servikal kalp nakli, deneyimli bir mikrocerrah tarafından 40 dakikadan daha kısa bir sürede ve giriş seviyesi bir mikrocerrah tarafından yaklaşık 60 dakika içinde gerçekleştirilebilir. Servikal kalp nakli çok sayıda hayvan modelinde incelenmiş olsa da, bir fare modeli, çok sayıda iyi tanımlanmış genetik suş, genetik değişiklik yetenekleri ve monoklonal antikorlar da dahil olmak üzere çok sayıda reaktifin mevcudiyeti nedeniyle altın standart olmaya devam et...

Abbott ve ark.1964 yılında sıçanlarda heterotopik abdominal kalp transplantasyonunun ilk tanımını 1 kez yayınlamıştır. Bu cerrahi teknikler 1969 yılında Ono ve ark. tarafından rafine edilmiş ve basitleştirilmiştir2. Corry ve ark. ilk olarak 1973 yılında farelerde heterotopik abdominal kalp nakli için bir yöntem tanımladılar; Daha önce bildirilen sıçan modellerine benzer şekilde, bu, donörün pulmoner arterinin uçtan yana anastomozları ve alıcının inferior vena kava ve abdominal aortuna yükselen aort ile revaskülarizasyon ile konakçının karnına engraftasyonu içeriyordu, sırasıyla3. Sıçanlarda heterotopik servikal kalp transplantasyonu 1971 yılında Heron tarafından 16 G (1.6 mm dış çaplı) intravenöz kateterlerden yapılmış Teflon manşetler kullanılarak tanımlanmıştır4. Chen5 ve Matsuura ve ark.6 daha sonra 1991 yılında farelerde heterotopik servikal kalp transplantasyonunu bildirmişlerdir ve bu transplantasyonlar öncelikle re-anastomoz yöntemlerinde farklılık göstermiştir. Chen'in yaklaşımı, donörün yükselen aortunun alıcının karotis arterine ve donörün pulmoner arterinin alıcının dış juguler venine dikişli anastomozlarını içeriyordu5. Bu mikrocerrahi dikişli anastomozlar için gereken ileri teknik beceri nedeniyle, yüksek bir başarı oranı elde etmek için önemli miktarda zaman ve deneyim gerekliydi. Matsuura ve ark., Heron tarafından kullanılana benzer, manşetlerin ekstra luminal yerleşimini kullanarak uçtan uca anastomozları içeren sütür olmayan bir manşet tekniği kullanan bir yöntem tanımlamıştır. 22 G (0.8 mm dış çap) ve 24 G (0.67 mm dış çap) intravenöz kateterlerden Teflon manşetler tasarladı ve bunları sırasıyla alıcının dış juguler veni ve ortak karotis arteri üzerine yerleştirdi6. Bu manşetler daha sonra donörün pulmoner arterinin ve aortunun içine yerleştirildi ve bağlantı etrafında bir sütür bağı bağlanarak sabitlendi. Bu yaklaşım gelişmiş bir başarı oranına dönüştü. En önemlisi, her iki servikal anastomozu tamamlamak için gereken sürenin kısalmasına neden oldu, böylece greftin sıcak iskemik zamanını abdominal dikiş yöntemi kullanılarak üçte birinden daha azına düşürdü. Ayrıca, manşetler damarın dış yüzeyinin etrafına yerleştirildiğinden, damar lümenine maruz kalan yabancı cisim yoktur, bu da ameliyat sonrası tromboz olasılığını büyük ölçüde azaltır7. Bu arada, manşet tekniğinin kullanılması, herhangi bir dikiş gerektirmeden anastomoz bölgesindeki damarların etrafında destek sağlar ve bu da revaskülarizasyon sonrası kanama riskini azaltır6.
Bu tekniğin çok sayıda revizyonu önerilmiştir. Fare ortak karotis arterinin kısa uzunluğunu (yaklaşık 5 mm) karşılamak için Tomita ve ark.8, bu tekniğin daha küçük bir arteriyel manşetle (0.6 mm dış çap) bir modifikasyonunu geliştirirken, tutma sütürlerini atlamış ve arteri doğrudan manşetten ince forseps ile çekmiştir. Wang ve ark., donörün sağ pulmoner arterine ve alıcının sağ ortak karotis arterine sırasıyla22 G ve 24 G manşetler yerleştirerek bu yaklaşımı daha da basitleştirdiler, 9. Çeşitli raporlar, özel manşetler, mikrocerrahi kelepçeler, damar dilatatörleri ve kardiyopleji10,11,12 kullanımı da dahil olmak üzere bu yaklaşımlardaki değişiklikleri tanımlamıştır. Özellikle, tüm bu yöntemler, kanın kalpten retrograd dolaşımını içerir; kan, alıcı ortak karotis arterden donör aort, koroner arterler, koroner sinüs için akar, daha sonra sağ atriyuma boşalır ve pulmoner arterden alıcının dış juguler venine çıkar.
Karındaki engraftmanla karşılaştırıldığında, servikal kalp nakli birçok avantaj sunar. Daha önce de belirtildiği gibi, servikal maruziyet daha hızlı revaskülarizasyon ve daha kısa sıcak iskemik zamanlar6 sağlar. Servikal yöntem de daha az invazivdir ve laparotomi6'dan kaçındığı için daha kısa postoperatif iyileşme süreleri ile ilişkilidir. Daha da önemlisi, uçtan uca anastomozlar yerine manşetlerle uçtan uca anastomozlar yapılabilir, bu da anastomoz kanaması gibi komplikasyon riskini azaltır. Abdominal yaklaşım ayrıca abdominal aort veya inferior vena kavada trombotik komplikasyonlar gelişme riski taşır ve omurilik iskemisi ve arka bacak felcine yol açar. Transplantasyonun yüzeysel servikal lokalizasyonu, palpasyon, elektrokardiyografi ve invaziv veya non-invaziv görüntüleme ile greft canlılığı değerlendirmesine kolay erişim sağlar. Servikal greftler reperfüzyon sonrası spontan kardiyak aktiviteye devam etmelerine rağmen, alıcının sistolik ve diyastolik parametrelerini anlamlı olarak etkilemezler. Bu model, transplantasyon sonrası iskemi-reperfüzyon hasarı ve greft reddi gibi hücresel yanıtları incelemek için değerli bilgiler sağlar. Ayrıca, bu model intravital iki foton mikroskopisi veya pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntüleme gibi nakil sonrası görüntülemeye izin vermek için ideal bir yaklaşım sunmaktadır. Bu amaçla, laboratuvarımız daha önce iskemi-reperfüzyon hasarı sırasında ve aterosklerotik plaklar içinde lökosit kaçakçılığını görselleştirmek için heterotopik servikal transplantasyonu takiben murin kalpleri ve aort ark greftlerini atarak murin kalpleri ve aort ark greftlerini de içeren faredeki hareketli doku ve organları görüntülemek için yöntemler bildirmiştir, sırasıyla13,14,15 . Ek olarak, yüzeysel konumu ve maruz kalma kolaylığı nedeniyle, bu model kardiyak re-transplantasyon için uygundur16.
