Name: surveying low-cost methods to measure lifespan and healthspan in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2022-05-18T14:00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

G.G. stöds av T32AG052374 och R.H.S. stöds av R00AG065200 från National Institute on Aging. Vi tackar CGC (finansierat av NIH Office of Research Infrastructure Program P40 OD010440) för stammarna.

Författarna förklarar inga konkurrerande ekonomiska intressen.

Livslängd, som enklast definieras som livets varaktighet, är ett tydligt binärt fenomen i de flesta organismer - antingen lever en organism eller inte. Livslängden korrelerar emellertid inte alltid med en organisms hälsa. Till exempel är mitokondriella hormesismodeller där exponering för mitokondriell stress dramatiskt ökar livslängden i allmänhet några av de längsta levande djuren, men uppvisar hämmad tillväxt och minskad metabolisk funktion 37,54. På samma sätt uppvisar djur med hyperaktiva endoplasmatiska retikulumstressreaktioner också vissa beteenden och fenotyper som kan korreleras med minskad hälsa, trots att de dramatiskt har förbättrat proteinhomeostas och livslängd 36,49. Slutligen är många livslängdsparadigmer i modellorganismer inklusive ökad HSF-1-funktion55, ökad XBP-1-funktion56 och förändrad FoxO-signalering57 alla korrelerade med ökad cancerrisk, och det är obestridligt att förlängd livslängd inte är fördelaktigt om en organism är i en ständig kamp med cancer och andra hälsosjukdomar. Därför kan livslängden inte vara ett fristående mått i åldrandebiologin.
Således har begreppet healthspan varit ett växande fält inom åldrandebiologi. Healthspan, löst definierad som den livstid som man är frisk, är svårare att fastställa än livslängd. Men till skillnad från livslängd är begreppet "hälsa" komplicerat, eftersom det finns många olika avläsningar av organismens hälsa: på organismnivå finns det muskelfunktion / styrka, neuronal / kognitiv funktion, reproduktiv hälsa etc.; på cellulär nivå finns proteinhomeostas, lipidhomeostas, glukoshomeostas, metabolism etc. År 2014 har åldrande biologer definitivt karakteriserat biologiska kännetecken för åldrande med den strukturerade definitionen att det måste vara något som naturligt bryts ner under åldrandet och kan experimentellt förändras så att experimentell förvärring bör påskynda åldrandet och experimentell intervention bör sakta ner åldrandet. Dessa nio kännetecken för åldrande inkluderar genomisk instabilitet, telomerförstöring, epigenetiska förändringar, förlust av proteinhomeostas (proteostas), stamcellsutmattning, förändrad intercellulär signalering, mitokondriell dysfunktion, avreglerad näringsavkänning och cellulär åldrande58. Sedan dess hävdar många studier att andra faktorer bör inkluderas, inklusive extracellulära proteiner och systemisk fysiologi som immunitet och inflammation59. I slutändan kräver den komplexa definitionen av healthspan att organismens hälsa mäts med flera olika metoder.
Därför presenteras i detta manuskript flera metoder för att mäta olika aspekter av healthspan med hjälp av nematodmodellen, C. elegans. Vi analyserar lokomotoriskt beteende med hjälp av thrashing-analyser, reproduktiv hälsa med äggantal och yngelstorlek och känslighet för stress. Faktum är att lokomotoriskt beteende är en guldstandardmetod för att mäta healthspan, eftersom organismer uppvisar signifikant förlust av rörlighet och rörelse under åldrande51. Förlust av lokomotoriskt beteende kan tillskrivas flera kännetecken för åldrande, eftersom muskelfunktionen i C. elegans är beroende av korrekt proteostas60, mitokondriell dysfunktion61 och neuronmuskelsignalering62. Medan detta manuskript fokuserar på en mätning av lokomotoriskt beteende, är det viktigt att notera att många andra metoder finns, inklusive rörlighet hos djur på en fast agarplatta, svar på beröring51 och kemotaxianalyser63. Dessa metoder kräver dock i allmänhet mer sofistikerade inspelningsenheter, användning av maskspårningsprogramvara eller användning av dyra, farliga eller flyktiga kemikalier, som alla kan vara oöverkomliga i vissa forskningsinställningar.
Dessutom presenteras analyser för äggantal och yngelstorlek som en metod för att mäta reproduktiv hälsa och som den enklaste metoden för att mäta celldelning hos vuxna maskar, eftersom vuxna maskar är post-mitotiska och endast könsceller och embryon genomgår celldelning inom en vuxen mask64. Som ett mått på celldelning kan reproduktiv hälsa vara relevant för åldrandets kännetecken för cellulär åldrande och stamcellsutmattning. Reproduktiv hälsa kan påverkas av många faktorer, inklusive patogen infektion65 eller exponering för stress49, även om det inte finns något direkt samband mellan reproduktiv hälsa och livslängd. Faktum är att vissa långlivade djur uppvisar en signifikant minskning av yngelstorlek49, och det är till och med möjligt att det finns en omvänd korrelation mellan livslängd och yngelstorlek50. Detta är inte ett fenomen som är specifikt för C. elegans, eftersom skadliga effekter av reproduktion på livslängden länge har observerats hos människor66, följeslagare67 och möss68. Ändå tillhandahåller vi äggantal och yngelstorlek som en pålitlig och billig metod för att mäta reproduktiv hälsa med förbehållet att reproduktiv hälsa kanske inte korrelerar med livslängd eller hälsospann.
Slutligen erbjuds överlevnadsanalyser som ett indirekt mått på organismens hälsa. Viktigt är att cellulära stressreaktioner, inklusive svar på termisk stress69 och ER-stress35, snabbt minskar under åldringsprocessen och har direkt relevans för åldringskännetecknet för proteostas70,71. Däremot kan hyperaktiverande stressreaktioner avsevärt öka livslängden genom att främja motståndskraft mot stress 35,37,38. Medan denna studie fokuserar på de enklaste och billigaste metoderna, finns det ett stort antal alternativa metoder för stressresiliensanalyser för termotolerans41 och oxidativ stress66, var och en kräver en annan uppsättning utrustning och förbrukningsvaror. Utöver enkla exponeringsstudier för stressfaktorer kan andra fysiologiska metoder utföras beroende på tillgång till utrustning. Till exempel kan en extracellulär flödesanalysator övervaka mitokondriell funktion och cellulär andning73; fluorescerande dissektionsmikroskop möjliggör mätningar av transkriptionella reportrar för aktivering av stressrespons20; och högupplösta förenings- eller konfokalmikroskop kan användas för att mäta organellmorfologi med fluorescerande sonder för mitokondrier74, endoplasmatisk retikulum 75,76 och aktincytoskelett77.
Som en sista varningsberättelse för mätningar av livslängd, medan kemiska och genetiska metoder för sterilisering av maskar erbjuds för att avsevärt minska kostnaden, är det viktigt att notera att båda direkt kan påverka livslängden. Till exempel har exponering för FUDR tidigare rapporterats påverka både livslängd och termotolerans45. Och medan glp-4(bn2)-mutanten i sig inte har några direkta effekter på livslängden, är tillväxt vid 25 °C en mild värmestress33,34 och kan därmed påverkalivslängden 2. Det finns andra metoder för sterilisering av C. elegans, inklusive auxinmedierad sterilitet78 eller alternativa temperaturkänsliga spermiebristmutanter79. Alla metoder har dock vissa försiktighetsåtgärder, och man bör vara försiktig med att använda den minst skadliga analysen för varje laboratoriums vetenskapliga behov. En sista begränsning av livslängdsstudier är potentiell variabilitet som kan uppstå på grund av låga urvalsstorlekar eller helt enkelt av ett objektivt fel av utredaren. Detta kan kringgås eftersom ny teknik föds i automatiserad livslängdsteknik80, men återigen är dessa system kostsamma och kräver viss ingenjörs- och beräkningsutrustning och färdigheter. I slutändan är samlingen av metoder som tillhandahålls här en pålitlig uppsättning verktyg som snabbt kan anpassas och läras i nästan vilken institution som helst och ge en solid grund för åldrande biologi.

