Name: using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala
Uploaded: 2022-06-29T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

تم دعم البحث من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82030037 ، 81871009) ولجنة الصحة البلدية في بكين (11000022T000000444685). نشكر TopEdit (www.topeditsci.com) على مساعدتها اللغوية أثناء إعداد هذه المخطوطة.

تمت الموافقة على هذه التجربة من قبل لجنة أخلاقيات التجارب في مستشفى Xuanwu ، جامعة العاصمة الطبية. تم الاحتفاظ بجميع الفئران في مختبر الحيوانات في مستشفى Xuanwu ، جامعة العاصمة الطبية. ينقسم هذا البروتوكول إلى أربعة أجزاء. يقدم الجزءان الأولان طريقة بناء القطب والدائرة الكهربائية باستخدام حلق?...

<ol>
	<li>Kurita, T., Sakurai, K., Takeda, Y., Horinouchi, T., Kusumi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+long-term+outcome+of+non-surgically+treated+patients+with+temporal+lobe+epilepsy+with+hippocampal+sclerosis:+A+retrospective+study.">Very long-term outcome of non-surgically treated patients with temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis: A retrospective study.</a> PLoS One. 11 (7), 0159464 (2016).</li><li>Choy, M., Duffy, B. A., Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+study+of+networks+in+epilepsy.">Optogenetic study of networks in epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (12), 2325-2335 (2017).</li><li>Aroniadou-Anderjaska, V., Fritsch, B., Qashu, F., Braga, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+and+pathophysiology+of+the+amygdala+in+epileptogenesis+and+epilepsy.">Pathology and pathophysiology of the amygdala in epileptogenesis and epilepsy.</a> Epilepsy Research. 78 (2-3), 102-116 (2008).</li><li>Smith, P. D., McLean, K. J., Murphy, M. A., Turnley, A. M., Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures,+not+hippocampal+neuronal+death,+provoke+neurogenesis+in+a+mouse+rapid+electrical+amygdala+kindling+model+of+seizures.">Seizures, not hippocampal neuronal death, provoke neurogenesis in a mouse rapid electrical amygdala kindling model of seizures.</a> Neuroscience. 136 (2), 405-415 (2005).</li><li>Reyes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+enlargement:+Temporal+lobe+epilepsy+subtype+or+nonspecific+finding.">Amygdala enlargement: Temporal lobe epilepsy subtype or nonspecific finding.</a> Epilepsy Research. 132, 34-40 (2017).</li><li>Fan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+surgical+treatment+of+non-lesional+temporal+lobe+epilepsy+with+unilateral+amygdala+enlargement.">Diagnosis and surgical treatment of non-lesional temporal lobe epilepsy with unilateral amygdala enlargement.</a> Neurological Sciences. 42 (6), 2353-2361 (2021).</li><li>Dhir, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazol+(PTZ)+kindling+model+of+epilepsy.">Pentylenetetrazol (PTZ) kindling model of epilepsy.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 37 (2012).</li><li>Van Erum, J., Van Dam, D., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTZ-induced+seizures+in+mice+require+a+revised+Racine+scale.">PTZ-induced seizures in mice require a revised Racine scale.</a> Epilepsy &amp; Behavior. 95, 51-55 (2019).</li><li>Carriero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guinea+pig+model+of+mesial+temporal+lobe+epilepsy+following+nonconvulsive+status+epilepticus+induced+by+unilateral+intrahippocampal+injection+of+kainic+acid.">A guinea pig model of mesial temporal lobe epilepsy following nonconvulsive status epilepticus induced by unilateral intrahippocampal injection of kainic acid.</a> Epilepsia. 53 (11), 1917-1927 (2012).</li><li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience Biobehavioral Reviews. 37, 2887-2899 (2013).