Bu raporda, kan akışının kaynaklandığı damarlara vasküler manşetlerin dışarıdan yerleştirilmesiyle laminer kan akışına izin veren bir teknik açıklanmaktadır. Bu, kan akışının bir damardan diğerine yumuşak bir şekilde geçmesine izin verir ve distal damar kenarının vasküler lümene maruz kalmasını önler. Ek olarak, teknik, donör pulmoner arterin alıcıya kan akışının bol miktarda geri dönmesini sağlamak için daha önce kullanılan 22 G manşet yerine daha büyük bir 20 G manşet kullanır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-0 braided silk ties</td>
			<td>Henry Schein Inc</td>
			<td>7718729</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.75% Providone iosine scrub</td>
			<td>Priority Care Inc</td>
			<td>NDC 57319-327-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 nylon suture</td>
			<td>Surgical Specialties Corporation</td>
			<td>AK-0106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>655-nm nontargeted Q-dots</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q21021MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Pharmco Products Inc</td>
			<td>111000140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 braided silk ties</td>
			<td>Henry Schein Inc</td>
			<td>1005597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson forceps</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>91127-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c and C57BL/6 mice (6-8 weeks)</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bipolar coagulator</td>
			<td>Valleylab Inc</td>
			<td>SurgII-20, E6008/E6008B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen (Rimadyl) injection</td>
			<td>Transpharm</td>
			<td>35844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen (Rimadyl) oral chewable tablet</td>
			<td>Transpharm</td>
			<td>38995/37919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Custom-built 2P microscope running ImageWarp acquisition software</td>
			<td>A&#38;B Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont no. 5 forceps</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine vannas style spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 5.0</td>
			<td>Sun Microsystems Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey needle holder</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>91201-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-Mosquito clamp curved tip</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>91309-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harvard Apparatus mouse ventilator model 687</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>MA1 55-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin solution (100 U/mL)</td>
			<td>Abraxis Pharmaceutical Products</td>
			<td>504031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (50 mg/kg)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>206205-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope&#8212;Leica Wild M651 &#215; 6&#8211;40 magnification</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria extra fine spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>15396-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ohio isoflurane vaporizer</td>
			<td>Parkland Scientific</td>
			<td>V3000i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qdots</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>1604036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T SuperGrip Forceps angled tip</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>00649-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S&#38;T SuperGrip Forceps straight tip</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>00632-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile normal saline (0.9% (wt/vol) sodium chloride</td>
			<td>Hospira Inc</td>
			<td>NDC 0409-4888-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Q-tips (tapered mini cotton tipped 3-inch applicators)</td>
			<td>Puritan Medical Company LLC</td>
			<td>823-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surflow 20 gauge 1/4-inch Teflon angiocatheter</td>
			<td>Terumo Medical Corporation</td>
			<td>SR-OX2032CA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surflow 24 gauge 3/4-inch Teflon angiocatheter</td>
			<td>Terumo Medical Corporation</td>
			<td>R-OX2419CA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoCare Small Animal ICU System (recovery settings 3 L/min O2, 80 &#176;C, 40% humidity)</td>
			<td>Thermocare Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VetBond</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology SC361931</td>
			<td>NC0846393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (10 mg/kg)</td>
			<td>Lloyd Laboratories</td>
			<td>139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse heterotopic cervical cardiac transplantation utilizing vascular cuffs