Sedan publiceringen av 'The genetics of Caenorhabditis elegans', en av de mest inflytelserika artiklarna av Sydney Brenner 1974, har denna mikroskopiska mask ansetts vara ett enastående modellsystem för att studera biologiska mysterier1. 1977 publicerade Michael R. Klass metoden för att mäta livslängden hos C. elegans och etablerade detta modellsystem för att studera åldrande2. Undersökningen för att förstå sambandet mellan stress och livslängd har börjat med identifieringen av en enda mutation i ålder-1-genen, vilket resulterade i en livslängdsförlängning i C. elegans3. Dessutom har samtida studier identifierat andra livslängdshöjande mutationer, som avslöjade långlivade mutanta maskar som uppvisar ökad motståndskraft mot stress 4,5,6. Med sina många fördelar, inklusive en kort livslängd, enkelt underhåll, helt sekvenserat genom som innehåller homologi till cirka två tredjedelar av alla mänskliga sjukdomsframkallande gener, tillgänglighet och lätthet att använda RNA-interferensbibliotek (RNAi) och fysiologisk likhet med människor 7,8,9, har C. elegans snabbt antagits som en enastående modell för stress- och åldrandebiologi.
De kanske största verktygen för C. elegans är dess extremt låga underhållskostnader, enkla experiment och de olika genetiska verktyg som finns tillgängliga för studier. C. elegans odlas vanligtvis på ett fast agarmedium med en E. coli-matkälla. Två vanliga E. coli-stammar är standard OP50, en B-stam som kanske är den vanligaste10, och HT115, en K-12-stam som främst används för RNAi-experiment11,12. HT115 K-12-stammen bär en deletion i RNAIII RNase, en mutation som är väsentlig för RNAi-metoder, där plasmider som uttrycker dsRNA motsvarande enskilda C. elegans-gener används. DSRNA-matningsvektorerna möjliggör robust knockdown av C. elegans-gener utan behov av komplexa korsningar eller genomredigering, eftersom bakterier som bär dessa plasmider kan matas direkt till nematoder. Tusentals av dessa bakteriella RNAi-vektorer finns i HT115-bakgrunden, inklusive det mest populära Vidal RNAi-biblioteket med >19 000 enskilda RNAi-konstruktioner13 och Ahringer RNAi-biblioteket med 16 757 RNAi-konstruktioner14. Emellertid, OP50 och HT115 bakteriedieter har stora skillnader i metabolisk profil, inklusive skillnader i Vitamin B1215,16. Därför rekommenderas att utföra alla experiment på en enda bakteriekälla, om möjligt, för att undvika gen-dietinteraktioner som kan introducera flera förvirrande faktorer som tidigare beskrivits 17,18,19. På grund av sin lätthet upprätthålls djur på OP50 för alla experimentella förhållanden som beskrivs här, men alla experiment utförs på HT115 som tidigarebeskrivits 20. I korthet bibehålls djuren vid OP50 och överförs till HT115 efter synkronisering (efter blekning) för konsistens mellan RNAi kontra icke-RNAi-experiment. Alternativt kan en RNAi-kompetent OP50-stam som bär en liknande deletion av RNAIII RNas som finns i E. coli K12 HT115-stammen också användas21.
Kanske är en stor begränsning för RNAi-experiment i C. elegans oro för knockdown-effektivitet. Medan knockdown-effektivitet kan valideras via qPCR eller western blotting, kräver dessa dyr utrustning och reagenser och är begränsade till bulkanalys. Detta är ännu mer oroande att titta på specifika celler, såsom neuroner, som är eldfasta (mindre känsliga) för RNAi. Medan RNAi-effektiviteten i specifika celler kan förbättras via överuttryck av SID-1, transmembranproteinet som är viktigt för dsRNA-upptag22, är detta fortfarande begränsat till de celltypspecifika uttrycksmönstren för promotorerna som används för dessa konstruktioner, och därmed är gen knockouts och mutationer det mest idiotsäkra sättet att tömma genfunktioner. Utöver RNAi-medierad knockdown är C. elegans också mycket mottagliga för genomredigering med CRISPR-baserade strategier 23,24,25 och transgen konstruktionsöveruttryck genom mikroinjektioner, med möjlighet att integrera transgena konstruktioner genom bestrålning eller transposonbaserad integration 26,27,28,29 . Dessa metoder kräver dock dyr mikroinjektionsutrustning, och de höga kostnaderna för guide-RNA eller Cas9-enzym kan förbjuda dessa metoder i institutioner med begränsad finansiering. Istället är tusentals transgena linjer och mutanter lätt tillgängliga för några dollar både på Caenorhabditis Genetics Center (CGC) och National Bioresource Project (NBRP). NBRP erbjuder isolerade mutanter för ett stort antal C. elegans-gener, inklusive publicerade och därför verifierade mutantstammar, mutanter härledda från pilotprojekt och mutanter som ännu inte har karakteriserats. Däremot är CGC en förvaringsplats för mestadels publicerade och etablerade C. elegans-linjer från forskarsamhället. Båda skickar stammar över hela världen till mycket rimliga priser och erbjuder ett brett utbud av alternativ för dem med begränsad kapacitet att syntetisera stammar internt.
