Name: surveying low-cost methods to measure lifespan and healthspan in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2022-05-18T14:00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

G.G. støttes av T32AG052374 og R.H.S. støttes av R00AG065200 fra National Institute on Aging. Vi takker CGC (finansiert av NIH Office of Research Infrastructure Program P40 OD010440) for belastningene.

Forfatterne oppgir ingen konkurrerende økonomiske interesser.

Levetid, mest enkelt definert som livets varighet, er et klart binært fenomen i de fleste organismer - enten en organisme lever eller ikke. Lang levetid korrelerer imidlertid ikke alltid med en organismes helse. For eksempel er mitokondrielle hormesismodeller der eksponering for mitokondrielt stress dramatisk øker levetiden generelt noen av de lengstlevende dyrene, men viser forkrøplet vekst og redusert metabolsk funksjon37,54. På samme måte viser dyr med hyperaktive endoplasmatiske retikulumstressresponser også visse atferd og fenotyper som kan korreleres med redusert helse, til tross for at de har dramatisk forbedret proteinhomeostase og levetid36,49. Endelig er mange levetidsparadigmer i modellorganismer, inkludert økt HSF-1-funksjon55, økt XBP-1-funksjon56 og endret FoxO-signalering57, alle korrelert med økt kreftrisiko, og det er ubestridelig at forlenget levetid ikke er gunstig hvis en organisme er i konstant kamp med kreft og andre helsesykdommer. Derfor kan lang levetid ikke være en frittstående måling i aldrende biologi.
Dermed har begrepet healthspan vært et voksende felt i aldrende biologi. Healthspan, løst definert som den perioden av livet som man er sunn, er vanskeligere å fastslå enn lang levetid. Imidlertid, i motsetning til lang levetid, er begrepet "helse" komplisert, da det er mange forskjellige avlesninger for organismenes helse: på organismenivå er det muskelfunksjon / styrke, nevronal / kognitiv funksjon, reproduktiv helse, etc.; På mobilnivå er det proteinhomeostase, lipidhomeostase, glukosehomeostase, metabolisme, etc. I 2014 har aldrende biologer definitivt karakterisert biologiske kjennetegn ved aldring med den strukturerte definisjonen at det må være noe som naturlig brytes ned under aldring og kan eksperimentelt endres slik at eksperimentell forverring bør akselerere aldring og eksperimentell intervensjon bør bremse aldring. Disse ni kjennetegnene ved aldring inkluderer genomisk ustabilitet, telomerslitasje, epigenetiske endringer, tap av proteinhomeostase (proteostase), stamcelleutmattelse, endret intercellulær signalering, mitokondriell dysfunksjon, deregulert næringssensor og cellulær senescens58. Siden da hevder mange studier at andre faktorer bør inkluderes, inkludert ekstracellulære proteiner og systemisk fysiologi som immunitet og betennelse59. Til syvende og sist krever den komplekse definisjonen av healthspan at organismenes helse måles ved hjelp av flere forskjellige metoder.
I dette manuskriptet presenteres derfor flere metoder for å måle ulike aspekter ved healthspan ved hjelp av nematodemodellen C. elegans. Vi analyserer lokomotorisk oppførsel ved hjelp av thrashing analyser, reproduktiv helse ved hjelp av egg teller og brød størrelse, og følsomhet for stress. Faktisk er lokomotorisk oppførsel en gullstandardmetode for måling av healthspan, da organismer utviser betydelig tap av motilitet og bevegelse under aldring51. Tap av bevegelsesadferd kan tilskrives flere kjennetegn ved aldring, da muskelfunksjon i C. elegans er avhengig av riktig proteostase60, mitokondriell dysfunksjon61 og nevronmuskelsignalering62. Mens dette manuskriptet fokuserer på en måling av bevegelsesadferd, er det viktig å merke seg at mange andre metoder eksisterer, inkludert motilitet hos dyr på en solid agarplate, respons på berøring51 og kjemotaksisanalyser63. Imidlertid krever disse metodene generelt mer sofistikerte opptaksenheter, bruk av ormsporingsprogramvare eller bruk av dyre, farlige eller flyktige kjemikalier, som alle kan være uoverkommelige i enkelte forskningsinnstillinger.
I tillegg presenteres analyser for eggtelling og brødstørrelse som en metode for måling av reproduktiv helse og som den enkleste metoden for å måle celledeling i voksne ormer, siden voksne ormer er post-mitotiske og bare kimceller og embryoer gjennomgår celledeling i en voksen orm64. Som et mål på celledeling kan reproduktiv helse være relevant for de aldrende kjennetegnene ved cellulær senescens og stamcelleutmattelse. Reproduktiv helse kan påvirkes av mange faktorer, inkludert patogen infeksjon65 eller eksponering for stress49, selv om det ikke er noen direkte sammenheng mellom reproduktiv helse og lang levetid. Faktisk viser noen langlivede dyr en betydelig reduksjon i brødstørrelse49, og det er til og med mulig at det eksisterer en omvendt sammenheng mellom levetid og brødstørrelse50. Dette er ikke et fenomen som er spesifikt for C. elegans, da skadelige effekter av reproduksjon på lang levetid lenge har blitt observert hos mennesker66,følgesvenner 67 og mus68. Likevel gir vi eggtelling og brødstørrelse som en pålitelig og billig metode for å måle reproduktiv helse med forbehold om at reproduktiv helse kanskje ikke korrelerer med lang levetid eller helse.
Til slutt tilbys overlevelsesanalyser som et indirekte mål på organismenes helse. Det er viktig at cellulære stressresponser, inkludert respons på termisk stress69 og ER-stress35, raskt avtar under aldringsprosessen og har direkte relevans for det aldrende kjennetegnet for proteostase70,71. I motsetning til dette kan hyperaktiverende stressresponser øke levetiden betydelig ved å fremme motstandskraft mot stress 35,37,38. Mens denne studien fokuserer på de enkleste og laveste kostnadsmetodene, finnes det et stort antall alternative metoder for stressmotstandsanalyser for termotolerans41 og oksidativt stress66, som hver krever et annet sett med utstyr og forbruksvarer. Utover enkle eksponeringsstudier for stressorer, kan andre fysiologiske metoder utføres avhengig av tilgang til utstyr. For eksempel kan en ekstracellulær fluksanalysator overvåke mitokondriell funksjon og cellulær respirasjon73; fluorescerende disseksjonsmikroskoper vil tillate målinger av transkripsjonsreportere for aktivering av stressrespons20; og høyoppløselige sammensatte eller konfokale mikroskoper kan brukes til å måle organellmorfologi med fluorescerende prober for mitokondrier74, endoplasmatisk retikulum 75,76 og aktincytoskelett77.
Som en siste advarsel for målinger av lang levetid, mens kjemiske og genetiske metoder for sterilisering av ormer tilbys å redusere kostnadene betydelig, er det viktig å merke seg at begge kan påvirke levetiden direkte. For eksempel er eksponering for FUDR tidligere rapportert å påvirke både levetid og termotolerans45. Og mens glp-4 (bn2) mutanten i seg selv ikke har noen direkte effekter på levetiden, er vekst ved 25 ° C en mild varmespenning33,34 og kan dermed påvirke levetiden2. Det finnes andre metoder for sterilisering av C. elegans, inkludert auxinmediert sterilitet78 eller alternative temperaturfølsomme sperm-mangelfulle mutanter79. Imidlertid har alle metoder noen forbehold, og det bør tas hensyn til å utnytte den minst skadelige analysen for hvert laboratoriums vitenskapelige behov. En siste begrensning av levetidsstudier er potensiell variabilitet som kan oppstå på grunn av lave utvalgsstørrelser eller bare ved en objektiv feil av etterforskeren. Dette kan omgås ettersom ny teknologi er født i automatiserte levetidsteknologier80, men igjen er disse systemene kostbare og krever noe ingeniør- og beregningsutstyr og ferdigheter. Til syvende og sist er samlingen av metoder som tilbys her et pålitelig sett med verktøy som raskt kan tilpasses og læres i nesten hvilken som helst institusjon og gir et solid grunnlag for aldringsbiologi.