</li><li>Fujita, A., Ota, M., Kato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+volatile+metabolites+of+amygdala-kindled+mice+reveal+novel+biomarkers+associated+with+temporal+lobe+epilepsy.">Urinary volatile metabolites of amygdala-kindled mice reveal novel biomarkers associated with temporal lobe epilepsy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10586 (2019).</li><li>Li, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatiotemporal+dynamics+of+phase+synchronization+during+epileptogenesis+in+amygdala-kindling+mice.">The spatiotemporal dynamics of phase synchronization during epileptogenesis in amygdala-kindling mice.</a> PLoS One. 11 (4), 0153897 (2016).</li><li>Wang, Y., Wei, P., Yan, F., Luo, Y., Zhao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+epilepsy:+A+phenotype-oriented+review.">Animal models of epilepsy: A phenotype-oriented review.</a> Aging and Disease. 13 (1), 215-231 (2022).</li><li>Fallah, M. S., Dlugosz, L., Scott, B. W., Thompson, M. D., Burnham, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiseizure+effects+of+the+cannabinoids+in+the+amygdala-kindling+model.">Antiseizure effects of the cannabinoids in the amygdala-kindling model.</a> Epilepsia. 62 (9), 2274-2282 (2021).</li><li>Chipika, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+pathology+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+primary+lateral+sclerosis.">Amygdala pathology in amyotrophic lateral sclerosis and primary lateral sclerosis.</a> Journal of the Neurological Sciences. 417, 117039 (2020).</li><li>Kuchukhidze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotional+recognition+in+patients+with+mesial+temporal+epilepsy+associated+with+enlarged+amygdala.">Emotional recognition in patients with mesial temporal epilepsy associated with enlarged amygdala.</a> Frontiers in Neurology. 12, 803787 (2021).</li><li>Soper, C., Wicker, E., Kulick, C. V., N'Gouemo, P., Forcelli, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+superior+colliculus+neurons+suppresses+seizures+originating+in+diverse+brain+networks.">Optogenetic activation of superior colliculus neurons suppresses seizures originating in diverse brain networks.</a> Neurobiology of Disease. 87, 102-115 (2016).</li><li>Devinsky, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy.">Epilepsy.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4, 18024 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+thalamus+and+hippocampus+in+termination+of+amygdala-kindled+seizures+in+mice.">Interaction between thalamus and hippocampus in termination of amygdala-kindled seizures in mice.</a> Computational and Mathematical Methods in Medicine. 2016, 9580724 (2016).</li><li>Ghotbedin, Z., Janahmadi, M., Mirnajafi-Zadeh, J., Behzadi, G., Semnanian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+low+frequency+stimulation+of+the+kindling+site+preserves+the+electrophysiological+properties+of+the+rat+hippocampal+CA1+pyramidal+neurons+from+the+destructive+effects+of+amygdala+kindling:+the+basis+for+a+possible+promising+epilepsy+therapy.">Electrical low frequency stimulation of the kindling site preserves the electrophysiological properties of the rat hippocampal CA1 pyramidal neurons from the destructive effects of amygdala kindling: the basis for a possible promising epilepsy therapy.</a> Brain Stimulation. 6 (4), 515-523 (2013).</li><li>Hristova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+GABAergic+neurons+reduce+seizure+duration+upon+optogenetic+closed-loop+stimulation.">Medial septal GABAergic neurons reduce seizure duration upon optogenetic closed-loop stimulation.</a> Brain. 144 (5), 1576-1589 (2021).</li></ol>