Här erbjuds en kurerad metodsamling, som sannolikt är de billigaste metoderna för att analysera livslängd och hälsospann i C. elegans. Alla metoder som presenteras här kräver billig utrustning och förnödenheter och använder endast stammar som är lätt tillgängliga från CGC. Kanske mest oöverkomligt för livslängd och överlevnadsanalyser i C. elegans är kostnaden för Nematode Growth Media (NGM) plattor. Eftersom C. elegans är hermafroditer och självbefruktade, kräver standardöverlevnadsanalyser att vuxna djur kontinuerligt flyttas bort från sin avkomma för att undvika kontaminering från avkomman. Denna process är inte bara tidskrävande, den kan bli dyr på grund av behovet av cirka 100 plattor per tillstånd för att köra en enda livslängdsanalys. Här tillhandahålls två alternativ: användning av den temperaturkänsliga bakterielösa mutanten, glp-4 (bn2) eller kemisk sterilisering med 5-fluor-2'-deoxiuridin (FUDR). glp-4 kodar för ett valylaminoacyl-tRNA-syntetas, och det temperaturkänsliga glp-4(bn2) är reproduktivt bristfälligt vid restriktiva temperaturer på grund av minskad proteinöversättning30,31. FUDR är en robust metod för att kemiskt sterilisera C. elegans genom att förhindra DNA-replikation och därmed hämma reproduktion32. Även om FUDR kan vara oöverkomligt dyrt för vissa laboratorier, krävs endast en liten mängd för att kemiskt sterilisera maskar, och dess stabilitet i pulverform kan göra det möjligt för de flesta grupper. Att använda den temperaturkänsliga glp-4 (bn2) mutanten är verkligen det billigaste alternativet, eftersom det enda kravet är en inkubator för att flytta djuren till de restriktiva 25 ° C; Det bör dock noteras att tillväxt vid 25 °C kan orsaka mild värmestress33,34. Oavsett metod kan användning av sterila djur avsevärt minska kostnaderna för förbrukningsvaror som krävs för åldersrelaterade analyser.
För att studera åldrande är standardlivslängdsanalyser konventionella eftersom paradigmer som förändrar livslängden har direkta effekter på åldrandet. Mätningar av healthspan och stresstolerans ger dock ytterligare information om organismens hälsa. Här erbjuds flera metoder för att mäta healthspan: 1) fecundity som ett mått på reproduktiv hälsa; 2) yngelstorlek som ett mått på utvecklingshälsa och livskraft hos lagda avkommor; och 3) lokomotoriskt beteende som ett mått på muskelfunktion och rörlighet, som båda är direkt korrelerade med åldrande. Dessutom erbjuds analyser av stresstolerans: överlevnad till ER-stress, mitokondriell / oxidativ stress och termisk stressöverlevnad. Faktum är att djur med ökad motståndskraft mot ER-stress35,36, mitokondriell stress37 och termisk stress38 uppvisar ökad livslängd. ER-stress appliceras genom att utsätta C. elegans för mantelmycin, vilket blockerar N-länkad glykosylering och orsakar ackumulering av felveckade proteiner39. Mitokondriell/oxidativ stress induceras genom exponering för parakvat, vilket inducerar superoxidbildning specifikt i mitokondrierna40. Värmespänning appliceras genom inkubation av djur vid 34–37 °C33,41. Alla analyser som beskrivs här kan utföras med minimal utrustning och medel och erbjuder en mängd olika verktyg för att studera åldrande i olika grupper.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>APEX IPTG</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>18-242</td>
			<td>for RNAi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>90000-764</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Peptone</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97064-330</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-904</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76345-522</td>
			<td>for RNAi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>80057-932</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH1115-1LP</td>
			<td>solvent for drugs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95020-778</td>
			<td>for LB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-132</td>
			<td>for NGM plates, M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraquat</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>36541</td>
			<td>for oxidative/mitochondrial stress</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-566</td>
			<td>for bleach soluton</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate dibasic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM-PX1570-2</td>
			<td>for NGM plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM-PX1565-5</td>
			<td>for M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S7E Dissecting Scope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>10450840</td>
			<td>Standard dissecting microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>EM-SX0420-5</td>
			<td>for NGM plates, M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hypochlorite</td>
			<td>VWR</td>
			<td>RC7495.7-32</td>
			<td>for bleach solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>VWR</td>
			<td>71003-472</td>
			<td>for M9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetracycline hydrochloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-638</td>
			<td>for RNAi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tunicamycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7765-50MG</td>
			<td>for ER stress</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

