Name: surveying low-cost methods to measure lifespan and healthspan in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2022-05-18T14:00:00
Duration: 10 min 8 s
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जीजी टी 32 एजी 052374 द्वारा समर्थित है और आरएचएस को नेशनल इंस्टीट्यूट ऑन एजिंग से आर 00 एजी 065200 द्वारा समर्थित है। हम उपभेदों के लिए सीजीसी (एनआईएच ऑफिस ऑफ रिसर्च इंफ्रास्ट्रक्चर प्रोग्राम पी 40 ओडी 010440 द्वारा वित्त पोषित) का धन्यवाद करते हैं।

लेखक कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हितों की घोषणा नहीं करते हैं।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>APEX IPTG</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>18-242</td>
			<td>for RNAi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>90000-764</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Peptone</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97064-330</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-904</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76345-522</td>
			<td>for RNAi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>80057-932</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH1115-1LP</td>
			<td>solvent for drugs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95020-778</td>
			<td>for LB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-132</td>
			<td>for NGM plates, M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraquat</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>36541</td>
			<td>for oxidative/mitochondrial stress</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-566</td>
			<td>for bleach soluton</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate dibasic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM-PX1570-2</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM-PX1565-5</td>
			<td>for M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S7E Dissecting Scope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>10450840</td>
			<td>Standard dissecting microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM-SX0420-5</td>
			<td>for NGM plates, M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hypochlorite</td>
			<td>VWR</td>
			<td>RC7495.7-32</td>
			<td>for bleach solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>71003-472</td>
			<td>for M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetracycline hydrochloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-638</td>
			<td>for RNAi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tunicamycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7765-50MG</td>
			<td>for ER stress</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

surveying low-cost methods to measure lifespan and healthspan in caenorhabditis elegans

एक मॉडल जीव के रूप में कैनोरहाब्डिटिस एलिगेंस की खोज और विकास जीव विज्ञान में प्रभावशाली था, खासकर उम्र बढ़ने के क्षेत्र में। कई ऐतिहासिक और समकालीन अध्ययनों ने आनुवंशिक उत्परिवर्तन, ट्रांसजेनिक जीन अभिव्यक्ति और हार्मेसिस, तनाव के लिए एक फायदेमंद, निम्न-श्रेणी के जोखिम सहित हजारों जीवनकाल-फेरबदल प्रतिमानों की पहचान की है। इसके कई फायदों के साथ, जिसमें एक छोटा जीवनकाल, आसान और कम लागत वाला रखरखाव, और सभी मानव जीनों के लगभग दो-तिहाई तक होमोलॉजी के साथ पूरी तरह से अनुक्रमित जीनोम शामिल है, सी एलिगेंस को तनाव और उम्र बढ़ने वाले जीव विज्ञान के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल के रूप में जल्दी से अपनाया गया है। यहां, जीवनकाल और स्वास्थ्य को मापने के लिए कई मानकीकृत तरीकों का सर्वेक्षण किया जाता है जिन्हें आसानी से लगभग किसी भी शोध वातावरण में अनुकूलित किया जा सकता है, खासकर सीमित उपकरण और धन वाले। एलिगेंस की अविश्वसनीय उपयोगिता को चित्रित किया गया है, जो व्यापक बुनियादी ढांचे की आवश्यकता के बिना उम्र बढ़ने वाले जीव विज्ञान में शक्तिशाली आनुवंशिक विश्लेषण करने की क्षमता को उजागर करता है। अंत में, प्रत्येक विश्लेषण और वैकल्पिक दृष्टिकोण की सीमाओं पर विचार के लिए चर्चा की जाती है।

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Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

कैनोरहाब्डाइटिस एलिगेंस स्वास्थ्य, जीवनकाल और तनाव के लिए लचीलापन के सर्वेक्षण के लिए मजबूत और कम लागत वाले तरीकों के साथ एक उत्कृष्ट मॉडल प्रणाली के रूप में काम करते हैं।

कैनोरहाब्डाइटिस एलिगेंस में जीवनकाल और हेल्थस्पैन को मापने के लिए कम लागत वाले तरीकों का सर्वेक्षण करना

The discovery and development of Caenorhabditis elegans as a model organism was influential in biology, particularly in the field of aging. Many ...