Siden tidspunktet for utgivelsen av 'The genetics of Caenorhabditis elegans', en av de mest innflytelsesrike artiklene av Sydney Brenner i 1974, har denne mikroskopiske ormen blitt ansett som et fremragende modellsystem for å studere biologiske mysterier1. I 1977 publiserte Michael R. Klass metoden for å måle levetiden til C. elegans og etablerte dette modellsystemet for å studere aldring2. Undersøkelsen for å forstå forholdet mellom stress og lang levetid har startet med identifisering av en enkelt mutasjon i alder-1-genet, noe som resulterte i en levetidsforlengelse i C. elegans3. Videre har moderne studier identifisert andre levetidsøkende mutasjoner, som avslørte langlivede mutante ormer som utviser økt motstand mot stress 4,5,6. Med sine mange fordeler, inkludert kort levetid, enkelt vedlikehold, fullstendig sekvensert genom som inneholder homologi til omtrent to tredjedeler av alle menneskelige sykdomsfremkallende gener, tilgjengelighet og enkel bruk av RNA-interferens (RNAi) biblioteker og fysiologisk likhet med mennesker 7,8,9, har C. elegans raskt blitt vedtatt som en fremragende modell for stress og aldringsbiologi.
Kanskje de største verktøyene til C. elegans er dens ekstremt lave vedlikeholdskostnader, enkel eksperimentering og mangfoldet av genetiske verktøy som er tilgjengelige for studier. C. elegans dyrkes vanligvis på et solid agarmedium med en E. coli matkilde. To vanlige E. coli-stammer er standard OP50, en B-stamme som kanskje er den mest brukte10, og HT115, en K-12-stamme som primært brukes til RNAi-eksperimenter11,12. HT115 K-12-stammen bærer en delesjon i RNAIII RNase, en mutasjon som er avgjørende for RNAi-metoder, hvor plasmider som uttrykker dsRNA som tilsvarer individuelle C. elegans-gener, brukes. DsRNA-fôringsvektorene tillater robust knockdown av C. elegans-gener uten behov for komplekse kryss eller genomredigering, da bakterier som bærer disse plasmidene kan mates direkte til nematoder. Tusenvis av disse bakterielle RNAi-vektorene finnes i HT115-bakgrunnen, inkludert det mest populære Vidal RNAi-biblioteket med >19 000 individuelle RNAi-konstruksjoner13 og Ahringer RNAi-biblioteket med 16 757 RNAi-konstruksjoner14. Imidlertid har OP50 og HT115 bakterielle dietter store forskjeller i metabolsk profil, inkludert forskjeller i vitamin B1215,16. Derfor anbefales det å utføre alle eksperimenter på en enkelt bakteriekilde, om mulig, for å unngå gen-diett-interaksjoner som kan introdusere flere forstyrrende faktorer som tidligere beskrevet 17,18,19. På grunn av sin letthet opprettholdes dyr på OP50 for alle eksperimentelle forhold beskrevet her, men alle eksperimenter utføres på HT115 som tidligere beskrevet20. Kort fortalt opprettholdes dyr ved OP50 og overføres til HT115 etter synkronisering (etter bleking) for konsistens mellom RNAi vs. ikke-RNAi eksperimenter. Alternativt kan en RNAi-kompetent OP50-stamme som bærer en lignende sletting av RNAIII RNase funnet i E. coli K12 HT115-stammen også brukes21.
Kanskje en stor begrensning for RNAi eksperimenter i C. elegans er bekymringen for knockdown effektivitet. Mens knockdown effektivitet kan valideres via qPCR eller western blotting, krever disse dyrt utstyr og reagenser og er begrenset til bulkanalyse. Dette er enda mer av en bekymring å se på bestemte celler, for eksempel nevroner, som er ildfaste (mindre følsomme) for RNAi. Mens RNAi-effektiviteten i spesifikke celler kan forbedres via overekspresjon av SID-1, transmembranproteinet som er essensielt for dsRNA-opptak22, er dette fortsatt begrenset til de celletypespesifikke uttrykksmønstrene til promotorene som brukes til disse konstruksjonene, og dermed er gen knockouts og mutasjoner det mest idiotsikre middelet for å tømme genfunksjoner. Utover RNAi-mediert knockdown er C. elegans også svært mottagelige for genomredigering med CRISPR-baserte strategier 23,24,25 og transgen konstruksjonsoveruttrykk gjennom mikroinjeksjoner, med mulighet for å integrere transgene konstruksjoner gjennom bestråling eller transposonbasert integrasjon 26,27,28,29 . Imidlertid krever disse metodene dyrt mikroinjeksjonsutstyr, og de høye kostnadene ved guide RNA eller Cas9 enzym kan forby disse metodene i institusjoner med begrenset finansiering. I stedet er tusenvis av transgene linjer og mutanter lett tilgjengelige for noen få dollar både på Caenorhabditis Genetics Center (CGC) og National Bioresource Project (NBRP). NBRP tilbyr isolerte mutanter for et stort antall C. elegans gener, inkludert publiserte og derfor verifiserte mutantstammer, mutanter avledet fra pilotprosjekter og mutanter som ennå ikke er karakterisert. I motsetning til dette er CGC et depot av for det meste publiserte og etablerte C. elegans linjer fra forskningsmiljøet. Begge sender stammer over hele verden til svært rimelige priser og tilbyr et bredt utvalg av alternativer for de med begrenset kapasitet til å syntetisere stammer internt.