surveying low-cost methods to measure lifespan and healthspan in caenorhabditis elegans

Upptäckten och utvecklingen av Caenorhabditis elegans som modellorganism var inflytelserik inom biologin, särskilt inom åldrandet. Många historiska och samtida studier har identifierat tusentals livslängdsförändrande paradigmer, inklusive genetiska mutationer, transgent genuttryck och hormesis, en fördelaktig, låggradig exponering för stress. Med sina många fördelar, inklusive en kort livslängd, enkelt och billigt underhåll och helt sekvenserat genom med homologi till nästan två tredjedelar av alla mänskliga gener, har C. elegans snabbt antagits som en enastående modell för stress- och åldrandebiologi. Här kartläggs flera standardiserade metoder för att mäta livslängd och hälsospann som enkelt kan anpassas till nästan vilken forskningsmiljö som helst, särskilt de med begränsad utrustning och medel. Den otroliga nyttan av C. elegans presenteras, vilket belyser förmågan att utföra kraftfulla genetiska analyser inom åldrandebiologi utan att behöva omfattande infrastruktur. Slutligen diskuteras begränsningarna för varje analys och alternativa tillvägagångssätt för övervägande.

C. elegans är en utmärkt modellorganism för åldrande forskning på grund av en stor majoritet av åldrande mekanismer bevaras med människor. Det är viktigt att de har en mycket låg kostnad för underhåll och experiment med minimikrav på utrustning och förbrukningsvaror, vilket gör dem till ett eftertraktat modellsystem för institutioner med begränsade medel. Dessutom gör en uppsjö av enkla analyser med grunda inlärningskurvor dem till ett utmärkt system för även den yngsta utredaren med liten eller ingen erfarenhet. Alla dessa faktorer i kombination med den kraftfulla genetiken hos C. elegans inklusive enkel genomredigering, tusentals tillgängliga mutanter och transgena djur till nominella kostnader och tillgängliga RNAi-bibliotek för genetisk knockdown av praktiskt taget varje gen gör dem till ett idealiskt system för grundutbildningsinstitutioner. Här undersöks några av de billigaste metoderna för att studera åldrande i C. elegans , med fokus främst på analyser med minimal utrustnings- och förbrukningskostnad, samt grunda inlärningskurvor. Faktum är att hela protokollen och datainsamlingen skrevs / utfördes av juniora utredare med <5 månaders forskningserfarenhet, mestadels studenter.
Livslängdsstudier i C. elegans är mycket enkla på grund av djurens korta livslängd, allt från 14-20 dagar. Viktigt är att livslängdsanalyser är mycket standardiserade och endast kräver en inkubator, ett standarddissektionsmikroskop, en standardmaskplockning och förbrukningsmaterial för beredning av NGM-agarplattor. Den kanske mest kostnadsdrivande aspekten av livslängdsmätningar i C. elegans är förbrukningsvaror som krävs. Detta beror på att C. elegans är hermafroditer som självbefruktar; därför måste vuxna som spåras för livslängdsanalyser flyttas bort från avkomma dagligen. Djur kan dock steriliseras genom att utsätta dem för FUDR eller använda mutanter, såsom den temperaturkänsliga glp-4(bn2)-mutanten utan könsceller som odlas vid den oöverkomliga 25 °C för att minska mängden förbrukningsvaror som krävs 30,31,32. Här utfördes livslängdsanalyser med FUDR eller med glp-4 (bn2) bakterielösa mutanter, som visar liknande resultat som standardlivslängder utförda på icke-sterila djur. Även om livslängden av vild typ inte är identisk på grund av effekterna av FUDR45 eller tillväxt vid 25 °C på livslängd2, visar det kortlivade hsf-1 knockdown-djuret på ett tillförlitligt sätt en signifikant minskning av livslängden för alla förhållanden (figur 1). hsf-1 kodar för transkriptionsfaktorn värmechockfaktor-1, som är involverad i regleringen av den termiska spänningsresponsen, och dess knockdown resulterar i en signifikant minskning av livslängden38,46.
Även om livslängd är en viktig faktor att tänka på i åldrande biologi, ofta, livslängd korrelerar inte med ökad hälsa, även i C. elegans47. Således, som ett kompletterande tillvägagångssätt, erbjuder vi flera metoder för att mäta organismens hälsa, inklusive reproduktiv hälsa, lokomotoriskt beteende och stressresiliens. Reproduktiv hälsa kan mätas på ett av två sätt. För det första kommer mätningar av äggantal att ge en direkt mätning av hur många ägg som läggs av en enda självgödslande hermafrodit. Men eftersom djur producerar fler oocyter än spermier läggs också några obefruktade ägg som aldrig skulle producera livskraftig avkomma48. För att få en bättre förståelse för djurets verkliga reproduktionskapacitet ger mätningar av yngelstorleken därför ett mått på hur många livskraftiga avkommor som produceras. Ofta kan ökad stressresiliens faktiskt minska reproduktionsförmågan, potentiellt på grund av den inneboende effekten av upplevd stress på reproduktion49. På samma sätt finns en signifikant minskning av både antalet ägg som läggs och yngelstorleken hos hsf-1-överuttrycksdjur jämfört med vildtypskontroller (figur 2A,B). Faktum är att vissa hsf-1-överuttrycksdjur uppvisar full sterilitet, vilket ger bevis för att reproduktiv hälsa kan vara omvänt korrelerad med livslängd.