यह प्रोटोकॉल समुद्र ी एलिगेंस में उम्र बढ़ने की सेवा के लिए सबसे कम लागत और सबसे कम तकनीकी विधियों को प्रस्तुत करता है। उम्र बढ़ने जीव विज्ञान में एक प्रभावशाली मॉडल जीव। इन विधियों का सबसे बड़ा लाभ कम लागत वाले उपकरणों और सामग्री का उपयोग करके कार्यान्वयन में आसानी है।अनुभव या उपलब्ध धन की परवाह किए बिना उन्हें किसी भी शोधकर्ता के लिए उत्तरदायी बनाना। एक पुराने उम्र बढ़ने के अध्ययन के रूप में आबादी के भीतर स्वास्थ्य में प्राकृतिक परिवर्तनशीलता है। इसलिए, यह आवश्यक है कि स्वस्थ, अच्छी तरह से खिलाया और कसकर सिंक्रनाइज़ जानवरों पर प्रयोग किए जाएं।चीर विकलांगता सुनिश्चित करने के लिए एक लीटर सूत्रकृमि विकास मीडिया या एनजीएम बरमा प्लेट की तैयारी शुरू करें। हलचल बार के साथ एक लीटर फ्लास्क में 2.5 ग्राम पेप टोन, 3.0 ग्राम सोडियम क्लोराइड और 20 ग्राम बरमा जोड़ें और 970 मिलीलीटर की अंतिम मात्रा में आसुत जल जोड़ें। एक मानक आटोक्लेव या मीडिया स्टेरिलाइज़र का उपयोग करके एक लीटर फ्लास्क में एनजीएम बरमा समाधान को निष्फल करें।और समाधान को तब तक हिलाएं जब तक कि यह 60 से 75 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा न हो जाए। जबकि समाधान ठंडा हो जाता है, मनका स्नान को 65 से 70 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करें। एक बार एनजीएम बरमा समाधान 60 से 75 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा हो जाता है।तरल योजक जोड़ें और समाधान को पांच मिनट के लिए पूरी तरह से मिश्रण करने दें। फिर प्लेट में डालते समय मीडिया को जमने से रोकने के लिए 65 से 70 डिग्री सेल्सियस पर मनका स्नान में फ्लास्क को डुबोएं। पिपेट प्रत्येक 60 मिलीलीटर प्लेट में समाधान के नौ से 11 मिलीलीटर।जब किया जाता है, तो तापमान बनाए रखने और पिपेट में जमने से किसी भी मीडिया को रोकने के लिए विंदुक को गर्म समाधान में वापस रखें। सभी प्लेटों के लिए प्रक्रिया को दोहराएं और एनजीएम को रात भर जमने दें। एक बार जमने के बाद, उन्हें बैक्टीरिया के साथ प्लेटों को बोने के लिए उपयोग करें या प्लेटों को विरंजन के माध्यम से कीड़े को सिंक्रनाइज़ करने के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर तीन महीने तक सीलबंद कंटेनरों में स्टोर करें।पेट्री डिश को ओवरफिल किए बिना कीड़े युक्त प्लेट पर एम 9 समाधान की एक छोटी मात्रा डालकर नेमाटोड एकत्र करें। फिर बैक्टीरिया लॉन से कीड़े को ढीला करने के लिए धीरे-धीरे एम नौ समाधान घुमाएं। अगला, एक सीरोलॉजिकल पिपेट के साथ 15 मिलीलीटर ट्यूब में वयस्क ग्रेविड कीड़े इकट्ठा करें।पिपेट टिप के साथ बरमा भेदी से बचें। 1100 गुना जी पर 30 सेकंड के लिए सेंट्र द्वारा जानवरों को गोली मारो, और सतह पर तैरनेवाला की आकांक्षा। कृमि गोली के लिए ताजा तैयार विरंजन समाधान के पांच मिलीलीटर जोड़ें, और आंतरायिक जोरदार मिलाते हुए हर कुछ मिनट में एक विदारक माइक्रोस्कोप के तहत कीड़े की जांच करें जब तक कि सभी वयस्क कृमि निकायों को भंग नहीं कर दिया जाता है और मिश्रण में केवल अंडे छोड़ दिए जाते हैं।