Her tilbys en kuratert metodesamling, som sannsynligvis vil være de laveste kostnadsmetodene for å analysere levetid og helsespan i C. elegans. Alle metodene som presenteres her krever billig utstyr og forsyninger, og bruker bare stammer som er lett tilgjengelige fra CGC. Kanskje mest uoverkommelig for levetid og overlevelsesanalyser i C. elegans er kostnaden for Nematode Growth Media (NGM) plater. Siden C. elegans er hermafroditter og selvbefruktning, krever standard overlevelsesanalyser at voksne dyr kontinuerlig flyttes bort fra deres avkom for å unngå forurensning fra avkom. Ikke bare er denne prosessen tidkrevende, den kan bli dyr på grunn av nødvendigheten av omtrent 100 plater per tilstand for å kjøre en enkelt levetidsanalyse. Her er to alternativer gitt: utnyttelse av den temperaturfølsomme germline-mindre mutanten, glp-4 (bn2), eller kjemisk sterilisering ved bruk av 5-fluoro-2'-deoksyuridin (FUDR). glp-4 koder for en valylaminoacyl-tRNA-syntetase, og den temperaturfølsomme glp-4(bn2) er reproduktivt mangelfull ved restriktive temperaturer på grunn av redusert proteinoversettelse30,31. FUDR er en robust metode for kjemisk sterilisering av C. elegans ved å forhindre DNA-replikasjon, og dermed hemme reproduksjon32. Selv om FUDR kan være uoverkommelig dyrt for noen laboratorier, er det bare en liten mengde som kreves for å sterilisere ormer kjemisk, og stabiliteten i pulverform kan gjøre det mulig for de fleste grupper. Å bruke den temperaturfølsomme glp-4 (bn2) mutanten er absolutt det billigste alternativet, da det eneste kravet er en inkubator for å skifte dyrene til de restriktive 25 ° C; Det skal imidlertid bemerkes at vekst ved 25 °C kan forårsake mild varmestress33,34. Uansett metode kan bruk av sterile dyr redusere kostnadene for forbruksvarer som kreves for aldersrelaterte analyser.
For å studere aldring er standard levetidsanalyser konvensjonelle, da paradigmer som endrer levetiden har direkte innvirkning på aldring. Målinger av helsespan og stresstoleranse gir imidlertid ytterligere informasjon om organismenes helse. Her tilbys flere metoder for å måle healthspan: 1) fecundity som et mål på reproduktiv helse; 2) brødstørrelse som et mål på utviklingshelse og levedyktighet av lagt avkom; og 3) lokomotorisk oppførsel som et mål på muskelfunksjon og motilitet, som begge er direkte korrelert med aldring. I tillegg tilbys analyser av stresstoleranse: overlevelse til ER-stress, mitokondrielt / oksidativt stress og termisk stressoverlevelse. Faktisk viser dyr med økt motstand mot ER-stress35,36, mitokondrielt stress37 og termisk stress38 økt levetid. ER-stress påføres ved å utsette C. elegans for tunicamycin, som blokkerer N-bundet glykosylering og forårsaker akkumulering av feilfoldede proteiner39. Mitokondrielt/oksidativt stress induseres ved eksponering for paraquat, som induserer superoksiddannelse spesielt i mitokondriene40. Varmestress påføres ved inkubering av dyr ved 34-37 °C 33,41. Alle analysene som er beskrevet her, kan utføres med minimalt utstyr og midler, og tilbyr en rekke verktøy for å studere aldring i ulike grupper.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>APEX IPTG</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>18-242</td>
			<td>for RNAi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>90000-764</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Peptone</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97064-330</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-904</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76345-522</td>
			<td>for RNAi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>80057-932</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH1115-1LP</td>
			<td>solvent for drugs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95020-778</td>
			<td>for LB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-132</td>
			<td>for NGM plates, M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraquat</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>36541</td>
			<td>for oxidative/mitochondrial stress</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-566</td>
			<td>for bleach soluton</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate dibasic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM-PX1570-2</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM-PX1565-5</td>
			<td>for M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S7E Dissecting Scope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>10450840</td>
			<td>Standard dissecting microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM-SX0420-5</td>
			<td>for NGM plates, M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hypochlorite</td>
			<td>VWR</td>
			<td>RC7495.7-32</td>
			<td>for bleach solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>71003-472</td>
			<td>for M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetracycline hydrochloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-638</td>
			<td>for RNAi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tunicamycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7765-50MG</td>
			<td>for ER stress</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