الصرع هو مجموعة من الأمراض ذات المظاهر المتعددة والأسباب المتنوعة18 ؛ تجدر الإشارة إلى أنه لا يمكن استخدام نموذج واحد لجميع أنواع الصرع ، ويجب على الباحثين اختيار نموذج مناسب لدراستهم المحددة. تقدم الدراسة الحالية واحدة من أكثر الطرق التي يمكن الوصول إليها لتصنيع الأقطاب الك...

صرع الفص الصدغي (TLE) هو أكثر أنواع الصرع انتشارا ولديه مخاطر عالية للتحول إلى صرع مقاوم للأدوية. الجراحة ، مثل استئصال اللوزة الحميدية الانتقائية ، هي علاج فعال ل TLE ، ولا يزال تكوين الصرع وتكوين المرض قيد التحقيق 1,2. وقد تبين أن التسبب في TLE يحدث ليس فقط في الحصين ولكن أيضا على نطاق واسع في اللوزة3،4. على سبيل المثال ، تم الإبلاغ عن كل من تصلب اللوزة وتضخم اللوزة بشكل متكرر كأصول لنوبات TLE 5,6. لا يمكن التقليل من أهمية اللوزة. نموذج اللوزة ضروري لدراسة تكوين الصرع ، وهناك حاجة ماسة إلى توضيح واضح لهذا النموذج.
تم اقتراح عدة نهج للحث على المضبوطات في النماذج الحيوانية. في الماضي ، تم حقن الأدوية المتشنجة داخل الصفاق في مرحلة مبكرة7. على الرغم من أن هذه الطريقة كانت مريحة ، إلا أن موقع بؤر الصرع كان غير مؤكد. مع تطور التكنولوجيا التجسيمية وأطلس الدماغ الحيواني المفصل ، تم تطبيق حقن المخدرات داخل الجمجمة لحل مشكلة التوطين8. ومع ذلك ، أدى عدم التدخل في النوبات الشديدة خلال المرحلة الحادة إلى ارتفاع معدل الوفيات ، وكانت النوبات التلقائية المزمنة مصحوبة بمشكلة تواتر النوبات والنوبات غير المستقرة 9,10. أخيرا ، تم تطوير طريقة إشعال النار الكهربائية ؛ تحفز هذه الطريقة بشكل دوري مناطق معينة من الدماغ عدة مرات ، مما يسمح بإحداث النوبات مع التحكم المحدد في كل من الموقع ووقت البدء11.
ميزة هذه الطريقة هي أن زرع الأقطاب الكهربائية داخل الجمجمة هو الحد الأدنى من التدخل الجراحي12. علاوة على ذلك ، يمكن السيطرة على شدة النوبة عن طريق إنهاء المنبهات ، مما يقلل من الوفيات الناجمة عن النوبات. هذه التغييرات حلت أوجه القصور في الأساليب السابقة. والجدير بالذكر أن هذا النموذج يمكن أن يحاكي بشكل كاف النوبات البشرية وهو مناسب بشكل خاص لدراسة حالة الصرع (SE) بسبب قدرته على تحفيز SE بسرعة13. ويمكن أيضا أن تستخدم لفحص المخدرات المضادة للصرع14 وفي الدراسات على آلية الصرع. أخيرا ، من المعروف أن اللوزة ترتبط ارتباطا وثيقا بتعديل الذاكرة ومعالجة المكافأة والعاطفة15. غالبا ما تصادف اضطرابات هذه الوظائف العقلية في مرضى الصرع ، وبالتالي ، قد يكون نموذج الصرع اللوزة خيارا أفضل لدراسة المشاكل العاطفية في الصرع16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c-Fos antibody</td>
			<td></td>
			<td>ab222699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cranial drill</td>
			<td>SANS</td>
			<td>SA302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dental cement</td>
			<td>NISSIN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EEG recording and stimulation equipment</td>
			<td>Neuracle Technology (Changzhou) Co., Ltd</td>
			<td>NSHHFS-210803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lead-free tin wire</td>
			<td>BAKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pin header/Female header</td>
			<td>XIANMISI</td>
			<td></td>
			<td>spacing of 1.27 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>786000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slip ring</td>
			<td>Senring Electronics Co.,Ltd</td>
			<td>SNM008-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>796000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrafine multi-stand wire</td>
			<td>Shenzhen Chengxing wire and cable</td>
			<td>UL10064-FEP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>welding equipment</td>
			<td>BAKON</td>
			<td>BK881</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala

اللوزة هي واحدة من أكثر أصول النوبات شيوعا ، ونموذج فأر اللوزة ضروري لتوضيح الصرع. ومع ذلك ، فقد وصفت دراسات قليلة البروتوكول التجريبي بالتفصيل. توضح هذه الورقة العملية الكاملة لصنع نموذج الصرع الكهربائي اللوزة ، مع إدخال طريقة لتصنيع القطب ثنائي القطب. يمكن لهذا القطب أن يحفز ويسجل ، مما يقلل من إصابة الدماغ الناتجة عن زرع أقطاب كهربائية منفصلة للتحفيز والتسجيل. لأغراض تسجيل مخطط كهربية الدماغ على المدى الطويل (EEG) ، تم استخدام حلقات الانزلاق للقضاء على انقطاع السجل الناجم عن تشابك الكابلات والسقوط.
بعد التحفيز الدوري (60 هرتز ، 1 ثانية كل 15 دقيقة) من اللوزة القاعدية (AP: 1.67 مم ، L: 2.7 مم ، V: 4.9 مم) لمدة 19.83 ± 5.742 مرة ، لوحظ إشعال كامل في ستة فئران (تعرف بأنها تحريض ثلاث حلقات مستمرة من الدرجة الخامسة مصنفة حسب مقياس راسين). تم تسجيل مخطط كهربية الدماغ داخل الجمجمة طوال عملية إشعال النار بأكملها ، ولوحظ إفراز صرع في اللوزة الدماغية يستمر 20-70 ثانية بعد الإشعال. لذلك ، هذا بروتوكول قوي لنمذجة الصرع الناشئ من اللوزة ، والطريقة مناسبة للكشف عن دور اللوزة في صرع الفص الصدغي. يساهم هذا البحث في الدراسات المستقبلية حول آليات صرع الفص الصدغي المتوسط والأدوية الجديدة المضادة للصرع.