अगला, 1100 गुना जी पर 30 सेकंड के लिए अंडे ब्लीच मिश्रण को कताई करके अंडे को गोली दें और विरंजन समाधान की आकांक्षा करें। फिर एम 9 समाधान के 15 मिलीलीटर तक जोड़कर और अंडे और समाधान को फैलाने के लिए ट्यूब को चार या पांच बार उलटकर गोली वाले अंडे धो लें। फिर, अंडे को गोली देने और एम 9 समाधान की आकांक्षा करने के लिए 1100 गुना जी पर 30 सेकंड के लिए ट्यूब अपकेंद्रित्र।अंडे के मिश्रण से किसी भी ब्लीच को खत्म करने के लिए चार बार धोएं। चौथे धोने के बाद प्रक्षालित कीड़े की कुल संख्या के आधार पर एम 9 समाधान को 100 माइक्रोलीटर से दो मिलीलीटर तक महाप्राण करें। गुच्छों को तोड़ने के लिए अंडे को अच्छी तरह से हिलाएं और सुनिश्चित करें कि अंडे एम 9 समाधान में पूरी तरह से निलंबित हैं।वैकल्पिक रूप से, जानवरों को 15 मिलीलीटर क्रॉनिकल ट्यूब में अंडे की गोली में एम 9 समाधान के 10 से 12 मिलीलीटर जोड़कर एक तंग अस्थायी सिंक्रनाइज़ेशन के लिए एल गिरफ्तार किया जा सकता है। कीड़े को 20 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे तक रोटेटर में घूमने दें। बैक्टीरिया के साथ बैठे एक एनजीएम प्लेट पर अंडे के मिश्रण के चार माइक्रोलीटर अंडे या एल एक एकाग्रता पिपेट का अनुमान लगाने के लिए।फिर मीडिया के प्रति माइक्रोलीटर मौजूद अंडे की गणना और गणना करें। सन्निकटन प्लेट के आधार पर सन्निकटन में सुधार करने के लिए तीन या चार बार गिनती दोहराएं, पसंद के बैक्टीरिया के साथ वरीयता प्राप्त एनजीएम बरमा प्लेट पर अंडे या एल एक गिरफ्तार जानवरों की उचित संख्या। पिटाई के माध्यम से कीड़े के लोकोमोटिव व्यवहार को मापने के लिए।एक विदारक गुंजाइश के तहत एम 9 समाधान के 10 से 20 माइक्रोलीटर पर एक एनजीएम बरमा प्लेट से एक वयस्क कीड़े की एक छोटी संख्या ले जाएँ। फिर एक समय में एक कीड़े पर ध्यान केंद्रित करें और 15 सेकंड में अवतल से उत्तल गठन के लिए नमूना स्विच करने की संख्या की गणना करें। एक हाथ काउंटर और टाइमर का उपयोग करें और 10 से 15 कीड़े के लिए प्रक्रिया को दोहराएं।वांछित उम्र के लिए कीड़े को उम्र दें और सभी वांछित उम्र में थ्रैशिंग माप दोहराएं। जैसा कि कल्पना की गई है, पुराने कीड़े काफी धीमी गति से पिटाई करते हैं। मात्रा और प्रजनन माप के लिए।10 से 15 कैनोरहाब्डाइटिस एलिगेंस कीड़े में, पसंद के बैक्टीरिया के साथ वरीयता प्राप्त एक अलग एनजीएम बरमा प्लेट में एल चार कीड़े को एकल करें। जानवरों को रात भर 20 डिग्री सेल्सियस पर बढ़ने दें और सुनिश्चित करें कि प्लेटों का एक नया बीज वाला बैच अगले दिन के लिए तैयार है। कैनोरहाब्डाइटिस एलिगेंस द्वारा रखे गए अंडों की मात्रा को मापने के लिए वयस्क कीड़े को एक ताजा एनजीएम बरमा ब्लेड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, जो उस लूटे गए बैक्टीरिया के साथ सात से आठ दिनों के लिए हर 12 से 24 घंटे में या जब तक अंडे दिखाई नहीं देते हैं और प्लेटों पर रखे गए अंडे की संख्या की गणना करते हैं।