Kardiyak transplantasyonun murin modelleri, iskemi-reperfüzyon hasarını, transplantasyon sonrası doğuştan gelen ve adaptif immün yanıtları ve immünomodülatör tedavilerin greft reddi üzerindeki etkisini incelemek için sıklıkla kullanılmaktadır. Farelerde heterotopik servikal kalp transplantasyonu ilk olarak 1991 yılında dikişli anastomozlar kullanılarak tanımlanmış ve daha sonra manşet tekniklerini içerecek şekilde modifiye edilmiştir. Bu değişiklik, başarı oranlarının iyileştirilmesine izin verdi ve o zamandan beri, daha fazla teknik iyileştirme öneren birden fazla rapor yapıldı. Bununla birlikte, greft anastomozları ile ilişkili teknik zorluk nedeniyle daha yaygın kullanıma çeviri sınırlı kalmaktadır, bu da vasküler anastomoz bükülmesini veya aşırı gerginliği önlemek için manşetlerin yeterli uzunluğunu ve kalibresini elde etmek için hassasiyet gerektirir ve bu da greftin zarar görmesine neden olabilir. Bu protokol, farelerde heterotopik servikal kardiyak transplantasyon için modifiye edilmiş bir tekniği tanımlamaktadır ve bu da alıcının ortak karotis arterine ve donörün pulmoner arterine kan akışının yönü ile uyumlu olarak manşet yerleştirilmesini içerir.

Bu fare servikal heterotopik kardiyak transplantasyon modeli, laboratuvarımızda yaklaşık %97'lik bir sağkalım oranı ile 1.000'den fazla nakil gerçekleştirmek için kullanılmıştır. Başarı oranı, farelerde diğer servikal heterotopik kalp nakli teknikleri kullanılarak yapılan önceki raporlardan biraz daha yüksektir10,11,20. Bu potansiyel olarak, alıcıya kan akışının bol miktarda geri dönüşünü sağlam...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs at JoVE.com

Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs

Fare kardiyak transplantasyon modelleri, transplantasyon immünolojisini incelemek için değerli araştırma araçlarını temsil etmektedir. Mevcut protokol, laminer kan akışına izin vermek için alıcının ortak karotis arterine ve donörün pulmoner arter gövdesine manşetlerin yerleştirilmesini içeren fare heterotopik servikal kardiyak transplantasyonunu detaylandırmaktadır.

Vasküler Manşetler Kullanılarak Fare Heterotopik Servikal Kardiyak Transplantasyonu

Murine models of cardiac transplantation are frequently utilized to study ischemia-reperfusion injury, innate and adaptive immune responses after ...