surveying low-cost methods to measure lifespan and healthspan in caenorhabditis elegans

Oppdagelsen og utviklingen av Caenorhabditis elegans som modellorganisme var innflytelsesrik i biologi, spesielt innen aldring. Mange historiske og moderne studier har identifisert tusenvis av levetidsendrende paradigmer, inkludert genetiske mutasjoner, transgent genuttrykk og hormesis, en gunstig, lavverdig eksponering for stress. Med sine mange fordeler, inkludert kort levetid, enkelt og rimelig vedlikehold, og fullt sekvensert genom med homologi til nesten to tredjedeler av alle menneskelige gener, har C. elegans raskt blitt vedtatt som en fremragende modell for stress og aldringsbiologi. Her kartlegges flere standardiserte metoder for å måle levetid og helse som enkelt kan tilpasses nesten alle forskningsmiljøer, spesielt de med begrenset utstyr og midler. Den utrolige nytten av C. elegans er omtalt, og fremhever kapasiteten til å utføre kraftige genetiske analyser i aldrende biologi uten behov for omfattende infrastruktur. Til slutt diskuteres begrensningene i hver analyse og alternative tilnærminger for vurdering.

C. elegans er en utmerket modellorganisme for aldringsforskning på grunn av at et stort flertall av aldringsmekanismer blir bevart hos mennesker. Det er viktig at de har svært lave kostnader i vedlikehold og eksperimentering med minimale krav til utstyr og forbruksvarer, noe som gjør dem til et ettertraktet modellsystem for institusjoner med begrensede midler. Videre gjør en mengde enkle analyser med grunne læringskurver dem til et utmerket system for selv den yngste etterforskeren med liten eller ingen erfaring. Alle disse faktorene kombinert med den kraftige genetikken til C. elegans , inkludert enkel genomredigering, tusenvis av tilgjengelige mutanter og transgene dyr til nominelle kostnader, og tilgjengelige RNAi-biblioteker for genetisk knockdown av praktisk talt alle gener, gjør dem til et ideelt system for lavere institusjoner. Her kartlegges noen av de laveste kostnadsmetodene for å studere aldring i C. elegans , med hovedfokus på analyser med minimal utstyr og forbrukskostnader, samt grunne læringskurver. Faktisk ble hele protokollene og datainnsamlingen skrevet / utført av juniorforskere med <5 måneders forskningserfaring, for det meste studenter.
Levetidsstudier i C. elegans er veldig enkle på grunn av dyrs korte levetid, alt fra 14-20 dager. Det er viktig at levetidsanalyser er svært standardiserte og krever bare en inkubator, et standard disseksjonsmikroskop, en standard ormplukk og forbruksvarer for å forberede NGM-agarplater. Kanskje det mest kostnadsoverkommelige aspektet ved levetidsmålinger i C. elegans er forbruksvarer som kreves. Dette er fordi C. elegans er hermafroditter som selvbefrukter; Derfor må voksne som spores for levetidsanalyser flyttes bort fra avkom daglig. Dyr kan imidlertid steriliseres ved å utsette dem for FUDR eller bruke mutanter, for eksempel den temperaturfølsomme germline-less glp-4 (bn2) mutanten dyrket ved uoverkommelige 25 ° C for å redusere mengden forbruksvarer som kreves 30,31,32. Her ble levetidsanalyser utført med FUDR eller med glp-4 (bn2) germline-mindre mutanter, som viser lignende resultater som standard levetid utført på ikke-sterile dyr. Selv om levetiden til villtype ikke er identisk på grunn av effekten av FUDR45 eller vekst ved 25 °C på levetid2, viser det kortvarige hsf-1 knockdown-dyret pålitelig en signifikant reduksjon i levetiden for alle forhold (figur 1). hsf-1 koder for varmesjokkfaktor-1-transkripsjonsfaktoren, som er involvert i reguleringen av termisk stressrespons, og dens knockdown resulterer i en betydelig reduksjon i levetiden38,46.
Mens lang levetid er en viktig faktor å vurdere i aldringsbiologi, korrelerer ofte ikke lang levetid med økt helse, selv i C. elegans47. Som en komplementær tilnærming tilbyr vi derfor flere metoder for å måle organismenes helse, inkludert reproduktiv helse, bevegelsesadferd og stressmotstandskraft. Reproduktiv helse kan måles på en av to måter. For det første vil målinger av eggtelling gi en direkte måling av hvor mange egg som legges av en enkelt selvbefruktende hermafroditt. Men siden dyr produserer flere oocytter enn sædceller, legges også noen ubefruktede egg som aldri ville produsere levedyktig avkom, 48. Derfor, for å få en bedre forståelse av den sanne reproduksjonsevnen til et dyr, gir målinger av brødstørrelsen et mål på hvor mange levedyktige avkom som produseres. Ofte kan økt stressmotstand faktisk redusere reproduksjonsevnen, potensielt på grunn av den iboende effekten av opplevd stress på reproduksjon49. Tilsvarende er en signifikant reduksjon i både antall egg lagt og brødstørrelse funnet hos hsf-1 overuttrykksdyr sammenlignet med villtypekontroller (figur 2A, B). Faktisk viser noen hsf-1 overuttrykksdyr full sterilitet, noe som gir bevis på at reproduktiv helse kan være omvendt korrelert med lang levetid.
Mens reproduktiv helse er viktig for å forstå germline helse, funksjonell meiose og reproduksjonskapasitet, er det generelt ingen direkte sammenheng mellom lang levetid og brødstørrelse50. Således, som en komplementær tilnærming, tilbys lokomotorisk oppførsel som en gullstandardmetode for å analysere C. elegans healthspan under aldring51. Det er mange metoder for å måle bevegelsesadferd, men de fleste metoder krever sofistikerte kameraer, sporingsprogramvare eller dyre kjemikalier. I motsetning til dette krever thrashing-analyser praktisk talt ikke noe utstyr utover hva et standard C. elegans-laboratorium er utstyrt med: dissekering av mikroskop, ormplukk, pipette og forbruksvarer for å lage NGM-agarplater. Thrashing priser gir en pålitelig metode for å måle healthspan under aldring, målt ved en signifikant reduksjon i thrashing hos gamle dyr sammenlignet med unge dyr (figur 2C).