يتيح القطب والدائرة تسجيل مخطط كهربية الدماغ والعمل كتحفيز (الشكل 1) ؛ يتجنب هذا الإعداد تعقيد تسجيل الزرع وتحفيز الأقطاب الكهربائية بشكل منفصل ويقلل من تلف أنسجة المخ. يسمح تطبيق حلقات الانزلاق بتوصيل القطب الكهربائي بجميع أنواع الأجهزة.
أجرينا جراحة زرع ا...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

تلعب اللوزة دورا رئيسيا في صرع الفص الصدغي ، الذي ينشأ في هذا الهيكل وينتشر منه. تقدم هذه المقالة وصفا مفصلا لتصنيع أقطاب الدماغ العميقة مع كل من وظائف التسجيل والتحفيز. يقدم نموذجا لصرع الفص الصدغي الإنسي الناشئ من اللوزة.

استخدام قطب كهربائي ثنائي القطب لإنشاء نموذج فأر صرع الفص الصدغي عن طريق إشعال اللوزة كهربائيا

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

اقترح هذا البروتوكول نموذجا للصرع مع اللوزة كأصله. إنه يمهد الطريق للتحقيق في هياكل الفص الصدغي المتوسط. يمكن تفسير هذا النموذج على أنه أساس التجربة.حيث أن هذا البروتوكول هو وسيلة منخفضة التكلفة وفعالة بحيث يمكن تنفيذه بسرعة في معظم المختبرات. سيكون Yongchang Lu ، وهو خريج في مختبرنا ، دليلا على الإجراء. ابدأ بجمع المكونات المعدة مسبقا بدءا من قطع طولها سنتيمترين من سلك التنغستن المطلي بالتفلون بقطر دب يبلغ 76.2 ميكرومتر.قطعة واحدة من الأسلاك الفضية بقطر دب 127 ميكرومتر من نفس الطول ومجموعة واحدة من اثنين من دبابيس الحبل المقيسة. استخدم ولاعة لحرق أحد طرفي كل سلك تنغستن لإزالة خمسة ملليمترات من طلاء العزل. قشر قسما من الأسلاك متعددة الخيوط فائقة الدقة.قم بفك الغلاف من الأسفل إلى الطرف العلوي حيث يبدأ الظلام ويستمر إلى الأعلى. اجمع بين هذا السلك فائق الدقة وسلك التنغستن عن طريق الضغط على أحد طرفيه ولف الطرف الآخر برفق ، مما يتيح تشابك المادتين معا بسهولة. اسحب برفق للتأكد من أن الأسلاك ملفوفة بإحكام وقطع السلك الزائد فائق الدقة.حاول الحفاظ على سلك التنغستن مستقيما طوال العملية. ثبت دبوس الحبل على المشبك الموجود على طاولة اللحام بحيث يكون الجانب الأطول من المسامير متجها للخارج. استخدم إبرة المحقنة لالتقاط بعض معجون اللحام وتطبيقه على المسامير.تسخين شعلة اللحام إلى 320 درجة مئوية. قم بإذابة وتشويه بعض أسلاك القصدير الخالية من الرصاص بطرف الشعلة. تداخل الطرف العلوي من سلك التنغستن بإبرة واحدة من دبابيس الحبل واستخدم اللحام الموجود على الشعلة لربط سلك التنغستن بالدبوس.قم بلحام سلك تنغستن آخر وسلك فضي آخر بدبوس الحبل بنفس الطريقة بحيث يتوافق كل سلك مع إبرة. قطع اثنين من الأنابيب القابلة للتقلص بالحرارة أطول قليلا من الطرف العلوي لسلك التنغستن. ضعها على مفصل اللحام لسلكين من التنغستن لضمان تغطية الجزء الموصل بالكامل في الأنبوب بحيث لا يتم وضع دائرة سلكي التنغستن في سلسلة.قم بإزالة القطب من مشبك طاولة اللحام وأمسك القطب برفق باستخدام كماشة كبيرة حيث يسهل على الأقطاب الكهربائية أن تفقد شكلها عند تسخين الأنبوب القابل للتقلص. استخدم مشبك توصيل حراري جيد بقوة أكبر قليلا. قم بتشغيل مجرى الهواء وتسخينه حتى تصل درجة الحرارة إلى 320 درجة مئوية.انفخ الأنبوب القابل للتقلص بالحرارة لعدة ثوان حتى يتم شده. تعزيز القطب مع لاصق تذوب الساخنة. امسك سلكي التنغستن ولفهما معا ، مع إبقاء نهاياتهما متباعدتين.قم بقص أسلاك التنغستن الملتوية إلى حوالي 10 ملم في الطول بحيث لا يتجاوز الفصل في النهايات 0.5 ملم. تحقق من الأقطاب الكهربائية بمقياس متعدد عن طريق وضع شريط واحد من المتر المتعدد على الجانب غير الملحوم من دبابيس الحبل ولمس نهاية سلك التنغستن أو السلك الفضي برفق إلى الشريط الآخر. التحقق مما إذا كانت الدائرة سلسة.تأكد من عدم وضع الخطوط في سلسلة. انزع خمسة ملليمترات من الجلد العازل في كل طرف لكشف السلك المعدني بالداخل. أضف قسما من الأنابيب القابلة للتقلص بالحرارة إلى كل سلك بداية.قم بلحام كل سلك بقابس موصل جهاز EEG. تقليص الأنبوب القابل للتقلص بالحرارة بالهواء الساخن. أضف قسما من الأنبوب القابل للتقلص بالحرارة إلى كل سلك دوار.