Vasküler manşet yerleştirmemiz laminer kan akışına izin verir ve alıcılara bol miktarda kan dönüşü sağlamak için donör pulmoner arter için daha büyük bir manşet kullanırız. Bu protokolde kullanılan bu modifikasyonlar, türbülanslı kan akışı ve trombüs oluşumu olasılığını azaltır ve hayatta kalma oranlarının artmasına neden olur. Bu yöntem, iskemi reperfüzyon hasarı ve greft reddi gibi transplantasyon sonrası immün yanıtları incelemek için değerli bilgiler sağlar.Ek olarak, tekniğimiz nakil sonrası izlemeyi veya yeniden nakli kolaylaştırır. Bu prosedürü gösteren, laboratuvarımızda bu tekniği geliştiren uzman bir mikrocerrah olan Dr. Wen Jun Li olacaktır. Elektrikli tıraş bıçağı kullanarak saçları göğüs ve karından tıraş ederek cerrahi bölgeyi hazırlayın.100 birim heparini intravenöz olarak erkekler için penis damarına veya erkekler ve kadınlar için dış juguler ven içine uygulayın. Fareleri, ön ayakları tepede olacak şekilde sırtüstü bir pozisyona yerleştirin. Ön ayakları ve arka bacakları cerrahi bantla sabitleyin ve cildi% 0.75 iyot ve% 70 etanol ile dezenfekte edin.Medyan laparosteronotomi için göbek kısmından sternal açıya kadar bir kesi yapın, ardından her kostal sınır boyunca bilateral bir torakotomi yapın. Mediastenin tam olarak maruz kalması için ön göğüs duvarını boynun üzerine katlayın. Timüsü tüketin ve intratorasik inferior vena kavayı açığa çıkarın.Retrograd perfüzyon için, intratorasik inferior vena kavaya 1.5 mililitre dört santigrat derece salin enjekte edin ve iğne greftin üzerine üstün bir şekilde yönlendirildi. Superior vena kava'yı 8-0 kullanarak bağlayın ipek dikiş ve distal bölün. İnferior vena kava yoluyla 1.5 mililitre dört santigrat derece salin enjekte ederek retrograd perfüzyonu tekrarlayın.İnferior vena kavayı 8-0 kullanarak bağlayın ipek dikiş ve distal bölün. Greft hasadı için aort arkı ve pulmoner arter gövdesini disekte edin ve her ikisini de distal olarak transekte edin. Kalbin arka yüzeyindeki pulmoner damarları 6-0 ipek sütür kullanarak bağlayın ve distal olarak bölün.Donör kalbi göğüs boşluğundan çıkararak greft hazırlığı yapın. Eksize edilen kalbi bir ila iki dakika boyunca dört santigrat derece heparinize salin ile doldurulmuş plastik bir kaba koyun. Grefti manşet yerleştirilmesi için buzla doldurulmuş steril bir plastik şişeye aktarın.Donör manşet için pulmoner arterin üzerine bir milimetre uzunluğunda 20 gauge anjiyokateter manşet yerleştirin. İnce forseps kullanarak, arterin kenarlarını manşetin üzerine yavaşça geri katlayın. Katlanmış kabı 10-0 naylon bir bağ kullanarak manşete sabitleyin.Donör kalbini heparinize salin veya başka bir koruma solüsyonunda dört santigrat derecede saklayın. Elektrikli tıraş bıçağı kullanarak saçları servikal bölgeden tıraş ederek cerrahi bölgeyi hazırlayın. Kornea kurumasını önlemek için gözlere steril ilaçsız oftalmik merhem uygulayın.Hayvanı vücuda bitişik ön ayaklarla sırtüstü bir pozisyona yerleştirin ve kafa hafifçe sola döndü. Ön ayakları ve arka bacakları cerrahi bantla sabitleyin. Cildi% 0.75 iyot ve% 70 etanol ile dezenfekte edin.Alt mandibuladan sternuma orta hat servikal insizyon yaptıktan sonra, sağ sternokleidomastoid kası transekte edin. Greft implantasyonu için alan yaratmak üzere inframandibuler bezin sağ lobunu tüketin. 6-0 ipek sütür kullanarak proksimal dış juguler ven üzerine bir kayma düğümü bağlayın.Distal dış juguler veni ve bitişik dalları 8-0 kullanarak bağlayın ipek dikiş. Damarın altına dikiş ve gazlı bezle örtün. Dış juguler venin ön duvarı boyunca enine bir kesi yapın.Manşet yerleştirme sırasında damarı sabitlemek için proksimal dış juguler venin kenarından ve altta yatan dokudan 10-0 naylon bir sütür yerleştirin. Distal sağ ortak karotis arteri 8-0 kullanarak bağlayın ipek sütür, karotis bifurkasyonundan hemen daha düşüktür. 6-0 ipek sütür kullanarak proksimal ortak karotis arter üzerine bir kayma düğümü bağlayın.Arteri dikişler arasında distal olarak transekte edin. Daha sonra alıcının sağ ortak karotis arterinin üzerine 0.6 mililitre uzunluğunda 24 gauge anjiyokateter manşet yerleştirin. İnce forseps kullanarak, arterin kenarlarını manşetin üzerine yavaşça geri katlayın.Katlanmış kabı 10-0 naylon bir bağ kullanarak manşete sabitleyin. Donör kalbi sağ servikal bölgeden üstün tutun. İmplantasyon sırasında birkaç dakikada bir kalp greftine soğuk salin damlatın.Grefti yerine sabitlemek için donör aortun kenarından ve altta yatan dokunun yüzeysel bir ısırığından 10-0 naylon bir sütür yerleştirin. Donör aortu 0.5 mililitre% 0.9 heparinize salin ile yıkayın. Alıcının ortak karotis arter manşetini donör aortuna yerleştirin.Anastomozu 8-0 ile sabitleyin ipek kravat. Aort ankraj dikişini çıkarın. Alıcının dış juguler venini 0.5 mililitre% 0.9 heparinize salin ile yıkayarak dış juguler veni havalandırın.Donör pulmoner arter manşetini alıcının dış juguler venine yerleştirerek pulmoner arter anastomozu yapın ve 8-0 ile sabitleyin ipek kravat. Dış juguler ven ankraj sütürünü çıkarın ve grefti altta yatan dokudan serbest bırakmak için dış juguler venin kalan arka duvarını transekte edin. Greftin anastomozun bükülmeden veya bükülmeden düzgün bir şekilde yönlendirildiğinden emin olun.Alıcının dış juguler venindeki kaymaları serbest bırakın, ardından kalp grefti reperfüzyonunu başlatmak için ortak karotis arter takip edin. Bu protokolde gösterilen teknik, yaklaşık% 97'lik bir hayatta kalma oranı gösterdiBu, potansiyel olarak, alıcıya kan akışının bol miktarda geri dönüşünü sağlamak için donör pulmoner artere yerleştirilen daha büyük 20 gauge manşete bağlanabilir. Ek olarak, mevcut teknikte kan akışının manşet yerleştirilmesi ile hizalanması, tromboz ve anastomoz türbülansı riskini en aza indirir.Ortalama alıcı ameliyat süresi yaklaşık 37 dakika olup, ortalama soğuk iskemi süresi 20 dakikadır. Sağkalım çalışmaları için, kalp greftleri günlük olarak kalp atışının doğrudan görselleştirilmesi ve dijital palpasyonu ile değerlendirildi. İntravital iki foton görüntüleme, lökosit kaçakçılığını değerlendirmek için transplantasyondan erken dönemde yapıldı.Bükülmeyi önlemek için greftin cilt kapanmadan önce uygun şekilde konumlandırıldığını ve yönlendirildiğini kontrol etmek önemlidir. Bu yöntem, alloimmün yanıtlara aracılık eden nakledilen greftlerde yerleşik immün hücreleri tanımlamak için yeniden transplantasyon modellerinde kullanılabilir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Sıçanlarda Ortotopik Hind-Ekstremite Nakli