Även om reproduktiv hälsa är viktigt för att förstå könshälsa, funktionell meios och reproduktionskapacitet, finns det i allmänhet ingen direkt korrelation mellan livslängd och yngelstorlek50. Således, som ett kompletterande tillvägagångssätt, erbjuds lokomotoriskt beteende som en guldstandardmetod för analys av C. elegans healthspan under åldrande51. Det finns många metoder för att mäta rörelsebeteende, men de flesta metoder kräver sofistikerade kameror, spårningsprogramvara eller dyra kemikalier. Däremot kräver thrashing-analyser praktiskt taget ingen utrustning utöver vad ett standard C. elegans-laboratorium är utrustat med: dissekeringsmikroskop, maskplockning, pipett och förbrukningsmaterial för att tillverka NGM-agarplattor. Thrashing-frekvenser ger en tillförlitlig metod för att mäta healthspan under åldrandet, mätt som en signifikant minskning av thrashing hos gamla djur jämfört med unga djur (Figur 2C).
Slutligen är överlevnad till stressanalyser ett ytterligare fysiologiskt mått på motståndskraft. Förmågan att aktivera stressreaktioner minskar i allmänhet under åldringsprocessen, vilket gör djur mindre motståndskraftiga och mer känsliga för stress. Således kan stressresiliens användas som en pålitlig proxy för organismens hälsa. Här erbjuds metoder för att kartlägga känsligheten för 1) ER-stress som svar på tunicamycinexponering, ett kemiskt medel som blockerar N-länkad glykosylering och resulterar i ackumulering av felveckade proteiner i ER; 2) mitokondriell/oxidativ stress genom exponering för parakvat, ett kemiskt medel som inducerar superoxidbildning i mitokondrier; och 3) termisk stress genom exponering för förhöjda temperaturer. För tunicamycin och parakvatanalyser införlivas läkemedlet i NGM-agarplattan under plattproduktionen. För höga koncentrationer av mantelskap utvecklas avkomma i allmänhet inte, och därmed behöver steriliseringstekniker inte användas. Protokollet som presenteras här rekommenderar 25 ng / μL som en slutlig koncentration av mantelmycin, men för dem med begränsade medel visar 10 ng / μL också en signifikant minskning av överlevnaden (figur 3A). Båda koncentrationerna begränsar avkommans utveckling, och därmed behövs inga steriliseringsmetoder, även om DMSO-kontrollen kommer att kräva en steriliseringsteknik eller förflyttning av djur till nya plattor. Detta beror på att tunicamycintoxicitet förhindrar utveckling av avkomma, men DMSO är praktiskt taget giftfri, vilket gör att avkomman kan utvecklas fullt ut när den odlas på tunicamycin.
För parakvatanalyser krävs antingen en steriliseringsteknik eller förflyttning av djur eftersom parakvatbehandling inte hindrar avkomma från att utvecklas till vuxen ålder. Höga nivåer av parakvat (4 mM) förkortar livslängden avsevärt, medan låga nivåer av parakvat (0,25 mM) ökar livslängden på grund av en hormetisk effekt (figur 3B), i överensstämmelse med tidigare publicerade resultat52. Slutligen kräver termotoleransanalyser endast en inkubator som kan nå 30-37 °C, och inga ytterligare reagenser krävs. Överuttryck av hsf-1 ökar termotoleransen vid 37 °C (figur 3C) som tidigarepublicerats 53. Men som andra har visat tidigare och från nuvarande data är det största problemet med termotoleransanalyser deras variabilitet. Många faktorer kan bidra till variabilitet inom termotoleransanalyser, inklusive skillnader mellan inkubatorer och den tid djur tillbringar utanför inkubatorn medan de gör termotolerans varje timme. För en grundlig riktlinje för termotolerans, se referens 41.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64091/64091fig01.jpg"> Figur 1: Jämförelse av livslängdsmätningar med och utan sterilisering. Djur flyttades bort från avkomman på dagarna 1, 3, 5 och 7 i vuxen ålder. (B) Livslängd för vilda N2-nematoder som odlas på NGM-agar-FUDR-plattor som är seedade med tomma vektor- (ev) eller hsf-1 RNAi-bakterier vid 20 °C. Djur odlades till vuxen ålder på vanliga ev- eller hsf-1 RNAi-plattor och flyttades sedan till FUDR-plattor på dag 1 i vuxen ålder. C) Livslängden för glp-4(bn2)-muterade djur som odlats på NGM-agarplattor som är seedade med tom vektor (ev) eller hsf-1 RNAi vid 25 °C. För alla förhållanden poängsattes djur för döden var 2: e dag tills alla djur registrerades som döda eller censurerade. Djur med påse, utsprång eller explosion av vulva, eller de som kröp upp på sidorna av plattorna och torkade censurerades. All statistik utfördes med hjälp av Log-Rank Mantel-Cox-testning och finns i tabell 2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64091/64091fig01large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64091/64091fig02.jpg"> Figur 2: Äggantal, yngelstorlek och thrashing som mått på healthspan. Thrashing poängsattes hos djur placerade i M9-lösning på en NGM-agarplatta, video inspelad med en vanlig smarttelefonkamera monterad på ett okular med ett standarddissekeringsomfång och thrashing poängsatt i slow motion för noggrannhet. n = 15 djur per tillstånd. (B) Äggantal mättes i vilda N2 (blå) och sur-5p::hsf-1 (röda) djur. Djur odlades vid 20 °C och flyttades på färska tallrikar, och ägg räknades var 12:e timme. Det totala antalet ägg som lades summerades. n = 7 djur för vildtyp och 9 djur för sur-5p::hsf-1. (C) Yngelanalyser mättes på samma djur som (B) där ägg odlades vid 20 °C i 2 dagar för att möjliggöra kläckning, och alla kläckta ägg räknades. = p < 0,001 beräknat med hjälp av icke-parametrisk Mann-Whitney-testning. Varje punkt representerar ett enda djur, och linjer representerar median- och interkvartilområdet. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64091/64091fig02large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64091/64091fig03.jpg"> Figur 3: Stresstålighet som en proxy för organismens hälsa. Djuren flyttades till plattor som innehöll antingen 1 % DMSO, 10 ng/μL mantelskap (TM) eller 25 ng/μl TM dag 1 i vuxen ålder. B) Överlevnadsanalyser av N2-djur som odlats på den tomma vektorn RNAi-bakterier vid 20 °C. Djur odlades från luckan på plattor som innehöll antingen vatten, 0,25 mM parakvat (PQ) eller 4 mM PQ. För A-B poängsattes djur för döden var 2: e dag tills alla djur registrerades som döda eller censurerade. Djur med påse, utsprång eller explosion av vulva, eller de som kröp upp på sidorna av plattorna och torkade censurerades. All statistik utfördes med hjälp av Log-Rank Mantel-Cox-testning (tabell 2). C) Sammanslagna data för alla 37 °C termotoleranstester för vilda N2-djur jämfört med överuttryck av hsf-1 (sur-5p::hsf-1). Data representeras som procent levande vid tiden = 9 h av en termotoleransanalys, där varje rad representerar ett matchat experiment som utförs samma dag. Djur odlades på den tomma vektorn RNAi-bakterier vid 20 °C och flyttades till 37 °C på dag 1 i vuxen ålder för analys. n = 60 djur per stam och replikat. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64091/64091fig03large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reagens</td>
			<td colspan="3">Recept</td>
		</tr><tr><td>Blekmedel lösning</td>
			<td colspan="3">1,8 % (v/v) natriumhypoklorit, 0,375 M KOH</td>
		</tr><tr><td>Karbenicillin</td>
			<td colspan="3">100 mg/ml stamlösning (1000x) i vatten. Förvaras vid 4 °C i upp till 6 månader eller -20 °C för långtidsförvaring</td>
		</tr><tr><td>FUDR</td>
			<td colspan="3">10 mg/ml lösning i vatten. Förvaras vid -20 °C.</td>
		</tr><tr><td>Iptg</td>
			<td colspan="3">1 M lösning i vatten.</td>
		</tr><tr><td>Lysogeni buljong (LB)</td>
			<td colspan="3">I detta protokoll användes kommersiell LB (se materialtabell), men alla vanliga LB-hemgjorda recept med Bacto-tryptone, jästextrakt och NaCl är tillräckliga.</td>
		</tr><tr><td>M9-lösning</td>
			<td colspan="3">22 mM KH2PO4 monobasisk, 42,3 mM Na2HPO4, 85,6 mM NaCl, 1 mM MgSO4</td>
		</tr><tr><td>Nematod tillväxtmedia (NGM)</td>
			<td colspan="3">1 mM CaCl2, 5 μg/ml kolesterol, 25 mM KPO4 pH 6,0, 1 mM MgSO4, 2 % (w/v) agar, 0,25 % (w/v) Bacto-Peptone, 51,3 mM NaCl</td>
		</tr><tr><td>NGM RNAi-plattor</td>
			<td colspan="3">1 mM CaCl2, 5 μg/ml kolesterol, 25 mM KPO4 pH 6,0, 1 mM MgSO4, 2% (w/v) agar, 0,25% (w/v) Bacto-Peptone, 51,3 mM NaCl, 1 mM IPTG, 100 μg/ml karbenicillin/ampicillin. Förvaras vid 4 ° C i mörker i upp till 3 månader</td>
		</tr><tr><td>NGM RNAi DMSO</td>
			<td colspan="3" rowspan="2">1 mM CaCl2, 5 μg/ml kolesterol, 25 mM KPO4 pH 6,0, 1 mM MgSO4, 2% (w/v) agar, 0,25% (w/v) Bacto-Peptone, 51,3 mM NaCl, 1 mM IPTG, 100 μg/ml karbenicillin/ampicillin; 1% DMSO</td>
		</tr><tr><td>(kontroll för mantelmycin)</td>
		</tr><tr><td>NGM RNAi TM</td>
			<td colspan="3">1 mM CaCl2, 5 μg/ml kolesterol, 25 mM KPO4 pH 6,0, 1 mM MgSO4, 2% (w/v) agar, 0,25% (w/v) Bacto-Peptone, 51,3 mM NaCl, 1 mM IPTG, 100 μg/ml karbenicillin/ampicillin; 1% DMSO, 25 ng/μl mantelialmycin</td>
		</tr><tr><td>Parakvat</td>
			<td colspan="3">400 mM lösning i vatten – bör beredas färsk</td>
		</tr><tr><td>Tetracyklin</td>
			<td colspan="3">10 mg/ml stamlösning (500x) i 100% etanol. Förvaras vid -20 °C</td>
		</tr><tr><td>Tunicamycin</td>
			<td colspan="3">2,5 mg/ml stamlösning i 100 % DMSO. Förvaras vid -80 °C för långtidsförvaring. Detta är en 100x lösning (25 ng / μL arbetslösning)</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 1. Recept för reagens och media för protokoll.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Motsvarande bildpanel</td>
			<td colspan="2">Stam, behandling</td>
			<td>Median livslängd</td>
			<td># Dödsfall/# Totalt</td>
			<td>p-värde (Log-Rank)</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">1A</td>
			<td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C</td>
			<td>17</td>
			<td>74/120</td>
			<td>--</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, hsf-1 RNAi, 20 °C</td>
			<td>11</td>
			<td>65/120</td>
			<td><0.001</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">1B</td>
			<td colspan="2">N2, vektor RNAi, FUDR, 20 °C</td>
			<td>19</td>
			<td>120/120</td>
			<td>--</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, hsf-1 RNAi, FUDR, 20 °C</td>
			<td>11</td>
			<td>116/120</td>
			<td><0.001</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">1C</td>
			<td colspan="2">N2, glp-4(bn2), vektor RNAi, 25 °C</td>
			<td>13</td>
			<td>115/121</td>
			<td>--</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, glp-4(bn2), hsf-1 RNAi, 25 °C</td>
			<td>4</td>
			<td>120/120</td>
			<td>< 0,001</td>
		</tr><tr><td rowspan="3">2A</td>
			<td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C, 1 % DMSO</td>
			<td>19</td>
			<td>85/120</td>
			<td>--</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C, 10 ng/μl mantelialmycin</td>
			<td>15</td>
			<td>109/120</td>
			<td><0.001</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C, 25 ng/μl mantelialmycin</td>
			<td>12</td>
			<td>117/120</td>
			<td><0.001</td>
		</tr><tr><td rowspan="3">2B</td>
			<td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C</td>
			<td>19</td>
			<td>84/120</td>
			<td>--</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C, 0,25 mM parakvat</td>
			<td>24</td>
			<td>91/120</td>
			<td><0.001</td>
		</tr><tr><td colspan="2">N2, vektor RNAi, 20 °C, 4 mM parakvat</td>
			<td>6</td>
			<td>50/120</td>
			<td><0.001</td>
		</tr></tbody></table>Tabell 2. Statistik för livslängd och stresstålighet.