Til slutt er overlevelse til stressanalyser en ekstra fysiologisk måling av motstandskraft. Kapasiteten til å aktivere stressresponser avtar generelt under aldringsprosessen, noe som gjør dyrene mindre motstandsdyktige og mer følsomme for stress. Dermed kan stressmotstandskraft brukes som en pålitelig proxy for organismenes helse. Her tilbys metoder for å kartlegge følsomhet for 1) ER-stress som respons på tunicamycineksponering, et kjemisk middel som blokkerer N-bundet glykosylering og resulterer i akkumulering av feilfoldede proteiner i ER; 2) mitokondrielt / oksidativt stress gjennom eksponering for paraquat, et kjemisk middel som induserer superoksiddannelse i mitokondrier; og 3) termisk stress gjennom eksponering for forhøyede temperaturer. For tunicamycin og paraquat analyser, er stoffet innlemmet i NGM-agar plate under plateproduksjon. For høye konsentrasjoner av tunicamycin utvikler avkom generelt ikke, og steriliseringsteknikker trenger derfor ikke å brukes. Protokollen som presenteres her anbefaler 25 ng/μL som endelig konsentrasjon av tunicamycin, men for de med begrensede midler viser 10 ng/μL også en signifikant reduksjon i overlevelse (figur 3A). Begge konsentrasjonene begrenser avkommets utvikling, og dermed er det ikke nødvendig med steriliseringsmetoder, selv om DMSO-kontrollen vil kreve en steriliseringsteknikk eller bevegelse av dyr på nye plater. Dette skyldes at tunicamycintoksisitet forhindrer utvikling av avkom, men DMSO er praktisk talt ikke-giftig, noe som gjør at avkom kan utvikle seg fullt ut når det dyrkes på tunicamycin.
For paraquat-analyser er det nødvendig med enten en steriliseringsteknikk eller bevegelse av dyr, da paraquatbehandling ikke forhindrer avkom i å utvikle seg til voksen alder. Høye nivåer av paraquat (4 mM) forkorter levetiden betydelig, mens lave nivåer av paraquat (0,25 mM) øker levetiden på grunn av en hormetisk effekt (figur 3B), i samsvar med tidligere publiserte resultater52. Til slutt krever termotoleransanalyser bare en inkubator som kan nå 30-37 ° C, og det kreves ingen ekstra reagenser. Overekspresjon av hsf-1 øker termotoleransen ved 37 °C (figur 3C) som tidligere publisert53. Men som andre har vist tidligere og fra dagens data, er det store problemet med termotoleransanalyser deres variabilitet. Mange faktorer kan bidra til variabilitet innen termotoleransanalyser, inkludert forskjeller mellom inkubatorer og tiden dyr bruker utenfor inkubatoren mens de scorer termotolerans hver time. For en grundig retningslinje for termotolerans, se referansen 41.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64091/64091fig01.jpg"> Figur 1: Sammenligning av levetidsmålinger med og uten sterilisering. (A) Levetid for villtype N2-nematoder dyrket på NGM-agarplater sådd med tom vektor (ev) eller hsf-1 RNAi-bakterier ved 20 °C. Dyr ble flyttet bort fra avkom på dagene 1, 3, 5 og 7 i voksen alder. (B) Levetid for villtype N2 nematoder dyrket på NGM-agar-FUDR-plater sådd med tom vektor (ev) eller hsf-1 RNAi bakterier ved 20 ° C. Dyr ble dyrket til voksen alder på standard ev eller hsf-1 RNAi-plater, og deretter flyttet til FUDR-plater på dag 1 i voksen alder. (C) Levetiden til glp-4 (bn2) mutante dyr dyrket på NGM-agarplater sådd med tom vektor (ev) eller hsf-1 RNAi ved 25 ° C. For alle forhold ble dyrene scoret for død hver 2. dag til alle dyrene ble registrert som døde eller sensurert. Dyr med bagging, fremspring eller eksplosjon av vulva, eller de som krøp opp sidene av platene og desiccated ble sensurert. All statistikk ble utført ved hjelp av Log-Rank Mantel-Cox testing og finnes i tabell 2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64091/64091fig01large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64091/64091fig02.jpg"> Figur 2: Eggtelling, stamfiskstørrelse og juling som målinger av healthspan. (A) Thrashing-analyser ble utført på glp-4 (bn2) mutante dyr dyrket på NGM-agarplater sådd med tom vektor ved 25 ° C på dag 1 (blå), dag 4 (rød) og dag 9 (grønn) dyr. Thrashing ble scoret i dyr plassert i M9-løsning på en NGM-agarplate, video spilt inn ved hjelp av et standard smarttelefonkamera montert på et okular av et standard dissekeringsomfang, og thrashing scoret i sakte film for nøyaktighet. n = 15 dyr per tilstand. (B) Eggtellinger ble målt i villtype N2 (blå) og sur-5p::hsf-1 (røde) dyr. Dyrene ble dyrket ved 20 °C og flyttet på ferske tallerkener, og eggene ble telt hver 12. Totalt antall egg som ble lagt ble summert. n = 7 dyr for villtype og 9 dyr for sur-5p::hsf-1. (C) Stamfiskanalyser ble målt på de samme dyrene som (B) hvor egg ble dyrket ved 20 °C i 2 dager for å tillate klekking, og alle klekkede egg ble talt. = p < 0,001 beregnet ved hjelp av ikke-parametrisk Mann-Whitney-testing. Hver prikk representerer et enkelt dyr, og linjer representerer median og interkvartilt område. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64091/64091fig02large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64091/64091fig03.jpg"> Figur 3: Stressmotstandskraft som en proxy for organismenes helse. (A) Overlevelsesanalyse av N2-dyr dyrket på den tomme vektoren RNAi-bakterier ved 20 ° C. Dyrene ble flyttet til plater som inneholdt enten 1 % DMSO, 10 ng/μL tunicamycin (TM) eller 25 ng/μL TM på dag 1 i voksen alder. (B) Overlevelsesanalyse av N2-dyr dyrket på den tomme vektoren RNAi-bakterier ved 20 °C. Dyr ble dyrket fra luken på plater som inneholdt enten vann, 0,25 mM paraquat (PQ) eller 4 mM PQ. For AB ble dyr scoret for død hver 2. dag til alle dyrene ble registrert som døde eller sensurert. Dyr med bagging, fremspring eller eksplosjon av vulva, eller de som krøp opp sidene av platene og desiccated ble sensurert. All statistikk ble utført med Log-Rank Mantel-Cox testing (tabell 2). (C) Samlede data for alle 37 °C termotoleransanalyser for villtype N2-dyr versus overekspresjon av hsf-1 (sur-5p::hsf-1). Data er representert som prosent i live på tid = 9 timer av en termotoleransanalyse, med hver linje som representerer et matchet eksperiment utført samme dag. Dyrene ble dyrket på den tomme vektoren RNAi-bakterier ved 20 °C og flyttet til 37 °C på dag 1 i voksen alder for analyse. n = 60 dyr per stamme per replikasjon. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64091/64091fig03large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagent</td>
			<td colspan="3">Oppskrift</td>
		</tr><tr><td>Blekemiddel løsning</td>
			<td colspan="3">1,8 % (v/v) natriumhypokloritt, 0,375 M KOH</td>
		</tr><tr><td>Carbenicillin</td>
			<td colspan="3">100 mg/ml stamløsning (1000x) i vann. Oppbevares ved 4 °C i opptil 6 måneder eller -20 °C for langtidslagring</td>
		</tr><tr><td>FUDR</td>
			<td colspan="3">10 mg/ml oppløsning i vann. Oppbevares ved -20 °C.</td>
		</tr><tr><td>IPTG</td>
			<td colspan="3">1 M løsning i vann.</td>
		</tr><tr><td>Lysogeni Kjøttkraft (LB)</td>
			<td colspan="3">I denne protokollen ble kommersiell LB brukt (se Materialtabell), men alle standard LB hjemmelagde oppskrifter med Bacto-trypton, gjærekstrakt og NaCl er tilstrekkelige.</td>
		</tr><tr><td>M9-løsning</td>
			<td colspan="3">22 mM KH2PO4 monobasisk, 42,3 mM Na2HPO4, 85,6 mM NaCl, 1 mM MgSO4</td>
		</tr><tr><td>Nematode Vekst Media (NGM)</td>
			<td colspan="3">1 mM CaCl2, 5 μg/ml kolesterol, 25 mM KPO4 pH 6,0, 1 mM MgSO4, 2 % (w/v) agar, 0,25 % (w/v) Bacto-Peptone, 51,3 mM NaCl</td>
		</tr><tr><td>NGM RNAi plater</td>
			<td colspan="3">1 mM CaCl2, 5 μg/ml kolesterol, 25 mM KPO4 pH 6,0, 1 mM MgSO4, 2 % (w/v) agar, 0,25 % (w/v) Bacto-Peptone, 51,3 mM NaCl, 1 mM IPTG, 100 μg/ml karbenicillin/ampicillin. Oppbevares ved 4 °C i mørke i opptil 3 måneder</td>
		</tr><tr><td>NGM RNAi DMSO</td>
			<td colspan="3" rowspan="2">1 mM CaCl2, 5 μg/ml kolesterol, 25 mM KPO4 pH 6,0, 1 mM MgSO4, 2 % (w/v) agar, 0,25 % (w/v) Bacto-Peptone, 51,3 mM NaCl, 1 mM IPTG, 100 μg/ml karbenicillin/ampicillin; 1% DMSO</td>
		</tr><tr><td>(kontroll for tunikamycin)</td>
		</tr><tr><td>NGM RNAi TM</td>
			<td colspan="3">1 mM CaCl2, 5 μg/ml kolesterol, 25 mM KPO4 pH 6,0, 1 mM MgSO4, 2 % (w/v) agar, 0,25 % (w/v) Bacto-Peptone, 51,3 mM NaCl, 1 mM IPTG, 100 μg/ml karbenicillin/ampicillin; 1% DMSO, 25 ng / μL tunicamycin</td>
		</tr><tr><td>Paraquat</td>
			<td colspan="3">400 mM løsning i vann – bør tilberedes fersk</td>
		</tr><tr><td>Tetracycline</td>
			<td colspan="3">10 mg/ml stamløsning (500x) i 100 % etanol. Oppbevares ved -20 °C</td>
		</tr><tr><td>Tunicamycin</td>
			<td colspan="3">2,5 mg/ml stamløsning i 100 % DMSO. Oppbevares ved -80 °C for langtidsoppbevaring. Dette er en 100x løsning (25 ng / μL arbeidsløsning)</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 1. Oppskrifter for reagenser og medier for protokoller.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Tilsvarende figurpanel</td>
			<td colspan="2">Stamme, behandling</td>
			<td>Median levetid</td>
			<td># Dødsfall/# Totalt</td>
			<td>p-verdi (Log-Rank)</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">1A</td>
			<td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C</td>
			<td>17</td>
			<td>74/120</td>
			<td>--</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, HSF-1 RNAi, 20 °C</td>
			<td>11</td>
			<td>65/120</td>
			<td><0,001</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">1B</td>
			<td colspan="2">N2, vektor RNAi, FUDR, 20 °C</td>
			<td>19</td>
			<td>120/120</td>
			<td>--</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, HSF-1 RNAi, FUDR, 20 °C</td>
			<td>11</td>
			<td>116/120</td>
			<td><0,001</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">1C</td>
			<td colspan="2">N2, glp-4(bn2), vektor RNAi, 25 °C</td>
			<td>13</td>
			<td>115/121</td>
			<td>--</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, glp-4(bn2), hsf-1 RNAi, 25 °C</td>
			<td>4</td>
			<td>120/120</td>
			<td>< 0,001</td>
		</tr><tr><td rowspan="3">2A</td>
			<td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C, 1 % DMSO</td>
			<td>19</td>
			<td>85/120</td>
			<td>--</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C, 10 ng/μL tunikamycin</td>
			<td>15</td>
			<td>109/120</td>
			<td><0,001</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C, 25 ng/μL tunikamycin</td>
			<td>12</td>
			<td>117/120</td>
			<td><0,001</td>
		</tr><tr><td rowspan="3">2B</td>
			<td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C</td>
			<td>19</td>
			<td>84/120</td>
			<td>--</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C, 0,25 mM paraquat</td>
			<td>24</td>
			<td>91/120</td>
			<td><0,001</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C, 4 mM paraquat</td>
			<td>6</td>
			<td>50/120</td>
			<td><0,001</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 2. Statistikk for levetid og stressmotstandskraft.