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel ...

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

Fonksiyonel Kardiyak Bağışıklık Hücreleri İzolasyon

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Mürin Tam kat Cilt Nakli

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Sitotoksik değerlendirilmesi ve insan hassas kesim akciğer dilimleri maddelerin etkileri Immunomodulatory

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

Sıçanlarda Heterotopik Kalp ve Kardiyak Kas Hücre Nakli için İmmünolojik Model

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Murin Kalp Nakli için Manşet Tekniğinin Optimizasyonu

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

Immuno RNA-Floresan In Situ Hibridizasyonu Kullanılarak SARS-CoV-2'nin Görselleştirilmesi

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

Purification and Expansion of Mouse Invariant Natural Killer T Cells for in vitro and in vivo Studies

In vitro ve in vivo Çalışmalar için Fare Değişmez Doğal Öldürücü T Hücrelerinin Saflaştırılması ve Genişlemesi

Invariant Natural Killer T (iNKT) cells are innate-like T Lymphocytes expressing a conserved semi-invariant T cell receptor (TCR) specific for self or ...

Partial Heterotopic Hindlimb Transplantation Model in Rats

Sıçanlarda Kısmi Heterotopik Hindlimb Transplantasyon Modeli

Vascularized composite allotransplantations (VCA) represent the most advanced reconstruction option for patients without autologous surgical possibilities ...