Watch this Scientific Journal Video about Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans fungerar som ett utmärkt modellsystem med robusta och billiga metoder för att kartlägga hälsa, livslängd och motståndskraft mot stress.

Kartläggning av billiga metoder för att mäta livslängd och hälsa i Caenorhabditis elegans

The discovery and development of Caenorhabditis elegans as a model organism was influential in biology, particularly in the field of aging. Many ...

Detta protokoll presenterar den lägsta kostnaden och lägsta tekniska metoder för att betjäna åldrande i havet elegans. En inflytelserik modellorganism inom åldrandebiologi. Den största fördelen med dessa metoder är enkel implementering, med hjälp av billig utrustning och material.Att göra dem mottagliga för alla forskare oavsett erfarenhet eller tillgänglig finansiering. Som en gammal åldrandestudie finns det en naturlig variation i hälsa inom populationer. Därför är det viktigt att experiment utförs på friska, välmatade och tätt synkroniserade djur.För att säkerställa riphandikapp Börja beredningen av en liter nematodtillväxtmedium eller NGM-skruvplatta. Tillsätt 2,5 gram pepton, 3,0 gram natriumklorid och 20 gram skruv i en liter kolv med en omrörningsstång och tillsätt destillerat vatten till en slutlig volym på 970 ml. Sterilisera NGM-skruvlösningen i en enliterskolv med en vanlig autoklav eller mediasterilisator.Och låt lösningen röra tills den svalnar till 60 till 75 grader Celsius. Medan lösningen svalnar, värm ett pärlbad till 65 till 70 grader Celsius. När NGM-skruvlösningen svalnar till 60 till 75 grader Celsius.Tillsätt de flytande tillsatserna och låt lösningen blandas helt i fem minuter. Sänk sedan ner kolven i ett pärlbad vid 65 till 70 grader Celsius för att förhindra att mediet stelnar medan det hälls i plattan. Pipettera nio till 11 ml av lösningen i varje 60 ml platta.När du är klar, placera pipetten tillbaka i den uppvärmda lösningen för att bibehålla temperaturen och för att förhindra att något media stelnar i pipetten. Upprepa proceduren för alla plattor och låt NGM a plattor stelna över natten. När de har stelnat, använd dem för såddplattor med bakterier eller förvara plattorna i förseglade behållare i upp till tre månader vid fyra grader Celsius för att synkronisera maskarna via blekning.Samla nematoderna genom att hälla en liten mängd M9-lösning på en tallrik som innehåller maskarna utan att överfylla petriskålen. Virvla sedan M nine-lösningen försiktigt för att lossa maskar från bakteriegräsmattorna. Samla sedan vuxna gravidmaskar i ett 15 ml rör med en serologisk pipett.Undvik att genomborra skruven med pipettspetsen. Pellet djuren med centr i 30 sekunder vid 1100 gånger G, och aspirera supernatanten. Tillsätt fem milliliter av den nyberedda blekningslösningen till maskpelleten och kontrollera maskarna under ett dissekerande mikroskop med några minuters mellanrum tillsammans med intermittent kraftig skakning tills alla vuxna maskkroppar är upplösta och endast ägg finns kvar i blandningen.Pelletera sedan äggen genom att snurra ner äggblekningsblandningen i 30 sekunder vid 1100 gånger G och aspirera blekningslösningen. Tvätta sedan de pelleterade äggen genom att tillsätta upp till 15 ml M9-lösning och invertera röret fyra eller fem gånger för att sprida äggen och lösningen. Återigen, centrifugera röret i 30 sekunder vid 1100 gånger G för att pelletera äggen och aspirera M9-lösningen.Utför tvätten fyra gånger för att eliminera eventuell blekmedel från äggblandningen. Efter den fjärde tvätten aspirerar M9-lösningen från 100 mikroliter till två milliliter beroende på det totala antalet blekta maskar. Skaka äggen noggrant för att bryta upp klumparna och se till att äggen är helt återsuspenderade i M9-lösningen.Alternativt kan djur arresteras L en för en tätare tidssynkronisering genom att tillsätta 10 till 12 ml M9-lösning till äggpelleten i ett 15 ml kronikrör. Låt maskarna snurra i en rotator i upp till 24 timmar vid 20 grader Celsius. För att approximera ägget eller L pipetterar en koncentration fyra mikroliter av äggblandningen på en NGM-platta som sitter med bakterier.Räkna sedan och beräkna de ägg som finns per mikroliter media. Upprepa räkningen tre eller fyra gånger för att förbättra approximationen, baserat på approximationsplattan, lämpligt antal ägg eller L ett arresterade djur på NGM-skruvplattan sådd med bakterier som valts. Att mäta maskarnas lokomotivbeteende via thrashing.Flytta ett litet antal dag en vuxna maskar från en NGM-skruvplatta till 10 till 20 mikroliter M9-lösning under ett dissekeringsområde. Fokusera sedan på en mask i taget och räkna antalet gånger provet växlar från en konkav till konvex bildning på 15 sekunder. Använd en handräknare och en timer och upprepa proceduren för 10 till 15 maskar.Åldras maskarna till önskad ålder och upprepa thrashingmätningar i alla önskade åldrar. Som visualiserat, äldre maskar thrash i betydligt lägre hastigheter. För kvantitets- och fertilitetsmätningar.I 10 till 15 Caenorhabditis elegans maskar, peka ut L fyra maskar till en separat NGM-skruvplatta sådd med bakterier av val. Låt djuren växa över natten vid 20 grader Celsius och se till att en nysådd sats plattor är redo för nästa dag. För att mäta mängden ägg som läggs av Caenorhabditis elegans överför de vuxna maskarna till ett nytt NGM-skruvblad som är sådd med den plundrade bakterien var 12: e till 24: e timme i sju till åtta dagar eller tills äggen inte längre är synliga och räkna antalet ägg som läggs på tallrikarna.För att mäta yngelstorleken på Caenorhabditis elegans Överför de vuxna maskarna till en färsk NGM-skruvplatta sådd med bakterier var 12:e till 24:e timme, eller sju till åtta dagar eller tills avkomman inte längre syns. Förvara alla plattor som innehåller ägg vid 20 grader Celsius. Två dagar efter överföring av maskar.Räkna den utvecklade avkomman på plattan. Räkna alla levande och utvecklande maskar i L-fyrsteget eller tidigare för att säkerställa att F-tvågenerationen inte förvirrar resultaten. Ta bort alla maskar från plattan när de räknas.Behåll plattorna i ytterligare en till två dagar innan du gör dem igen för att säkerställa att djur med försenad kläckning eller utveckling inte missas. Steriliseringsmetodens effekt på livslängden hos de vilda N2-nematoderna visade att förändringar i livslängden hos maskarna som odlades på NGM-skruvplattorna liknade dem hos maskar som odlades på NGM-skruven FUDR-plattorna eller de glp fyra BN2-mutanta djuren som odlades på NGM-skruvplattorna. Det kortlivade HSF ett knockdown-djur visade en signifikant nedgång i livslängden för alla förhållanden.En betydande minskning av antalet lagda ägg och yngelstorlek hittades i HSF en över uttrycksdjur jämfört med kontrollerna av vild typ. Vissa HSF ett över uttryck djur uppvisade full sterilitet vilket indikerar att reproduktiv hälsa kan vara omvänt korrelerad med livslängd. Thrashinghastigheten gav en tillförlitlig metod för att mäta hälsa under åldrandet mätt som en signifikant minskning av thrashing hos gamla djur jämfört med de unga.Överlevnad till stress är tillförlitliga analyser för att mäta organismhälsa, Tunicamycin som orsakar retikulumstress resulterade i en minskad livslängd oavsett koncentration jämfört med DMSO-kontroll. De höga nivåerna av parakvat förkortade livslängden avsevärt medan låga koncentrationer av parakvat ökade livslängden på grund av hormetisk effekt. I termotoleransanalyserna ökade överuttrycket av HSF en termotoleransen vid 37 grader Celsius För alla livslängds- och åldringsexperiment.Det är viktigt att komma ihåg att steriliseringstekniker kan ha en pleiotrop effekt på organismhälsan, vilket påverkar resultaten. Det finns många ytterligare och kompletterande metoder för att mäta hälsospann om utrustning och infrastruktur finns tillgänglig, inklusive mätningar av transkription, translationsproteinaggregering, organell, morfologi och metaboliska funktioner.