Watch this Scientific Journal Video about Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans fungerer som et utmerket modellsystem med robuste og rimelige metoder for å kartlegge helsespan, levetid og motstandskraft mot stress.

Kartlegge lavkostnadsmetoder for å måle levetid og helse i Caenorhabditis elegans

The discovery and development of Caenorhabditis elegans as a model organism was influential in biology, particularly in the field of aging. Many ...

Denne protokollen presenterer de laveste kostnadene og laveste teknologiske metodene for å betjene aldring i sjøeleganer. En innflytelsesrik modellorganisme i aldringsbiologi. Den største fordelen med disse metodene er enkel implementering, ved hjelp av lavpris utstyr og materiale.Gjøre dem mottagelige for enhver forsker uavhengig av erfaring eller tilgjengelig finansiering. Som en gammel aldring studier er det naturlig variasjon i helse i befolkningen. Derfor er det viktig at eksperimenter utføres på sunne, velfødde og tett synkroniserte dyr.For å sikre rip funksjonshemming Begynn forberedelsen av en liter nematode vekstmedier eller NGM skrueplate. Tilsett 2,5 gram pepton, 3,0 gram natriumklorid og 20 gram skrue i en liter kolbe med rørstang og tilsett destillert vann til et endelig volum på 970 milliliter. Steriliser NGM-skrueløsningen i en liter kolbe ved hjelp av en standard autoklav eller mediesterilisator.Og la løsningen røre til den avkjøles til 60 til 75 grader Celsius. Mens løsningen avkjøles, varme et perlebad til 65 til 70 grader Celsius. Når NGM-skrueløsningen avkjøles til 60 til 75 grader Celsius.Tilsett flytende tilsetningsstoffer og la løsningen blandes helt i fem minutter. Senk deretter kolben i et perlebad ved 65 til 70 grader Celsius for å forhindre at mediet størkner mens det helles i platen. Pipette ni til 11 milliliter av løsningen i hver 60 milliliter plate.Når du er ferdig, plasser pipetten tilbake i den oppvarmede løsningen for å opprettholde temperaturen og for å forhindre at medier stivner i pipetten. Gjenta prosedyren for alle platene og la NGM en plate stivne over natten. Når de er størknet, bruk dem til såplater med bakterier eller oppbevar platene i forseglede beholdere i opptil tre måneder ved fire grader Celsius for å synkronisere ormene via bleking.Samle nematodene ved å helle en liten mengde M9-løsning på en tallerken som inneholder ormene uten å overfylle petriskålen. Virvle deretter M nine-løsningen forsiktig for å løsne ormer av bakterieplenene. Deretter samler du voksne gravid ormer i et 15 milliliter rør med en serologisk pipette.Unngå å stikke hull i skruen med pipettespissen. Pellet dyrene ved centr i 30 sekunder ved 1100 ganger G, og aspirer supernatanten. Tilsett fem milliliter av den nytilberedte blekeløsningen til ormpelleten, og kontroller ormene under et dissekeringsmikroskop hvert par minutter sammen med intermitterende kraftig risting til alle de voksne ormlegemene er oppløst og bare egg er igjen i blandingen.Deretter pellet eggene ved å spinne ned eggblekemiddelblandingen i 30 sekunder ved 1100 ganger G og aspirer blekeløsningen. Vask deretter pelleterte egg ved å tilsette opptil 15 ml M9-løsning og invertere røret fire eller fem ganger for å spre eggene og løsningen. Igjen, sentrifuger røret i 30 sekunder ved 1100 ganger G for å pelletere eggene og aspirere M9-løsningen.Utfør vasken fire ganger for å eliminere blekemiddel fra eggblandingen. Etter fjerde vask sentrifusjonsaspirat M9-løsningen fra 100 mikroliter til to milliliter, avhengig av totalt antall ormer bleket. Rist eggene grundig for å bryte opp klumpene og sørg for at eggene er fullstendig resuspendert i M9-løsningen.Alternativt kan dyr være L en arrestert for en strammere tidsmessig synkronisering ved å legge til 10 til 12 ml M9-løsning til eggpelleten i et 15 milliliter krønikerør. La ormene spinne i en rotator i opptil 24 timer ved 20 grader Celsius. For å tilnærme egget eller L en konsentrasjon pipette fire mikroliter av eggblandingen på en NGM-plate sittende med bakterier.Deretter teller og beregner eggene som er tilstede per mikroliter media. Gjenta tellingen tre eller fire ganger for å forbedre tilnærmingen, basert på tilnærmingsplaten, riktig antall egg eller L-en arresterte dyr på NGM-skrueplaten sådd med valgte bakterier. For å måle lokomotivets oppførsel av ormene via juling.Flytt et lite antall dag en voksen ormer fra en NGM skrueplate på 10 til 20 mikroliter M9-løsning under et dissekeringsomfang. Fokuser deretter på en orm om gangen og tell antall ganger prøven bytter fra en konkav til konveks formasjon på 15 sekunder. Bruk en håndteller og en timer og gjenta prosedyren for 10 til 15 ormer.Alder ut ormene til ønsket alder og gjenta thrashing målinger i alle ønskede aldre. Som visualisert, slår eldre ormer med betydelig lavere hastigheter. For mengde- og fruktbarhetsmålinger.I 10 til 15 Caenorhabditis elegans ormer, enkelt ut L fire ormer i en egen NGM skrueplate sådd med bakterier av valget. La dyrene vokse over natten ved 20 grader Celsius og sørg for at en nylig sådd gruppe plater er klar til neste dag. For å måle mengden egg lagt av Caenorhabditis elegans overføre de voksne ormene til et friskt NGM skrueblad frøet med at plyndrede bakterier hver 12 til 24 timer i syv til åtte dager eller til eggene ikke lenger er synlige og telle antall egg lagt på platene.For å måle brødstørrelsen til Caenorhabditis elegans Overfør de voksne ormene på en fersk NGM-skrueplate sådd med bakterier hver 12. til 24. time, eller syv til åtte dager eller til avkommet ikke lenger er synlig. Hold alle platene som inneholder egg ved 20 grader Celsius. To dager etter overføring av ormer.Tell det utviklede avkommet på tallerkenen. Tell alle levende og utviklende ormer på L fire trinn eller tidligere for å sikre at F-generasjonen ikke forvirrer resultatene. Fjern alle ormene fra tallerkenen etter hvert som de telles.Vedlikehold platene i ytterligere en til to dager før du scorer dem igjen for å sikre at dyr med forsinket klekking eller utvikling ikke blir savnet. Effekten av steriliseringsmetoden på levetiden til de ville type N2-nematodene viste at endringer i levetiden til ormene som ble dyrket på NGM-skrueplatene, lignet på ormer dyrket på NGM-auger FUDR-platene eller glp fire BN2-mutante dyr dyrket på NGM-skrueplatene. Det kortvarige HSF one knockdown-dyret viste en betydelig nedgang i levetiden for alle forhold.En betydelig nedgang i antall lagt egg og brødstørrelse ble funnet i HSF en over uttrykk dyr sammenlignet med villtype kontroller. Noen HSF en over uttrykk dyr viste full sterilitet indikerer at reproduktiv helse kan være omvendt korrelert med lang levetid. Thrashing rate ga en pålitelig metode for å måle helse under aldring målt ved en signifikant reduksjon i thrashing hos gamle dyr sammenlignet med de unge.Overlevelse til stress er pålitelige analyser for måling av organismehelse, tunicamycin som forårsaker retikulumstress resulterte i redusert levetid uavhengig av konsentrasjon sammenlignet med DMSO-kontroll. De høye nivåene av paraquat forkortet levetiden betydelig, mens lave konsentrasjoner av paraquat økte levetiden på grunn av hormetisk effekt. I termotoleranseanalysene økte overuttrykket av HSF termotoleransen ved 37 grader Celsius For alle levetids- og aldringseksperimenter.Det er viktig å huske at steriliseringsteknikker kan ha en pleiotropisk effekt på organismenes helse, noe som påvirker resultatene. Det finnes mange ekstra og komplementære tilnærminger for å måle helsespenn hvis utstyr og infrastruktur er tilgjengelig, inkludert målinger av transkripsjon, oversettelsesproteinaggregering, organell, morfologi og metabolske funksjoner.