कैनोरहाब्डाइटिस एलिगेंस के ब्रूड आकार को मापने के लिए वयस्क कीड़े को हर 12 से 24 घंटे, या सात से आठ दिनों या जब तक संतान दिखाई नहीं देती है, तब तक बैक्टीरिया के साथ वरीयता प्राप्त एक ताजा एनजीएम बरमा प्लेट पर स्थानांतरित करें। अंडे वाली सभी प्लेटें 20 डिग्री सेल्सियस पर रखें। कीड़े स्थानांतरित करने के दो दिन बाद।प्लेट पर विकसित संतान की गणना करें। एल चार चरण या उससे पहले सभी जीवित और विकासशील कीड़े की गिनती करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि एफ दो पीढ़ी परिणामों को भ्रमित नहीं करती है। प्लेट से सभी कीड़े निकालें क्योंकि वे गिने जाते हैं।प्लेटों को फिर से स्कोर करने से पहले अतिरिक्त एक से दो दिनों के लिए बनाए रखें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि विलंबित हैचिंग या विकास वाले किसी भी जानवर को याद नहीं किया जाता है। जंगली प्रकार एन 2 नेमाटोड के जीवनकाल पर नसबंदी विधि के प्रभाव से पता चला है कि एनजीएम बरमा प्लेटों पर उगाए गए कीड़े के जीवनकाल में परिवर्तन एनजीएम बरमा एफयूडीआर प्लेटों पर उगाए गए कीड़े या एनजीएम बरमा प्लेटों पर उगाए गए जीएलपी चार बीएन 2 उत्परिवर्ती जानवरों के समान थे। अल्पकालिक एचएसएफ एक नॉकडाउन जानवर ने सभी स्थितियों के लिए जीवनकाल में महत्वपूर्ण गिरावट देखी।जंगली प्रकार के नियंत्रणों की तुलना में अभिव्यक्ति जानवरों पर एचएसएफ में रखे गए अंडे और ब्रूड आकार की संख्या में पर्याप्त कमी पाई गई। अभिव्यक्ति जानवरों पर कुछ एचएसएफ ने पूर्ण बाँझपन का प्रदर्शन किया जो दर्शाता है कि प्रजनन स्वास्थ्य को दीर्घायु के साथ विपरीत रूप से सहसंबद्ध किया जा सकता है। पिटाई दर ने उम्र बढ़ने के दौरान स्वास्थ्य को मापने के लिए एक विश्वसनीय तरीका प्रदान किया जैसा कि युवाओं की तुलना में पुराने जानवरों में पिटाई में महत्वपूर्ण कमी से मापा जाता है।तनाव के लिए उत्तरजीविता जीव स्वास्थ्य को मापने के लिए विश्वसनीय परख हैं, ट्यूनिकामाइसिन जो रेटिकुलम तनाव का कारण बनता है, जिसके परिणामस्वरूप डीएमएसओ नियंत्रण की तुलना में एकाग्रता की परवाह किए बिना जीवनकाल कम हो जाता है। पैराक्वाट के उच्च स्तर ने जीवनकाल को काफी छोटा कर दिया, जबकि पैराक्वाट की कम सांद्रता ने हार्मेटिक प्रभाव के कारण जीवनकाल में वृद्धि की। थर्मो सहिष्णुता परख में, एचएसएफ की अधिक अभिव्यक्ति ने सभी जीवनकाल और उम्र बढ़ने के प्रयोगों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मो सहिष्णुता में वृद्धि की।यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि नसबंदी तकनीकों का ऑर्गेनिस्मल स्वास्थ्य पर प्लियोट्रोपिक प्रभाव हो सकता है, जो परिणामों को प्रभावित करता है। यदि प्रतिलेखन, अनुवाद प्रोटीन एकत्रीकरण, ऑर्गेनेल, आकृति विज्ञान और चयापचय कार्यों के माप सहित उपकरण और बुनियादी ढांचे उपलब्ध हैं, तो स्वास्थ्य अवधि को मापने के लिए कई अतिरिक्त और मानार्थ दृष्टिकोण मौजूद हैं।