قم بربط الأجزاء الموصلة من الأسلاك الحمراء والبرتقالية معا ولحامها بمفصل ورأس لتناسب دبوس الحبل. قم بلحام السلكين الآخرين على الرأس لكل مفصل. وزن الماوس.عندما يتم تخدير الماوس بالكامل ، احلق الشعر من العين إلى منطقة الأذن باستخدام ماكينة حلاقة. إصلاح الماوس على الإطار المجسم. ضع الأسنان العلوية الأمامية في شريط القاطعة وأدخل كلا قضيبي الأذن إلى أعماق متساوية في الأذنين.ضع مرهم العين الاريثروميسين على العينين لمنع الجفاف والعمى الناجم عن الضوء الساطع أثناء الجراحة. تطهير المنطقة الجراحية ثلاث مرات على الأقل مع مسحات بالتناوب من اليودوفور و 75 ٪ الكحول. قم بعمل شق طولي لكشف المنطقة الجراحية بالكامل أو قم بعمل شق مثلث طالما أنه يكشف اليافوخ الأمامي والخلفي ومواقع زرع القطب الكهربائي.لف قطعة صغيرة من القطن على شكل كرة ورطبها بنسبة 3٪ بيروكسيد الهيدروجين. قم بإزالة الأنسجة الرخوة المتصلة بالجمجمة عن طريق فرك المنطقة المكشوفة برفق باستخدام كرة قطنية صغيرة حتى يتم رؤية اليافوخ الأمامي والخلفي. اضبط الارتفاعات الأمامية والخلفية بحيث يكون اليافوخ الأمامي والخلفي أفقيا.ضع في اعتبارك أن موضع اليافوخ الأمامي هو أصل المحاور. ثبت برغي من الفولاذ المقاوم للصدأ على جمجمة المخيخ الأيسر. اضبط إحداثيات إشعال اللوزة من البريغما واضبط جهاز التجسيم لتحديد موقع هذه البقعة ووضع علامة عليها.حفر حفرة على بقعة المسيرة مع حفر الجمجمة قطرها 0.5 ملم. ثبت الأقطاب الكهربائية على قضيب تحديد موقع الجهاز المجسم. ضع القطب عموديا فوق الفتحة وقم بإسقاط الموضع إلى سالب 4.9 ملم ببطء.لف السلك الفضي حول المسمار ثلاث مرات. الحرص على عدم هز جسم القطب أثناء التشغيل. خلط الاسمنت الأسنان وتطبيقه بلطف على القطب وسطح الجمجمة.عندما يصلب الأسمنت السني ، قم بتعديل الجزء الخارجي حتى يتحول الأسمنت الذي يحيط بالقطب الثابت إلى مخروط. ثم حرر القطب من الجهاز المجسم. أخرج الماوس وضعه مرة أخرى في القفص.إبقائها منفصلة عن الفئران الأخرى. ضع الماوس في صندوق مخصص به كابلات زلقة تربط القطب على رأس الماوس وجهاز EEG. قم بتشغيل الكبل من خلال فتحة في غطاء الصندوق واضبط الطول المتبقي في الصندوق للسماح للماوس بالتحرك بحرية.قم بتشغيل جهاز EEG وتأكد من أنه يعمل بشكل صحيح. اضبط معلمات المحفز لتقديم نبضات موجة مربعة أحادية الطور ميلي ثانية واحدة عند 60 هرتز لمدة قطار ثانية واحدة لمدة 10 دورات تحفيز. ابدأ بكثافة حالية تبلغ 50 ميكروأمبير للتحفيز الأول.راقب مخطط كهربية الدماغ بعد التفريغ الذي يتميز بارتفاعات عالية التردد. إذا لم يلاحظ بعد التفريغ ، أضف 25 ميكروأمبير إلى التحفيز التالي واستمر في هذه العملية كل 10 دقائق حتى يتم ملاحظة تفريغ بعد ويستمر خمس ثوان. تحفيز الماوس مع شدة التيار المحددة كل 15 دقيقة ، لا يزيد عن 20 مرة في اليوم.مراقبة الاستجابات السلوكية للتحفيز. تم إجراء جراحة زرع القطب الكهربائي على ستة ذكور بالغين أصحاء C57 أسود 6 فئران وتم إجراء التحفيز الكهربائي بعد أسبوعين من الجراحة. زاد مستوى النوبات السلوكية تدريجيا مع زيادة عدد المحفزات وتم تسجيل عدد المحفزات المطلوبة للإشعال الكامل.استمر تخطيط كهربية الدماغ بعد التفريغ من خمس إلى 15 ثانية. ثم تكثفت التصريفات التلقائية داخل الجمجمة وبدأت الأعراض السلوكية. كانت مدة النوبة عادة أقل من دقيقة واحدة مما يقلل من خطر الوفاة من التشنجات الشديدة التي تؤدي إلى انقطاع النفس.تم الكشف عن تعبير c-Fos في أنسجة المخ بواسطة الكيمياء الهيستولوجية المناعية بعد ساعتين من الإشعال الكامل. أظهرت النتائج أن التعبير عن c-Fos في اللوزة المماثلة زاد بشكل كبير للتحقق من جدوى هذا النموذج. يجب ألا يتجاوز فصل نهايات سلك التنغستن نصف ملليمتر وإلا فلن يمر عبر ثقب الدماغ.يجب ألا يكون طول القطب طويلا وإلا فإنه سيؤثر على نشاط الفئران.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings (GCMR) in the Insect Antennal Lobe