Research

JoVE Journal

Genetics

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

Design and Use of a Low Cost, Automated Morbidostat for Adaptive Evolution of Bacteria Under Antibiotic Drug Selection

Design og bruk av en lav pris, Automated Morbidostat for Adaptive Evolution of Bakterier Under Antibiotika Drug Selection

We describe a low cost, configurable morbidostat for characterizing the evolutionary pathway of antibiotic resistance. The morbidostat is a bacterial ...

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic Random Mutagenese Bruke Histone-miniSOG i<em&gt; C. elegans</em

Forward genetic screening in model organisms is the workhorse to discover functionally important genes and pathways in many biological processes. In most ...

Quantification of Information Encoded by Gene Expression Levels During Lifespan Modulation Under Broad-range Dietary Restriction in C. elegans

Quantification of Information Encoded by Gene Expression Levels During Lifespan Modulation Under Broad-range Dietary Restriction in C. elegans

Kvantifisering av informasjonen kodet av Gene Expression nivåer under levetid modulering Under bredt kosttilskudd restriksjon i C. elegans

Sensory systems allow animals to detect, process, and respond to their environment. Food abundance is an environmental cue that has profound effects on ...

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

Rundormer Caenorhabditis Elegans - en allsidig i Vivo modell å studere vert-mikrobe interaksjoner

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the ...

Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans

Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans

Manipulering av Ploidy i Caenorhabditis elegans

Mechanisms that involve whole genome polyploidy play important roles in development and evolution; also, an abnormal generation of tetraploid cells has ...

The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan

The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan

Metoden sett replika: En høy gjennomstrømming tilnærming til kvantitativt mål Caenorhabditis elegans levetid

The Replica Set method is an approach to quantitatively measure lifespan or survival of Caenorhabditis elegans nematodes in a high-throughput manner, thus ...

Culture and Assay of Large-Scale Mixed-Stage Caenorhabditis elegans Populations

Culture and Assay of Large-Scale Mixed-Stage Caenorhabditis elegans Populations

Kultur og analyse av storskala blandet-stage Caenorhabditis elegans populasjoner

Caenorhabditis elegans (C. elegans) has been and remains a valuable model organism to study developmental biology, aging, neurobiology, and genetics. The ...

Measuring Caenorhabditis elegans Sensitivity to the Acetylcholine Receptor Agonist Levamisole

Measuring Caenorhabditis elegans Sensitivity to the Acetylcholine Receptor Agonist Levamisole

Måling av Caenorhabditis elegans Følsomhet overfor acetylkolinreseptoragonisten Levamisole

At the neuromuscular junction (NMJ), the binding of the excitatory neurotransmitter acetylcholine (ACh) to postsynaptic receptors leads to muscle ...

Measuring Embryonic Viability and Brood Size in Caenorhabditis elegans

Measuring Embryonic Viability and Brood Size in Caenorhabditis elegans

Måling av embryonal levedyktighet og brødstørrelse i Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is an excellent model organism for the study of meiosis, fertilization, and embryonic development. C. elegans exist as ...

Epigenetic Inheritance and ChIP in Caenorhabditis elegans

Analysis of Transgenerational Epigenetic Inheritance in C. elegans Using a Fluorescent Reporter and Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

RNAi Inheritance and ChIP in C. elegans (Video) | JoVE

Analyse av transgenerasjonell epigenetisk arv i C. elegans ved bruk av en fluorescerende reporter og kromatinimmunoprecipitasjon (ChIP)

Transgenerational epigenetic inheritance (TEI) allows the transmission of information through the germline without changing the genome sequence, through ...