Research

JoVE Journal

Genetics

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

Design and Use of a Low Cost, Automated Morbidostat for Adaptive Evolution of Bacteria Under Antibiotic Drug Selection

Utformning och användning av en låg kostnad, Automated Morbidostat för Adaptive Evolution av bakterier under antibiotikum Drug Val

We describe a low cost, configurable morbidostat for characterizing the evolutionary pathway of antibiotic resistance. The morbidostat is a bacterial ...

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic Slumpmässig mutagenes med användning Histon-miniSOG i<em&gt; C. elegans</em

Forward genetic screening in model organisms is the workhorse to discover functionally important genes and pathways in many biological processes. In most ...

Quantification of Information Encoded by Gene Expression Levels During Lifespan Modulation Under Broad-range Dietary Restriction in C. elegans

Quantification of Information Encoded by Gene Expression Levels During Lifespan Modulation Under Broad-range Dietary Restriction in C. elegans

Kvantifiering av Information kodas av genen uttryck nivåer under livslängden modulering enligt bred-range kosttillskott begränsning i C. elegans

Sensory systems allow animals to detect, process, and respond to their environment. Food abundance is an environmental cue that has profound effects on ...

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

Den nematoder Caenorhabditis Elegans - en mångsidig In Vivo -modell för att studera värd-mikrobinteraktioner

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the ...

Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans

Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans

Manipulation av ploiditeten i Caenorhabditis elegans

Mechanisms that involve whole genome polyploidy play important roles in development and evolution; also, an abnormal generation of tetraploid cells has ...

The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan

The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan

Den replika Set-metoden: En hög genomströmning strategi att kvantitativt mäta Caenorhabditis elegans livslängd

The Replica Set method is an approach to quantitatively measure lifespan or survival of Caenorhabditis elegans nematodes in a high-throughput manner, thus ...

Culture and Assay of Large-Scale Mixed-Stage Caenorhabditis elegans Populations

Culture and Assay of Large-Scale Mixed-Stage Caenorhabditis elegans Populations

Kultur och analys av storskaliga blandade caenorhabditis elegans populationer

Caenorhabditis elegans (C. elegans) has been and remains a valuable model organism to study developmental biology, aging, neurobiology, and genetics. The ...

Measuring Caenorhabditis elegans Sensitivity to the Acetylcholine Receptor Agonist Levamisole

Measuring Caenorhabditis elegans Sensitivity to the Acetylcholine Receptor Agonist Levamisole

Mätning Caenorhabditis elegans känslighet för acetylkolinreceptoragonisten levamisol

At the neuromuscular junction (NMJ), the binding of the excitatory neurotransmitter acetylcholine (ACh) to postsynaptic receptors leads to muscle ...

Measuring Embryonic Viability and Brood Size in Caenorhabditis elegans

Measuring Embryonic Viability and Brood Size in Caenorhabditis elegans

Mätning av embryonal livskraft och yngelstorlek hos Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is an excellent model organism for the study of meiosis, fertilization, and embryonic development. C. elegans exist as ...

Epigenetic Inheritance and ChIP in Caenorhabditis elegans

Analysis of Transgenerational Epigenetic Inheritance in C. elegans Using a Fluorescent Reporter and Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

RNAi Inheritance and ChIP in C. elegans (Video) | JoVE

Analys av transgenerationell epigenetisk nedärvning i C. elegans med hjälp av en fluorescerande reporter och kromatinimmunoprecipitation (ChIP)

Transgenerational epigenetic inheritance (TEI) allows the transmission of information through the germline without changing the genome sequence, through ...