Research

JoVE Journal

Genetics

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

Design and Use of a Low Cost, Automated Morbidostat for Adaptive Evolution of Bacteria Under Antibiotic Drug Selection

डिजाइन और एक कम लागत का उपयोग, बैक्टीरिया की अनुकूली विकास के लिए एंटीबायोटिक दवा चयन के तहत स्वचालित Morbidostat

We describe a low cost, configurable morbidostat for characterizing the evolutionary pathway of antibiotic resistance. The morbidostat is a bacterial ...

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic यादृच्छिक mutagenesis में Histone-miniSOG का प्रयोग<em&gt; सी। एलिगेंस</em

Forward genetic screening in model organisms is the workhorse to discover functionally important genes and pathways in many biological processes. In most ...

Quantification of Information Encoded by Gene Expression Levels During Lifespan Modulation Under Broad-range Dietary Restriction in C. elegans

Quantification of Information Encoded by Gene Expression Levels During Lifespan Modulation Under Broad-range Dietary Restriction in C. elegans

C. एलिगेंस में व्यापक रेंज आहार प्रतिबंध के तहत आयु मॉडुलन के दौरान जीन अभिव्यक्ति के स्तर द्वारा इनकोडिंग जानकारी का ठहराव

Sensory systems allow animals to detect, process, and respond to their environment. Food abundance is an environmental cue that has profound effects on ...

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

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निमेटोड Caenorhabditis एलिगेंस-एक बहुमुखी Vivo मॉडल में मेजबान-सूक्ष्म बातचीत का अध्ययन करने के लिए

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the ...

Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans

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Caenorhabditis एलिगेंस में Ploidy का हेरफेर

Mechanisms that involve whole genome polyploidy play important roles in development and evolution; also, an abnormal generation of tetraploid cells has ...

The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan

The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan

प्रतिकृति सेट विधि: मात्रात्मक माप करने के लिए एक उच्च-प्रवाह Approach Caenorhabditis एलिगेंस आयुष्यात

The Replica Set method is an approach to quantitatively measure lifespan or survival of Caenorhabditis elegans nematodes in a high-throughput manner, thus ...

Culture and Assay of Large-Scale Mixed-Stage Caenorhabditis elegans Populations

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संस्कृति और बड़े पैमाने पर मिश्रित मंच Caenorhabditis elegans आबादी की परख

Caenorhabditis elegans (C. elegans) has been and remains a valuable model organism to study developmental biology, aging, neurobiology, and genetics. The ...

Measuring Caenorhabditis elegans Sensitivity to the Acetylcholine Receptor Agonist Levamisole

Measuring Caenorhabditis elegans Sensitivity to the Acetylcholine Receptor Agonist Levamisole

एसिटाइलकोलाइन रिसेप्टर एगोनिस्ट लेवामिसोल के लिए कैनोरहाब्डाइटिस एलिगेंस संवेदनशीलता को मापना

At the neuromuscular junction (NMJ), the binding of the excitatory neurotransmitter acetylcholine (ACh) to postsynaptic receptors leads to muscle ...

Measuring Embryonic Viability and Brood Size in Caenorhabditis elegans

Measuring Embryonic Viability and Brood Size in Caenorhabditis elegans

केनोरहाब्डिस एलिगेंस में भ्रूण व्यवहार्यता और ब्रूड आकार को मापना

Caenorhabditis elegans is an excellent model organism for the study of meiosis, fertilization, and embryonic development. C. elegans exist as ...

Epigenetic Inheritance and ChIP in Caenorhabditis elegans

Analysis of Transgenerational Epigenetic Inheritance in C. elegans Using a Fluorescent Reporter and Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

RNAi Inheritance and ChIP in C. elegans (Video) | JoVE

एक फ्लोरोसेंट रिपोर्टर और क्रोमैटिन इम्यूनोप्रेसिपेशन (सीएचआईपी) का उपयोग करके सी एलिगेंस में ट्रांसजेनरेशनल एपिजेनेटिक इनहेरिटेंस का विश्लेषण

Transgenerational epigenetic inheritance (TEI) allows the transmission of information through the germline without changing the genome sequence, through ...