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings GCMR in the Insect Antennal Lobe

تحديد مواد متطايرة الشم باستخدام الغاز اللوني موضوع وحدة تسجيلات (GCMR) في الفص Antennal الحشرات

All  organisms inhabit a world full of sensory stimuli that determine their  behavioral and physiological response to their environment. Olfaction is ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

التربسين بروتوكول دايجست لتحليل الأوعية الدموية الشبكية للنموذج الفأر

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

بروتوكول الشامل للتجزئة دليل الهياكل الفص الصدغي الإنسي

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

نموذج الماوس إشعال الناجمة عن بينتيلينيتيترازولي

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

قوة إينتيرستيمولوس الفاصل الزمني للتقييم لتجهيز الزمانية في القوارض

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

التحليل السلوكي والفسيولوجي في نموذج حمار وحشي من الصرع

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Behaving Mouse

ناجحة في التصوير الكلسيوم الجسم الحي مع المجهر Miniaturized الرأس جبل في Amygdala من الماوس تتصرف بحرية

In vivo real-time monitoring of neuronal activities in freely moving animals is one of key approaches to link neuronal activity to behavior. For this ...

A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy

فحص سلوكي للنوبات الناجمة عن الحرارة في نماذج الفئران من الصرع

Transgenic mouse models have proved to be powerful tools in studying various aspects of human neurological disorders, including epilepsy. The ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

تسجيل انتقالات الكالسيوم في الوصلة العصبية العضلية للفأر بدقة زمنية عالية باستخدام المجهر البؤري

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...